專利名稱：一種植物凝集素及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體地說(shuō)是涉及一種植物凝集素在體外長(zhǎng)期維持造血干/祖細(xì)胞活存和自我更新中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
造血干細(xì)胞移植已經(jīng)是目前常用的各種惡性、非惡性血液腫瘤疾病和大劑量癌癥化療患者骨髓重建的治療手段，為得到治療所需的細(xì)胞量，許多人都試圖通過(guò)離體(exvivo)的手段擴(kuò)增造血干/祖細(xì)胞，包括使用飼養(yǎng)細(xì)胞以及各種細(xì)胞因子聯(lián)用等。但細(xì)胞增殖和細(xì)胞的自我更新及多潛能性的保持之間存在矛盾，擴(kuò)增往往導(dǎo)致造血干/祖細(xì)胞多能性的喪失。相反，如果能將造血干/祖細(xì)胞長(zhǎng)期維持在靜止期，對(duì)于使細(xì)胞周期同步化以利于下一步的基因治療，清除殘余的腫瘤細(xì)胞，保護(hù)造血干細(xì)胞，以及調(diào)整合適的時(shí)機(jī)進(jìn)行細(xì)胞擴(kuò)增或移植都十分有利。
凝集素是動(dòng)植物體內(nèi)的一類蛋白質(zhì)或糖蛋白，與細(xì)胞表面蛋白或脂類復(fù)合物中的單糖或寡糖具有高度特異的結(jié)合能力。許多植物凝集素都能作為動(dòng)物細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的外源刺激因子，在各種生理反應(yīng)中發(fā)揮作用，自1988年Stillmark發(fā)現(xiàn)豆類種子提取物對(duì)動(dòng)物細(xì)胞具有凝集作用以來(lái)，越來(lái)越多的凝集素得到開(kāi)發(fā)利用。利用某些豆類凝集素可刺激淋巴細(xì)胞群的增殖，如ConA、PHA、美洲商陸等；在凝集素與腫瘤、免疫及造血相關(guān)的研究領(lǐng)域近年來(lái)也有新的進(jìn)展。
用凝集素在離體條件下長(zhǎng)期維持培養(yǎng)造血干/祖細(xì)胞將解決造血干細(xì)胞移植中出現(xiàn)的許多問(wèn)題，拓展其臨床應(yīng)用的范圍。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種有維持造血干/祖細(xì)胞活存和自我更新能力的植物凝集素的基因及其編碼的蛋白質(zhì)。
一種植物凝集素基因，它是下列核苷酸序列之一1)序列表中序列1的DNA序列；2)與序列表中序列1限定的DNA序列具有90％以上同源性，且編碼相同功能蛋白質(zhì)的DNA序列。
所述植物凝集素基因的完整開(kāi)放讀碼框?yàn)樾蛄斜碇行蛄?的第1至819共819個(gè)堿基。
一種植物凝集素前體蛋白質(zhì)，它是下列氨基酸序列之一1)序列表中序列2的氨基酸序列；2)序列表中序列2的氨基酸序列經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代、缺失或添加且具有與序列2的氨基酸序列相同活性的由序列2衍生的蛋白質(zhì)。
所述植物凝集素蛋白質(zhì)的兩類亞基主體序列分別為序列表中序列2的第17至38共22個(gè)氨基酸和第124至152共29個(gè)氨基酸。
一種植物凝集素蛋白質(zhì)的構(gòu)成亞基，它是下列的氨基酸序列之一1)序列表中序列3的氨基酸序列組的一個(gè)或多個(gè)序列；2)序列表中序列3的氨基酸序列組的一個(gè)或多個(gè)序列經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代、缺失、添加或組合且具有與序列3的氨基酸序列組相同活性的由序列3衍生的蛋白質(zhì)。
所述植物凝集素蛋白質(zhì)的三個(gè)小分子量構(gòu)成亞基N端起始序列分別為序列表中序列3的β、α1、α2氨基酸順序。
利用NCBI的Genbank數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)本發(fā)明基因進(jìn)行檢索，結(jié)果表明數(shù)據(jù)庫(kù)中沒(méi)有基因與此基因序列完全相同。
