一種芭蕉半液體離體組培快繁方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于西貢蕉的組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種西貢蕉的半液體快速離體繁殖方法。
【背景技術(shù)】
[0002]芭蕉(MuSa basjoo)又名西貢蕉(MuSa abb)芭蕉科芭蕉屬植物，為食用蕉之一。西貢蕉具有果形美，皮薄色鮮黃，果肉嫩滑，甜度適宜，商品性好，具有耐瘠、耐旱、耐寒適應(yīng)性強。抗香蕉葉斑病、束頂病、花葉心腐病以及周年結(jié)果等特點，深受市場歡迎。在廣西、廣東、云南等地已廣泛種植，取得了較好的經(jīng)濟效益和社會效益，提高了蕉農(nóng)種植西貢蕉的積極性，傳統(tǒng)的種苗繁殖難以滿足市場上蕉苗的需求，隨著市場經(jīng)濟的發(fā)展，其產(chǎn)品供應(yīng)處于緊俏的狀況。
[0003]此外芭蕉的生物學(xué)特性與香蕉不同，在離體培養(yǎng)上無法達到香蕉的繁殖效果，褐變率高，增殖系數(shù)低，誘導(dǎo)芽分化時間長是制約芭蕉快速繁殖的主要原因，難以進行規(guī)?；?、標(biāo)準化生產(chǎn)和大面積的推廣。因此探索一個快速有效的芭蕉的繁育方法勢在必行。本發(fā)明探索將芭蕉進行半液體組培，建立一個有效的芭蕉苗組織快速繁殖程序，以解決其外植體褐變率高和芽的增殖緩慢，生長周期長等技術(shù)問題，從而達到快速繁殖芭蕉種苗，將芭蕉的半液體離體培養(yǎng)研究技術(shù)轉(zhuǎn)化為現(xiàn)實生產(chǎn)力的目的。目前，還沒有對芭蕉進行半液體組培快繁的報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]為解決現(xiàn)有組培技術(shù)對芭蕉組培快繁存在外植體褐變率高、芽的增殖緩慢、生長周期長的技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種芭蕉半液體離體組培快繁方法，以滿足芭蕉優(yōu)質(zhì)種苗的大規(guī)模生產(chǎn)需要。
[0005]本發(fā)明所提供的一種芭蕉半液體離體組培快繁方法，包括以下步驟:
[0006](I)外植體的選擇和滅菌
[0007]①將無病蟲害的芭蕉植株吸芽在自來水下沖洗干凈，剝?nèi)ネ鈱永先~和枯葉后，用質(zhì)量分數(shù)為72%硫酸鏈霉素溶液浸泡預(yù)處理3小時，再將經(jīng)預(yù)處理的吸芽剝離為直徑為2?3cm，長3?4cm的牙尖；
[0008]②將牙尖在自來水下清洗干凈，在無菌條件下，用體積分數(shù)為70%酒精浸泡30分鐘，再用質(zhì)量分數(shù)為0.I %升汞溶液滅菌25分鐘，用無菌水沖洗5?6次，再用無菌濾紙吸去表面水分；
[0009]③再將牙尖分割留下生長點及其周圍有4?5層葉鞘的切塊為外植體；
[0010](2)誘導(dǎo)培養(yǎng)
[0011 ]將步驟(I)③所述外植體接種到半液體誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，在溫度為28?30°C，光照強度為1600?20001x，光照時間為8h/d，每分鐘搖動30次的恒溫搖床培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)50天?60天，得到瘤狀芽體，所述半液體誘導(dǎo)培養(yǎng)基為:
[0012]MS培養(yǎng)液+6-BA 4mg/L+NAA 0.15mg/L+蔗糖30g/L+活性炭0.5g/L+瓊脂3g/L，pH5.6?5.8 ；
[0013](3)增殖繼代培養(yǎng)
[0014]①將誘導(dǎo)培養(yǎng)獲得的瘤狀芽體分割為0.4cm X 0.4cm?0.6cm X 0.6cm帶芽體的小塊，接種到固體增殖繼代培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度28?30°C，光照強度1600?2000Ix，光照時間8h/d條件下培養(yǎng)25?30天，得到小苗，所述固體增殖繼代培養(yǎng)基為:
[0015]MS培養(yǎng)液+6-BA 3mg/L+NAA 0.15mg/L+蔗糖30g/L+活性炭0.5g/L+瓊脂6.0g/L，pH5.6?5.8 ；
[0016]②將步驟(3)①培養(yǎng)得到小苗中苗高度小于3cm的小苗切割繼續(xù)轉(zhuǎn)接到步驟(3)①中所述的固體增殖繼代培養(yǎng)基中，在步驟(3)①中所述的培養(yǎng)條件下培養(yǎng)25?30天得到苗高達3cm以上的小苗；
