一種長筒石蒜組織培養(yǎng)得到再生植株的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及植物快速繁殖技術(shù)領(lǐng)域，尤其設(shè)及一種長筒石蒜組織培養(yǎng)得到再生植 株的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 近年來市場上對石蒜屬植物的需求量日益增加，但石蒜有性雜交結(jié)實率(禾谷類 作物飽滿谷粒占穎花總數(shù)的百分率)很低，大部分是花而不實;其自然分球繁殖系數(shù)低、速 度慢，因而石蒜的快速繁殖技術(shù)成為迫切需要解決的問題。
[0003] 目前對石蒜組織培養(yǎng)的研究較多，但一般W其鱗莖等為外植體，通過器官發(fā)生途 徑獲得再生植株，但是運種方法的誘導(dǎo)率較低，一般不足50%。目前，還沒有利用石蒜的種 子胚或花朵為外植體誘導(dǎo)愈傷組織獲得完整植株的技術(shù)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的上述問題，提供一種長筒石蒜組織培養(yǎng)得到再生植 株的方法，利用石蒜種子胚或花朵為外植體誘導(dǎo)愈傷組織獲得完整植株，誘導(dǎo)率高。
[0005] 為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：
[0006] -種長筒石蒜組織培養(yǎng)得到再生植株的方法，主要包括W下步驟：
[0007] 步驟1、W長筒石蒜的種子胚或花朵為材料誘導(dǎo)出愈傷組織；
[000引步驟2、將愈傷組織順次進行不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)W及生根誘導(dǎo)培養(yǎng)，即得到長筒石蒜 再生植株。
[0009] 優(yōu)選的是，所述的長筒石蒜組織培養(yǎng)得到再生植株的方法中，步驟1中，誘導(dǎo)愈傷 組織所用培養(yǎng)基為愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基，所述愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基主要成分為:MS+2,4-D 1.Omg/L+6-BA 1.Omg/L。
[0010] 優(yōu)選的是，所述的長筒石蒜組織培養(yǎng)得到再生植株的方法中，所述愈傷組織誘導(dǎo) 培養(yǎng)基薦糖濃度為30-38g/L、瓊脂6.9-7.5g/L，pH值調(diào)為5.5-6.0。
[0011] 優(yōu)選的是，所述的長筒石蒜組織培養(yǎng)得到再生植株的方法中，所述愈傷組織誘導(dǎo) 培養(yǎng)基薦糖濃度為35g/L、瓊脂7. lg/L，pH值調(diào)為5.8。
[0012] 優(yōu)選的是，所述的長筒石蒜組織培養(yǎng)得到再生植株的方法中，W長筒石蒜的種子 胚為材料誘導(dǎo)愈傷組織，具體的操作方法包括W下步驟：
[0013] 步驟1.1.1、種子無菌材料的制備，將長筒石蒜種子順次進行W下操作:流水沖洗 1-2h;用質(zhì)量濃度為73-78 %乙醇溶液浸泡l-3min;無菌雙蒸水沖洗2-5次，每次10-30S;質(zhì) 量濃度為0.08-0.3 %的HgCh浸泡10-20min;無菌雙蒸水清洗2-5次，得種子無菌材料；
[0014] 步驟1.1.2無菌操作取出所述種子無菌材料中的完整種胚，即得種子胚；
[0015] 步驟1.1.3將所述種子胚接種于所述愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上；
[0016] 步驟1.1.4進行暗培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度25±rc，培養(yǎng)時間5-25d，即得所述愈傷組織。
[0017] 優(yōu)選的是，所述的長筒石蒜組織培養(yǎng)得到再生植株的方法中，W長筒石蒜的花朵 為材料誘導(dǎo)愈傷組織;具體的操作方法包括W下步驟：
[0018] 步驟1.2.1、花朵無菌材料的制備，將長筒石蒜花朵順次進行W下操作:流水沖洗 1-2h;取花朵的花被片、花絲或花莖，并切成4-6mm X 4-6mm的小塊，用質(zhì)量濃度為73-78 %乙 醇溶液浸泡l-3min;無菌雙蒸水沖洗2-5次，每次10-30S;質(zhì)量濃度為0.08-0.3 %的化Cl2浸 泡10-20min;無菌雙蒸水清洗2-5次，得花朵無菌材料；
[0019] 步驟1.2.2將所述花朵無菌材料接種于所述愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上；
[0020] 步驟1.2.3進行暗培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度25± rc，培養(yǎng)時間5-25d，即得所述愈傷組織。
[0021] 優(yōu)選的是，所述的長筒石蒜組織培養(yǎng)得到再生植株的方法中，步驟2中誘導(dǎo)不定芽 采用不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基，所述不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的主要成分為:MS+2，4-D 1. Omg/L+6-BA 1.Om邑/L;
[0022] 不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)的溫度為25±rc，自然光照培養(yǎng)，培養(yǎng)時間5-25天。
