3-芳基-5-甲基丁內(nèi)酯化合物用作殺植物病原真菌的方法
【專利說明】
[0001] 本申請是原申請"3-芳基-5-甲基丁內(nèi)酯化合物用作抗植物病毒劑的方法"（申 請?zhí)?01410344605. 2,申請日2014年07月18日）的分案申請。
技術(shù)領(lǐng)域
[0002] 本發(fā)明的技術(shù)方案涉及化學(xué)化合物的殺菌劑，具體地說是3-芳基-5-甲基丁內(nèi)酯 化合物用作殺植物病原真菌的方法。
【背景技術(shù)】
[0003] 丁內(nèi)酯的骨架結(jié)構(gòu)廣泛存在于天然產(chǎn)物和藥物分子中。3-(4-甲基 苯基）-5-乙基-2, 5-二氫咲喃-2-酮（Incrustoporin)最早是從樹木擔(dān)子菌 Incrustoporia carneola 9170 中分離得到的（Zapf，S. ;Anke T. ;Sterner，0· Acta. chem. scand. 1995, 49, 233 - 234.)，生物活性研究發(fā)現(xiàn)有一定的抑菌活性和細(xì)胞毒性。 采用瓊脂擴散法離體測試模式評估其殺菌活性，測試對象為：Absidia glauca(+)(灰 綠犁頭霉），Absidia glauca( - )，Aspergillus ochraceus(赫曲霉），Cladosporium cladosporioides (黑霉菌），Curvularia Iunata (彎抱菌），F(xiàn)usarium oxysporum (尖 抱鏡刀菌），F(xiàn)usarium fujikuroi (鏡抱菌），Mucor miehei (米黑毛霉），Nematospora coryli(樣針抱酵母），Paecilomyces variotii(宛氏擬青霉），Penicillium islandicum(島青霉），Penicillium notatum(點青霉），Ustilago nuda(黑粉菌）；但是對 Acinetobacter calcoaceticus (醋酸鈣不動桿菌）、Arthrobacter citreus (梓檬色節(jié)桿 菌）、Baci Ilus brevis (短芽抱桿菌）、Baci Ilus subtil is (枯草芽抱桿菌）、Escherichia coli K12(大腸桿菌）、Micrococcus Iuteus (藤黃微球菌）、Salmonella typhimurium TA 98(鼠傷寒沙門氏菌）和Streptomyces spec.ATCC23836(鏈霉菌）等菌種并沒有抑制效 果。Pour等人先后報道了 3-芳基-5-烷基-2, 5-二氫呋喃-2-酮（如通式Ia)的對人 體致病菌的殺菌活性（Pour，M. ;et al. Bioorg. Med. Chem. Lett. 2000, 11，1893 - 1895.; Bioorg. Med. Chem. 2003, 11 (13)，2843 - 2866. ;Chem. Listy 2003, 97, 1061 - 1069.)，采用 離體測試模式對抑菌性能進行評估，測試對象為：CA，Candida albicans ATCC 44859(白色 念珠菌）；CK，Candida krusei E28(克魯斯假絲酵母菌）；CT，Candida tropicalis 156(熱 帶念珠菌）；CG，Candida glabrata 20/1(光滑念珠菌）；TB，Trichosporon beigelii 1188 (白吉利毛抱子菌）；AF，Aspergillus fumigatus 231 (煙曲霉菌）；AC，Absidia corymbifera 272(傘枝犁頭菌）；TM，Trichophyton mentagrophytes 445(須毛癬 菌）。2001年，Pour等人報道3-芳基-5-酰氧甲基-2, 5-二氫呋喃-2-酮系列化合物 (PourjM. ； SpulakjM. ；Buchta, V. ；Kubanova, P. ； Voprs alova, M. ；Ws0l,V. ；Fakova, Η.