專利名稱：與小麥Brock抗白粉病基因緊密連鎖的分子標(biāo)記的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于農(nóng)業(yè)生物技術(shù)工程，特別涉及與白粉病抗性基因連鎖的AFLP分子標(biāo)記及其所用引物。
背景技術(shù)：
由專性寄生真菌小麥白粉菌(Erysiphe graminis f.sp.tritici)引起的小麥白粉病是危害小麥生產(chǎn)的主要病害之一。近年來，隨著矮稈、半矮稈小麥品種的推廣，田間栽培密度的增加以及水肥條件的改善，該病害在我國南北麥區(qū)危害程度日趨嚴(yán)重，成為當(dāng)前小麥高產(chǎn)、穩(wěn)產(chǎn)的主要障礙因素之一。1990年小麥白粉病在全國39％的小麥種植區(qū)流行，造成產(chǎn)量損失達(dá)4億公斤。目前，小麥白粉病已經(jīng)成為威脅我國小麥生產(chǎn)的常見病害之一，所以對該病的防治刻不容緩。
盡管實踐中可以采取化學(xué)藥劑來防治小麥白粉病，但是，培育抗病品種是最為安全、經(jīng)濟、有效的措施。70年代初，我國引入具1B/1R的小麥衍生品種做為抗源，曾經(jīng)一度有90％以上的品種攜有Pm8抗白粉病基因，由于抗性基因的單一性，結(jié)果導(dǎo)致小麥白粉病在全國范圍內(nèi)多次大流行。此后，我國小麥育種家致力于多方引入和轉(zhuǎn)育具有新抗病基因的品種，但由于有些抗病基因在不同遺傳背景中表達(dá)不一致，致使真正用于生產(chǎn)實際的抗白粉病基因很少，在育種中應(yīng)用的僅有Pm4a、Pm4b、Pm6、Pm8及其組合Pm2+6、Pm2+4等，再加上小麥白粉病菌具有群體大，適應(yīng)范圍廣，生理小種多且毒力變異快等特點，使得許多花費多年時間培育的抗病品種(系)剛應(yīng)用不久，有的甚至還未應(yīng)用，便由于病菌群體毒性的變化而喪失了抗性?！熬盼濉逼陂g，Pm4a、Pm6在全國各地均已開始喪失抗性。二十世紀(jì)末，北京地區(qū)推出了我國第一個自行轉(zhuǎn)育成功并定名的Pm21基因。目前，我國小麥育種項目中較為廣泛地利用了該基因，應(yīng)引起警惕，防止抗源單一現(xiàn)象再次發(fā)生，有效地控制白粉病的流行。為此就必須大力挖掘和利用新抗源并不斷地進(jìn)行抗病基因的累加，培育抗性持久的小麥品種。
為實現(xiàn)上述任務(wù)，挖掘新抗源，以往，育種家們大多借助形態(tài)學(xué)標(biāo)記和生化標(biāo)記來輔助育種，但這類標(biāo)記具有工作量大、標(biāo)記數(shù)量少、易受環(huán)境影響等缺點。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，一類基于DNA變異的分子標(biāo)記技術(shù)已經(jīng)被國內(nèi)外許多學(xué)者應(yīng)用于小麥抗白粉病研究。應(yīng)用分子標(biāo)記，可以免除傳統(tǒng)育種中繁重的工作程序，跟蹤、檢測外源基因，還可以把多個抗白粉病基因聚合到同一優(yōu)良品種中，獲得持久抗性。此外，將基因精確定位于高密度的分子圖譜上，以緊密連鎖的分子標(biāo)記為起點，應(yīng)用染色體步行(Chromosome Walking)等方法，逐漸逼近目標(biāo)基因，最終克隆該基因。實踐證明DNA分子標(biāo)記是進(jìn)行抗病性鑒定和輔助育種研究的重要工具。
小麥對白粉病的抗性主要由主效基因控制，早期基因符號為M1，正式命名的基因符號為Pm(powdery mildew)。自從1930年澳大利亞學(xué)者首次報道了澳大利亞春小麥品種Thew攜帶一個顯性抗白粉病基因以來，至今已鑒定出30個Pm基因位點，除Pm29外，其余主效基因已被定位到染色體或染色體臂上。此外尚有抗病基因未被正式命名，臨時以M1表示。自從90年代初開展小麥抗白粉病基因分子標(biāo)記研究以來，已有接近一半的抗病基因找到了相應(yīng)的分子標(biāo)記，但仍有很多抗白粉病的未知基因，尚未篩選出分子標(biāo)記。因此，繼續(xù)用分子標(biāo)記的方法，篩選與抗白粉病基因相關(guān)的標(biāo)記，在農(nóng)業(yè)上有重要應(yīng)用價值。
