專利名稱：一種糖基化亞硝基血紅蛋白色素及其制備和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明提供一種糖基化亞硝基血紅蛋白色素及其制備和應(yīng)用，涉及采用糖類處理亞硝基血紅蛋白，生產(chǎn)穩(wěn)定型紅色素——糖基化亞硝基血紅蛋白(Glycosylated Nitroso-hemoglobin)的方法，以及在肉制品、果蔬汁飲料、雪糕、冰淇淋、面包、糕點、果凍等進(jìn)行調(diào)色食品加工中的應(yīng)用，屬于食品添加劑生產(chǎn)
背景技術(shù)：
在肉制品加工中，亞硝酸鹽可使肉制品具有鮮艷的色澤、良好的質(zhì)構(gòu)和獨特的風(fēng)味，因此亞硝酸鹽在肉類腌制中是一種廣泛使用和重要的發(fā)色劑。但亞硝酸鹽是一種有毒物質(zhì)(ADI0～0.06mg/kg)，在腌制發(fā)色過程中可轉(zhuǎn)化為亞硝胺，而成為強烈的致癌物。為此，在肉制品生產(chǎn)中降低亞硝酸鹽的用量，受到廣泛的研究和重視。
畜禽血是肉類加工生產(chǎn)中的副產(chǎn)物，血紅蛋白是其中主要的蛋白質(zhì)成分。血紅蛋白和肌紅蛋白皆含有血紅素，與亞硝酸鈉或一氧化氮反應(yīng)具有同樣的發(fā)色效果，因此以全血或血紅蛋白與亞硝酸鈉或一氧化氮反應(yīng)制備亞硝基血紅蛋白，或直接由血紅素與一氧化氮反應(yīng)制備亞硝基血紅素，可作為紅色素添加到肉制品中，代替亞硝酸鈉的發(fā)色作用。馬美湖在《食品科學(xué)》2001，Vol.22，No.7中報道以豬血紅蛋白為原料，與亞硝酸鈉反應(yīng)制備亞硝基血紅蛋白并應(yīng)用于香腸中，有效地降低了亞硝基的殘留量。中國專利CN1124107A提供了一氧化氮與血紅蛋白反應(yīng)的優(yōu)化條件，并通過微膠囊包埋提高了亞硝基血紅蛋白的穩(wěn)定性。此外，在《食品科學(xué)》2002，Vol.23，No.8中孔保華等也進(jìn)行了相關(guān)的研究。Shahidi F.在《JOURNALOF FOOD SCIENCE》1991，Vol156，No.6中報道了制備亞硝基血紅素后，將該色素與抗氧化劑、防腐劑等組成多元腌制系統(tǒng)，在肉制品加工中應(yīng)用后取得較好的呈色效果。
在相關(guān)的已公開專利技術(shù)方面，有中國專利CN1124107A、CN1295807A等，報道了亞硝基血紅蛋白、血紅素和羧甲基纖維素(CMC)吸附的血紅素作為紅色素的研究。這些色素，在空氣中及光照條件下很不穩(wěn)定，易發(fā)生降解而使產(chǎn)品褪色，為提高色素的穩(wěn)定性多采用噴霧干燥方法進(jìn)行微膠囊包埋，但微膠囊包埋的色素為水不溶性，且光、熱穩(wěn)定性仍不理想。
蛋白質(zhì)和多糖在控制條件下通過美拉德(Maillard)反應(yīng)可發(fā)生一定程度的聚合，形成糖基化蛋白?！禞.Agric.Food Chem.》1996，Vol.44中Shu Yu-Wei等和《FoodResearch International》2002，Vol.35中SongY.等的研究表明蛋白質(zhì)經(jīng)糖基化處理后，溶解性、抗氧化性、抗菌性以及熱穩(wěn)定性等性能都將明顯提高。
通過糖基化處理亞硝基血紅蛋白生成多糖—蛋白共價結(jié)合物，提高亞硝基血紅蛋白色素的穩(wěn)定性和分散性的方法國內(nèi)外未見報道。

發(fā)明內(nèi)容