由于本發(fā)明所提供的蛋白質(zhì)單獨(dú)添加到CD34+造血干/祖細(xì)胞的培養(yǎng)基中，就能維持CD34+造血干/祖細(xì)胞的活存達(dá)28天以上，同時(shí)保持大部分細(xì)胞都處于細(xì)胞周期的G0/G1時(shí)相，并維持了很高比例的集落形成細(xì)胞，因此本發(fā)明的基因及其編碼的蛋白質(zhì)有望成為臨床骨髓、外周血、臍帶血造血干/祖細(xì)胞移植重要的維持因子或蛋白類藥物，為拓展骨髓、外周血、臍帶血造血干/祖細(xì)胞的細(xì)胞治療和基因治療等研究提供足夠的能長(zhǎng)期維持、可調(diào)控細(xì)胞周期進(jìn)程的理想靶細(xì)胞，并促使造血細(xì)胞相關(guān)的基因治療更加有效和廣泛地應(yīng)用于臨床，將會(huì)帶來(lái)巨大的社會(huì)效益及經(jīng)濟(jì)效益。本發(fā)明的基因及其編碼的蛋白質(zhì)可為造血調(diào)控過(guò)程中造血干/祖細(xì)胞響應(yīng)細(xì)胞因子發(fā)生信號(hào)傳導(dǎo)、周期調(diào)控、增殖、分化等方面變化的研究提供新思路，為探討干細(xì)胞的自我更新機(jī)制、明確白血病的成因并進(jìn)行治療提供幫助，也為其它干細(xì)胞的長(zhǎng)期維持和臨床應(yīng)用提供了新的理論和方法；而且，對(duì)于蛋白質(zhì)作用的不同研究階段開(kāi)發(fā)的不同產(chǎn)品，包括新抗體、生物芯片的靶基因、篩選出的新藥等，也將促進(jìn)形成新興的人類基因產(chǎn)業(yè)。


圖1為本發(fā)明蛋白的15％SDS-PAGE電泳結(jié)果。
圖2為本發(fā)明凝集素對(duì)不同細(xì)胞表面特異受體的雜交結(jié)果。其中分別顯示A人臍帶血陽(yáng)性結(jié)果，B人臍帶血陰性對(duì)照，C CD34+細(xì)胞陽(yáng)性結(jié)果，D CD34+陰性對(duì)照，E單個(gè)核細(xì)胞，F(xiàn)人紅白血病細(xì)胞K562，G人紅白血病細(xì)胞HEL，H人紅白血病細(xì)胞U937，I人T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞Jurkat，J人B淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞Raji，K人髓系白血病細(xì)胞KG1，L人骨髓母細(xì)胞KG1a，M膀胱癌細(xì)胞EJ1，N人胎腎細(xì)胞HEK293，O肝癌細(xì)胞HepG2，P人宮頸癌細(xì)胞Hela，Q人骨髓基質(zhì)細(xì)胞HFCL，R人乳腺癌細(xì)胞MCF-7。
圖3為本發(fā)明凝集素及FL的單獨(dú)和組合應(yīng)用對(duì)CD34+造血干/祖細(xì)胞增殖影響的結(jié)果。
圖4為本發(fā)明凝集素及FL對(duì)CD34+造血干/祖細(xì)胞的細(xì)胞周期的作用結(jié)果。
各圖中均以FRIL表示本發(fā)明凝集素。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1、凝集素基因的克隆本發(fā)明的基因cDNA克隆自眉豆Dolichos labab的新生豆苗cDNA文庫(kù)，引物序列及其多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)的條件如下primer15’CGTCACAGAACGCCTCTTGTAA 3’primer25’CGCATGTTTCCCAGTAAGGTTA 3’50μl反應(yīng)體系包括4μl cDNA(100ng/μl)，各1μl 10μM的primer1和primer2，4μl dNTP(2.5mM)，1μl Ex Taq DNA聚合酶(TakaRa公司，5u/μl)，5μl 10×PCRBuffer，38μl滅菌水。反應(yīng)條件為94℃ 30s；59℃ 30s，72℃ 45s，35個(gè)循環(huán)，72℃7min。反應(yīng)產(chǎn)物克隆至pMD-18T載體(TakaRa公司)。用常規(guī)方法測(cè)序，結(jié)果表明本發(fā)明所克隆到的基因?yàn)樾蛄斜碇行蛄?的DNA序列。
