專利名稱：保護(hù)活體免受外部因子損害的方法及組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種預(yù)防由外部因子引起的活體損害的方法及組合物，包括一種通過提取操作處理蘑菇而獲得的物質(zhì)。
背景技術(shù)：
一個人總是被環(huán)境污染物這樣的外部因子所包圍。環(huán)境污染物包括如無數(shù)類型的病毒、細(xì)菌、霉菌、寄生蟲等生物，以及為數(shù)眾多的除這些生物之外的抗原物質(zhì)、煙草煙中的致癌物質(zhì)以及致癌作用促進(jìn)物質(zhì)。為了保持健康，應(yīng)當(dāng)消除這些外部因子的負(fù)面影響。
在這樣的環(huán)境下，由于保持健康的期望在增強(qiáng)，通常，更多人傾向于攝入健康食物和健康補(bǔ)品。因此，幾乎沒有副作用并含有一種活性成分(特別地，具有抗腫瘤效果)的天然物質(zhì)正受到注意以用于健康食品或健康補(bǔ)品。這是由于化學(xué)藥劑和合成的成分隨同抗腫瘤活性一起還顯示了許多副作用。具有一種活性成分的天然物質(zhì)的實例包括蘑菇、食用菌等。
許多具有抗腫瘤活性的多糖都分離自蘑菇(Hamuro J等(1978)，Cancer Res.383080-3085；Mizuno T等(1992)，Biosci.Biotechnol.Biochem.56347-348)。通常叫作蘑菇的食用菌屬于擔(dān)子門(Basidiomycota)的菌蕈科(Agaricaceae)，并且植物學(xué)名稱為(Agaricus blazei Murill)而日文名稱為“kawariharatake”。Agaricus blazei Murill(下文，統(tǒng)稱為ABM，或蘑菇)傳統(tǒng)上已在巴西圣保羅的Piedade地區(qū)用作藥劑。據(jù)稱蘑菇具有多種免疫激活活性、防癌作用、腫瘤生長抑制作用等。當(dāng)前，蘑菇作為健康食物供應(yīng)國內(nèi)使用。
來自蘑菇的多糖包括β-1，6-吡喃葡糖殘基并具有抗肉瘤180的抗腫瘤活性(Ebina T等(1986)，Jpn.J.Cancer Res 771034-1042)。來自蘑菇的提取物包括具有(1→6)-β-分枝鏈，并具有天然的殺傷細(xì)胞激活活性以及通過細(xì)胞凋亡介異的選擇性抗腫瘤活性的(1→4)-α-D-葡聚糖(Fujimiya Y等(1998)，Cancer Immunol Immunother46147-159)。來自蘑菇的肽聚糖具有直接的在雙重植入腫瘤系統(tǒng)中抗Meth A腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒活性以及間接的在患腫瘤小鼠中的免疫增強(qiáng)活性。(Ebina T等(1998)，Biotherapy 11259-265)。來自蘑菇的多糖改變在小鼠T細(xì)胞亞群中脾Thy1，2-，L3T4陽性細(xì)胞的百分率(Mizuno M等(1998)，Biosci.Biochem.62434-437)。這些報告提示來自蘑菇的多糖具有通過免疫調(diào)節(jié)活性來對抗腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒性活性。
曾有許多報告稱多種自然物質(zhì)，特別是蘑菇提取物具有免疫增強(qiáng)活性及抗腫瘤活性。但是，沒有報告它們通過延遲的超敏感作用或抗體的生產(chǎn)來增強(qiáng)免疫活性。蘑菇提取物如何激活免疫系統(tǒng)的機(jī)制尚未得到解決。而且，幾乎沒有報告特別證實蘑菇提取物具有除免疫激活活性、致癌作用預(yù)防效果以及腫瘤生長抑制效果之外的一種生物活性。

發(fā)明內(nèi)容
一個活體總是處于環(huán)境污染物這樣的外部因子中。環(huán)境污染物包括如無數(shù)類型的病毒、細(xì)菌、霉菌、寄生蟲等生物，以及為數(shù)眾多的除這些生物之外的抗原物質(zhì)、致癌物質(zhì)以及抽煙中的致癌作用促進(jìn)物質(zhì)。據(jù)認(rèn)為這些活體的外部因子或產(chǎn)生于活體中的異常的變異細(xì)胞(如，癌細(xì)胞)主要是通過活體的免疫系統(tǒng)的感染保護(hù)功能和免疫監(jiān)測機(jī)制去除的。因而，增強(qiáng)活體的免疫系統(tǒng)以維持并增強(qiáng)個體的健康是重要的。真實地檢驗自然物質(zhì)蘑菇的生物活性效果也是一個重要問題，其對于維持并增強(qiáng)個體的健康是必要的，比如多種免疫激活活性、致癌作用預(yù)防效果、腫瘤生長抑制效果、免疫激活效果等。
我們通過檢驗?zāi)⒐教崛∥锸欠裾T導(dǎo)抗體生產(chǎn)，并且研究其機(jī)制而完成了本發(fā)明。另外，我們通過讓小鼠吸入初級煙草煙，確定肺中的DNA危害，并且進(jìn)一步確定蘑菇提取物在防止這種危害中的效果而完成了本發(fā)明。
本發(fā)明涉及用于保護(hù)活體免受外部因子損害的組合物，并且該組合物包括來自蘑菇的提取物。
該組合物可以通過激活免疫活性細(xì)胞來保護(hù)活體。
該免疫活性細(xì)胞可以是巨噬細(xì)胞。
該免疫活性細(xì)胞可以是巨噬細(xì)胞或T細(xì)胞。
該免疫活性細(xì)胞可以是抗體生產(chǎn)細(xì)胞。
該組合物可以通過體液免疫的增強(qiáng)來保護(hù)活體。
該外部因子可以通過抽煙來獲取。
該組合物可以通過降低遺傳損害來保護(hù)活體。
該遺傳危害可以是肺部組織的氧化性DNA損害。
該外部因子可以是一種抗原物質(zhì)。
體液免疫的增強(qiáng)可以通過激活選自可激活T細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的淋巴細(xì)胞而引發(fā)。