(1)要解決的技術(shù)問題亞硝基血紅蛋白熱穩(wěn)定性較差，75℃加熱即發(fā)生沉淀，不再溶于水。在空氣中或光照條件下亞硝基血紅蛋白色素和添加了該色素的肉制品色澤不穩(wěn)定，很快褪色。微膠囊包埋后，穩(wěn)定性提高不大，且為水不溶性，分散性較差，在水中形成懸濁液，其應(yīng)用受到限制。
微膠囊包埋亞硝基血紅蛋白僅是亞硝基血紅蛋白和糖類的簡單混合作用，而蛋白質(zhì)的糖基化作用是蛋白質(zhì)與糖類形成了共價結(jié)合，所形成的糖基化亞硝基血紅蛋白色素的理化性狀明顯改變。糖基化反應(yīng)是在一定的反應(yīng)溫度、時間、亞硝基血紅蛋白與糖的比率和反應(yīng)液的pH條件下進(jìn)行的。使糖基化反應(yīng)充分，同時減少亞硝基血紅蛋白的變性程度和因蛋白加熱條件下的褐變而影響糖基化亞硝基血紅蛋白色素的收率和色澤。
糖基化亞硝基血紅蛋白色素只有與抗氧化劑、防腐劑等組成腌制系統(tǒng)添加到肉制品加工中，才能有效替代亞硝酸鈉的發(fā)色、抗氧化和防腐等的多功能作用。
(2)技術(shù)方案糖基化亞硝基血紅蛋白色素的制備方法，是由檢疫合格的新鮮畜禽血制備的血紅蛋白與亞硝酸鈉或一氧化氮反應(yīng)制備亞硝基血紅蛋白；再與糖類混和，在低于蛋白質(zhì)變性溫度下加熱，通過美拉德(Maillard)反應(yīng)，進(jìn)行糖基化反應(yīng)制備糖基化亞硝基血紅蛋白色素；糖基化反應(yīng)條件是pH4～8，反應(yīng)溫度40～70℃，加熱攪拌反應(yīng)5～60min，反應(yīng)液中亞硝基血紅蛋白的濃度為5％～10％，糖的濃度為0.5％～1％，反應(yīng)后將溶液過濾，除去不溶物，得到糖基化亞硝基血紅蛋白色素溶液；將濃縮或不經(jīng)濃縮的液體色素作為產(chǎn)品，也可以通過噴霧干燥或凍干得到粉末狀產(chǎn)品。
血紅蛋白的制備，將新鮮采集的豬、牛、羊、兔、雞、鴨、鵝等畜禽血經(jīng)離心分離或通過添加與血細(xì)胞表面電荷相反的膠體，自然沉降后得到紅細(xì)胞，再采用溶脹法或凍融法或研磨法破壁，離心或過濾去除細(xì)胞壁碎片后得到血紅蛋白液。
亞硝基血紅蛋白的制備，向血紅蛋白液中添加還原劑、發(fā)色劑后，調(diào)節(jié)pH5～9，在0～10℃條件下腌制8～48h制備亞硝基血紅蛋白，或直接向添加還原劑和調(diào)節(jié)pH5～9的血紅蛋白液中通入一氧化氮制備。
所用的還原劑可以是抗壞血酸、抗壞血酸鈉、異抗壞血酸、異抗壞血酸鈉、葡萄糖、煙酸、煙酰胺、生育酚、茶多酚，其用量為總量的0.1％～1.0％；所用的發(fā)色劑可以是硝酸鈉、亞硝酸鈉，其用量為總量的0.05％～0.5％。
以亞硝基血紅蛋白為原料，進(jìn)行糖基化反應(yīng)制備糖基化亞硝基血紅蛋白。將亞硝基血紅蛋白液與糖液混和，使反應(yīng)液中亞硝基血紅蛋白的濃度為5％～10％，糖的濃度為0.5％～1％，用1mol/L HCl或1mol/L NaOH調(diào)整反應(yīng)液pH為4～8，40～70℃攪拌加熱反應(yīng)5～60min，反應(yīng)后過濾去除不溶物。將濃縮或不經(jīng)濃縮的液體色素作為產(chǎn)品，也可以通過噴霧干燥或冷凍干燥得到粉末狀產(chǎn)品；噴霧干燥后粉末狀色素中糖類含量為8％～20％，低于微膠囊包埋亞硝基血紅蛋白色素中作為壁材糖類的用量。