實(shí)施例2、蛋白質(zhì)的親和層析純化本發(fā)明的蛋白質(zhì)來(lái)源于眉豆Dolichos lablab干種子，利用凝集素對(duì)特定糖基高親和力的特性加以親和層析純化，過(guò)程如下將眉豆研磨成粉，以5倍體積Tris緩沖液(50mmol/L Tris-HCl，1mmol/L MgCl2，1mmol/L CaCl2，pH8.0)勻漿，4℃平衡4小時(shí)以上；4℃ 20000g高速離心20min，取上清；以冰醋酸調(diào)pH至4.0，同上高速離心取上清；40％NaOH調(diào)pH至8.0，同上高速離心取上清，即凝集素粗提液。粗提液與Tris緩沖液平衡后的親和層析介質(zhì)(mannose-Sepharose matrix，Pharmacia公司)結(jié)合，4℃反應(yīng)4小時(shí)以上，接著用Tris緩沖液洗滌至沒(méi)有蛋白流出，再以200mmol/Lα-甲基α-D-甘露糖苷洗脫得到凝集素FRIL純?nèi)芤骸?5％SDS-PAGE結(jié)果如圖1所示，從圖中可以看出在10kD-25kD范圍內(nèi)有5條明顯的條帶，是所分離的植物凝集素的5個(gè)亞基。
實(shí)施例3、蛋白質(zhì)部分亞基的N端氨基酸測(cè)序15％SDS-PAGE分開(kāi)所純化的豆類凝集素的各亞基條帶，通過(guò)半干轉(zhuǎn)移法轉(zhuǎn)移至PVDF膜上，以491A蛋白序列分析儀經(jīng)自動(dòng)Edman降解測(cè)定N端前5個(gè)氨基酸序列，結(jié)果表明本發(fā)明所純化的蛋白質(zhì)其部分構(gòu)成亞基N端序列為序列表中序列3的氨基酸序列。從表中可以看出，本發(fā)明蛋白的α2亞基存在兩個(gè)組分，其中一個(gè)是N端缺失一個(gè)氨基酸的。
實(shí)施例4、凝集素活性的測(cè)定抽取家兔耳緣靜脈血，處理后用生理鹽水配成2％紅細(xì)胞懸液。在V型凝血板上，將本發(fā)明凝集素用PBS(137mmol/L NaCl，2.7mmol/L KCl，4.3mmol/L Na2HPO4·7H2O，1.4mmol/L KH2PO4，pH＝7.3)倍比稀釋(1∶2)，每孔加25μL，再加入2％新鮮血球懸液25μL，振蕩搖勻后，25℃放置1～2h，肉眼觀察凝集現(xiàn)象的發(fā)生。結(jié)果顯示，純化的凝集素在稀釋到300ng/ml左右仍有凝集活性，本發(fā)明的蛋白質(zhì)是一種具有凝集血細(xì)胞能力的植物凝集素。
實(shí)施例5、凝集素的糖抑制試驗(yàn)將蔗糖、甘露糖、α-D甘露糖、3-Oα-D甘露糖、葡萄糖、α-甲基α-D-甘露糖苷分別用蒸餾水配成1mol/L濃度，在V型凝血板上以PBS按1∶10的梯度倍比稀釋，每孔加25μL，再往各孔添加900ng/ml的本發(fā)明凝集素25μL，以及2％新鮮血球懸液50μL，25℃放置1～2h，肉眼觀察抑制結(jié)果，能與紅細(xì)胞競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合本發(fā)明凝集素的糖將導(dǎo)致紅細(xì)胞的沉積。糖抑制實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。由表中看出，本發(fā)明凝集素主要與3-Oα-D甘露糖有很高的親和性，本發(fā)明的凝集素是一種針對(duì)3-Oα-D甘露糖特異結(jié)合的凝集素。
表1 扁豆凝集素糖抑制實(shí)驗(yàn)糖競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)有效稀釋濃度(mol/L)蔗糖 10-2甘露糖10-2α-D甘露糖10-3glucose 10-1α-甲基α-D-甘露糖苷 -3-Oa-D甘露糖 10-5實(shí)施例6、凝集素的細(xì)胞表面特異受體的組織化學(xué)檢測(cè)將本發(fā)明純化獲得的蛋白質(zhì)以常規(guī)方法用辣根過(guò)氧化物酶HRP標(biāo)記，作為組織化學(xué)檢測(cè)的探針。
利用組織化學(xué)方法檢測(cè)本發(fā)明蛋白質(zhì)受體在多種造血細(xì)胞系和組織細(xì)胞系中的表達(dá)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明蛋白質(zhì)的受體在人宮頸癌、乳腺癌、膀胱癌、肝癌、胎腎細(xì)胞、骨髓基質(zhì)細(xì)胞上均無(wú)表達(dá)，在多種造血細(xì)胞中，也僅有人紅白血病細(xì)胞HEL、人骨髓母細(xì)胞KG1a和分離純化的人臍帶血單個(gè)核細(xì)胞MNC和CD34+細(xì)胞表面存在特異受體，其余人髓系白血病細(xì)胞KG1、U937、人紅白血病細(xì)胞K562、人T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞Jurkat上也不存在受體，而CD34+細(xì)胞中，存在本發(fā)明蛋白質(zhì)特異受體的細(xì)胞也僅占其中的一部分。結(jié)果如圖2所示。圖2顯示出，本發(fā)明蛋白質(zhì)的受體是部分造血干/祖細(xì)胞所特有的，本發(fā)明蛋白質(zhì)能特異性針對(duì)造血干/祖細(xì)胞發(fā)揮作用。