[0023] 優(yōu)選的是，所述的長筒石蒜組織培養(yǎng)得到再生植株的方法中，步驟2中生根誘導(dǎo)采 用生根誘導(dǎo)培養(yǎng)基，所述生根誘導(dǎo)培養(yǎng)基的主要成分為:MS+NAA 0.2mg/l;
[0024] 生根誘導(dǎo)不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)的溫度為25±rc，自然光照培養(yǎng)，培養(yǎng)時間5-25天。
[0025] 本發(fā)明至少包括W下有益效果:本發(fā)明利用石蒜種子胚或花朵為外植體誘導(dǎo)愈傷 組織獲得完整植株，不僅使石蒜的外植體來源更為廣泛易得，而且誘導(dǎo)成功率大幅度提高， 誘導(dǎo)成功率達(dá)到80% W上，相對于傳統(tǒng)的利用石蒜鱗莖為外植體進行誘導(dǎo)的方法提高至少 30%，從根本上解決了石蒜的快速繁殖的技術(shù)問題。此外，通過該種方法誘導(dǎo)培養(yǎng)所得植株 也更為健壯，成活率高，生長速度快。
[0026] 本發(fā)明的其它優(yōu)點、目標(biāo)和特征將部分通過下面的說明體現(xiàn)，部分還將通過對本 發(fā)明的研究和實踐而為本領(lǐng)域的技術(shù)人員所理解。
【具體實施方式】
[0027] 下面對本發(fā)明做詳細(xì)說明，W令本領(lǐng)域普通技術(shù)人員參閱本說明書后能夠據(jù)W實 施。
[0028] -種長筒石蒜組織培養(yǎng)得到再生植株的方法，主要包括W下步驟:步驟1、W長筒 石蒜的種子胚或花朵為材料誘導(dǎo)出愈傷組織;步驟2、將愈傷組織順次進行不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng) W及生根誘導(dǎo)培養(yǎng)，即得到長筒石蒜再生植株。
[0029] 本發(fā)明利用石蒜種子胚或花朵為外植體誘導(dǎo)愈傷組織獲得完整植株，不僅使石蒜 的外植體來源更為廣泛易得，而且誘導(dǎo)成功率大幅度提高，誘導(dǎo)成功率達(dá)到80% W上，相對 于傳統(tǒng)的利用石蒜鱗莖為外植體進行誘導(dǎo)的方法提高至少30%，從根本上解決了石蒜的快 速繁殖的技術(shù)問題。此外，通過該種方法誘導(dǎo)培養(yǎng)所得植株也更為健壯，成活率高，生長速 度快。
[0030] 所述的長筒石蒜組織培養(yǎng)得到再生植株的方法中，步驟1中，誘導(dǎo)愈傷組織所用培 養(yǎng)基為愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基，所述愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基主要成分為:15+2,4-〇1.〇111肖/1+6-BA 1. Omg/L。所述愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基薦糖濃度為30-38g/L、瓊脂6.9-7.5g/L，pH值調(diào)為 5.5-6.0。WMS為基本培養(yǎng)基，然后添加不同濃度的2，4-D及6-BA進行長筒石蒜愈傷組織的 誘導(dǎo)，每種材料都用4種配方誘導(dǎo)作對比試驗，不同愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方下的誘導(dǎo)成功 率見表1。
[0031]表1不同愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方下的誘導(dǎo)成功率統(tǒng)計表
[0033] 由表1可知，誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方對誘導(dǎo)成功率產(chǎn)生一定的影響，愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基 主要成分為MS+2,4-D l.Omg/L+6-BA l.Omg/L的配方誘導(dǎo)成功率顯著高于其他配方，達(dá)到 85%W 上。
[0034] 所述的長筒石蒜組織培養(yǎng)得到再生植株的方法中，所述愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基薦糖 濃度為35g/L、瓊脂7. lg/L，pH值調(diào)為5.8。
[0035] 所述的長筒石蒜組織培養(yǎng)得到再生植株的方法中，W長筒石蒜的種子胚為材料誘 導(dǎo)愈傷組織，具體的操作方法包括W下步驟:步驟1.1.1、種子無菌材料的制備，將長筒石蒜 種子順次進行W下操作:流水沖洗1-化；用質(zhì)量濃度為73-78%乙醇溶液浸泡l-3min;無菌 雙蒸水沖洗2-5次，每次10-30S;質(zhì)量濃度為0.08-0.3 %的HgCl2浸泡10-20min;無菌雙蒸水 清洗2-5次，得種子無菌材料;步驟1.1.2無菌操作取出所述種子無菌材料中的完整種胚，即 得種子胚;步驟1.1.3將所述種子胚接種于所述愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上;步驟1.1.4進行暗 培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度25 ± rC，培養(yǎng)時間5-25d，即得所述愈傷組織。
[0036] 所述的長筒石蒜組織培養(yǎng)得到再生植株的方法中，W長筒石蒜的花朵為材料誘導(dǎo) 愈傷組織;具體的操作方法包括W下步驟:步驟1.2.1、花朵無菌材料的制備，將長筒石蒜花 朵順次進行W下操作:流水沖洗1-化;取花朵的花被片、花絲或花莖，并切成4-6mmX4-6mm 的小塊，用質(zhì)量濃度為73-78%乙醇溶液浸泡l-3min;無菌雙蒸水沖洗2-5次，每次10-30S; 質(zhì)量濃度為0.08-0.3 %的HgCl2浸泡10-20min;