其中所用的糖是葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖、麥芽糖、糊精、羧甲基纖維素鈉、阿拉伯膠、卡拉膠、果膠、海藻酸鈉、黃原膠、殼聚糖的一種或一種以上的糖混合溶液。
糖基化亞硝基血紅蛋白色素中糖類與蛋白質(zhì)為共價結(jié)合，在pH5.5、0.02mol/L的磷酸鹽體系中色素經(jīng)凝膠層析分離純化后，在紅外圖譜中除含有亞硝基血紅蛋白特征吸收外，在1000～1300nm-1還有明顯的糖類C-OH特征吸收，而在紫外吸收曲線中形成從530～580nm之間平緩微升的峰，明顯地不同于亞硝基血紅蛋白、微膠囊包埋的亞硝基血紅蛋白、亞硝基血紅蛋白和糖類的混合液在540、575nm附近的特征紫外吸收。
制備的糖基化亞硝基血紅蛋白色素產(chǎn)品的應(yīng)用，色素的水溶性好，溶解后為深紅色透明液，95℃加熱仍穩(wěn)定，可以用于肉制品、果蔬汁飲料、雪糕、冰淇淋、面包、糕點、果凍等進(jìn)行調(diào)色的食品生產(chǎn)中。色素與抗氧化劑、防腐劑等組成腌制系統(tǒng)用于肉制品加工中，抗氧化劑是生育酚、或抗壞血酸鈉、或異抗壞血酸鈉、或茶多酚；防腐劑是尼生素、或游霉素、或山梨酸鉀；建議添加量以原料肉質(zhì)量百分計液體色素為1％～5％(粉末狀色素0.1％～0.5％)，抗氧化劑為0.01％～0.1％，防腐劑為0.01％～0.1％；用于果蔬汁飲料加工中的建議添加量以配方質(zhì)量百分比計液體色素為0.1％～1％(粉末狀色素0.05％～0.5％)；用于冰淇淋加工中的建議添加量以配方質(zhì)量百分比計液體色素為1％～5％(粉末狀色素0.1％～0.5％)；其他食品加工中的建議添加量以配方質(zhì)量百分比計液體色素為0.5％～5％(粉末狀色素0.05％～0.5％)。
(3)本發(fā)明的有益效果本發(fā)明制備的糖基化亞硝基血紅蛋白色素比不經(jīng)糖基化處理的亞硝基血紅蛋白色素?zé)岱€(wěn)定性明顯提高，蛋白質(zhì)熱變性溫度從74.13℃提高到97.69℃，95℃加熱仍保持紅色液狀，并具有良好的分散性；光照穩(wěn)定性有所改善，日光照射下5天微膠囊包埋的亞硝基血紅蛋白色素已經(jīng)成為淡黃色，而糖基化色素仍保持淺紅色；而且保藏穩(wěn)定性明顯提高，粉末狀微膠囊包埋的亞硝基血紅蛋白產(chǎn)品常溫下保存一年后540nm處吸光度降低了22％，而糖基化亞硝基血紅蛋白僅降低了6％；粉末狀糖基化色素中亞硝基血紅蛋白含量達(dá)75％～85％，低濃度下即可達(dá)到理想的呈色效果，而微膠囊包埋的色素由于多糖作為壁材，使用量較大，因此色素使用的濃度高于糖基化的色素。從畜禽血的采集、分離，到色素的制備，工藝簡單、生產(chǎn)成本低，易于工業(yè)化生產(chǎn)。
將制備的糖基化亞硝基血紅蛋白色素與抗氧化劑、防腐劑等組成腌制系統(tǒng)，在肉制品加工中替代亞硝酸鈉，液體色素按原料肉質(zhì)量1％～5％(粉末產(chǎn)品按0.1％～0.5％)的比例添加到肉餡中，賦予肉制品穩(wěn)定的色澤并且增加了1％～2％的出品率，持水力有所提高并改善了產(chǎn)品的質(zhì)構(gòu)。肉制品中亞硝基的含量僅為1～10mg/kg，達(dá)到在肉制品加工中減少亞硝酸鹽殘留量的目的。
亞硝基血紅蛋白色素的穩(wěn)定性差，微膠囊包埋后的色素是水不溶性的，即在水中形成懸濁液。由于其分散性差，所以僅限于在肉制品中應(yīng)用，不能應(yīng)用于飲料、果凍等其他調(diào)色食品中。而本發(fā)明產(chǎn)品糖基化亞硝基血紅蛋白色素，因為水溶解性好，為透明紅色液體，光照、加熱條件下穩(wěn)定，因此，在食品加工中用途廣泛，不僅可以添加到肉制品中，還可用于果蔬汁飲料、蛋白類飲料、果凍、糕點、糖果中。
