L。
[0039] 任選地，F(xiàn)eSO4 · 7H20先與Na2EDTA配制成絡(luò)合物，然后才與其它溶液混合。優(yōu)選 地，培養(yǎng)基配制好后，分裝并滅菌，優(yōu)選在121°C下高溫滅菌25-30min。
[0040] 在一具體實(shí)施方案中，誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基分別包含表2中所 示組分。
[0041] 表2光皮樺組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基組成
[0042]
[0043]
[0044] 本申請中所述的約1/8份、1/4份、3/8份、約1/2份、3/4份、約0.8份、約1份和約 1. 2份并非嚴(yán)格限定其所修飾的項(xiàng)目中各組分的比例，即，大量元素和微量元素中的各組分 可各自為MS基本培養(yǎng)基中組分量的約1/8倍、1/4倍、3/8倍、約1/2倍、3/4倍、約0. 8倍、 約1倍和約1. 2倍。由于配方中的離子濃度高，在配制、貯存和消毒等過程中，即使有些成 分略有出入，也不會(huì)影響離子間的平衡，因此所述大量元素和微量元素中各組分，以及氨基 乙酸、鹽酸硫胺素、鹽酸吡哆醇、煙酸、肌醇、糖類的量可以為上述量±20%以內(nèi)的量。凝固 劑在培養(yǎng)基中主要起支持作用，其含量只要使培養(yǎng)基具有可成固體的硬度即可，因此凝固 劑的量可以為上述量±20%以內(nèi)的量。
[0045] 在一實(shí)施方案中，所述方法還包括采集外植體的步驟，任選地所述采集外植體的 步驟包括從母樹的基部取2-3cm長的幼嫩葉芽作為外植體，任選地所述母樹為10年生以 上且生長勢旺盛的母樹。在一實(shí)施方案中，在母樹的基部選擇健壯的萌芽，用剪刀剪取其 2-3cm長的幼嫩葉芽作為外植體。
[0046] 在一實(shí)施方案中，所述方法還包括對外植體進(jìn)行消毒的步驟?？梢允褂妙I(lǐng)域內(nèi)常 用的消毒劑對外植體進(jìn)行消毒，例如使用NaC10 3、HgCl2、84消毒液、雙氧水、酒精等消毒劑 或其任選的組合，任選地在消毒后使用無菌水沖洗。任選地使用每50ml含2-3滴吐溫80的 0. 1%的HgCl2混合水溶液對外植體進(jìn)行消毒。任選地在消毒之前使用3 %的洗衣粉水浸泡 外植體20min。在一實(shí)施方案中，將采集的外植體剪除多余的葉片后，先用3%的洗衣粉水 浸泡20min，然后每根葉芽剪取I. 5-2. Ocm長放置到超凈臺(tái)上的無菌器皿中。用每50ml含 2-3滴吐溫80的0. 1 %的HgCl2混合水溶液消毒6min，然后用無菌水沖洗5-7遍。
[0047] 在一實(shí)施方案中，將洗凈并消毒處理后的葉芽外植體垂直接種于外植體的誘 導(dǎo)培養(yǎng)基上。外植體的誘導(dǎo)培養(yǎng)的培養(yǎng)條件優(yōu)選為：培養(yǎng)基pH值為5. 6-6. 0,培養(yǎng)溫度 24-28°C。任選地，在暗培養(yǎng)7天后，再采用日光燈進(jìn)行光照。任選地，誘導(dǎo)培養(yǎng)時(shí)的光照強(qiáng) 度3500-40001x，每天光照時(shí)間為10-12小時(shí)。誘導(dǎo)培養(yǎng)時(shí)間任選地為30-40天。
[0048] 在一實(shí)施方案中，將誘導(dǎo)成功并萌發(fā)出誘導(dǎo)芽的外植體轉(zhuǎn)接至增殖培養(yǎng)基上。外 植體的增殖培養(yǎng)的培養(yǎng)條件優(yōu)選為：培養(yǎng)基pH值為5. 6-6. 0,培養(yǎng)溫度24-28°C。任選地，采 用日光燈進(jìn)行光照。任選地，增殖培養(yǎng)時(shí)的光照強(qiáng)度為3500-40001X，每天光照時(shí)間10-12 小時(shí)。任選地，增殖培養(yǎng)時(shí)間為35-40天。在一實(shí)施方案中，當(dāng)外植體萌出3-4個(gè)側(cè)芽，每 個(gè)例芽生長出2-3片小葉時(shí)，將外植體取出剪成單芽，重新接種至增殖培養(yǎng)基，促進(jìn)側(cè)芽萌 發(fā)生長，得到增殖芽，如此循環(huán)增殖培養(yǎng)，達(dá)到增殖的目的。
