一種富硒羊肚菌深層發(fā)酵工藝的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于食用菌培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種羊肚菌的培養(yǎng)工藝，具體涉及一種富砸羊肚菌深層發(fā)酵工藝。
【背景技術(shù)】
[0002]利用食用菌對(duì)微量元素進(jìn)行富集，所得到的有機(jī)態(tài)微量元素，比較容易被人體吸收利用；同時(shí)它在富集微量元素時(shí)表現(xiàn)出良好的穩(wěn)定性，這種富集了微量元素的食用菌不僅便于貯存、運(yùn)輸，同時(shí)也避免了營(yíng)養(yǎng)成分損失；人體對(duì)微量元素的攝取，在限制范圍內(nèi)對(duì)人體并無毒副作用；所以，現(xiàn)在越來越多的科研工作者們對(duì)食用菌富集微量元素進(jìn)行了廣泛的研宄；目前以食用菌為載體，通過噴灑或者施加含砸肥料的方式對(duì)靈芝、金針菇、平菇、香菇和猴頭菌等進(jìn)行了人工培養(yǎng)，這種方式得到的富砸食用菌，不僅富集砸的程度低，而且其產(chǎn)量和安全系數(shù)也比較低；羊肚菌的子實(shí)體和菌絲體均含有豐富的營(yíng)養(yǎng)成分，其氨基酸含量為食用菌之首，共含有19種氨基酸，是一種高營(yíng)養(yǎng)低熱量的高級(jí)營(yíng)養(yǎng)滋補(bǔ)佳品，同時(shí)國(guó)內(nèi)外均未實(shí)現(xiàn)羊肚菌商業(yè)化栽培，也沒有利用發(fā)酵法獲取富砸羊肚菌多糖的報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是，針對(duì)以上現(xiàn)有技術(shù)存在的缺點(diǎn)，提出一種富砸羊肚菌深層發(fā)酵工藝，該發(fā)酵工藝簡(jiǎn)單易行，發(fā)酵效率高，成本低廉，制備出的富砸羊肚菌含砸高，產(chǎn)量高，安全系數(shù)好。
[0004]本發(fā)明解決以上技術(shù)問題的技術(shù)方案是:
一種富砸羊肚菌深層發(fā)酵工藝，該深層發(fā)酵工藝的流程為:羊肚菌母種的轉(zhuǎn)接及活化-接種到搖瓶深層發(fā)酵培養(yǎng)基中-加入亞砸酸鈉-深層發(fā)酵培養(yǎng)-富砸羊肚菌菌絲體，其中:
(O羊肚菌母種的轉(zhuǎn)接，將母種轉(zhuǎn)接在配制好的斜面培養(yǎng)基上具體為:首先將接種環(huán)、酒精燈、酒精棉球、打火機(jī)以及斜面培養(yǎng)基放在凈化工作臺(tái)里，打開紫外燈，對(duì)它們進(jìn)行紫外照射殺菌20-28min，關(guān)閉紫外燈，然后從冰箱中取出保藏的母種，接種時(shí)先將接種環(huán)用酒精燈的火焰反復(fù)灼燒，待冷卻后用接種環(huán)挑取母種，并快速接種至預(yù)先配制好的斜面培養(yǎng)基上，接種完成后，將斜面培養(yǎng)基的試管口用火焰進(jìn)行殺菌，然后塞入棉塞或膠塞，將接種后的菌種放入恒溫恒濕箱中，控制溫度為24°C，靜置培養(yǎng)1-3天，然后將其放入0-3°C的冰箱中保臧；