目前，肉類加工中畜禽血的利用率較低，既浪費了大量的優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)和高效補血的血紅素，又污染了環(huán)境，增加企業(yè)的治污費用。因此，本發(fā)明的應(yīng)用可充分利用畜禽血資源，提供一種穩(wěn)定性高的天然色素添加劑。


圖1糖基化亞硝基血紅蛋白和亞硝基血紅蛋白的紅外圖譜。
圖2糖基化亞硝基血紅蛋白、亞硝基血紅蛋白和微膠囊包埋亞硝基血紅蛋白的紫外圖譜。
圖3糖基化亞硝基血紅蛋白、亞硝基血紅蛋白和微膠囊包埋亞硝基血紅蛋白的差示掃描量熱技術(shù)(DSC)圖譜，a.亞硝基血紅蛋白DSC曲線，b.糖基化亞硝基血紅蛋白DSC曲線，c.微膠囊包埋亞硝基血紅蛋白DSC曲線。
具體實施例方式
實施例1收集檢疫合格的新鮮豬血，加入0.5％檸檬酸鈉抗凝后，以3000r/min離心分離15min，棄去上層血清后加入等體積的生理鹽水(0.9％NaCL)洗滌紅血球，同樣轉(zhuǎn)速下再離心15min，收集紅血球。加入等體積或三倍體積的蒸餾水，攪拌30min后溶脹破壁，釋放出血紅蛋白。
于血紅蛋白液中添加0.1％異抗壞血酸鈉、0.05％亞硝酸鈉，調(diào)pH為5.9，于4℃下腌制24h，得到亞硝基血紅蛋白液。
亞硝基血紅蛋白與等體積的1％殼聚糖溶液(溶于1％醋酸溶液中)混和，反應(yīng)液中亞硝基血紅蛋白的濃度為5％，糖的濃度為0.5％，調(diào)節(jié)pH為4.5，再于50℃下加熱20min，過濾后得到糖基化亞硝基血紅蛋白色素，在pH5.5、0.02M的磷酸鹽緩沖溶液中，凝膠分離純化后的紅外圖譜顯示糖類與亞硝基血紅蛋白為共價結(jié)合；粉末狀產(chǎn)品中糖的含量為9％。
通過將糖基化亞硝基血紅蛋白和微膠囊包埋的亞硝基血紅蛋白在日光下曝曬，5天后微膠囊包埋的亞硝基血紅蛋白液成為淡黃色，而糖基化亞硝基血紅蛋白液為淺紅色，實驗表明糖基化處理后的色素光照穩(wěn)定性明顯提高。
實施例2所用的糖液是2％殼聚糖(溶于1％醋酸中)和2％葡萄糖的等體積混合液，亞硝基血紅蛋白與混和糖液等體積混和，反應(yīng)液中亞硝基血紅蛋白的濃度為6％，糖的濃度為1％，調(diào)節(jié)pH為6.0，在70℃下加熱5min，其余操作條件同實施例1，得到的粉末狀色素中糖含量為18％；其紫外吸收不同于微膠囊包埋的亞硝基血紅蛋白、亞硝基血紅蛋白與糖類的混合液。通過在85℃加熱10min，糖基化亞硝基血紅蛋白色素液仍為紅色液體，而微膠囊包埋處理的色素已經(jīng)變性沉淀，實驗表明糖基化處理的色素?zé)岱€(wěn)定性明顯提高。
實施例3將2體積的血紅蛋白液與1體積的2％殼聚糖溶液混和，使反應(yīng)液亞硝基血紅蛋白的濃度為8％，糖的含量為0.7％，調(diào)pH為7.5，在40℃下加熱50min，其余操作條件同實施例1，所得粉末狀色素中糖含量為8％，低于微膠囊包埋的產(chǎn)品。
用差示掃描量熱技術(shù)(DSC)測定，亞硝基血紅蛋白的熱變性溫度為74.13℃，通過糖基化處理蛋白質(zhì)，糖基化亞硝基血紅蛋白的熱變性溫度從74.13℃提高到97.69℃，而微膠囊包埋的亞硝基血紅蛋白色素的熱變性溫度為79.19℃表明糖基化處理的亞硝基血紅蛋白色素的熱穩(wěn)定性明顯提高。
