昆蟲病原線蟲HbSD、其殺蟲劑及制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物殺蟲劑，尤其涉及昆蟲病原線蟲HbSD、其殺蟲劑及制備方法和應(yīng) 用。
【背景技術(shù)】
[0002] 昆蟲病原線蟲是一類體內(nèi)攜帶共生細(xì)菌的昆蟲寄生性線蟲，該類線蟲作為國(guó)際上 新型的生物殺蟲劑，具有寄主范圍廣泛；對(duì)脊椎動(dòng)物、植物以及其他非靶標(biāo)生物安全，利于 環(huán)境保護(hù)；易于進(jìn)行活體或離體大量培養(yǎng)，使用方便；能主動(dòng)尋找寄主，快速殺死害蟲；在 環(huán)境中能循環(huán)利用，能與多種化學(xué)和生物殺蟲劑混用等優(yōu)點(diǎn)，在防治多種土壤害蟲和隱蔽 害蟲方面發(fā)揮了重要的作用。
[0003] 昆蟲病原線蟲隸屬于動(dòng)物界線蟲動(dòng)物門（Nematoda),尾感器（Secernentea), 小桿目（Rhabditida)，至今為止，已知的寄生于昆蟲的線蟲約為40多個(gè)科，其中使用 較多的殺蟲線蟲包括斯氏線蟲（Steinernema carpocapsae，Sc)和嗜菌異小桿線蟲 (Heterorhabditis bacteriophora，Hb)。線蟲與其體內(nèi)共生的細(xì)菌協(xié)同作用來(lái)殺死昆蟲。 用于殺蟲的線蟲被認(rèn)為是對(duì)環(huán)境和人類友好的生物殺蟲劑。目前殺蟲線蟲已廣泛應(yīng)用于土 棲性害蟲，如金龜子、金針蟲、地老虎、螻蛄、根蛆，韭菜蛆等害蟲的防治。施用方法包括線蟲 噴霧懸浮液和線蟲感染后的蟲尸，但由于其噴霧懸浮液需加4-5種助劑和保護(hù)劑（如抗蒸 發(fā)劑、保水劑、粘合劑、紫外保護(hù)劑），導(dǎo)致其生產(chǎn)成本高，且所制備的殺蟲劑殺蟲效率低等 缺點(diǎn)影響其應(yīng)用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明提供的一種昆蟲病原線蟲HbSD，提高了殺蟲效率。
[0005] 另一方面，本發(fā)明提供的懸浮液制劑解決了生物殺蟲劑生產(chǎn)過(guò)程需增加多種助劑 和保護(hù)劑導(dǎo)致成本高等問(wèn)題。
[0006] 本發(fā)明的昆蟲病原線蟲HbSD，通過(guò)將幼齡黃粉蟲置放于線蟲中，若干天后使末齡 黃粉蟲變?yōu)榧t棕色的死蟲，進(jìn)一步篩選出線蟲HbSD。
[0007] 昆蟲病原線蟲HbSD懸浮液制劑的制備方法，包括將HbSD感染末齡黃粉蟲幼蟲，第 6天獲得顏色變?yōu)榧t棕色的死蟲，在濕濾紙上繼續(xù)培養(yǎng)至第10天蟲HbSD感染期幼蟲從死 蟲尸體內(nèi)爬出，進(jìn)入水中，即得懸浮液，保持在l〇_12°C;使用時(shí)往懸浮液加入Triton X-100 制得HbSD懸浮液制劑。
[0008] 昆蟲病原線蟲HbSD懸浮液制劑，包括昆蟲病原線蟲HbSD和Triton X-100。
[0009] 昆蟲病原線蟲HbSD懸浮液制劑，使用時(shí)將濃度為900-1000條/mL的昆蟲病原線 蟲HbSD原液配成27-30條/mL昆蟲病原線蟲HbSD和體積占比為0. 05 %的Triton X-100。 [0010] 昆蟲病原線蟲HbSD蟲尸劑的制備方法，使用昆蟲病原線蟲HbSD感染末齡黃粉蟲 幼蟲，第6天獲得顏色變?yōu)榧t棕色的死蟲，繼續(xù)培養(yǎng)至第9天獲得蟲尸體。
[0011] 昆蟲病原線蟲HbSD懸浮液制劑用于防治昆蟲，昆蟲為末齡大蠟螟幼蟲、3齡甘蔗 黃螟幼蟲、末齡黃粉蟲幼蟲、椰心葉甲幼蟲或末齡大袋蛾幼蟲。
[0012] 昆蟲病原線蟲HbSD蟲尸劑用于防治昆蟲，昆蟲為末齡大蠟螟幼蟲、3齡甘蔗黃螟 幼蟲、末齡黃粉蟲幼蟲、末齡椰心葉甲幼蟲或末齡大袋蛾幼蟲。。
[0013] 本發(fā)明通過(guò)篩選獲得了昆蟲病原線蟲HbSD，并發(fā)現(xiàn)其對(duì)防治害蟲具有良好的效 果。
[0014] 進(jìn)一步地，本發(fā)明的線蟲懸浮液制劑和蟲尸劑。這兩種制劑作為殺蟲劑，制備方法 和應(yīng)用方法均較簡(jiǎn)單。與現(xiàn)有技術(shù)相比，簡(jiǎn)化了線蟲殺蟲劑的制備和使用方法。