體液免疫的增強(qiáng)可以通過選自白介素-1β和白介素-6的白介素的增強(qiáng)表達(dá)而引發(fā)。
該組合物可以進(jìn)一步包含藥學(xué)上可接受的載體。
該組合物可以是選自粉末、液體、片劑、膠囊和藥丸的形式。
本發(fā)明進(jìn)一步涉及一種保護(hù)活體免受外部因子損害的方法，并且該方法包含對一個受試者施用包含來自蘑菇提取物的組合物的步驟。
該方法可以通過免疫活性細(xì)胞來保護(hù)活體。
該免疫活性細(xì)胞可以是巨噬細(xì)胞。
該免疫活性細(xì)胞可以是巨噬細(xì)胞或T細(xì)胞。
該免疫活性細(xì)胞可以是抗體生產(chǎn)細(xì)胞。
該方法可以通過體液免疫的增強(qiáng)來保護(hù)活體。
該外部因子可以通過抽煙獲取。
該組合物可以通過降低遺傳危害來保護(hù)活體。
該遺傳危害可以是肺部組織的氧化性DNA的危害。
該外部因子可以是一種抗原物質(zhì)。
體液免疫的增強(qiáng)可以通過激活選自可激活T細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的淋巴細(xì)胞而引發(fā)。
體液免疫的增強(qiáng)可以通過選自白介素-1β和白介素-6的白介素的增強(qiáng)表達(dá)而引發(fā)。
本發(fā)明進(jìn)一步涉及來自蘑菇的提取物在制備一種用于保護(hù)活體免受外部因子損害的組合物中的用途。
如此處所用的術(shù)語相對于活體的“外部因子”包括如病毒、細(xì)菌、霉菌、寄生蟲等的生物，除這些生物之外的抗原物質(zhì)，煙草煙中的致癌物質(zhì)以及致癌作用促進(jìn)物質(zhì)；甚至是產(chǎn)生于活體中的異常的變異細(xì)胞(例如，癌細(xì)胞)。如此處所用的術(shù)語“保護(hù)活體免受外部因子的損害”意指由“外部因子”引發(fā)的如病毒性疾病、過敏、活組織的氧化性損傷、腫瘤、癌等的綜合病征的發(fā)生得到了預(yù)防或延遲，或該綜合病征得到了減輕或消除。術(shù)語“免疫活性細(xì)胞”意指參與免疫反應(yīng)的細(xì)胞，其對于本領(lǐng)域技術(shù)人員是公知的。免疫活性細(xì)胞可以大體分為介導(dǎo)體液免疫的B細(xì)胞和介異細(xì)胞免疫的T細(xì)胞。免疫活性細(xì)胞包括淋巴細(xì)胞；輔助細(xì)胞如巨噬細(xì)胞、朗格漢斯細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞等；NK細(xì)胞(天然殺傷細(xì)胞)；LAK細(xì)胞(淋巴因子激活殺傷細(xì)胞)；以及誘導(dǎo)抗體依賴性細(xì)胞損傷的細(xì)胞等。T細(xì)胞包括控制免疫反應(yīng)的輔助T細(xì)胞和抑制T細(xì)胞、摧毀靶細(xì)胞的殺傷T細(xì)胞，以及涉及延遲過敏反應(yīng)的T細(xì)胞。B細(xì)胞包括通過抗原或T細(xì)胞的激活而從B細(xì)胞分化的抗體分泌細(xì)胞。
蘑菇提取物可以包括一種分子量為100到2000的色譜層析洗脫的主要餾分作為有效成分，它是通過用熱水從蘑菇的子實體提取，透析提取液并對透析液進(jìn)行色譜層析處理的步驟而獲得的。
或者，蘑菇提取物可以包括一種透析液作為有效成分，它是通過用熱水從蘑菇的子實體提取，將提取物與乙醇混合并離心以分離沉淀和上清液，將上清液與乙醇混合并離心以分離沉淀和上清液，以及將沉淀溶入稀釋的水水以進(jìn)行透析的步驟而獲得的。蘑菇提取物可以適當(dāng)?shù)匾耘c藥學(xué)上可以接受的載體混合的形式存在。藥學(xué)上可以接受的載體對于本領(lǐng)域的技術(shù)人員是公知的并且包括，例如如下的載體但并不限于這些緩沖液如林格溶液、Hank’s平衡鹽溶液或緩沖的生理鹽水；脂肪酸如芝麻油；合成的脂肪酸酯如油酸乙酯或甘油三酯；糖類如乳糖、蔗糖、甘露糖、山梨糖醇；源自植物如玉米、小麥、大米或馬鈴薯的淀粉；纖維素如甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素或羧基甲基纖維素鈉；橡膠如阿拉伯樹膠或黃蓍膠；蛋白質(zhì)如明膠或膠原蛋白；交聯(lián)的聚乙烯吡咯烷酮、瓊脂、海藻酸或其鹽等。
附圖簡述

圖1是顯示在小鼠肺組織中免疫染色結(jié)果的照片。
圖2為顯示抽煙對于在肺組織中8-OHdG表達(dá)的影響的圖。
圖3為顯示抽煙對于在肺組織中8-OHdG濃度的影響以及施用本發(fā)明組合物的效果的圖。
圖4為顯示抽煙對于肺泡肺Mφ細(xì)胞中活性氧生產(chǎn)的影響的圖。
圖5為顯示抽煙對于在肺泡肺MφDNA中8-OhdG濃度的影響以及施用本發(fā)明組合物的效果的圖。
圖6為顯示抽煙對于在心臟組織中8-OHdG濃度的影響的圖。
圖7為顯示抽煙對于在尿中8-OHdG濃度的影響以及施用本發(fā)明組合物的效果的圖。
圖8為漢堡II自動抽煙裝置的照片。
圖9為顯示ABM提取物對于PFC s數(shù)量的影響的圖。在第0天，將1×108SRBC和ABM提取物(25mg/kg)或?qū)BS作為對照進(jìn)行腹內(nèi)注射到小鼠。在第四天，收集小鼠的脾并利用PFC分析測量抗SRBC抗原的PFCs。(a)顯示每106個脾細(xì)胞中PFCs的數(shù)量而(b)顯示每個脾中PFCs的數(shù)量。結(jié)果以平均數(shù)±S.D.(n＝12)表示。**表示與對照相比統(tǒng)計學(xué)上顯著的結(jié)果(p＜0.01)。