[0049] 在一實(shí)施方案中，將經(jīng)過增殖培養(yǎng)的外植體，剪成帶1-2片小葉的單芽，接種至生 根培養(yǎng)基上。芽的生根培養(yǎng)的培養(yǎng)條件優(yōu)選為：培養(yǎng)基pH值為5. 6-6. 0,培養(yǎng)溫度24-28°C。 任選地，采用日光燈進(jìn)行光照。任選地，生根培養(yǎng)時(shí)的光照強(qiáng)度3500-40001X，每天光照時(shí)間 10-14小時(shí)，培養(yǎng)時(shí)間30-40天。
[0050] 在一實(shí)施方案中,所述方法還包括對生根苗進(jìn)行煉苗的步驟。任選地,當(dāng)生根苗生 長到4-5cm高時(shí)，將其轉(zhuǎn)移到溫室或大棚進(jìn)行煉苗培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度15-30°C，保持溫室或大 棚內(nèi)良好的通風(fēng)，煉苗培養(yǎng)時(shí)間10-15天。任選地，煉苗時(shí)的光照主要為太陽光的散射光。
[0051] 在一實(shí)施方案中，所述方法還包括對組培苗進(jìn)行移栽的步驟。在一實(shí)施方案中，將 煉苗培養(yǎng)后的組培苗從培養(yǎng)瓶中取出，移栽至用1-3%。高錳酸鉀液消毒后的黃心土基質(zhì)營 養(yǎng)杯或羥基質(zhì)營養(yǎng)杯。
[0052] 在一實(shí)施方案中，所述方法還包括對移栽苗進(jìn)行移栽后管理的步驟。在一實(shí)施方 案中，將移栽有組培苗的營養(yǎng)杯放置在有自動(dòng)控制噴霧設(shè)備的苗床上，晴天用75%遮光率 的遮蔭網(wǎng)遮光以減弱光照強(qiáng)度。任選地，在移栽后的前7天內(nèi)白天噴霧頻率為1次/lOmin， 保持葉面濕潤，晚上噴霧頻率調(diào)整為1次/30min。任選地在移栽7天以后白天噴霧頻率調(diào) 整為1次/20min，晚上1次/60min，持續(xù)培養(yǎng)30-40天后，按常規(guī)育苗方式管理。
[0053] 在第二方面，本申請?zhí)峁┝送ㄟ^以上方法獲得的光皮樺組培苗。
[0054] 在第三方面，本申請?zhí)峁┝斯馄逯参锝M織培養(yǎng)基，其包括誘導(dǎo)培養(yǎng)基、生根培養(yǎng) 基和任選地增殖培養(yǎng)基，其特征在于所述生根培養(yǎng)基包含6-BA、IBA和NAA。
[0055] 在一實(shí)施方案中，所述生根培養(yǎng)基包含約0· 15-0. 25mg/L的6-BA、約0· 8-1. 2mg/ L的IBA和約0. 8-1. 2mg/L的NAA。在一實(shí)施方案中，所述生根培養(yǎng)基包含約0. 2mg/L的 6-BA、約 1.0 mg/L 的 IBA 和約 1.0 mg/L 的 NAA。
[0056] 在一實(shí)施方案中，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基包含6-BA和NAA。在一實(shí)施方案中，所述誘導(dǎo)培 養(yǎng)基包含約I. 2-1. 8mg/L的6-BA和約0. 15-0. 25mg/L的NAA。在一實(shí)施方案中，所述誘導(dǎo) 培養(yǎng)基包含約I. 5mg/L的6-BA和約0. 2mg/L的NAA。
[0057] 在一實(shí)施方案中，所述增殖培養(yǎng)基包含6-BA、IBA和NAA。在一實(shí)施方案中，所述增 殖培養(yǎng)基包含約 〇. 8-1. 2mg/L 的 6-BA、約 0. 15-0. 25mg/L 的 IBA 和約 0. 8-1. 2mg/L 的 NAA。 在一實(shí)施方案中，所述增殖培養(yǎng)基包含約I. 〇mg/L的6-BA、約0. 2mg/L的IBA和約0. lmg/L 的 NAA0
[0058] 申請人根據(jù)長期實(shí)驗(yàn)結(jié)果，選用MS培養(yǎng)基作為光皮樺培養(yǎng)基的基礎(chǔ)組分，并進(jìn)行 改良。MS培養(yǎng)基的大量元素和微量元素組成如表1所示。