栽培小麥Brock，由中國農(nóng)業(yè)大學(xué)楊作民教授從英國引進(jìn)，強抗白粉病。用白粉病菌15號生理小種感染Brock、京411及由它們配制的近等基因系，2周后發(fā)現(xiàn)Brock及近等基因系抗性單株葉片上沒有任何菌斑出現(xiàn)，表現(xiàn)強抗白粉病，而輪回親本京411嚴(yán)重染菌。據(jù)報道，Brock中含有Pm2(Liu Z Y，Sun Q X，Ni Z F，et al.1999.Development of SCAR markers linked to the Pm21 gene conferring resistance topowdery mildew in common wheat.Plant Breeding，118215-219)，但是，生產(chǎn)上含有pm2的小麥品種對白粉病菌大多已經(jīng)喪失抗性(李隆業(yè)，黃元江.小麥白粉病已知抗性基因的效應(yīng)及評價.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)，1990，23(3)20-26)。為了證實Brock中Pm2的抗性是否存在，我們曾經(jīng)用華北地區(qū)流行的白粉病菌優(yōu)勢種15號生理小種感染含有Pm2包括Brock在內(nèi)的11個小麥栽培種，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，除Brock具有強抗特性外，其余10個栽培種為中等程度甚至高度感染白粉病，因而，我們推測，栽培小麥Brock的抗性并非來自于Pm2，而是來自于Pm2以外的另一個強抗白粉病的新基因(見參考文獻(xiàn)Wang Zhenying，Zhao Pei，Chen Hong，et al.2005.Identifiation ofRAPD markers and development of SCAR msrkers linked to a powdery mildew resistance gene，and their location on chromosome in wheat cultivar Brock.Plant Production Science.8(5)578-585)。我們前期的研究表明，Brock中強抗白粉病的新基因為顯性單基因遺傳，為抗白粉病的主效基因(見參考文獻(xiàn)ZhenyingWang，Qi Zheng，Yongkang Peng，et al.，2004.Identification of Random Amplified Polymorphic DNA and Simple Seqence RepeatMarkers Linked to Powdery Mildew resistance in Common wheat cultivar Brock.PlantProduction Science.7(3)318-322)。利用抗源供體親本Brock、近等基因系及輪回親本京411及Brock×京411的F2分離抗、感單株為材料，用RAPD、SSR、SCAR分子標(biāo)記方法，找到Brock中與抗白粉病目的基因連鎖的分子標(biāo)記OPP15917、S2092972、及Xgwm114120，它們與Brock中目的基因的遺傳距離分別為6.0cM、4.9cM和9.3cM(見參考文獻(xiàn)Wang Zhenying，Zhao Pei，Chen Hong，et al.2005.Identificationof RAPD markers and development of SCAR markers linked to a powdery mildew resistance gene，and their location on chromosome in wheat cultivar Brock.Plant Production Science.8(5)578-585)。