[0015] 本發(fā)明的昆蟲病原線蟲HbSD懸浮液制劑和蟲尸劑均具有效果穩(wěn)定、生產(chǎn)簡(jiǎn)易、成 本低廉、無(wú)污染、殺菌活性尚等優(yōu)點(diǎn)。
【附圖說(shuō)明】
[0016] 圖1為4種異小桿線蟲屬線蟲對(duì)末齡大蠟螟幼蟲的殺蟲性實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖；
[0017] 圖2為昆蟲病原線蟲HbSD感染期幼蟲分別對(duì)3齡甘蔗黃螟幼蟲和末齡黃粉蟲幼 蟲的殺蟲性實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖；
[0018] 圖3為昆蟲病原線蟲HbSD蟲尸劑和昆蟲病原線蟲HbSD懸浮液制劑分別對(duì)甘蔗黃 螟的防治效果圖；
[0019] 圖4為庭院噴施昆蟲病原線蟲HbSD懸浮液制劑防治香樟大袋蛾害蟲的實(shí)驗(yàn)結(jié)果 圖。
【具體實(shí)施方式】
[0020] 下面通過(guò)【具體實(shí)施方式】結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。
[0021] 本發(fā)明的昆蟲病原線蟲HbSD (Hb為異小桿線蟲簡(jiǎn)稱，SD為編號(hào)）為一種異小桿線 蟲，可通過(guò)在野外誘捕方獲得，具體方法為：將末齡黃粉蟲幼蟲置于尼龍網(wǎng)內(nèi)，埋入野外土 中，第六天收獲顏色變?yōu)榧t棕色的黃粉蟲，寄生于黃粉蟲內(nèi)的線蟲為本發(fā)明的昆蟲病原線 蟲HbSD。HbSD具有很好的生殖能力，也可以通過(guò)人工大量培養(yǎng)獲得其后代。
[0022] 昆蟲病原線蟲HbSD感染期幼蟲（IJs)為感染昆蟲病原線蟲HbSD后的昆蟲幼蟲。
[0023] 實(shí)施例一：昆蟲病原線蟲HbSD懸浮液制劑的制備方法
[0024] 第一種昆蟲病原線蟲HbSD殺蟲劑為懸浮液制劑，其制備方法包括：
[0025] 昆蟲病原線蟲HbSD懸浮液制劑的制備方法：在塑料盒底部放一層濾紙，挑選生長(zhǎng) 健康的末齡黃粉蟲幼蟲100頭置于濾紙上，用移液槍吸取濃度為1000頭/ml的HbSD線蟲 懸浮液滴加在末齡黃粉蟲上，蓋上，在室溫放置4-5天后檢查蟲體顏色變化情況：第六天， 正常感染昆蟲病原線蟲的黃粉蟲顏色變?yōu)榧t棕色，棄掉顏色不正常的黃粉蟲后繼續(xù)培養(yǎng)， 第10天收獲感染了昆蟲病原線蟲HbSD的黃粉蟲。通過(guò)"白色誘捕"法，即利用HbSD感染 期幼蟲（IJs)的趨水性收集線蟲，線蟲從昆蟲尸體內(nèi)爬進(jìn)水里，第一天收獲的棄掉，將第 2-3天的感染期幼蟲懸浮液在顯微鏡下檢查存活率，線蟲的存活率要大于95%;然后存放于 10-15Γ冰箱供下一步實(shí)驗(yàn)接用。
[0026] 使用前將存儲(chǔ)的線蟲懸浮液濃度稀釋到900-1000條線蟲/毫升，稀釋到27-30條 /mL的昆蟲病原線蟲HbSD，按溶液體積0. 05 %的比例加入Triton X-100。
[0027] Triton X-100為聚乙二醇辛基苯基醚，是一種非離子型表面活性劑，具有均勻分 散和粘稠的作用。
[0028] 本實(shí)施例選用Triton X-100作為線蟲HbSD懸浮液的單一助劑，成本低、殺蟲效率 高且不影響線蟲尋找寄生的能力。
[0029] 實(shí)施例二：昆蟲病原線蟲HbSD蟲尸劑的制備
[0030] 第二種昆蟲病原線蟲HbSD殺蟲劑為蟲尸劑，其制備方法包括：
[0031] 昆蟲病原線蟲HbSD蟲尸劑的制備方法：第1天將用收獲的昆蟲病原線蟲HbSD感 染期幼蟲感染末齡黃粉蟲幼蟲。第6天選擇顏色變?yōu)榧t棕色的黃粉蟲，繼續(xù)培養(yǎng)，第9天收 獲蟲尸體，置于50-100mL離心管內(nèi)，在10-14Γ條件下保存?zhèn)溆谩?br>[0032] 昆蟲病原線蟲HbSD的存活率要大于95%，蟲尸劑為HbSD感染后的末齡黃粉蟲幼 蟲，每個(gè)蟲尸體至少含有5000條昆蟲病原線蟲HbSD。
[0033] 本發(fā)明的兩種HbSD線蟲殺蟲劑：線蟲懸浮液制劑和蟲尸劑。制備方法和應(yīng)用方法 均較簡(jiǎn)單。與現(xiàn)有技術(shù)相比，簡(jiǎn)化了線蟲殺蟲劑的制備和使用方法。
[0034] 實(shí)施例三：昆蟲病原線蟲HbSD的殺蟲特性實(shí)驗(yàn)
[0035] 供試線蟲品系：4種嗜菌異小桿線蟲屬線蟲HbSD、HbI、HbII和Hblll。