圖10為顯示ABM提取物對于在脾細(xì)胞中白介素-1β和白介素-6mRNA表達(dá)的影響的電泳凝膠照片。給小鼠腹內(nèi)注射ABM提取物(25mg/kg)(+)或不注射ABM提取物(-)。三或四天后，收集脾并利用AGPC法分離全RNA。接下來，對β-肌動蛋白進(jìn)行26個循環(huán)的RT-PCR，對白介素-1β進(jìn)行29個循環(huán)，而對白介素-6進(jìn)行32個循環(huán)。對PCR產(chǎn)物進(jìn)行30％的聚丙烯酰胺凝膠電泳，隨后利用溴化乙錠顯色。
圖11為顯示ABM提取物對于在腹巨噬細(xì)胞中白介素-1β和白介素-6mRNA表達(dá)的影響的電泳凝膠照片。將腹部細(xì)胞分布在一個96孔平底培養(yǎng)板上(5×104細(xì)胞/0.1ml/孔)，有或無0.1或1mg/ml的ABM提取物。將細(xì)胞在5％CO2中于37℃培養(yǎng)24或48小時。隨后，利用AGPC法分離全部的RNA。接下來，進(jìn)行有關(guān)圖2所述的RT-PCR。對PCR產(chǎn)物進(jìn)行30％的聚丙烯酰胺凝膠電泳，隨后利用溴化乙錠顯色。
實施發(fā)明的最佳方式下文中，描述了一種生產(chǎn)能預(yù)防由本發(fā)明的外部因子所引起的損害的組合物的方法。
本發(fā)明所用的蘑菇可以為天然或人工培養(yǎng)的蘑菇的子實體或菌絲體部分。為了方便，也能夠用商業(yè)上現(xiàn)有的干子實體。蘑菇可以如其原樣、或切削、或粉碎使用并用來制備蘑菇提取物。
蘑菇提取物是一種蘑菇的提取物包括通過使用水、低級醇等作為溶劑獲得的蘑菇源的成分。一般地，使用水、乙醇、含水乙醇等?？梢允褂萌魏稳軇┲灰軌蝾A(yù)防由外部因子引起的活體損害。通常，將干子實體或其粉末與2到10倍于其重量的溶劑混合以進(jìn)行提取。溶劑的實例包括水、乙醇、丙醇、丁醇、1，3-丁二醇、乙酸乙酯、己烷、二氯甲烷、甲醇或它們的混合物。
一般地，蘑菇提取物能夠通過用水作為溶劑獲得。優(yōu)選它是通過用熱水從蘑菇中提取制備的?？梢酝ㄟ^將干子實體與5到10倍于其重量的水混合，并對提取物加熱或?qū)⒒旌衔锛訜峄亓?到3個小時來進(jìn)行用熱水從蘑菇中提取的操作。必要的話，可以通過重復(fù)進(jìn)行熱水提取或?qū)ο惹坝脽崴崛∵^的殘渣進(jìn)行加熱回流來對蘑菇進(jìn)行加熱水提取。由此得到的用熱水提取的溶液通過本領(lǐng)域公知的方法如凍干法、噴霧干燥等進(jìn)行干燥以獲得干燥的產(chǎn)品(下文中，稱為干燥產(chǎn)品A)。將干燥產(chǎn)品A與5到20倍于其重量的水混合。隨后，將溶液倒入透析管中并以幾倍量的蒸餾水進(jìn)行10到15小時的透析。將得到的透析液進(jìn)行冷凍干燥以獲得以熱水提取的蘑菇的干燥產(chǎn)品(下文中，稱為干燥產(chǎn)品C)。
隨后，進(jìn)一步以流水將在透析管中保留的溶液透析20到40小時并以蒸餾水透析兩次，每次幾小時，如上所述就獲得了保留在透析管中溶液的干燥產(chǎn)品。這樣，就能夠獲得預(yù)防由外部因子對活體引起損害的用熱水提取的蘑菇的干燥產(chǎn)品(下文中，稱為干燥產(chǎn)品B)。
接下來，將得到的干燥產(chǎn)品C溶入約10倍于其重量的蒸餾水中。以蒸餾水作為洗脫液進(jìn)行色譜層析而獲得20mL的各餾分。從獲得的各餾分中，在由凝膠過濾而得的分子量為100-2000kDa的中間餾分中的主要成分為用熱水提取的蘑菇的一種餾分，它能預(yù)防由外部因子引起的對活體的損害。
利用使用ODS(十八硅烷化硅膠)的反相色譜層析、使用DEAE-TOYOPEARL 650的離子交換色譜層析等進(jìn)一步對這些餾分進(jìn)行分析，并得以確認(rèn)它包括一些成分如精氨酸、賴氨酸、甘露醇等。
將以上述方法獲得的以熱水提取的溶液與等量的乙醇混合。將混合物離心以分離沉淀和上清液。將得到的上清液進(jìn)一步與1到3倍于其體積的乙醇混合。將混合物進(jìn)一步離心以獲得沉淀。將得到的沉淀溶于蒸餾水中并將得到的溶液進(jìn)行透析。得到的透析液也是用熱水提取的蘑菇的低分子量部分，它能預(yù)防根據(jù)本發(fā)明的由外部因子引起的對活體的損害。
如上所述獲得的蘑菇提取物或其餾分本身或與多種載體組合能夠用于藥物生產(chǎn)。進(jìn)一步地，蘑菇提取物或其餾分本身或與其它食品一起使用可以用作健康食品。
一般地，所要求的本發(fā)明的組合物能夠與一種生物相容的藥學(xué)載體(例如，生理鹽水、加了緩沖劑的生理鹽水、葡萄糖、水等)一起口服。本發(fā)明的組合物能夠通過其本身或與其它藥物或食物結(jié)合服用。
本發(fā)明的組合物可以包括藥學(xué)上可以接受的載體。藥學(xué)上可以接受的載體的實例包括，例如生理鹽水、加了緩沖劑的生理鹽水、葡萄糖、水等。通常，藥學(xué)上可以接受的載體是藥學(xué)上無活性的。
本發(fā)明的組合物也可以包括蘑菇提取物或其餾分、賦形劑、佐劑，以及藥學(xué)上可以接受的載體。進(jìn)一步地，該組合物可以在蘑菇提取物之外與其它藥物組合并施用于患者。
本發(fā)明的組合物可以口服或注射施用。注射施用包括局部的、真皮的、動脈內(nèi)的、肌肉內(nèi)的、皮下的、髓質(zhì)內(nèi)的、潴泡內(nèi)的、心室內(nèi)的、靜脈內(nèi)的、腹內(nèi)的和鼻內(nèi)的施用。優(yōu)選地，本發(fā)明的組合物通過靜脈內(nèi)或動脈內(nèi)注射施用。藥物組合物的制劑技術(shù)和給藥技術(shù)對于本領(lǐng)域技術(shù)人員是公知的，如在一種本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的教科書，“REMINGTON’S PHARMACEUTICAL SCIENCES”(Maack出版公司，EASTON，巴拿馬)中所描述的。