在上述研究的基礎(chǔ)上，用多態(tài)性更高的AFLP分子標(biāo)記技術(shù)，進(jìn)一步尋找更加逼近Brock中未知抗白粉病基因的分子標(biāo)記和引物，篩選比現(xiàn)有抗白粉病基因的RAPD、SSR、SCAR標(biāo)記更貼近目標(biāo)基因的分子標(biāo)記，以利于小麥分子標(biāo)記輔助選擇育種及抗病基因的圖位克隆。

發(fā)明內(nèi)容
技術(shù)問題本發(fā)明的目的在于提供基于PCR的與普通小麥Brock中抗白粉病未知基因連鎖的AFLP標(biāo)記獲得的方法和引物組合以及該標(biāo)記的核苷酸序列。以抗白粉病小麥栽培種Brock為供體親本，品質(zhì)優(yōu)良但對白粉病敏感的小麥品種京411為輪回親本，通過雜交、回交和自交后配制抗白粉病特性穩(wěn)定的近等基因系(NILs)，用擴增片段長度多態(tài)性(AFLP)分析方法，對Brock、京411和近等基因系進(jìn)行引物篩選，引物組合P7/M14在上述材料中表現(xiàn)出擴增產(chǎn)物的多態(tài)性，獲得與抗白粉病基因相連鎖的AFLP標(biāo)記P7/M14227，該引物組合在所有的抗性單株中都能檢測到特征帶，可以用于小麥白粉病輔助選擇育種。
技術(shù)方案與小麥Brock抗白粉病基因緊密連鎖的分子標(biāo)記P7/M14227，是應(yīng)用AFLP分子標(biāo)記技術(shù)采用下述方法得到的以小麥栽培種Brock為抗性供體親本，品質(zhì)優(yōu)良但對白粉病敏感的小麥品種京411為輪回親本，通過雜交、回交和自交后配制抗白粉病特性穩(wěn)定的近等基因系Brock/015京4117(NILs)，以Brock、京411和近等基因系為材料，用苯酚-氯仿方法分別提取它們的總體DNA，采用AFLP分子標(biāo)記技術(shù)，用225對引物篩選與小麥白粉病抗性相關(guān)的分子標(biāo)記，篩選出一個AFLP分子標(biāo)記P7/M14227，經(jīng)過連鎖性鑒定，該標(biāo)記與小麥抗白粉病基因緊密連鎖，與抗性基因的遺傳距離為1.9cM；篩選P7/M14227標(biāo)記所用AFLP引物序列為P7CACTGCGTACATGCAGAGC
M14GATGAGTCCTGAGTAAACCP7/M14227的堿基序列為GATGAGTCCTGAGTAAACCCTGAGAATGCAGAGCACGTAAATAAATATCGACGTTCAAATCCCTGAAATCCATACCCTGACCTCCCTGATCCCGGTCGTTTCTGACCTTTAGGTTGTATCCAAACAGGGGGATTTTTACCTGGGCAGAGAACGGACGGGATCAAGGTGAGTCATCTACATGCAGGTGGGTCTCATGGTCTCCTGGATTGCTCTGCATGTACGCAGTC。
采用AFLP分子標(biāo)記方法，篩選與小麥抗白粉病基因相連鎖的分子標(biāo)記，其的具體做法是以Brock、京411及近等基因系的基因組DNA為模板，通過Pst I和Mse I雙酶切后與接頭引物在T4 DNA連接酶的作用下連接，連接產(chǎn)物作為AFLP分析用模板。本發(fā)明共選擇225對引物組合在3個供試材料中進(jìn)行AFLP分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)有28個引物組合出現(xiàn)擴增產(chǎn)物多態(tài)性，連鎖性鑒定分析發(fā)現(xiàn)，只有引物組合P7/M14的擴增片段P7/M14227與抗白粉病基因有連鎖關(guān)系，其與抗白粉病基因之間的遺傳距離為1.9cM。將P7/M14227克隆并測序，發(fā)現(xiàn)其長227bp。