實施例4將血紅蛋白液調(diào)pH為6.1，加入0.1％的異抗壞血酸鈉，通一氧化氮氣制備亞硝基血紅蛋白，其余條件同實施例1，將得到的糖基化亞硝基血紅蛋白液噴霧干燥，色素產(chǎn)品的水溶性好，為深紅色透明液，不同于微膠囊包埋的色素在水中不能溶解，只能形成懸濁液；由此擴大了糖基化亞硝基血紅蛋白色素的使用范圍，可以應(yīng)用在肉制品、果蔬汁飲料、蛋白類飲料、果凍、糖果、糕點等加工中，賦予產(chǎn)品理想的色澤。
通過將常溫保存一年后的糖基化亞硝基血紅蛋白和亞硝基血紅蛋白粉末狀色素稀釋相同的倍數(shù)，測定540nm處的吸光度，與新制備的兩種色素比較，亞硝基血紅蛋白的吸光度降低了22％；而糖基化亞硝基血紅蛋白的吸光度僅降低了6％，結(jié)果表明糖基化處理后的色素更耐貯藏。
實施例5將2.0g粉末狀色素與0.5g異抗壞血酸鈉和0.5g山梨酸鉀混和，制成新的腌制系統(tǒng)替代亞硝酸鹽的發(fā)色作用，在斬拌時添加到1kg原料肉制成的肉餡中，生產(chǎn)的灌腸產(chǎn)品色澤為暗紅色，并且增加了出品率，持水力有所提高并改善了產(chǎn)品的質(zhì)構(gòu)。
將分別添加了糖基化亞硝基血紅蛋白色素和微膠囊包埋亞硝基血紅蛋白色素制備的灌腸切開后，在4℃和日光燈照射下保藏，添加微膠囊包埋亞硝基血紅蛋白色素的產(chǎn)品7天后，色澤開始變淡，10天后發(fā)黃，而添加糖基化亞硝基血紅蛋白色素的產(chǎn)品，保藏7天后色澤無明顯變化，15天時色澤尚可，表明糖基化亞硝基血紅蛋白色素在肉制品加工中應(yīng)用后，產(chǎn)品的色澤穩(wěn)定性提高。
實施例6將制備的液體色素按1％～5％，或粉末狀色素0.1％～0.5％(先加水溶解配成2％的溶液)，經(jīng)過濾后添加到配料缸中，與其他原料混合，應(yīng)用于冰淇淋的加工，提高了產(chǎn)品的膨脹度，增加了補血成分血紅素并呈現(xiàn)理想的紅色。
將冰激凌產(chǎn)品與等體積的蒸餾水混和，過濾后在400～600nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行紫外掃描，形成一個從530～580nm之間平緩微升的峰，明顯地不同于亞硝基血紅蛋白、微膠囊包埋的亞硝基血紅蛋白、亞硝基血紅蛋白和糖類的混合液在540、575nm附近的特征紫外吸收。
權(quán)利要求
1.一種糖基化亞硝基血紅蛋白色素，其特征是由檢疫合格的新鮮畜禽血制備的血紅蛋白與亞硝酸鈉或一氧化氮反應(yīng)制備亞硝基血紅蛋白；再將亞硝基血紅蛋白與糖類混合，在低于蛋白質(zhì)變性溫度下加熱，通過美拉德反應(yīng)而制得的色素。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的色素，其特征是制備的色素形式可以是濃縮或不經(jīng)濃縮的液體色素，或通過噴霧干燥或經(jīng)冷凍干燥得到的粉末狀色素，粉末狀色素中糖類含量為8％～20％。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的色素，其特征是糖基化亞硝基血紅蛋白色素中糖類與蛋白質(zhì)為共價結(jié)合，在pH5.5、0.02mol/L的磷酸鹽體系中色素經(jīng)凝膠層析分離純化后，在紅外圖譜中除含有亞硝基血紅蛋白特征吸收外，在1000～1300nm-1還有明顯的糖類C-OH特征吸收，而在紫外吸收曲線中形成從530～580nm之間平緩微升的峰。
