螺雄性四倍體純系高效育成方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種螺雄性四倍體純系高效育成方法，包括如下步驟：他莫昔芬喂養(yǎng)料的配備、對母螺進行投喂他莫昔芬喂養(yǎng)料、熱休克處理、雌激素抑制劑溶液的配制、雌激素抑制劑溶液泡浴、獲得螺的雄性四倍體純系。通過此方法，可獲得100%的螺雄性四倍體純系。此方法，不僅有效地育成螺的四倍體，而且提高了四倍體的育成率與出苗率，為生產(chǎn)三倍體不育魚奠定了堅實的基礎。
【專利說明】
螺雄性四倍體純系高效育成方法
技術領域
[0001] 本發(fā)明涉及螺的多倍體繁育方法，具體涉及螺雄性四倍體純系高效育成方法。
【背景技術】
[0002] 螺的分布、種類多，是指腹足類(gastropod)動物，特別是指有一個封閉的殼，可以 完全縮入其中以得保護的腹足類動物，常見的有環(huán)棱螺、田螺等等，螺的繁育方式一般為卵 胎生。因螺三倍體的不育特征，使其在生長速度、抗病性、肉質等方面表現(xiàn)出更為顯著的優(yōu) 勢?，F(xiàn)有技術中，要獲得三倍體不育螺，最快捷有效的方法是通過四倍體螺與二倍體螺倍間 雜交獲得，那么就需要建立遺傳穩(wěn)定、純度極高的四倍體螺純系。但在螺的遺傳育種中，到 目前為止還未見四倍體全雄螺育成的報道。

【發(fā)明內容】

[0003] 針對上述現(xiàn)有技術存在的不足，本發(fā)明的目的是提供一種方法穩(wěn)定、種群純度高 達100%的螺雄性四倍體純系高效育成方法。
[0004] 為達到上述目的，本發(fā)明的技術方案如下： 螺雄性四倍體純系高效育成方法，包括如下步驟： (1) 他莫昔芬喂養(yǎng)料的配備:取純度為95%以上的他莫昔芬粉劑，加入到螺人工飼養(yǎng)飼 料中，制成喂養(yǎng)料，其中他莫昔芬含量為10~20g/500g喂養(yǎng)料，待用； (2) 投喂:在母螺產(chǎn)卵前5~10天，按常規(guī)飼料投喂方法對母螺進行投喂他莫昔芬喂養(yǎng) 料，每天兩次，早上8:00每100g母螺投喂5~10g，下午6:00每100g母螺投喂8~10g;至其卵 發(fā)育成熟，然后，取公螺放在一起，使其自然產(chǎn)卵受精，得受精懷卵母螺； (3) 熱休克處理:觀察懷卵母螺受精卵的發(fā)育情況，在受精卵第一次卵裂前2~3min，把 步驟⑵中的懷卵母螺放入溶氧達5~8mg/l、溫度為39~42°C恒溫水中，熱休克3~5min，待 用； (4) 雌激素抑制劑溶液的配制:將氯米芬和睪酮一起溶于80%~90%的乙醇中，再加蒸餾 水配制成雌激素抑制劑溶液，其中雌激素抑制劑溶液中氯米芬的濃度為100~200mg/l，睪 酮的濃度為10~50mg/l; (5) 取步驟(3)處理后的懷卵母螺，放入用步驟(4)所制備的雌激素抑制劑溶液中，常溫 泡浴60~120S，懷卵母螺與溶液比為1:2，通過充氧，使溶液中的氧氣含量達5~10mg/l; (6) 取步驟(5)處理后的懷卵母螺，放入育苗池中進行常規(guī)育苗培育;直至產(chǎn)出幼螺，從 而獲得1 〇〇%螺的雄性四倍體純系。
[0005] 本發(fā)明的優(yōu)點：1、本發(fā)明中對母本進行添加他莫昔芬飼料投喂，起到抑制DNA分裂 和促雄性的雙重作用的同時，將受精卵第一次卵裂的時間推遲了 3~5min，并提高所有受精 卵第一次卵裂的同步程度(可達99%)，為操作下一步提供時間保障和奠定染色體加倍基礎； 2、較短的熱休克處理，不僅有效減少對受精卵的不良影響，提高受精卵的成活率，而且進一 步加強了四倍體的形成機率;3、雌激素抑制劑溶液浸泡，再一次強化與保證其雄性的轉化 率。因而通過此方法，可獲得100%的螺雄性四倍體純系。此方法，不僅有效地育成螺的四倍 體，而且提高了四倍體的育成率與出苗率，為生產(chǎn)三倍體不育魚奠定了堅實的基礎。
【具體實施方式】
[0006] 現(xiàn)結合具體實施例，對本發(fā)明作進一步描述。