； KoudelkajP. ；Pourova, H. ；Schi I Ierj R. J. Med. Chem. 2001, 44 (17), 2701 - 2706. ) ? 采用離體測試模式對抑菌性能進行評估，測試對象為：CA1，Candida albicans ATCC 44859(白色念珠菌）；CA2, Candida albicans ATCC 90028(白色念珠菌）；CP，Candida parapsilosis ATCC 22019(近平滑假絲酵母菌）；CK1，Candida krusei ATCC 6258(克魯 斯假絲酵母菌）；CK2, Candida krusei E28(克魯斯假絲酵母菌）；CT, Candida tropicalis 156(熱帶念珠菌）；CG, Candida glabrata20/I(光滑念珠菌）；CL, Candida lusitaniae 2446/I (葡萄牙念珠菌）；TB, Trichosporon beigelii Il88 (白吉利毛孢子菌）； AF, Aspergillus fumigatus 231(煙曲霉菌）；AC, Absidia corymbifera 272(傘枝犁頭 菌）；TM, Trichophyton mentagrophytes 445 (須毛癬菌）。
[0004] 目前，由于合成方法的限制，對于3- (4-甲基苯基）-5-乙基-2, 5-二氫呋喃-2-酮 及其類似化合物的研究主要集中在抗人體致病菌，如：白色念珠菌、克柔念珠菌、熱帶念珠 菌、光滑念珠菌、白吉利毛孢子菌、煙曲霉菌、傘枝犁頭霉及須毛癬菌等。關(guān)于該類化合物對 植物病原真菌表現(xiàn)出較高的殺菌活性的性能并沒有見到相關(guān)報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是：提供3-芳基-5-甲基丁內(nèi)酯化合物用作殺植物病 原真菌的方法，將3-芳基-5-甲基丁內(nèi)酯化合物用作殺植物病原真菌劑，對植物病原真菌 表現(xiàn)出較高的殺菌活性。
[0006] 本發(fā)明解決該技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是：3_芳基-5-甲基丁內(nèi)酯化合物用作 殺植物病原真菌的方法，步驟如下：
[0007] A.所述的3-芳基-5-甲基丁內(nèi)酯化合物為具有如下所示通式（I)所示結(jié)構(gòu)的化 合物：
[0008]
[0009] 通式（I)所示結(jié)構(gòu)的化合物又包括13和I b兩類，具體個體化合物如下：
[0010]
[0011]
[0012]
[0013] B.上述3-芳基-5-甲基丁內(nèi)酯化合物用作殺植物病原真菌的方法如下：
[0014] B-L用于離體殺植物病原真菌活性的步驟如下：
[0015] 菌體生長速率測定法即平皿法：將3mg上述3-芳基-5-甲基丁內(nèi)酯化合物的個體 化合物溶解在〇. 〇3mL丙酮內(nèi)，然后用含有200 μ g/mL吐溫80的水溶液稀釋至測試濃度為 50mg/kg，然后各吸取ImL藥液注入與之對應(yīng)的培養(yǎng)皿內(nèi)，再分別加入9mL培養(yǎng)基，搖勻后制 成50 μ g/mL的含藥平板，以添加 ImL滅菌純凈水的平板做空白對照，用直徑4mm的打孔器 沿菌絲外緣切取菌盤，移至含藥平板上，每處理重復(fù)三次，將培養(yǎng)皿放在24土 1°C恒溫培養(yǎng) 箱內(nèi)培養(yǎng)，48h后調(diào)查各處理菌盤擴展直徑，求平均值，與空白對照比較計算相對抑菌率，
[0016]
[0017] B-2.用于活體殺植物病原真菌活性的步驟如下：