實(shí)施例7、蛋白質(zhì)體外長(zhǎng)期維持CD34+造血干/祖細(xì)胞實(shí)驗(yàn)本發(fā)明凝集素的受體是flt3，而flt3的另一個(gè)配體是FL(flt3 ligand)，它是目前廣泛應(yīng)用的體外擴(kuò)增造血干/祖細(xì)胞的細(xì)胞因子之一，對(duì)比本發(fā)明凝集素與FL在體外對(duì)CD34+造血干/祖細(xì)胞的維持作用，方法如下依照CD34+細(xì)胞分離試劑盒(miniMACS magnetic cell sorting system，Miltenyi BiotechGmbH公司，德國(guó))操作步驟分離純化臍帶血CD34+細(xì)胞，細(xì)胞以4～8×105/mL的濃度培養(yǎng)于含10％FBS、0.5％BSA的RPMI 1640培養(yǎng)基中，分別添加FRIL、FL、(FRIL+FL)培養(yǎng)，F(xiàn)RIL、FL添加的終濃度均為300ng/mL，不更換培養(yǎng)基，于一定時(shí)間計(jì)數(shù)細(xì)胞量，并收集細(xì)胞用于PI染色、流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期，另部分細(xì)胞進(jìn)行混合集落培養(yǎng)(2000～8000細(xì)胞接種于0.5mL含5ng/mL GM-CSF、5ng/mL IL-3、50ng/mL SCF、2U/mL EPO、5×10-5mol/L 2-ME、10％FBS、10％HS的甲基纖維素預(yù)混培養(yǎng)基MethoCultTMSF中，按24孔板中每孔0.5mL加入，培養(yǎng)至16d計(jì)數(shù)形成的各種集落。集落密度即每104個(gè)細(xì)胞形成的集落數(shù)。)細(xì)胞增殖曲線見(jiàn)圖3，細(xì)胞周期檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖4，混合集落培養(yǎng)計(jì)數(shù)結(jié)果見(jiàn)表2。圖3、圖4顯示，以本發(fā)明凝集素培養(yǎng)的CD34+細(xì)胞G0/G1期的比例總在80％以上，超出FL的作用水平，同時(shí)比較細(xì)胞數(shù)上的差別，推測(cè)本發(fā)明凝集素延長(zhǎng)了造血干細(xì)胞的細(xì)胞周期，減少了進(jìn)入分裂和增殖過(guò)程的細(xì)胞數(shù)。表2顯示，以本發(fā)明凝集素長(zhǎng)期培養(yǎng)CD34+細(xì)胞相對(duì)FL表現(xiàn)出較高的集落形成能力，可見(jiàn)本發(fā)明凝集素更適用于長(zhǎng)期保存造血干/祖細(xì)胞的多能性。以上結(jié)果說(shuō)明，本發(fā)明凝集素具有更強(qiáng)的體外維持CD34+造血干/祖細(xì)胞的活存和自我更新潛力的能力，主要是通過(guò)將CD34+造血干/祖細(xì)胞滯留在細(xì)胞周期的G0/G1期實(shí)現(xiàn)的。
表2扁豆凝集素及FL不同組合對(duì)CD34+造血干/祖細(xì)胞集落形成能力的影響Day Medium Myeloid Erythroid Mix0 824±141 8±3 83±103FL 1001±16510±7 17±21FRIL 790±202*21±178±6FL+FRIL863±392 0 16±15Blank 795±28 35±1417±87FL 902±252 34±30107±95FRIL 818±376 35±2290±84FL+FRIL836±240 119±97 107±91Blank 432±107 0 014 FL 260±137 11±1015±13FRIL 326±121*21±13*23±9*FL+FRIL272±147***0***5±5***Blank 0 0 021 FL 130±126 1±1 4±3FRIL 295±117**6±4*12±9*FL+FRIL347±303****0****0***Blank 00 028 FL 120±64 0 1±1FRIL 172±60*0 1±2FL+FRIL180±74 2±2 1±1Blank 00 0*P＜0.05本發(fā)明凝集素與FL組相比，**P＜0.01本發(fā)明凝集素與FL組相比，***P＜0.001本發(fā)明凝集素與FL之間存在交互作用，****P＜0.05本發(fā)明凝集素與FL之間存在交互作用。
