15000-25000mg/L的糖類；任選 地，所述生根培養(yǎng)基還包含凝固劑。3. 如權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述生根培養(yǎng)基包含約0. 2mg/L的6-BA、約 1.0 mg/L 的 IBA 和約 1.0 mg/L 的 NAA ; 任選地，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基包含約I. 5mg/L的6-BA和約0. 2mg/L的NAA ; 任選地，所述增殖培養(yǎng)基包含約I. 〇mg/L的6-BA、約0. 2mg/L的IBA和約0. lmg/L的 NAA ； 任選地，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基包含約1/2份的MS培養(yǎng)基中的大量元素和約1份的MS培養(yǎng) 基中的微量元素；任選地，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基包含約2mg/L的氨基乙酸，約0. lmg/L的鹽酸硫 胺素、約〇. 5mg/L的鹽酸吡哆醇、約0. 5mg/L的煙酸和約100mg/L的肌醇；任選地，所述誘導(dǎo) 培養(yǎng)基包含約20000mg/L的糖類； 任選地，所述增殖培養(yǎng)基包含約1份的MS培養(yǎng)基中的大量元素和約1份的MS培養(yǎng)基 中的微量元素；任選地，所述增殖培養(yǎng)基包含約lmg/L的氨基乙酸，約0. lmg/L的鹽酸硫胺 素、約0. 5mg/L的鹽酸批唆醇、約0. 5mg/L的煙酸和約50mg/L的肌醇；任選地，所述增殖培 養(yǎng)基包含約30000mg/L的糖類； 任選地，所述生根培養(yǎng)基包含約1/4份的MS培養(yǎng)基中的大量元素和約1份的MS培養(yǎng) 基中的微量元素；任選地，所述生根培養(yǎng)基包含約lmg/L的氨基乙酸，約0. lmg/L的鹽酸硫 胺素、約〇. 5mg/L的鹽酸批B多醇、約0. 5mg/L的煙酸和約50mg/L的肌醇；任選地，所述生根 培養(yǎng)基包含約20000mg/L的糖類； 任選地所述糖類為單糖或二糖；任選地所述單糖為葡萄糖；任選地所述二糖為蔗糖； 任選地所述凝固劑為卡拉膠、瓊脂粉或其任選的組合；任選地所述卡拉膠的量為 約5500-8500mg/L ;任選地所述卡拉膠的量為約7000mg/L ;任選地所述瓊脂粉的量為約 4000-6000mg/L ;任選地所述瓊脂粉的量為約5000mg/L。4. 如權(quán)利要求1-3中任一項所述的方法，其中所述誘導(dǎo)培養(yǎng)的培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)基pH 值為5. 6-6. 0,培養(yǎng)溫度24-28°C;任選地，在暗培養(yǎng)7天后，再采用日光燈進(jìn)行光照；任選地 誘導(dǎo)培養(yǎng)時的光照強(qiáng)度為3500-40001X，每天光照時間為10-12小時； 任選地，其中所述增殖培養(yǎng)的培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)基pH值為5. 6-6. 0,培養(yǎng)溫度24-28°C; 任選地，采用日光燈進(jìn)行光照；任選地，增殖培養(yǎng)時的光照強(qiáng)度為3500-40001x，每天光照 時間為10-12小時；任選地當(dāng)外植體萌出3-4個側(cè)芽，每個側(cè)芽生長出2-3片小葉時，將小 苗取出剪成單芽，重新接種至增殖培養(yǎng)基； 任選地，其中所述生根培養(yǎng)的培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)基pH值為5. 6-6. 0,培養(yǎng)溫度24-28°C; 任選地，采用日光燈進(jìn)行光照；任選地生根培養(yǎng)時的光照強(qiáng)度為3500-40001x，每天光照時 間為10-14小時。5. 如權(quán)利要求1-4中任一項所述的方法，其還包括采集外植體的步驟，任選地所述采 集外植體的步驟包括從母樹的基部取2-3cm長的幼嫩葉芽作為外植體，任選地所述母樹為 10年生以上且生長勢旺盛的母樹。