4.權(quán)利要求1所述的糖基化亞硝基血紅蛋白色素的制備方法，其特征是由檢疫合格的新鮮畜禽血制備的血紅蛋白與亞硝酸鈉或一氧化氮反應(yīng)制備亞硝基血紅蛋白；再將亞硝基血紅蛋白與糖類混合，在低于蛋白質(zhì)變性溫度下加熱，通過美拉德反應(yīng)制備糖基化亞硝基血紅蛋白色素，反應(yīng)液中亞硝基血紅蛋白的濃度為5％～10％，糖的濃度為0.5％～1％，調(diào)整pH為4～8，在40～70℃溫度下，加熱攪拌反應(yīng)5～60min，反應(yīng)后將溶液過濾，除去不溶物，得到糖基化亞硝基血紅蛋白色素溶液。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征是糖基化所用的糖是葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖、麥芽糖、糊精、羧甲基纖維素鈉、阿拉伯膠、卡拉膠、果膠、海藻酸鈉、黃原膠、殼聚糖的一種或一種以上的糖混合溶液。
6.如權(quán)利要求1所述色素的應(yīng)用，其特征是在肉制品加工中糖基化亞硝基血紅蛋白色素與抗氧化劑、防腐劑組成腌制系統(tǒng)，替代硝酸鹽、亞硝酸鹽的作用；其中抗氧化劑是生育酚、或抗壞血酸鈉、或異抗壞血酸鈉、或茶多酚；防腐劑是尼生素、或游霉素、或山梨酸鉀；用于肉制品加工中的建議添加量以原料肉質(zhì)量百分計液體色素為1％～5％，或粉末狀色素為0.1％～0.5％，抗氧化劑的用量為0.01％～0.1％，防腐劑的用量為0.01％～0.1％。
7.如權(quán)利要求1所述色素的應(yīng)用，其特征是糖基化亞硝基血紅蛋白色素溶于水，為深紅色澄清透明液，用于果蔬汁飲料、雪糕、冰淇淋、面包、糕點、果凍進(jìn)行調(diào)色的食品生產(chǎn)中，用于果蔬汁飲料加工中的建議添加量以配方中質(zhì)量百分比計液體色素為0.1％～1％，或粉末狀色素為0.05％～0.5％；用于冰淇淋加工中的建議添加量以配方中質(zhì)量百分比計液體色素為1％～5％，或粉末狀色素為0.1％～0.5％；其他食品加工中的建議添加量以配方中質(zhì)量百分比計液體色素為0.5％～5％，或粉末狀色素為0.05％～0.5％。
全文摘要
一種糖基化亞硝基血紅蛋白色素及其制備和應(yīng)用，屬于食品添加劑生產(chǎn)技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明以畜禽血中的血紅蛋白為原料與亞硝酸鈉或一氧化氮反應(yīng)制備亞硝基血紅蛋白，再將糖類與亞硝基血紅蛋白反應(yīng)制備糖基化亞硝基血紅蛋白色素溶液，可直接使用，或經(jīng)噴霧干燥制成粉末狀色素產(chǎn)品。該色素為多糖－蛋白共價結(jié)合物，其光、熱穩(wěn)定性和分散性顯著提高。將該色素與抗氧化劑、防腐劑組成的腌制系統(tǒng)應(yīng)用到肉制品加工中，可減少其中亞硝酸鈉的殘留量，且光照下肉制品的色澤穩(wěn)定。還可作為食用色素用于其他食品的加工中。添加該色素的食品，色澤穩(wěn)定、蛋白含量提高并增加了高效補鐵成分血紅素。本發(fā)明的應(yīng)用可充分利用畜禽血資源，提供一種穩(wěn)定性高的天然色素添加劑。
文檔編號A23L1/03GK1650748SQ20041010320
公開日2005年8月10日 申請日期2004年12月29日 優(yōu)先權(quán)日2004年12月29日
發(fā)明者夏文水, 楊錫洪 申請人:江南大學(xué)