有益效果白粉病是影響小麥生產(chǎn)的一種嚴(yán)重病害。本發(fā)明是利用分子標(biāo)記方法得到一個新的與白粉病抗性基因連鎖的AFLP分子標(biāo)記。利用這種方法，不僅克服了常規(guī)育種方法所需時間周期長等缺點，而且能夠有目標(biāo)地將抗病基因在實驗室內(nèi)選擇得到，還可以有目的地聚合多個抗白粉病基因、培育出具有穩(wěn)定抗性的小麥新品種，同時也可利用這個新白粉病抗性基因的分子標(biāo)記克隆抗白粉病基因，對于進(jìn)一步了解小麥抗白粉病的分子遺傳學(xué)機理有積極意義。因此，本研究結(jié)果在小麥育種實踐及抗病理論研究上都很有價值。其優(yōu)點具體歸納如下1、本發(fā)明的與白粉病抗性基因連鎖的分子標(biāo)記，是在對華北地區(qū)白粉病菌免疫的小麥品種Brock及其抗性穩(wěn)定的雜交后代單株中獲得的新的標(biāo)記，對15號生理小種均有抗性，而且穩(wěn)定存在，可以用于小麥白粉病品種鑒定和小麥抗病后代的輔助選擇育種。
2、本研究所用材料為對15號生理小種(為混合型生理小種，為華北地區(qū)流行的多種白粉病病菌)免疫的小麥品種，對華北地區(qū)白粉病菌具有比較廣普的抗性。因此，根據(jù)所得分子標(biāo)記有望克隆到新的白粉病抗性基因。
3、本發(fā)明用多態(tài)性更高的AFLP分子標(biāo)記技術(shù)，得到的分子標(biāo)記P7/M14227與抗白粉病新基因間的遺傳距離為1.9Cm，比以前篩選到的該抗白粉病基因的RAPD、SSR、SCAR標(biāo)記更貼近目標(biāo)基因，更有可能用于生產(chǎn)實踐。


圖1京411、抗性單株、Brock基因組DNA電泳圖；圖2部分引物組合在京411、抗性單株、Brock中的AFLP擴增產(chǎn)物電泳圖譜；圖3P7/M14227與抗白粉病基因連鎖性分析譜帶圖；圖4P7/M14227核苷酸序列；其中圖1-4中符號分別表示為1 感病親本京411；2抗性單株；3抗病親本Brock；2A引物組合P7/M14擴增產(chǎn)物電泳圖譜；2B引物組合P13/M13擴增產(chǎn)物電泳圖譜；2C引物組合P3/M10擴增產(chǎn)物電泳圖譜；2D引物組合P6/M10擴增產(chǎn)物電泳圖譜；2E引物組合P9/M5擴增產(chǎn)物電泳圖譜MλDNA Hind III/EcoR I Markers；R雜交后代抗病單株；S沒有特異帶的雜交后代感病單株；S*有特異帶，但表型為感病的雜交后代單株；
具體實施例方式(結(jié)合附圖具體說明)實施例1·近等基因系的配制該分子標(biāo)記實驗的抗白粉病供體基因為Brock，是一種對白粉病具強抗特性的小麥栽培種，京411是優(yōu)良小麥品種，015為優(yōu)良品系。本研究實驗材料的獲得是通過Brock與015雜交，F(xiàn)1與京411雜交，所得后代與京411連續(xù)回交7代自交1代后得到的一個抗白粉病特性穩(wěn)定品系，這個品系在連續(xù)回交過程中，每回交后代是通過白粉病菌的脅迫后選擇得到的。
·基因組DNA的分離分別取Brock、京411和上述近等基因系0.2g黃化幼苗葉片，于液氮中研磨，盡量呈粉末，迅速加入2毫升提取Buffer(50mM Tris-HCl，pH 8.0；20mM EDTA；50mM NaCl)，輕輕混合，65℃溫浴15min，其間顛倒混勻2-3次。0℃冰浴10分鐘，0-4℃，3000轉(zhuǎn)/分離心15分鐘，輕取上清，加入到一新管中，加等體積Tris-HCl(pH 8.0)飽和酚，輕輕混合。0-4℃，3000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘，取上清，加入等體積酚、氯仿-異戊醇(25∶24∶1)抽提，輕輕混勻。