表中以FRIL表示本發(fā)明凝集素。
序列表<160>2<210>1<211>819<212>DNA<213>扁豆屬扁豆種(Dolichos lablab L.[Lablab vulgaris Savi])<400>1atgtttccca gtaaggttaa gtcagcacag tcattgtcat ttagtttcac 50caagtttgat cctaaccaag aggatcttat cttccaaggt catgccactt 100ctacaaacaa tgtcttacaa ctcaccaagt tagacagtgc aggaaaccct 150gtgagttcta gtgcgggaag agtgttatat tctgcaccat tgcgcctttg 200ggaagactct gcggtattga caagctttga caccattatc aactttgaaa 250tctcaacacc ttacacttct cgtatagctg atggcttggc cttcttcatt 300gcaccacctg actctgtcat cagttatcat ggtggttttc ttggactctt 350tcccaacgca aacactctca acaactcttc cacctctgaa aaccaaacca 400ccactaaggc tgcatcaagc aacgttgttg ctgttgaatt tgacacctat 450cttaatcccg attatggtga tccaaactac atacacatcg gaattgacgt 500caactctatt agatccaagg taactgctaa gtgggactgg caaaatggga 550aaatagccac tgcacacatt agctataact ctgtctctaa aagactatct 600gttactactt attatcctgg gagtaaacct gcgactctct cctatgatat 650tgagttacat acagtgcttc ctgaatgggt cagagtaggg ttatctgctt 700caactggaca agataaagaa agaaataccg ttcactcatg gtctttcact 750tcaagcttgt ggaccaatgt ggcgaagaag gagaatgaaa acaagtatat 800tacaagaggc gttctgtga 819<210>2<211>272<212>PRT<213>扁豆屬扁豆種(Dolichos lablab L.[Lablab vulgaris Savi])
<400>2Met Phe Pro Ser Lys Val Lys Ser Ala Gln Ser Leu Ser Phe Ser15 10 15Phe Thr Lys Phe Asp Pro Asn Gln Glu Asp Leu Ile Phe Gln Gly20 25 30His Ala Thr Ser Thr Asn Asn Val Leu Gln Leu Thr Lys Leu Asp35 40 45Ser Ala Gly Asn Pro Val Ser Ser Ser Ala Gly Arg Val Leu Tyr50 55 60Ser Ala Pro Leu Arg Leu Trp Glu Asp Ser Ala Val Leu Thr Ser65 70 75Phe Asp Thr Ile Ile Asn Phe Glu Ile Ser Thr Pro Tyr Thr Ser80 85 90Arg Ile Ala Asp Gly Leu Ala Phe Phe Ile Ala Pro Pro Asp Ser95 100 105Val Ile Ser Tyr His Gly Gly Phe Leu Gly Leu Phe Pro Asn Ala110 115 120Asn Thr Leu Asn Asn Ser Ser Thr Ser Glu Asn Gln Thr Thr Thr125 130 135Lys Ala Ala Ser Ser Asn Val Val Ala Val Glu Phe Asp Thr Tyr140 145 150Leu Asn Pro Asp Tyr Gly Asp Pro Asn Tyr Ile His Ile Gly Ile155 160 165Asp Val Asn Ser Ile Arg Ser Lys Val Thr Ala Lys Trp Asp Trp170 175 180Gln Asn Gly Lys Ile Ala Thr Ala His Ile Ser Tyr Asn Ser Val185 190 195Ser Lys Arg Leu Ser Val Thr Thr Tyr Tyr Pro Gly Ser Lys Pro200 205 210Ala Thr Leu Ser Tyr Asp Ile Glu Leu His Thr Val Leu Pro Glu215 220 225Trp Val Arg Val Gly Leu Ser Ala Ser Thr Gly Gln Asp Lys Glu230 235 240Arg Asn Thr Val His Ser Trp Ser Phe Thr Ser Ser Leu Trp Thr
