蠟樣芽孢桿菌bcjb01在防治根結(jié)線蟲方面的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及菌株的應(yīng)用領(lǐng)域，特別是設(shè)及蠟樣芽抱桿菌BCJBOl在防治根結(jié)線蟲方 面的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 根結(jié)線蟲病是一種嚴重的植物線蟲寄生性病害，常造成嚴重的經(jīng)濟損失。根結(jié)線 蟲病害的防治是目前農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上亟待解決的難題。傳統(tǒng)的防治措施主要包括化學(xué)防治、輪 作和使用抗病品種等，但運些防治措施都有其局限性。利用微生物防治根結(jié)線蟲，具有可持 續(xù)發(fā)展的優(yōu)勢，是根結(jié)線蟲病害可持續(xù)治理的理想途徑之一。
[0003] 利用生防細菌防治根結(jié)線蟲的研究報道，主要有根圍促生細菌、穿刺己氏桿菌、假 單胞桿菌、蘇云金芽抱桿菌、枯草芽抱桿菌、類芽抱桿菌、巨大芽抱桿菌、解淀粉芽抱桿菌 等，它們在線蟲生物防治中有著巨大的開發(fā)潛力，其價值也逐漸被人們認知。但是現(xiàn)有的生 防細菌防治根結(jié)線蟲的效果仍需改善加強，新的生防細菌也需要繼續(xù)開發(fā)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的就是針對上述存在的缺陷而提供蠟樣芽抱桿菌BCJBOl在防治根結(jié) 線蟲方面的應(yīng)用。本發(fā)明提供了一種新的防治根結(jié)線蟲的菌株，其效果不低于市面上現(xiàn)有 化學(xué)藥劑，在防治根結(jié)線蟲方面有著極大的進步。
[0005] 本發(fā)明的蠟樣芽抱桿菌BCJBOl在防治根結(jié)線蟲方面的應(yīng)用技術(shù)方案為，蠟樣芽抱 桿菌BCJBOl的上清液和菌懸液對番茄根結(jié)線蟲二齡幼蟲和即將解化出二齡幼蟲的卵均有 完全致死作用。
[0006] 本發(fā)明所述蠟樣芽抱桿菌（Bacillus cereus)BCJB01，其保藏號為CGMCC NO. 10477，保藏單位：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中屯、(簡稱CGMCC)，地址： 北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，郵編：100101，保藏日期為2015年1月30日。
[0007] 將蠟樣芽抱桿菌BCJBOl發(fā)酵液制備成生防菌劑進行蔬菜根結(jié)線蟲病的防治。
[000引蠟樣芽抱桿菌Bacillus cereus BCJBOl發(fā)酵液的制備具體為：培養(yǎng)溫度30°C，轉(zhuǎn) 速1IORPM，發(fā)酵時間為36~44h，發(fā)酵液抑維持在7.0，溶氧量20%，通氣量8~小時，罐 壓0.05~0.化化，產(chǎn)抱率為80%W上，活菌計數(shù)7X109 CFU ? mL-i;發(fā)酵培養(yǎng)基配方:玉米粉 2o/o，豆巧粉l%，酵母粉0.3%，CaCl2 0.1%，MgS04?7H20 0.035%，Na2冊04?12H20 0.3o/o， 船也口04*2也0 0.15%，口職.0~7.2。
[0009]所述的生防菌劑為懸浮劑，將蠟樣芽抱桿菌Bacillus cereus BCJBOl發(fā)酵液與表 面活性劑、防腐劑、懸浮助劑和增稠劑等混合制備懸浮劑，其中懸浮助劑是氯化鐘。本發(fā)明 的懸浮劑的懸浮助劑選擇氯化鐘替代現(xiàn)在常用的氯化鋼，在實際應(yīng)用中即可減少±壤環(huán)境 中氯化鋼的含量，防止±壤鹽堿化，同時氯化鐘可作為鐘肥能被作物吸收利用。優(yōu)選的，本 發(fā)明懸浮助劑是氯化鐘，防腐劑是雙乙酸鋼，表面活性劑是有機娃抓-3077，增稠劑是黃原 膠。
[0010] 所述的懸浮劑具體制備方法為:在蠟樣芽抱桿菌Bacillus cereus BCJBOl發(fā)酵液 中，按質(zhì)量百分比加入氯化鐘5 %~8 %，雙乙酸鋼0.1 %~0.5 %，有機娃抓-3077 0.1 %~ 0.3 %，黃原膠0.2 %~0.3 %制得懸浮劑，所得懸浮劑中BCJBO1活菌計數(shù)5 X 1〇9 C化? mL-i。 W上各組份的用量均WBCJB01菌的發(fā)酵液的質(zhì)量為基數(shù)。