本發(fā)明的組合物包括能預(yù)防由外部因子引起的對活體的損害的藥學(xué)上有效量的蘑菇提取物及其餾分。一般地，可以制備本發(fā)明的組合物用來施用，使得蘑菇提取物及其餾分的劑量為約5mg/體重kg到100mg/體重kg。術(shù)語“藥學(xué)上有效量”可以被本領(lǐng)域技術(shù)人員充分認(rèn)識，是指對于預(yù)防由外部因子引起的對活體的預(yù)期損害有效的量。因而，藥學(xué)上有效量是一種足夠用來緩和由外部因子引起的對活體損害的綜合癥狀的量，否則就應(yīng)該對該癥狀進(jìn)行治療。
一種對于確認(rèn)“藥學(xué)上有效量”有用的檢測實例為測量活體受損害的程度，損害是由外部因子引起的，例如，在病人中的氧化性DNA損傷。實際上施用的蘑菇提取物及其餾分的量依賴于將提取物應(yīng)用于其上的個體的健康狀況等，并且可以對其進(jìn)行優(yōu)化從而能夠取得期望的效果。對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說確定藥學(xué)上有效量是一種常規(guī)方法。
藥學(xué)上有效量能夠首先通過利用細(xì)胞培養(yǎng)或合適的動物模型進(jìn)行體外試驗來評估。隨后，在所得信息的基礎(chǔ)上，一種在對人給藥中有效的量和給藥方式能夠得以確定。
可以把用于口服給藥的組合物配制成一種組合物，它包含以適于給藥的處方形式存在的本領(lǐng)域公知的藥學(xué)上可接受的載體。這種載體使得能夠?qū)⒃摻M合物配制為適于病人攝取的片劑、丸劑、糖衣丸劑、膠囊、液體、凝膠、糖漿、漿、懸浮液等。
具有預(yù)防由外界因素引起的對活體的損害的活性的蘑菇提取物及其部分可以以足夠發(fā)揮其功能的量與一種或多種經(jīng)選擇的食物混合。將一種或多種經(jīng)選擇的食物以本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的形式，通常是粉末形式，與所述具有免疫活性的部分混合。這種混合物可以依賴其效用或偏好用作一種液體食物產(chǎn)品。或者，這種混合物也可以成形為膠囊如硬膠囊或較膠囊、片劑、丸劑，或可以成形為粉狀的、粒狀的、茶葉、茶袋或糖果的形式。
在下文中，通過實施例的方式對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的描述。下面的實施例僅僅是說明性的，并不限制本發(fā)明。
實施例(實施例1)蘑菇熱水提取物對抽煙引起的DNA損害的影響I.材料和方法實施例1所用的材料和方法如下1.抽煙通過使用圖8所示漢堡II自動抽煙裝置(來自Borgwaldt公司現(xiàn)有的)，使小鼠(8周齡C57BL/6小鼠)每天抽20只煙(CORESTA每只煙包含15mg焦油和1.5mg尼古丁)持續(xù)10天。
2.蘑菇提取物來自蘑菇的熱水提取物(ABM)(上面提到的干燥產(chǎn)品A)由KyomaEngineering公司提供(東京，日本)。這是通過帶有一些改進(jìn)的Mizuno等(同上)所述的方法從AMB中提取而得的。特別地，利用沸水進(jìn)行ABM干子實體的提取。將得到的溶液在1800×g離心10分鐘并進(jìn)行凍干以得到蘑菇熱水提取物。隨后，將產(chǎn)物再一次溶解于不含Ca++和Mg++的濃度為10mg/mL的Dulbecco’s緩沖生理鹽水(PBS)中(NissuiPharmaceutical公司，東京，日本)。以0.45μm膜濾器(Millipore有限公司，Bedford，摩洛哥)過濾溶液。將所得的過濾液保存于4℃待用。在抽煙前在靜脈內(nèi)注射(i.p.)過濾液，使得給藥量為25mg/體重kg。對照組僅給予不含蘑菇熱水提取物的PBS。
3.肺泡肺巨噬細(xì)胞(Mφ)在抽煙完成后的第一天，實施BAL(Broncho alveolar lavage)法收集BAL液。在BAL法中，重復(fù)用注射器將1mlPBS插入使用乙醚麻醉劑處死的小鼠的主支氣管中并且吸出液體的操作10次。隨后，以1000轉(zhuǎn)/分將得到的BAL液離心10分鐘。收集得到的沉淀作為Mφ。
4.在肺組織中8-OHdG(8-羥基脫氧鳥苷)的測量在抽煙完成后的第一天，切除一個肺組織，隨后以常規(guī)方法制備石臘切片。用OAB(二甲氨基偶氮苯)染料對切片進(jìn)行免疫染色。在顯微鏡下觀察染色的強(qiáng)度以測量8-OHdG(8-羥基脫氧鳥苷)。
5.在肺、肺泡肺Mφ和心臟的DNA中的8-OHdG煙草煙包含許多致癌劑和致癌作用促進(jìn)物質(zhì)，如苯并芘。已報道抽煙與肺癌的發(fā)生相關(guān)并且8-OHdG參與致癌作用(Floyd，R.A.Carcinogenesis，111447-1450，1990)。
在抽煙完成和組織提取后的第一天，以常規(guī)方法提取DNA(Lu Wang等的方法)。隨后，利用ELISA法進(jìn)行檢測，ELISA法使用抗8-OHdG抗體作為第一抗體而IgG酶標(biāo)抗體作為第二抗體。通過對切下的肺的支氣管肺泡肺進(jìn)行洗滌來收集肺泡肺Mφ。進(jìn)一步地，在抽煙完成后的第一天收集尿液。也通過ELISA法檢測在尿液中的8-OHdG。
6.在肺、肺泡肺Mφ和心臟中O2-和H2O2的產(chǎn)生如上面第3部分所述，在抽煙完成后的第一天收集肺泡肺Mφ。隨后，將2.5μg/ml氫化己啶(Hydroethidine)和20μg/mlDCFH-DA(二氯熒光素雙乙酸鹽)加入其中。將混合物在37℃搖動30分鐘進(jìn)行反應(yīng)。通過離心洗滌反應(yīng)液中的Mφ。利用FACSort(Bass，D.A.等，J.Immunol.1391910-1917，1983)對得到的混合物進(jìn)行檢測。
II.結(jié)果圖1顯示了在肺組織中免疫染色的結(jié)果。圖1的上半?yún)^(qū)為顯示在未抽煙小鼠肺組織中免疫染色結(jié)果的顯微照片。圖1的下半?yún)^(qū)為顯示在抽煙小鼠肺組織中免疫染色結(jié)果的顯微照片。如圖1所示，與未抽煙的小鼠比較，在抽煙的小鼠中識別出強(qiáng)烈的染色。