[0007] 實施例一 螺雄性四倍體純系高效育成方法，包括如下步驟： (1) 他莫昔芬喂養(yǎng)料的配備:取純度為95%以上的他莫昔芬粉劑，加入到螺人工飼養(yǎng)飼 料中，制成喂養(yǎng)料，其中他莫昔芬含量為10g/500g喂養(yǎng)料，待用； (2) 投喂:在母螺產(chǎn)卵前5天，按常規(guī)飼料投喂方法對母螺進行投喂他莫昔芬喂養(yǎng)料，每 天兩次，早上8:00每100g母螺投喂10g，下午6:00每100g母螺投喂8g;至其卵發(fā)育成熟，然 后，取公螺放在一起，使其自然產(chǎn)卵受精，得受精懷卵母螺； (3) 熱休克處理:觀察懷卵母螺受精卵的發(fā)育情況，在受精卵第一次卵裂前2min，把上 述懷卵母螺放入溶氧達5mg/l(通過人工充氧）、溫度為42°C恒溫水中，熱休克5min，待用； (4) 雌激素抑制劑溶液的配制:將氯米芬和睪酮一起溶于80%的乙醇中，再加蒸餾水配 制成雌激素抑制劑溶液，其中雌激素抑制劑溶液中氯米芬的濃度為200mg/l，睪酮的濃度為 50mg/l； (5) 取步驟(3)處理后的懷卵母螺，放入用步驟(4)所制備的雌激素抑制劑溶液中，常溫 泡浴120S，懷卵母螺與溶液比為1:2，通過充氧，使溶液中的氧氣含量達5mg/l; (6) 取步驟(5)處理后的懷卵母螺，放入育苗池中進行常規(guī)育苗培育;直至產(chǎn)出幼螺，從 而獲得1 〇〇%螺的雄性四倍體純系。
[0008] 實施例二 螺雄性四倍體純系高效育成方法，包括如下步驟： (1) 他莫昔芬喂養(yǎng)料的配備:取純度為95%以上的他莫昔芬粉劑，加入到螺人工飼養(yǎng)飼 料中，制成喂養(yǎng)料，其中他莫昔芬含量為20g/500g喂養(yǎng)料，待用； (2) 投喂:在母螺產(chǎn)卵前10天，按常規(guī)飼料投喂方法對母螺進行投喂他莫昔芬喂養(yǎng)料， 每天兩次，早上8:00每100g母螺投喂5~5g，下午6:00每100g母螺投喂10g;至其卵發(fā)育成 熟，然后，取公螺放在一起，使其自然產(chǎn)卵受精，得受精懷卵母螺； (3) 熱休克處理:觀察懷卵母螺受精卵的發(fā)育情況，在受精卵第一次卵裂前3min，把步 驟(2)中的懷卵母螺放入溶氧達8mg/l(通過人工充氧）、溫度為39°C恒溫水中，熱休克3min， 待用； (4) 雌激素抑制劑溶液的配制:將氯米芬和睪酮一起溶于90%的乙醇中，再加蒸餾水配 制成雌激素抑制劑溶液，其中雌激素抑制劑溶液中氯米芬的濃度為180mg/l，睪酮的濃度為 30mg/l； (5) 取步驟(3)處理后的懷卵母螺，放入用步驟(4)所制備的雌激素抑制劑溶液中，常溫 泡浴60S，懷卵母螺與溶液比為1:2，通過充氧，使溶液中的氧氣含量達10mg/l; (6) 取步驟(5)處理后的懷卵母螺，放入育苗池中進行常規(guī)育苗培育;直至產(chǎn)出幼螺，從 而獲得1 〇〇%螺的雄性四倍體純系。
[0009] 上述兩個實施例僅為本發(fā)明的優(yōu)選方案之二，并不能限制本發(fā)明的保護范圍，任 意與本發(fā)明等同或相似的技術手段視為本發(fā)明的保護范圍。以下附上本發(fā)明部分處理方式 及結果統(tǒng)計。
[0010]附:螺雄性四倍體育成結果統(tǒng)計
注:上述結果是母螺產(chǎn)卵前10天投喂他莫昔芬，一次卵裂前3min熱休克保持3min，雌激 素抑制劑浸泡60s所取得的結果。
【主權項】
1.螺雄性四倍體純系高效育成方法，包括如下步驟： (1) 他莫昔芬喂養(yǎng)料的配備：取純度為95%以上的他莫昔芬粉劑，加入到螺人工飼養(yǎng)飼 料中，制成喂養(yǎng)料，其中他莫昔芬含量為10~20g/500g喂養(yǎng)料，待用； (2) 投喂：在母螺產(chǎn)卵前5~10天，按常規(guī)飼料投喂方法對母螺進行投喂他莫昔芬喂養(yǎng) 料，每天兩次，早上8:00每100g母螺投喂5~10g，下午6:00每100g母螺投喂8~10g;至其卵 發(fā)育成熟，然后，取公螺放在一起，使其自然產(chǎn)卵受精，得受精懷卵母螺； (3) 熱休克處理:觀察懷卵母螺受精卵的發(fā)育情況，在受精卵第一次卵裂前2~3min，把 步驟⑵中的懷卵母螺放入溶氧達5~8mg/l、溫度為39~42°C恒溫水中，熱休克3~5min，待 用； (4) 雌激素抑制劑溶液的配制:將氯米芬和睪酮一起溶于80%~90%的乙醇中，再加蒸餾 水配制成雌激素抑制劑溶液，其中雌激素抑制劑溶液中氯米芬的濃度為100~200mg/l，睪 酮的濃度為10~50mg/l; (5) 取步驟(3)處理后的懷卵母螺，放入用步驟(4)所制備的雌激素抑制劑溶液中，常溫 泡浴60~120S，懷卵母螺與溶液比為1:2，通過充氧，使溶液中的氧氣含量達5~10mg/l; (6) 取步驟(5)處理后的懷卵母螺，放入育苗池中進行常規(guī)育苗培育;直至產(chǎn)出幼螺，從 而獲得1 〇〇%螺的雄性四倍體純系。
【文檔編號】A01K61/00GK105994077SQ201610496053
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年6月30日
【發(fā)明人】楊品紅, 黃海洪, 類延菊
【申請人】湖南文理學院