[0059] 在一實(shí)施方案中，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基包含約1/4-3/4份的MS培養(yǎng)基中的大量兀素和 約0. 8-1. 2份的MS培養(yǎng)基中的微量兀素。在一實(shí)施方案中，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基包含約1/2份 的MS培養(yǎng)基中的大量元素和約1份的MS培養(yǎng)基中的微量元素。
[0060] 在一實(shí)施方案中，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基還包含約1.6-2. 4mg/L的氨基乙酸，約 0· 08-0. 12mg/L的鹽酸硫胺素、約0· 4-0. 6mg/L的鹽酸吡哆醇、約0· 4-0. 6mg/L的煙酸和約 80-120mg/L的肌醇。在一實(shí)施方案中，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基包含約2mg/L的氨基乙酸，約0.1 mg/ L的鹽酸硫胺素、約0. 5mg/L的鹽酸吡哆醇、約0. 5mg/L的煙酸和約100mg/L的肌醇。
[0061] 在一實(shí)施方案中，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基還包含約15000-25000mg/L的糖類。在一實(shí)施 方案中，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基包含約20000mg/L的糖類。
[0062] 在一實(shí)施方案中，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基還包含凝固劑。
[0063] 在一實(shí)施方案中，所述增殖培養(yǎng)基包含約0. 8-1. 2份的MS培養(yǎng)基中的大量元素和 約0. 8-1. 2份的MS培養(yǎng)基中的微量元素。在一實(shí)施方案中，所述增殖培養(yǎng)基包含約1份的 MS培養(yǎng)基中的大量元素和約1份的MS培養(yǎng)基中的微量元素。
[0064] 在一實(shí)施方案中，所述增殖培養(yǎng)基還包含約0.8-1. 2mg/L的氨基乙酸，約 0· 08-0. 12mg/L的鹽酸硫胺素、約0· 4-0. 6mg/L的鹽酸吡哆醇、約0· 4-0. 6mg/L的煙酸和約 40-60mg/L的肌醇。在一實(shí)施方案中，所述增殖培養(yǎng)基包含約lmg/L的氨基乙酸，約0.1 mg/ L的鹽酸硫胺素、約0. 5mg/L的鹽酸批唆醇、約0. 5mg/L的煙酸和約50mg/L的肌醇。
[0065] 在一實(shí)施方案中，所述增殖培養(yǎng)基還包含約25000-35000mg/L的糖類。在一實(shí)施 方案中，所述增殖培養(yǎng)基包含約30000mg/L的糖類。
[0066] 在一實(shí)施方案中，所述增殖培養(yǎng)基還包含凝固劑。
[0067] 在一實(shí)施方案中，所述生根培養(yǎng)基包含約1/8-3/8份的MS培養(yǎng)基中的大量兀素和 約0. 8-1. 2份的MS培養(yǎng)基中的微量兀素。在一實(shí)施方案中，所述生根培養(yǎng)基包含約1/4份 的MS培養(yǎng)基中的大量元素和約1份的MS培養(yǎng)基中的微量元素。
[0068] 在一實(shí)施方案中，所述生根培養(yǎng)基還包含約0.8-1. 2mg/L的氨基乙酸，約 0· 08-0. 12mg/L的鹽酸硫胺素、約0· 4-0. 6mg/L的鹽酸吡哆醇、約0· 4-0. 6mg/L的煙酸和約 40-60mg/L的肌醇。在一實(shí)施方案中，所述生根培養(yǎng)基包含約lmg/L的氨基乙酸，約0. lmg/ L的鹽酸硫胺素、約0. 5mg/L的鹽酸批唆醇、約0. 5mg/L的煙酸和約50mg/L的肌醇。
[0069] 在一實(shí)施方案中，所述生根培養(yǎng)基還包含約15000-25000mg/L的糖類。在一實(shí)施 方案中，所述生根培養(yǎng)基包含約20000mg/L的