接下來，隨機(jī)選擇各自小鼠的肺支氣管上皮的6個位點(diǎn)(圖1中方形所示的部分)。利用Image-Pro Plus(Planetron，Inc.)分析免疫染色的平均光學(xué)亮度。圖2顯示其結(jié)果。如圖2所示，未抽煙組的平均光學(xué)亮度顯著高于抽煙組的平均亮度。
圖3顯示在肺組織的DNA中8-OHdG的檢測結(jié)果。如圖3所示，識別出在抽煙組的肺組織DNA中的8-OHdG值顯著高于未抽煙組。但是，通過給藥蘑菇提取物(在圖3和下面的圖中以Ag表示)，該值明顯地降低了。
圖4顯示在肺泡肺Mφ中O2-和H2O2的檢測結(jié)果。如圖所示，在抽煙組的肺泡肺Mφ中生產(chǎn)O2-的陽性細(xì)胞的百分比顯著高于未抽煙組。識別出在抽煙組中產(chǎn)生H2O2的細(xì)胞傾向于多于未抽煙組。
圖5、6和7分別顯示了8-OhdG在肺胞肺MφDNA、心臟組織DNA以及尿液中的檢測結(jié)果。如圖中所示，在肺胞肺MφDNA、心臟組織DNA以及尿液中在抽煙組與未抽煙組的8-OhdG值之間沒有觀察到顯著的區(qū)別。但是，認(rèn)識到通過施用蘑菇熱水提取物(在圖5和7中表示為Ag)，在肺胞肺MφDNA和尿液中的8-OhdG值趨于降低。
基于上面提到的結(jié)果，隨著由于抽煙引起的在肺胞肺Mφ中O2-生產(chǎn)的增多，顯示出一種氧化性的DNA損害在肺組織中得以引發(fā)并且蘑菇提取物的施用具有預(yù)防由抽煙引起的氧化性損害的效果。
(實施例2)蘑菇熱水提取物對抗體產(chǎn)生的影響I.材料和方法實施例2中所用的材料和方法如下1.小鼠使用8-10周齡的雌性C57BL/6小鼠(Japan SLC Inc.，濱松，日本)。將12只小鼠分成一個蘑菇(Agaricus blazei Murill，下文中，簡稱為ABM)組和一個對照組。允許它們自由取食標(biāo)準(zhǔn)的非純化的食物(8.7克水，25.2克粗蛋白質(zhì)，4.6克粗脂，4.4克粗纖維，6.5克粗礦物質(zhì)，50.7克NFE/100克食物344.4千卡；Clea Japan，大阪，日本)和水。將小鼠圈養(yǎng)保持在25℃的房間內(nèi)。根據(jù)京都Sangyo大學(xué)動物委員會的倫理指南對小鼠進(jìn)行處理。
2.蘑菇提取物的制備蘑菇的熱水提取物由Kyowa Engineering Co.(東京日本)提供。其通過在Mizuno等(同上)所述的方法從蘑菇中進(jìn)行提取。特別地，使用沸水進(jìn)行干子實體的提取。將得到的溶液在1800×g離心10分鐘并進(jìn)行凍干以得到蘑菇的熱水提取物。隨后，將產(chǎn)物再一次溶解于不含Ca+和Mg++的濃度為10mg/mL的Dulbecco’s緩沖的生理鹽水(PBS)中(Nissui Pharmaceutical公司，東京，日本)中。以0.45μm膜濾器(Millipore有限公司，Bedford，摩洛哥)對溶液進(jìn)行過濾。將所得的過濾液保存于4℃待用。
3.空斑形成細(xì)胞(PFC)的分析將來自Nikken Bio-medical laboratory Inc.(京都，日本)的綿羊紅血細(xì)胞(SRBC)用作抗原。用生理鹽水將SRBC洗滌三次。將1×108有AMB提取物(25mg/kg)的SRBC或作為對照的PBS經(jīng)腹內(nèi)注射入小鼠。四天后，將小鼠處死。根據(jù)在Cuunigham，A.J.等，Immunology 14599-600，1968中所述的方法切除脾，在鋼網(wǎng)上切碎，并讓其通過紗布層以獲得脾細(xì)胞的懸浮液。隨后，以490×g將獲得的懸浮液離心五分鐘兩次。將得到的沉淀物再次懸浮于10mL Eagle’s培養(yǎng)基(Nikken Bio-medical laboratory Inc.(京都，日本))的MEM培養(yǎng)基中。通過錐蟲藍(lán)清除測試來進(jìn)行存活細(xì)胞的計數(shù)。通過Cuuninggham和Szenberg(Cuunigham，A.J.等，(1968)，Immunology.14(4)599-600)的方法對與SRBC抗原相關(guān)的PFC的數(shù)量進(jìn)行測定。特別地，將100μl份的脾細(xì)胞懸浮液與50μl的50％SRBC及24％補(bǔ)足物混合從而得到500μl終體積。將100μl樣品于37℃在Cunnigham’s槽(商標(biāo))(76×26mm)中溫育一小時。通過一個克隆計數(shù)器(Sekisui Chemical Corp.，大阪，日本)對SRBC的空斑進(jìn)行計數(shù)。
4.白介素-1β和白介素-6mRNA的表達(dá)
4.1.RNA的提取a)脾細(xì)胞與上述對于PFC的方法相似，將AMB提取物(25mg/kg)或PBS經(jīng)腹內(nèi)注射入小鼠中。四天后，將脾切除，在鋼網(wǎng)上切碎，并讓其通過紗布層以獲得脾細(xì)胞的懸浮液。通過使用一種硫氰酸胍-苯酚-氯仿(AGPC)方法從脾細(xì)胞懸浮液中提取全細(xì)胞RNA。
b)腹膜細(xì)胞從通過用10mL冷的PBS洗滌收集的濾液建立巨噬細(xì)胞的培養(yǎng)物。將濾液匯集于塑料管中并在250×g下離心10分鐘。在濾液中的細(xì)胞成為沉淀。將沉淀物再次懸浮于補(bǔ)充了胎牛血清(FCS)(JRHBiosciences Inc.，Lenexa，KS)的RPMI(Nikken Bio-medicallaboratory Inc.，京都，日本)中。將一份腹膜細(xì)胞(5×105細(xì)胞/0.1ml/細(xì)胞)在平底96孔培養(yǎng)板(Becton Dickinson Co.Ltd，MA，美國)中進(jìn)行培養(yǎng)，其中含有或不含有0.1或1mg/mL ABM提取物。在含5％CO2的加溫的空氣中進(jìn)行培養(yǎng)。24和48小時后，通過用AGPC法進(jìn)行全RNA的分離。