[0017](4)生根培養(yǎng)
[0018]將步驟(3)①和步驟(3)②培養(yǎng)得到的苗高達3cm以上的小苗接種到生根培養(yǎng)基中，在溫度23?25°C，光照強度2000?23001x，光照時間為8h/d的條件下培養(yǎng)15?20天，得生根苗，所述生根培養(yǎng)基為:
[0019]MS培養(yǎng)液+NAA 0.5mg/L+IBA 0.lmg/L+蔗糖30g/L+活性炭0.5g/L+瓊脂6.0g/L，pH5.6?5.8。
[0020]本發(fā)明具有下列優(yōu)點和有益效果:
[0021]1、本發(fā)明通過半液體恒溫搖床培養(yǎng)，有效減少了芭蕉的褐變率，顯著提高吸芽的誘導(dǎo)分化率和增殖系數(shù)，解決了芭蕉外植體易褐變、褐變率高和芽的增殖系數(shù)低，生長緩慢的技術(shù)問題，建立了一個有效的芭蕉組培苗快繁程序。本發(fā)明技術(shù)方案，比常規(guī)固體培養(yǎng)方法縮短培養(yǎng)周期40?60天。減少了芭蕉的褐變率，褐變率只占10%，常規(guī)培養(yǎng)褐變率達到70?80%，顯著提高吸芽的誘導(dǎo)分化率。
[0022]2、本發(fā)明對整個芭蕉種苗生產(chǎn)技術(shù)流程中關(guān)鍵環(huán)節(jié)所提出的技術(shù)方案，大大節(jié)約了生產(chǎn)成本和生產(chǎn)時間。
[0023]3、本發(fā)明能使種苗性狀穩(wěn)定，種苗來源單一，適宜標(biāo)準化、工廠化規(guī)?；a(chǎn)，為市場提供了統(tǒng)一標(biāo)準的優(yōu)良種苗。
【具體實施方式】
[0024]以下實施例無特殊說明的為常規(guī)方法。
[0025]實施例1
[0026](I)外植體的選擇和滅菌
[0027]①于每年3月，選擇生長健壯，無病蟲害的芭蕉植株吸芽在自來水下沖洗干凈，剝?nèi)ネ鈱永先~和枯葉后，用質(zhì)量分數(shù)為72%硫酸鏈霉素溶液浸泡預(yù)處理3小時，再將經(jīng)預(yù)處理的吸芽剝離為直徑為2?3cm，長3?4cm的牙尖；
[0028]②將牙尖在自來水下清洗干凈，在無菌條件下，用體積分數(shù)為70%酒精浸泡30分鐘，再用質(zhì)量分數(shù)為0.I %升汞溶液滅菌25分鐘，用無菌水沖洗5?6次，再用無菌濾紙吸去表面水分；
[0029]③再將牙尖分割留下生長點及其周圍有4?5層葉鞘的切塊為外植體。
[0030] (2)誘導(dǎo)培養(yǎng)
[0031 ]將步驟(I)③所述外植體接種到半液體誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，在溫度為28?30°C，光照強度為1600?20001x，光照時間為8h/d，每分鐘搖動30次的恒溫搖床培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)50天，得到瘤狀芽體，所述半液體誘導(dǎo)培養(yǎng)基為:
[0032]MS培養(yǎng)液+6-BA 4mg/L+NAA 0.15mg/L+蔗糖30g/L+活性炭0.5g/L+瓊脂3g/L，pH5.6?5.8o
[0033](3)增殖繼代培養(yǎng)
[0034]①將步驟(2)誘導(dǎo)培養(yǎng)獲得的瘤狀芽體分割為0.4cm X 0.4cm?0.6cm X 0.6cm帶芽體的小塊，接種到固體增殖繼代培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度28?30°C，光照強度1600?20001x，光照時間8h/d條件下培養(yǎng)25天，得到小苗，所述固體增殖繼代培養(yǎng)基為:
[0035]MS培養(yǎng)液+6-BA 3mg/L+NAA 0.15mg/L+蔗糖30g/L+活性炭0.5g/L+瓊脂6.0g/L，pH5.6?5.8 ；
[0036]②將步驟(3)①培養(yǎng)得到小苗中苗高度小于3cm的小苗切割繼續(xù)轉(zhuǎn)接到步驟(3)①中所述的固體增殖繼代培養(yǎng)基中，在步驟(3)①中所述的培養(yǎng)條件下培養(yǎng)25天，得到苗高達3cm以上的小苗。
[0037](4)生根培養(yǎng)
[0038]將步驟(3)①和步驟(3)②培養(yǎng)得的苗高達3cm以上的小苗接種到生根培養(yǎng)基中，在溫度23?25°C，光照強度2000?23001x，光照時間為8h/d的條件下培養(yǎng)16天，得生根苗，所述生根培養(yǎng)基為:
[0039]MS培養(yǎng)液+NAA 0.5mg/L+IBA 0.lmg/L+蔗糖30g/L+活性炭0.5g/L+瓊脂6.0g/L，pH5.6?5.8o
[0040]實驗效果:
[0041 ] 減少了芭蕉的褐變率，褐變率只占10%，常規(guī)培養(yǎng)褐變率達到70?80%，顯著提高了吸芽的誘導(dǎo)分化率。培養(yǎng)周期為116天，比常規(guī)固體培養(yǎng)方法縮短培養(yǎng)周期40?60天。
【主權(quán)項】
1.一種芭蕉半液體離體組培快繁方法，包括以下步驟: (1)外植體的選擇和滅菌 ①將無病蟲害的芭蕉植株吸芽在自來水下沖洗干凈，剝?nèi)ネ鈱永先~和枯葉后，用質(zhì)量分數(shù)為72%硫酸鏈霉素溶液浸泡預(yù)處理3小時，再將經(jīng)預(yù)處理的吸芽剝離為直徑為2?3cm，長3?4cm的牙尖； ②將牙尖在自來水下清洗干凈，在無菌條件下，用體積分數(shù)為70%酒精浸泡30分鐘，再用質(zhì)量分數(shù)為0.1 %升汞溶液滅菌25分鐘，用無菌水沖洗5?6次，再用無菌濾紙吸去表面水分； ③再將牙尖分割留下生長點及其周圍有4?5層葉鞘的切塊為外植體； (2)誘導(dǎo)培養(yǎng) 將步驟(1)③所述外植體接種到半液體誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，在溫度為28?30°C，光照強度為.1600?20001x，光照時間為8h/d，每分鐘搖動30次的恒溫搖床培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)50天?60天，得到瘤狀芽體，所述半液體誘導(dǎo)培養(yǎng)基為: MS培養(yǎng)液+6-BA 4mg/L+NAA 0.15mg/L+蔗糖30g/L+活性炭0.5g/L+瓊脂3g/L，pH 5.6?.5.8； (3)增殖繼代培養(yǎng) ①將誘導(dǎo)培養(yǎng)獲得的瘤狀芽體分割為0.4cm X 0.4cm?0.6 cm X 0.6cm帶芽體的小塊，接種到固體增殖繼代培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度28?30°C，光照強度1600?20001x，光照時間8h/d條件下培養(yǎng)25?30天，得到小苗，所述固體增殖繼代培養(yǎng)基為: MS培養(yǎng)液+6-BA 3mg/L+NAA 0.15mg/L+蔗糖30g/L+活性炭0.5g/L+瓊脂6.0g/L，pH 5.6?5.8; ②將步驟(3)①培養(yǎng)得到小苗中苗高度小于3cm的小苗切割繼續(xù)轉(zhuǎn)接到步驟(3)①中所述的固體增殖繼代培養(yǎng)基中，在步驟(3)①中所述的培養(yǎng)條件下培養(yǎng)25?30天得到苗高達.3cm以上的小苗； (4)生根培養(yǎng) 將步驟(3)①和步驟(3)②培養(yǎng)得到的苗高達3cm以上的小苗接種到生根培養(yǎng)基中，在溫度23?25°C，光照強度2000?23001x，光照時間為8h/d的條件下培養(yǎng)15?20天，得生根苗，所述生根培養(yǎng)基為: MS培養(yǎng)液+NAA 0.5mg/L+IBA 0.lmg/L+蔗糖30g/L+活性炭0.5g/L+瓊脂6.0g/L，pH 5.6?5.8.
【專利摘要】本發(fā)明公開一種芭蕉半液體離體組培快繁方法。該方法包括半液體誘導(dǎo)培養(yǎng)基：MS培養(yǎng)液+6-BA？4mg/L+NAA？0.15mg/L+蔗糖30g/L+活性炭0.5g/L+瓊脂3g/L，pH？5.6～5.8，在溫度28～30℃，光照強度1600～2000lx，光照8h/d，每分鐘搖動30次的恒溫搖床培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。增殖繼代培養(yǎng)基主要為：MS培養(yǎng)液+6-BA？3mg/L+NAA？0.15mg/L+活性炭0.5g/L；生根培養(yǎng)基主要為：MS培養(yǎng)液+NAA？0.5mg/L+IBA0.1mg/L+活性炭0.5g/L。本發(fā)明減少了芭蕉的褐變率，顯著提高了誘導(dǎo)分化率和增殖系數(shù)，縮短了培養(yǎng)周期。
【IPC分類】A01H4/00
【公開號】CN105519446
【申請?zhí)枴緾N201610083786
【發(fā)明人】蘇艷, 楊寶明, 瞿素萍, 張藝萍, 王繼華, 王麗花, 楊秀梅, 張麗芳, 許鳳
【申請人】云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院花卉研究所
【公開日】2016年4月27日
【申請日】2016年2月10日