6. 如權(quán)利要求1-5中任一項所述的方法，還包括對所述外植體進(jìn)行消毒以及任選無菌 水沖洗的步驟，優(yōu)選地所述外植體消毒的步驟包括用每50ml含2-3滴吐溫80的0. 1 %的 HgCl2混合水溶液消毒外植體6min，任選地在所述消毒步驟之前用3 %的洗衣粉水浸泡外植 體20min，然后從每個外植體取I. 5-2. Ocm長放置到超凈臺上的無菌器皿中。7. 如權(quán)利要求1-6中任一項所述的方法，其還包括對所述生根苗進(jìn)行煉苗的步驟，任 選地所述煉苗步驟的條件為：當(dāng)生根苗生長至4-5cm高時，將其轉(zhuǎn)移到溫室或大棚，培養(yǎng) 溫度15-30°C，保持溫室或大棚內(nèi)良好的通風(fēng)；任選地，煉苗時的光照主要為太陽光的散射 光； 任選地所述方法還包括組培苗移栽的步驟，任選地所述移栽步驟通過以下進(jìn)行：將煉 苗后的組培苗從培養(yǎng)瓶中取出，移栽至用1-3%。高錳酸鉀液消毒后的黃心土基質(zhì)營養(yǎng)杯或 羥基質(zhì)營養(yǎng)杯；任選地所述方法還包括組培苗的移栽后管理，任選地在所述移栽后管理期 間在晴天時用75%遮光率的遮蔭網(wǎng)遮光以減弱光照強(qiáng)度，任選地所述移栽后管理包括將移 栽有組培苗的營養(yǎng)杯放置在有自動控制噴霧設(shè)備的苗床上，移栽后的前7天內(nèi)白天噴霧頻 率為1次/l〇min，保持葉面濕潤；晚上噴霧頻率調(diào)整為1次30min，7天以后白天噴霧頻率 調(diào)整為1次20min，晚上1次60min，持續(xù)培養(yǎng)30-40天后，按常規(guī)育苗方式管理。8. 光皮樺植物組織培養(yǎng)基，其包括誘導(dǎo)培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基和任選地增殖培養(yǎng)基，其特 征在于所述生根培養(yǎng)基包含6-BA、IBA和NAA。9. 如權(quán)利要求8所述的組織培養(yǎng)基，其中所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基包含6-BA和NAA ; 任選地，所述增殖培養(yǎng)基包含6-BA、IBA和NAA ; 任選地，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基包含約I. 2-1. 8mg/L的6-BA和約0. 15-0. 25mg/L的NAA ; 任選地，所述增殖培養(yǎng)基包含約0. 8-1. 2mg/L的6-BA、約0. 15-0. 25mg/L的IBA和約 0? 8-1. 2mg/L 的 NAA ; 任選地，所述生根培養(yǎng)基包含約0. 15-0. 25mg/L的6-BA、約0. 8-1. 2mg/L的IBA和約 0? 8-1. 2mg/L 的 NAA ; 任選地，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基還包含約1/4-3/4份的MS培養(yǎng)基中的大量元素和約0. 8-1. 2 份的MS培養(yǎng)基中的微量兀素；任選地，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基還包含約I. 6-2. 4mg/L的氨基乙酸， 約0? 08-0. 12mg/L的鹽酸硫胺素、約0? 4-0. 6mg/L的鹽酸吡哆醇、約0? 4-0. 6mg/L的煙酸和 約80-120mg/L的肌醇；任選地，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基還包含約15000-25000mg/L的糖類；任選 地，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基還包含凝固劑； 任選地，所述增殖培養(yǎng)基還包含約0. 8-1. 2份的MS培養(yǎng)基中的大量元素和約0. 8-1. 2 份的MS培養(yǎng)基中的微量元素；任選地，所述增殖培養(yǎng)基還包含約0. 