[0011] 所述的生防菌劑為粉劑，將蠟樣芽抱桿菌Bacillus cereus BCJBOl與保護劑混 合，然后噴霧干燥制備母粉，繼而W草炭±為載體，殼聚糖為增效劑，脂肪醇聚氧乙締酸為 潤濕劑，2-糞橫酸甲醒聚合物鋼鹽為分散劑，巧光增白劑CBS為紫外保護劑，將BCJBOl母粉 制成粉劑，其中噴霧保護劑為白炭黑、甘油和吐溫80的混合物，保護劑濃度為14~20%，母 粉中活菌得率平均在60%W上，活菌數(shù)在150億個/gW上。
[0012] 所述粉劑由按重量比的W下成分組成： 母粉5~10重量份 草炭±55~77重量份 殼聚糖1~2.5重量份 2-糞橫酸甲醒聚合物鋼鹽3~5重量份 脂肪醇聚氧乙締酸3~5重量份 巧光增白劑CBS 0.2~0.5重量份。
[0013] 本發(fā)明的蠟樣芽抱桿菌BCJBOl在防治根結(jié)線蟲方面的應(yīng)用有益效果為:BCJBOl發(fā) 酵上清液及其菌懸液對番茄根結(jié)線蟲二齡幼蟲均有致死作用，致死作用隨著稀釋液濃度的 降低而減小，隨著處理時間的延長而加大。本發(fā)明中的BCJBOl懸浮劑在每畝用量化時的防 治效果最好，防效為91.59%dBCJB01粉劑在每畝用量8kg時的防治效果為90.40%。本發(fā)明中 的BCJBOl懸浮劑和粉劑對番茄根結(jié)線蟲的防治效果均好于已商品化的B418菌株制劑。其 中，在相同使用劑量下，BCJBO1懸浮劑防治效果較B418懸浮劑提高1.37倍，BCJBO1粉劑防治 效果較B418粉劑提高1.11倍。本發(fā)明中的BCJBO1懸浮劑畝用量2L時的防效為76.64%， BCJBOl粉劑畝用量4kg時的防效為78.12%，均與當(dāng)前市場上防治效果最好的化學(xué)藥劑10%嚷 挫麟顆粒劑相近。表明本發(fā)明中的BCJBOl懸浮劑和粉劑是效果很好的微生物殺線劑。
【附圖說明】
[0014] 圖1所示為蠟樣芽抱桿菌(Bacillus cereus)BCJB01對根結(jié)線蟲二齡幼蟲卵的致 死過程。
[0015] 圖2所示為BCJBOl致死的二齡幼蟲。
[0016]
【具體實施方式】： 為了更好地理解本發(fā)明，下面用具體實例來詳細說明本發(fā)明的技術(shù)方案，但是本發(fā)明 并不局限于此。
[0017] 本發(fā)明所述蠟樣芽抱桿菌（Bacillus cereus)BCJB01，其保藏號為CGMCC NO. 10477,保藏單位:中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中屯、(簡稱CGMCC)。
[001引實施例1 BCJBOl菌株分離及鑒定 1、本發(fā)明設(shè)及番茄根結(jié)線蟲二齡幼蟲和即將解化出二齡幼蟲的卵均有致死作用的 BCJBOl菌株，分離于山東省聊城市高唐縣白菜田±壤中。菌種保藏號為CGMCC NO. 10477。
[0019] 2、菌株鑒定 采用采用生理生化特征測定和ieSrDNA序列比對分析結(jié)合的方法將菌株BC JBOl鑒定為 蠟樣芽抱桿菌(BacilIus cereus)。同時，將分離純化的單菌落同時進行V.P試驗、菌膜形成 試驗、卵憐脂酶試驗、淀粉水解試驗、酪蛋白水解試驗、屯葉靈、纖維二糖等屯個重要特征的 鑒定，測定依據(jù)均參照東秀珠、蔡妙英等編著的《常見細菌系統(tǒng)鑒定手冊》。
[0020] 實施例2 BC JBOl對番茄根結(jié)線蟲二齡幼蟲的致死作用 1. BC JBOl發(fā)酵液的制備，按W下步驟進行： (1)斜面菌種:采用固體LB培養(yǎng)基，將蠟樣芽抱桿菌BCJBO1接種在試管培養(yǎng)基上，3(TC 培養(yǎng)24小時。
[0021 ] (2)搖瓶菌種:采用液體LB培養(yǎng)基，將試管菌種接種在液體LB培養(yǎng)基中，置搖床上 30°C，振蕩培養(yǎng)15小時。
[0022] (3)液體發(fā)酵:采用培養(yǎng)基，玉米粉2%，豆巧粉1%，酵母粉0.3%，〔曰(：12〇.1%，1旨5〇4-7出0 0.035%，化抽口04*12此0 0.3%，化出口04*2此0 0.15%，口職.0~7.2。121。(：滅菌20分鐘， 將(2)的種子接種于10升的發(fā)酵罐內(nèi)（接種量為5%wt)，30°C培養(yǎng)，溶氧量20%，通氣量8~ 12m3/小時，罐壓0.05~0.1 KPa,攬拌速度為110RPM，培養(yǎng)時間為36~44小時；在芽抱脫落 80 %時終止發(fā)酵。
[0023] 2 .根結(jié)線蟲二齡幼蟲的制備 根結(jié)線蟲采自常年發(fā)病的實驗田，取番茄病根，流水洗凈，置解剖鏡下挑取新鮮卵囊， 放入直徑9cm的滅菌培養(yǎng)皿內(nèi)，用