4.2.RT-PCR用MLV反轉(zhuǎn)錄酶(Life Technologies Ltd.，MD，美國)將全RNA轉(zhuǎn)錄為cDNA。由發(fā)表過的白介素-1β(250bp)、白介素-6(290bp)和β-肌動蛋白(268)cDNA的管家基因來構(gòu)建寡核苷酸引物。隨后，使用下列引物對β-肌動蛋白的有義鏈(5’-GCATTGTTACCAACTGGGAC-3’)和β-肌動蛋白的反義鏈(5’-TCTCCGGAGTCCATCACAAT-3’)；白介素-1β的有義鏈(5’-AGCTACCTGTGTCTTTCCCG-3’)和白介素-1β的反義鏈(5’-GTCGTTGCTTGGTTCTCCTT-3’)；白介素-6的有義鏈(5’-GATGCTACCAAACTGGAGATAATC-3’)和白介素-6的反義鏈(5’-GGTCCTTAGCCACTGCTTCTGTG-3’)對白介素-1β的PCR，進(jìn)行30個循環(huán)，對白介素-6進(jìn)行32個循環(huán)的PCR。由在94℃變性1分鐘、在56℃將引物退火1分鐘和在72℃延伸1分鐘來建立擴(kuò)增程序。在最后一個循環(huán)后，在72℃進(jìn)一步延伸10分鐘。隨后將反應(yīng)物冷卻至4℃結(jié)束反應(yīng)。將PCR產(chǎn)物進(jìn)行30％聚丙烯酰胺凝膠電泳，隨后用溴化乙錠進(jìn)行顯色。
5.對表面抗原的分析通過直接的免疫熒光方法檢測在脾細(xì)胞中表面抗原的表達(dá)。將獲得的含有或不含有ABM提取物的脾細(xì)胞(5×105細(xì)胞/100μl)在4℃用0.5μg與異硫氰酸熒光素(FITC)綴合的或與藻紅蛋白(PE)綴合的mAb的終產(chǎn)物進(jìn)行染色。與FITC綴合的抗CD3、抗CD4、抗CD8、抗CD25、抗CD11b(Mac-1)mAb和與PE綴合的抗CD19 mAb得自CaltagInc.(舊金山，加利福尼亞)。將這些細(xì)胞溫育，隨后，用1mL PBS在490×g進(jìn)行離心5分鐘。其后，將所得的沉淀再次懸浮在含100μg/mL CaCl2/MgCl2、0.01％疊氮鈉和1％FCS的0.5mL PBS中。接下來，利用FAC掃描流式細(xì)胞儀(Becton Dickenson Co.，MA，US)對所得的溶液進(jìn)行分析。
6.統(tǒng)計分析所有值都在平均數(shù)±S.D.的基礎(chǔ)上表示。通過斯圖登特t-檢驗進(jìn)行ABM處理組和對照組之間的比較。將P值小于0.05定義為顯著性的。
II.結(jié)果1.ABM對抗體產(chǎn)生的影響檢測ABM對每106個脾細(xì)胞和每個脾的PFCs數(shù)目的影響。如表1所示，在ABM處理組(1.11±0.29×108細(xì)胞/脾)和對照組(0.98±0.20×108細(xì)胞/脾)小鼠的脾細(xì)胞數(shù)目上沒有顯著區(qū)別。對于對照組，每106脾細(xì)胞的PFCs數(shù)目為425±283個細(xì)胞，而對于ABM處理組的小鼠則為897±440個細(xì)胞(圖9(a)，表1)。對于ABM處理組的小鼠，每個脾的PFCs數(shù)目為3.8±2.20×104細(xì)胞，而對于對照組則為10.5±5.63×104細(xì)胞(圖9(b)，表1)。如從這些結(jié)果可以看出的，ABM引起了每106個脾細(xì)胞和每個脾的PFCs數(shù)目的顯著增長(p＜0.01)。
表1ABM產(chǎn)品對PFCs數(shù)目的影響

1)用SRBC抗原免疫四天后進(jìn)行PFC分析。
2)將SRBC抗原(×108)和ABM提取物(25mg/kg)進(jìn)行腹內(nèi)給藥。
3)每個值代表平均數(shù)±S.D.(n＝12)。星號指示相對于對照組有顯著性差異。*p＜0.01
2.ABM提取物對在脾細(xì)胞或腹巨噬細(xì)胞中白介素-1β和白介素-6mRNA表達(dá)的影響為了測試ABM提取物是如何增多PFCs的，對白介素-1β和白介素-6的mRNA表達(dá)進(jìn)行了檢測。在ABM提取物處理組中，脾中白介素-1β和白介素-6mRNA的表達(dá)在第三天和第四天得到了提高(圖10)。特別地，在第四天在ABM提取物處理的組的小鼠中白介素-1βmRNA的表達(dá)得到了最大程度的提高。為了測試ABM提取物是否激活巨噬細(xì)胞，對白介素-1β和白介素-6mRNA的誘導(dǎo)表達(dá)進(jìn)行了檢測。結(jié)果，發(fā)現(xiàn)ABM提取物以依賴于服藥的方式在24小時的培養(yǎng)后強(qiáng)烈地提高了白介素-1β和白介素-6的表達(dá)(圖11)。
3.ABM提取物對脾細(xì)胞表面抗原的影響在ABM提取物處理組的小鼠中Mac-1、B7-1或CD25抗原陽性細(xì)胞的百分率分別是25.4±1.4、42.0±2.0或26.9±2.5。在對照組小鼠中，它們分別是17.0±3.6、42.0±2.9或13.1±2.2。與對照組小鼠相比，在ABM處理組小鼠中有顯著的增長(分別地為p＜0.01，p＜0.01，p＜0.001)。但是，在這兩組中沒有發(fā)現(xiàn)CD3、CD4、CD8、CD19或第二類抗原陽性細(xì)胞的百分率有顯著的差別(表2)。