8-1. 2mg/L的氨基乙酸， 約0? 08-0. 12mg/L的鹽酸硫胺素、約0? 4-0. 6mg/L的鹽酸吡哆醇、約0? 4-0. 6mg/L的煙酸 和約40-60mg/L的肌醇；任選地，所述增殖培養(yǎng)基還包含約25000-35000mg/L的糖類；任選 地，所述增殖培養(yǎng)基還包含凝固劑； 任選地，所述生根培養(yǎng)基還包含約1/8-3/8份的MS培養(yǎng)基中的大量元素和約0. 8-1. 2 份的MS培養(yǎng)基中的微量元素；任選地，所述生根培養(yǎng)基還包含約0. 8-1. 2mg/L的氨基乙酸， 約0? 08-0. 12mg/L的鹽酸硫胺素、約0? 4-0. 6mg/L的鹽酸吡哆醇、約0? 4-0. 6mg/L的煙酸 和約40-60mg/L的肌醇；任選地，所述生根培養(yǎng)基還包含約15000-25000mg/L的糖類；任選 地，所述生根培養(yǎng)基還包含凝固劑。10.如權(quán)利要求8或9所述的組織培養(yǎng)基，其中所述生根培養(yǎng)基包含約0. 2mg/L的 6-BA、約 1.0 mg/L 的 IBA 和約 1.0 mg/L 的 NAA ; 任選地，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基包含約I. 5mg/L的6-BA和約0. 2mg/L的NAA ; 任選地，所述增殖培養(yǎng)基包含約I. 〇mg/L的6-BA、約0? 2mg/L的IBA和約0? lmg/L的 NAA ； 任選地，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基包含約1/2份的MS培養(yǎng)基中的大量元素和約1份的MS培養(yǎng) 基中的微量元素；任選地，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基包含約2mg/L的氨基乙酸，約0. lmg/L的鹽酸硫 胺素、約〇. 5mg/L的鹽酸吡哆醇、約0. 5mg/L的煙酸和約100mg/L的肌醇；任選地，所述誘導(dǎo) 培養(yǎng)基包含約20000mg/L的糖類； 任選地，所述增殖培養(yǎng)基包含約1份的MS培養(yǎng)基中的大量元素和約1份的MS培養(yǎng)基 中的微量元素；任選地，所述增殖培養(yǎng)基包含約lmg/L的氨基乙酸，約0. lmg/L的鹽酸硫胺 素、約0. 5mg/L的鹽酸批唆醇、約0. 5mg/L的煙酸和約50mg/L的肌醇；任選地，所述增殖培 養(yǎng)基包含約30000mg/L的糖類； 任選地，所述生根培養(yǎng)基包含約1/4份的MS培養(yǎng)基中的大量元素和約1份的MS培養(yǎng) 基中的微量元素；任選地，所述生根培養(yǎng)基包含約lmg/L的氨基乙酸，約0. lmg/L的鹽酸硫 胺素、約〇. 5mg/L的鹽酸批B多醇、約0. 5mg/L的煙酸和約50mg/L的肌醇；任選地，所述生根 培養(yǎng)基包含約20000mg/L的糖類； 任選地所述糖類為單糖或二糖；任選地所述單糖為葡萄糖；任選地所述二糖為蔗 糖；任選地所述凝固劑為卡拉膠、瓊脂粉或其任選的組合；任選地所述卡拉膠的量為 約5500-8500mg/L ;任選地所述卡拉膠的量為約7000mg/L ;任選地所述瓊脂粉的量為約 4000-6000mg/L ;任選地所述瓊脂粉的量為約5000mg/L。
【專利摘要】光皮樺組織培養(yǎng)方法屬于植物無性繁殖技術(shù)領(lǐng)域，包括如下步驟：將外植體在誘導(dǎo)培養(yǎng)基中誘導(dǎo)培養(yǎng)，得到誘導(dǎo)芽；將誘導(dǎo)芽在增殖培養(yǎng)基中增殖培養(yǎng)，得到增殖芽；和將所述增殖芽在包含6-BA、IBA和NAA的生根培養(yǎng)基中生根培養(yǎng)，得到生根苗。本申請還涉及用于該方法的培養(yǎng)基和通過該方法產(chǎn)生的植物。
【IPC分類】A01H4/00
【公開號】CN105010133
【申請?zhí)枴緾N201410173069
【發(fā)明人】劉志喬
【申請人】湖南永興強(qiáng)林林業(yè)科技發(fā)展有限公司
【公開日】2015年11月4日
【申請日】2014年4月28日