245 250 255Asn Val Ala Lys Lys Glu Asn Glu Asn Lys Tyr Ile Thr Arg Gly260 265 270Val Leu272<210>3本發(fā)明凝集素部分亞基N端氨基酸序列subunit AA sequence of N-terminalβ Ala Gln Ser Leu Ser Pheα1 Thr Thr Thr Lys Ala Alaα2 Asp Ser Ser Thr Ser/Ser Ser Thr Ser Gln
權(quán)利要求
1.一種具有體外長(zhǎng)期維持造血干/祖細(xì)胞活存和自我更新能力的豆類凝集素基因，它是下列核苷酸序列之一1)序列表中序列1的DNA序列；2)與序列表中序列1限定的DNA序列具有90％以上同源性，且編碼相同功能蛋白質(zhì)的DNA序列。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基因，其特征在于所述具有體外長(zhǎng)期維持造血干/祖細(xì)胞活存和自我更新能力的基因是序列表中序列1的DNA序列。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的基因，其特征在于所述具有體外長(zhǎng)期維持造血干/祖細(xì)胞活存和自我更新能力基因的完整開(kāi)放讀碼框?yàn)樾蛄斜碇行蛄?的第1至819共819個(gè)堿基。
4.一種具有體外長(zhǎng)期維持造血干/祖細(xì)胞活存和自我更新能力的蛋白質(zhì)，它的前體蛋白具有序列表中序列2的氨基酸序列或?qū)⑿蛄?的氨基酸序列經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代、缺失或添加且具有與序列2的氨基酸序列相同活性的由序列2衍生的蛋白質(zhì)。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的蛋白質(zhì)，其特征在于所述蛋白質(zhì)的前體具有序列表中序列2的氨基酸序列。
6.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的蛋白質(zhì)，其特征在于所述具有體外長(zhǎng)期維持造血干/祖細(xì)胞活存和自我更新能力蛋白質(zhì)的部分構(gòu)成亞基N端是序列表中序列3的一組或多組氨基酸序列。
全文摘要
本發(fā)明目的為提供一種能夠在體外長(zhǎng)期維持造血干/祖細(xì)胞活存和自我更新的基因及其編碼的蛋白質(zhì)。本發(fā)明所提供的基因是序列表中序列1的DNA序列；本發(fā)明所提供的蛋白質(zhì)具有序列表中序列2或序列3的氨基酸序列。本發(fā)明的基因及其編碼的蛋白質(zhì)有望成為臨床造血干/祖細(xì)胞體外擴(kuò)增和定向誘導(dǎo)分化的重要維持因子或蛋白類藥物，為細(xì)胞治療和基因治療等研究提供足夠的能長(zhǎng)期維持、可調(diào)控細(xì)胞周期進(jìn)程的靶細(xì)胞，并為研究造血調(diào)控及探討干細(xì)胞的自我更新機(jī)制提供幫助，也為其它干細(xì)胞的長(zhǎng)期維持和臨床應(yīng)用提供了新的理論和方法；對(duì)于蛋白質(zhì)作用的不同階段開(kāi)發(fā)不同的產(chǎn)品，包括新抗體、生物芯片的靶基因、篩選出的新藥等，也將促進(jìn)形成新興的人類基因產(chǎn)業(yè)。
文檔編號(hào)C12N5/08GK1626661SQ20041007402
公開(kāi)日2005年6月15日 申請(qǐng)日期2004年9月1日 優(yōu)先權(quán)日2003年10月31日
發(fā)明者裴雪濤, 謝小燕, 謝超, 王冬梅, 李艷華, 李錦 , 師偉 申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院野戰(zhàn)輸血研究所