羊肚菌母種的活化，活化前要將接種環(huán)、酒精燈、酒精棉球、打火機(jī)以及配制好的斜面培養(yǎng)基放在凈化工作臺(tái)里，打開紫外燈，對(duì)相關(guān)的接種器具進(jìn)行紫外照射殺菌28-35min，然后從冰箱中取出保藏的要活化的菌種，開始接種前先將凈化工作臺(tái)的紫外燈關(guān)閉，雙手用酒精棉球進(jìn)行消毒，接種時(shí)先將接種環(huán)用酒精燈的火焰反復(fù)灼燒，待冷卻后用接種環(huán)挑取菌種的菌絲塊，并快速接種至預(yù)先配制好的斜面培養(yǎng)基上，接種完畢后，將斜面培養(yǎng)基的試管口用火焰進(jìn)行殺菌，然后方可塞入棉塞或膠塞；接種結(jié)束后，將接種后的菌種放入恒溫恒濕箱中，設(shè)定溫度為25°C，靜置培養(yǎng)24-48h即可完成菌種的活化；
其中，羊肚菌母種轉(zhuǎn)接和活化時(shí)的斜面培養(yǎng)基按質(zhì)量份數(shù)計(jì)包括以下組分:馬鈴薯:20-25份，葡萄糖:1-2份，瓊脂:1-2份，磷酸二氫鉀:0.2-0.5份，硫酸鎂0.1-0.3份，蒸餾水10-20份；
(2)接種到搖瓶深層發(fā)酵培養(yǎng)基中，先配制深層發(fā)酵培養(yǎng)基，深層發(fā)酵培養(yǎng)基按質(zhì)量份數(shù)計(jì)包括以下成份:亞砸酸鈉5-10份，磷酸二氫鉀:0.1-0.3份，蒸餾水:5-8份，硫酸鎂:
1-2份，黃顯粉:2_3份，麥麩:3_5份，玉米粉:1-3份；
深層發(fā)酵培養(yǎng)基的制備具體為:首先把麥麩、玉米粉、黃豆粉放入燒杯中，加水煮沸25-29min，然后用紗布濾去雜質(zhì)，加入磷酸二氫鉀和硫酸鎂，加水定容至100mL，再加熱7-10min，待所有藥品充分溶解后，裝入500ml的搖瓶中，放到滅菌鍋里，在121°C的條件下對(duì)其進(jìn)行滅菌，20-26min后取出，放入凈化工作臺(tái)中打開紫外殺菌燈，殺菌28_35min，等待其自然冷卻，冷卻后向搖瓶中中加入亞砸酸鈉制得深層發(fā)酵培養(yǎng)基；
在凈化工作臺(tái)上，打開紫外燈，對(duì)相關(guān)的接種器具進(jìn)行紫外照射殺菌30-35min，對(duì)接種環(huán)反復(fù)灼燒，然后從活化的斜面菌種中取一塊接入液態(tài)深層發(fā)酵培養(yǎng)基中，然后用注射器向深層發(fā)酵培養(yǎng)基加入亞砸酸鈉，最后將搖瓶的瓶口放在酒精燈的火焰上方消毒，然后塞上棉塞，并用消毒后的報(bào)紙將瓶口封嚴(yán)，把接入羊肚菌菌種后的搖瓶放入振蕩培養(yǎng)箱中，控制培養(yǎng)溫度為25-27°C，振蕩培養(yǎng)箱轉(zhuǎn)速為90-100r/min，振蕩2_4天后取出，得到富砸羊肚菌菌絲體。
[0005]本發(fā)明進(jìn)一步限定的技術(shù)方案為:
前述富砸羊肚菌深層發(fā)酵工藝中，在步驟(I)母種在轉(zhuǎn)接時(shí)每支斜面培養(yǎng)基能用接種環(huán)接種2塊母種，菌種在活化時(shí)每支斜面培養(yǎng)基能用接種環(huán)接種2塊菌絲塊。