表2在ABM提取物腹內(nèi)給藥后第四天脾細(xì)胞亞群的細(xì)胞種群陽性細(xì)胞的百分率(％)CD3 CD4CD8CD19 Mac-1第二類 B7 CD25對照 28.94±1.322)18.67±1.7312.24±0.8752.20±3.3316.97±3.55 35.92±9.6411.92±2.89 13.13±2.23ABM1)28.03±1.21 18.98±0.4914.39±1.8453.79±5.2825.44±1.35*42.03±2.0218.68±2.04*26.90±2.46**1)在FACs分析前四天對ABM提取物(25mg/kg)進(jìn)行腹內(nèi)給藥。
2)每個值代表平均數(shù)±S.D.(n＝5)。星號指示相對于對照組有顯著性差異。*p＜0.01，**p＜0.001
4.討論ABM被廣泛認(rèn)識到具有抗腫瘤活性(Fujimiya Y等，同上；EbinaT等，同上；以及Mizuno M等，同上)。還沒有報道ABM對抗體產(chǎn)生的影響。本發(fā)明顯示ABM提取物可以提高免疫系統(tǒng)的反應(yīng)性。將PFC分析用于確認(rèn)ABM提取物對抗體生產(chǎn)的影響。PFC分析是檢測體液免疫反應(yīng)的一種典型方法(Cunningham AJ等，同上)。
在ABM處理組的小鼠中，脾內(nèi)抗SRBC抗原的PFCs數(shù)較對照組小鼠增長了約三倍。但是，在B細(xì)胞和脾細(xì)胞的種群數(shù)上沒有區(qū)別。在免疫后第四天的小鼠脾中，ABM處理組的小鼠中的Mac-1或CD25抗原陽性細(xì)胞的百分率較對照組小鼠顯著提高。但是，在兩組間CD19抗原陽性細(xì)胞的種群上沒有顯著區(qū)別。Mac-1存在于分化的單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞、粒細(xì)胞和激活的T淋巴細(xì)胞上。CD25抗原存在于激活的或分化的T/B淋巴細(xì)胞和分化的單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞的表面膜上。CD19抗原存在于未激活的B淋巴細(xì)胞的表面膜上。相應(yīng)地，這些結(jié)果提示ABM提取物主要刺激巨噬細(xì)胞和T細(xì)胞，并在沒有B細(xì)胞數(shù)目增加時引起B(yǎng)細(xì)胞分化。Mizuno等(同上)顯示在口服可溶性的ABM餾分的小鼠中Thy-1、2、CD4和CD8陽性細(xì)胞群較對照顯著增多，但是，本發(fā)明人未能發(fā)現(xiàn)CD4和CD8陽性細(xì)胞的百分率之間存在顯著的差別。這些不一致可以歸因于在提取ABM提取物的方法、給藥途徑以及濃度上的不同。
B細(xì)胞的分化需要從巨噬細(xì)胞或T細(xì)胞分泌的多種細(xì)胞因子的協(xié)同效應(yīng)(Mitsuzumi H等，Jpn.J.Pharmacol.78(2)169-79)。已報道抗SRBC抗原的抗體生產(chǎn)由于白介素-1激活引發(fā)抗體生產(chǎn)的T細(xì)胞而在白介素1-1-小鼠中得以降低(Nakae S等(2001)，J.Immunol.167(1)，90-7)。據(jù)顯示GM-CSF對成熟的功能性的APC具有影響并且也通過白介素-1的分泌和Ia抗原的表達(dá)而導(dǎo)致體外免疫系統(tǒng)的增強(qiáng)反應(yīng)(Morrissey PJ等(1987)，J.Immunol.15；139(4)1113-1119)。據(jù)顯示白介素-6加速B細(xì)胞的末期分化以形成抗體分泌細(xì)胞，而主要的生產(chǎn)者為單核細(xì)胞和T細(xì)胞(Morgan EL等(1990)，J.Immunol.1；144(7)2499-505)。本申請已經(jīng)顯示ABM提取物增強(qiáng)來自腹部巨噬細(xì)胞白介素-6和白介素-1βmRNA的表達(dá)。另外，同樣的結(jié)果也在ABM處理組的小鼠的脾細(xì)胞白介素-1β和白介素-6的mRNA表達(dá)中得以顯示。這些結(jié)果已顯示，由ABM提取物引起的抗體生產(chǎn)的增強(qiáng)是由激活的T細(xì)胞和巨噬細(xì)胞生產(chǎn)的IL-1β和IL-6誘導(dǎo)的，并且B細(xì)胞得以分化。如上所述，證明了來自ABM的熱水提取物對于免疫系統(tǒng)的增強(qiáng)和多種疾病的預(yù)防是一種重要物質(zhì)。
5.結(jié)論本發(fā)明檢測了來自干蘑菇(ABM)的熱水提取物的免疫增強(qiáng)活性。通過關(guān)于綿羊紅血細(xì)胞(SRBC)抗原的空斑形成細(xì)胞(PFC)方法檢測了ABM對抗體生產(chǎn)的影響。與對照組相比，ABM提取物以25mg/kg的腹內(nèi)給藥劑量顯著地提高了脾內(nèi)PFCs的數(shù)量。利用流式細(xì)胞儀分析這些脾細(xì)胞上的表面抗原。與對照組小鼠相比，Mac-1或CD25陽性細(xì)胞種群增多了，但是在CD19陽性細(xì)胞方面沒有區(qū)別。通過RT-PCR對白介素-6和白介素-1βmRNA的表達(dá)進(jìn)行了分析。ABM提取物增強(qiáng)了在腹巨噬細(xì)胞和脾細(xì)胞二者中的表達(dá)。這些結(jié)果提示，ABM提取物是一種T細(xì)胞和巨噬細(xì)胞釋放白介素-1β和白介素-6的有效刺激因子，并且能提高抗SRBC抗原抗體的生產(chǎn)。
工業(yè)實用性根據(jù)本發(fā)明，通過用熱水進(jìn)行蘑菇的提取，提供了一種預(yù)防由外部因子引起的對活體的損害的組合物以及包括該組合物的健康食品。蘑菇熱水提取物包括一種用于T細(xì)胞和巨噬細(xì)胞釋放白介素-1β和白介素-6的有效的刺激因子。因而，提供了一種增強(qiáng)生產(chǎn)抗外源抗體能力的一種組合物或健康食品。
序列表<110>Sundory Co.Ltd.，and Kyowa Engineering Co.Ltd.