[0018] 植株噴霧法：稱量30mg上述3-芳基-5-甲基丁內(nèi)酯化合物中的一個個體化合物， 溶于0. 3mL二甲基亞砜中，然后加入質(zhì)量百分比濃度為1%。的吐溫80水溶液，配制成測試濃 度為200 μ g/mL的噴霧用藥劑，供試黃瓜、小麥幼苗、玉米幼苗培養(yǎng)于日光溫室，黃瓜第一 片真葉完全展開后，用上述噴霧用藥劑噴霧處理，噴液量ImL/處理，噴霧壓力為0. 7kg/cm2， 噴霧距離為15cm，小麥一葉一心期處理，方法與黃瓜處理過程相同，玉米幼苗處理方法與黃 瓜處理過程相同，藥劑處理后24h，黃瓜灰霉與黃瓜霜霉均采用噴霧接種5 X IO5個/mL的孢 子囊懸浮液于藥劑處理后的黃瓜真葉葉背，至葉片呈水浸狀止，暗環(huán)境保濕培養(yǎng)24h，后移 至溫室環(huán)境下正常培養(yǎng)，48h后調(diào)查結(jié)果，小麥苗則采用沉降接種法，接菌后7天調(diào)查結(jié)果， 結(jié)果調(diào)查采用分級方法，以"100"級代表無病，即抑制率1〇〇%;"〇"級代表最嚴(yán)重的發(fā)病程 度，抑制率為0,記錄結(jié)果。
[0019] 上述3-芳基-5-甲基丁內(nèi)酯化合物用作殺植物病原真菌的方法，所述的通式（I) 所示結(jié)構(gòu)的化合物中包括的1 3和I b兩類中的具體個體化合物均是公知化合物，通過商購等 公知途徑獲得，所涉及的其他試劑也通過商購等公知途徑獲得。
[0020] 本發(fā)明的有益效果是：3_芳基-5-甲基丁內(nèi)酯化合物Ia-I~Ia_9對14種植物病 原真菌表現(xiàn)出較高的殺菌活性，尤其是化合物I a_3, Ia_4, Ia-5和Ia-6對多種植物病原真菌 都表現(xiàn)很好的殺菌活性，在50mg/kg濃度下對14種真菌離體活性與商品化品種多菌靈和百 菌清相當(dāng)；在50mg/kg濃度下化合物I a-3, Ia-4, Ia-5和Ia-6對花生褐斑菌、番茄早疫菌離 體活性明顯優(yōu)于商品化品種多菌靈和百菌清，具備極大的開發(fā)價值。因此說，相對于現(xiàn)有技 術(shù)，本發(fā)明方法具有顯著的進步和極為突出的經(jīng)濟效益。
【具體實施方式】
[0021] 實施例1
[0022] A.所述的3-芳基-5-甲基丁內(nèi)酯化合物為具有如下所示通式⑴所示結(jié)構(gòu)的化 合物：
[0023]
[0024] 通式（I)所示結(jié)構(gòu)的化合物又包括13和I b兩類，具體個體化合物如下：
[0025]
[0026]
[0027]
[0028] B.上述3-芳基-5-甲基丁內(nèi)酯化合物用作殺植物病原真菌的方法如下：
[0029] B-L用于離體殺植物病原真菌活性的步驟如下：
[0030] 菌體生長速率測定法即平皿法：將3mg上述3-芳基-5-甲基丁內(nèi)酯化合物的個體 化合物I a-I溶解在〇. 〇3mL丙酮內(nèi)，然后用含有200 μ g/mL吐溫80的水溶液稀釋至測試濃 度為50mg/kg，然后各吸取ImL藥液注入與之對應(yīng)的培養(yǎng)皿內(nèi)，再分別加入9mL培養(yǎng)基，搖勻 后制成50 μ g/mL的含藥平板，以添加 ImL滅菌純凈水的平板做空白對照，用直徑4mm的打 孔器沿菌絲外緣切取菌盤，移至含藥平板上，每處理重復(fù)三次，將培養(yǎng)皿放在24土 1°C恒溫 培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，48h后調(diào)查各處理菌盤擴展直徑，求平均值，與空白對照比較計算相對抑菌 率。
[0031]
[0032] 上述3-芳基-5-甲基丁內(nèi)酯化合物的個體化合物Ia-I的離體殺真菌活性的結(jié)果 見表1 ;
[0033] B-2.用于活體殺植物病原真菌活性的步驟如下：
[0034] 植株噴霧法：稱量30mg上述3-芳基-5-甲基丁內(nèi)酯化合物的個體化合物Ia_l，溶 于0. 3mL二甲基亞砜，然后加入質(zhì)量百分比濃度為1%。的吐溫80水溶液，配制成測試濃度為 200 μ g/mL的噴霧用藥劑，供試黃瓜、小麥幼苗、玉米幼苗培養(yǎng)于南開大學(xué)生測樓日光溫室， 黃瓜第一片真葉完全展開后，用上述噴霧用藥劑噴霧處理，噴液量ImL/處理，噴霧壓力為 0. 7kg/cm2,噴霧距離為15cm，小麥一葉一心期處理，方法與黃瓜處理過程相同，玉米幼