[0006]前述富砸羊肚菌深層發(fā)酵工藝中，斜面培養(yǎng)基的制備具體為:首先把馬鈴薯洗凈并去皮，用刀把馬鈴薯切塊，大小均一，然后按照配方中的標(biāo)準(zhǔn)加入蒸餾水，煮沸30min后，用紗布對(duì)馬鈴薯溶液進(jìn)行過濾，然后加入葡萄糖、瓊脂、磷酸二氫鉀和硫酸鎂，然后加水定容至100mL，再加熱5-10min，待所有藥品充分溶解后，裝入試管中，放到滅菌鍋里，在120-125°C的條件下對(duì)其進(jìn)行滅菌，滅菌25-30min后取出，放入凈化工作臺(tái)中打開紫外殺菌燈，殺菌24-28min最后自然冷卻至室溫得到斜面培養(yǎng)基。
[0007]前述富砸羊肚菌深層發(fā)酵工藝中，富砸羊肚菌深層發(fā)酵得到的富砸羊肚菌菌絲生物量為9-10g/L，富砸羊肚菌多糖得率為3-5%，砸含量為9.0-9.3 μ g/mL。
[0008]本發(fā)明的有益效果是:
液態(tài)深層發(fā)酵培養(yǎng)基在滅菌后即可進(jìn)行接種，采用500ml的搖瓶，液態(tài)深層發(fā)酵培養(yǎng)基可以裝入100至200mL，但不宜超過搖瓶容積的一半，因?yàn)樵谝簯B(tài)深層發(fā)酵過程中，應(yīng)給予培養(yǎng)基中足夠的氧氣，否則容易抑制羊肚菌的生長(zhǎng)。
[0009]在羊肚菌母種的轉(zhuǎn)接盒活化，以及菌種在深層發(fā)酵培養(yǎng)基接種時(shí)，都統(tǒng)一的對(duì)接種環(huán)進(jìn)行反復(fù)灼燒，是為了避免每次接種時(shí)染菌，導(dǎo)致日后羊肚菌菌種的非正常生長(zhǎng)，提高了工作效率，降低了成本。
[0010]本發(fā)明中深層發(fā)酵培養(yǎng)基選用亞砸酸鈉、磷酸二氫鉀、蒸餾水、硫酸鎂、黃豆粉、麥麩以及玉米粉，麥麩、黃豆粉、玉米粉它們不僅取材容易而且成本低廉，同時(shí)營(yíng)養(yǎng)成分很豐富，在麥麩中含有豐富的碳源和氮源，有助于深層發(fā)酵過程中富砸羊肚菌菌絲體的生長(zhǎng)季其多糖的合成，羊肚菌在含有黃豆粉和玉米粉的培養(yǎng)基中可以較好的生長(zhǎng)，玉米粉還有多種復(fù)合因子，對(duì)富砸羊肚菌菌絲體的生長(zhǎng)有促進(jìn)作用，這些原材料價(jià)格低廉，且還是復(fù)合氮源。
【具體實(shí)施方式】
[0011]實(shí)施例1
本實(shí)施例提供一種富砸羊肚菌深層發(fā)酵工藝，該深層發(fā)酵工藝的流程為:羊肚菌母種的轉(zhuǎn)接及活化-接種到搖瓶深層發(fā)酵培養(yǎng)基中-加入亞砸酸鈉-深層發(fā)酵培養(yǎng)-富砸羊肚菌菌絲體，其中:
(1)羊肚菌母種的轉(zhuǎn)接，將母種轉(zhuǎn)接在配制好的斜面培養(yǎng)基上具體為:首先將接種環(huán)、酒精燈、酒精棉球、打火機(jī)以及斜面培養(yǎng)基放在凈化工作臺(tái)里，打開紫外燈，對(duì)它們進(jìn)行紫外照射殺菌25min，關(guān)閉紫外燈，然后從冰箱中取出保藏的母種，接種時(shí)先將接種環(huán)用酒精燈的火焰反復(fù)灼燒，待冷卻后用接種環(huán)挑取母種，能用接種環(huán)接種2塊母種，并快速接種至預(yù)先配制好的斜面培養(yǎng)基上，接種完成后，將斜面培養(yǎng)基的試管口用火焰進(jìn)行殺菌，然后塞入棉塞或膠塞，將接種后的菌種放入恒溫恒濕箱中，控制溫度為24°C，靜置培養(yǎng)I天，然后將其放入2 V的冰箱中保藏；
羊