<120>保護(hù)活體免受外部因子損害的方法及組合物。
<130>
<160>6<170>PatentIn Ver.2.1<210>1<211>20<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>人工序列的描述β肌動蛋白的有義鏈<300>
<400>1gcattgttac caactgggac20<210>2<211>20<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>人工序列的描述β肌動蛋白的反義鏈<400>2tctccggagt ccatcacaat..20<210>3<211>20<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>人工序列的描述白介素-1β的有義鏈<400>3agctacctgt gtctttcccg20
<210>4<211>20<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>人工序列的描述白介素-1β的反義鏈<400>4gtcgttgctt ggttctcctt20<210>5<211>24<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>人工序列的描述白介素-6的有義鏈<400>5gatgctacca aactggagat aatc24<210>6<211>23<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>人工序列的描述白介素-6的反義鏈<400>6ggtccttagc cactgcttct gtg2權(quán)利要求
1.一種保護(hù)活體免受外部因子損害的組合物，它包括一種來自蘑菇的提取物。
2.一種根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，它通過免疫活性細(xì)胞來保護(hù)活體。
3.一種根據(jù)權(quán)利要求2的組合物，其中所述的免疫活性細(xì)胞為巨噬細(xì)胞。
4.一種根據(jù)權(quán)利要求2的組合物，其中所述的免疫活性細(xì)胞為巨噬細(xì)胞或T細(xì)胞。
5.一種根據(jù)權(quán)利要求2的組合物，其中所述的免疫活性細(xì)胞為抗體生產(chǎn)細(xì)胞。
6.一種根據(jù)權(quán)利要求2的組合物，它通過體液免疫的增強(qiáng)來保護(hù)活體。
7.一種根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其中所述的外部因子得自抽煙。
8.一種根據(jù)權(quán)利要求7的組合物，它通過降低遺傳損害來保護(hù)活體。
9.一種根據(jù)權(quán)利要求8的組合物，其中所述的遺傳損害為肺組織的氧化性DNA損害。
10.一種根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其中所述的外部因子為一種抗原物質(zhì)。
11.一種根據(jù)權(quán)利要求6的組合物，其中所述的體液免疫的增強(qiáng)是通過激活選自T細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的淋巴細(xì)胞而引起的。
12.一種根據(jù)權(quán)利要求11的組合物，其中所述的體液免疫的增強(qiáng)是通過提高選自白介素-1β和白介素-6的白介素的表達(dá)而引起的。
13.一種根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，它進(jìn)一步包含一種藥學(xué)上可接受的載體。
14.一種根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，它是選自粉末、液體、片劑、膠囊和藥丸的形式。
15.種保護(hù)活體免受外部因子損害的方法，它包含向被試者施用一種包括來自蘑菇的提取物的步驟。
16.一種根據(jù)權(quán)利要求15的方法，它通過免疫活性細(xì)胞來保護(hù)活體。
17.一種根據(jù)權(quán)利要求1 6的方法，其中所述的免疫活性細(xì)胞為巨噬細(xì)胞。
18.一種根據(jù)權(quán)利要求16的方法，其中所述的免疫活性細(xì)胞為巨噬細(xì)胞或T細(xì)胞。
19.一種根據(jù)權(quán)利要求16的方法，其中所述的免疫活性細(xì)胞為抗體生產(chǎn)細(xì)胞。
20.一種根據(jù)權(quán)利要求16的方法，它通過體液免疫的增強(qiáng)來保護(hù)活體。
21.一種根據(jù)權(quán)利要求15的方法，其中所述的外部因子得自抽煙。
22.一種根據(jù)權(quán)利要求21的方法，它通過降低遺傳損害來保護(hù)活體。
23.一種根據(jù)權(quán)利要求22的方法，其中所述的遺傳損害為肺組織的氧化性DNA損害。
24.一種根據(jù)權(quán)利要求15的方法，其中所述的外部因子為一種抗原物質(zhì)。
25.一種根據(jù)權(quán)利要求20的方法，其中所述的體液免疫的增強(qiáng)是通過激活選自T細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的淋巴細(xì)胞而引起的。
26.一種根據(jù)權(quán)利要求25的方法，其中所述的體液免疫的增強(qiáng)是通過提高選自白介素-1β和白介素-6的白介素的表達(dá)而引起的。
27.一種來自蘑菇的提取物在制備一種保護(hù)活體免受外部因子損害的組合物中的應(yīng)用。
全文摘要
目的是為了提供一種保護(hù)活體免受外部因子損害的組合物或一種食物，它包含來自蘑菇(Agaricus Blazei Murill)的提取物。該組合物通過免疫活性細(xì)胞來保護(hù)活體。該免疫活性細(xì)胞可以為巨噬細(xì)胞，任選還有T細(xì)胞。該免疫活性細(xì)胞可以是抗體生產(chǎn)細(xì)胞。該組合物可以通過增強(qiáng)體液免疫來保護(hù)活體。體液免疫的增強(qiáng)通過激活選自T細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的淋巴細(xì)胞并且因此提高選自白介素－1β和白介素－6的白介素的表達(dá)而引起。外部因子可以得自抽煙，或者可以是一種抗原物質(zhì)。
文檔編號A23L1/30GK1633303SQ0282864
公開日2005年6月29日 申請日期2002年12月16日 優(yōu)先權(quán)日2002年2月8日
發(fā)明者竹內(nèi)實, 中島敦子 申請人:株式會社盛多利, 協(xié)和工程株式會社