0-4℃，3000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘，取上清，加入等體積氯仿-異戊醇(25∶24∶1)抽提，輕輕混勻。0-4℃，3000轉(zhuǎn)/分，離心10分鐘，取上清，加2倍體積冷乙醇，-20℃沉淀1小時以上。0-4℃，12000轉(zhuǎn)/分，離心20分鐘，棄上清，75％乙醇0-4℃短暫離心，洗沉淀2次，晾干，溶于100μl TE(pH8.0)。加1μl RNase(10mg/ml)，37℃保溫1小時，以除去樣品中的RNA。加等體積酚、氯仿，抽提一次，0-4℃，3000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘。取上清，加等體積仿，抽提一次，0-4℃，3000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘。取上清，加兩倍體積冷乙醇，-20℃沉淀2小時以上。0-4℃，12000轉(zhuǎn)/分，離心20分鐘。棄上清，75％乙醇洗滌產(chǎn)物，0-4℃短暫離心，洗沉淀2次，晾干，溶于50μl TE(pH8.0)中。分別用紫外分光光度法檢測DNA樣品的濃度，0.7％的瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA的完整性見圖1。
·標(biāo)記的篩選AFLP分析參照Vos(Vos，P.，R.Hogers，M.Bleeker，M.Reijans，T.van de Lee，M.Hornes，A.Frijters，J.Pot，J.Peleman，M.Kuiper，M.Zabeau.AFLPA new technique for DNAfingerprinting.Nucleic Acids Res，1995，214407-4414)的方法進(jìn)行。所用接頭和引物見表1。
表1 AFLP分析所用接頭和引物

注下畫線部分為選擇堿基，N為任意堿基A、G、T、C1)基因組DNA雙酶切及接頭連接100×BSA 0.2μl，NEB buffer 4.0μl，Pst I(20U/μl)0.25μl，Mse I(10U/μl)0.5μl，Pst I接頭(5pM)1.0μl，Mse I接頭(50pM)1.0μl，T4 DNA ligase 0.4μl，10×T4 buffer 2.0μl，DNA(100ng/μl)5.0μl，ddH2O補齊40μl。37℃條件下保溫8個小時。
2)預(yù)擴增反應(yīng)體系為25μL，內(nèi)含1μL連接產(chǎn)物，0.6pmol/L引物，10×PCR緩沖液2.5μL，0.2mmol/L的dNTPs，1U Taq聚合酶。PCR擴增程序為94℃ 2min；94℃ 35S，56℃ 35S，72℃ 60S，30個循環(huán)；72℃ 5min。預(yù)擴增產(chǎn)物用1％瓊脂糖電泳檢測，稀釋20倍保存?zhèn)溆谩?br> 3)選擇性擴增稀釋的預(yù)擴增產(chǎn)物為選擇性擴增模板進(jìn)行AFLP分析。選擇性擴增體積為20μL，AFLP選擴體系Pst I接頭引物(50ng/μL)0.8μL，MseI接頭引物(50ng/μL)0.8μL，10×Buffer 2.0μL，MgCl2(25mM)1.2μL，dNTP(10mM)0.45μL，TaqE(5U/μL)0.2μL，模板DNA 2.0μL，ddH2O補齊20μL。
PCR擴增采用遞降式方法，其程序為94℃ 2min94℃ 35S，65℃ 35S，72℃ 30S，以后每個循環(huán)退火溫度降低0.7℃，共12個循環(huán)；然后94℃ 35S，56℃ 35S，72℃，60S，30個循環(huán)；最后72℃ 5min。擴增在MJ Research PTC-200型PCR儀上進(jìn)行。
4)擴增產(chǎn)物的檢測擴增產(chǎn)物8μL加等量loading Buffer(98％甲酰胺；10mMEDTA pH8.0；0.25％溴酚蘭；0.25％二甲苯青)，95℃變性5min，立即于冰浴待用。用6％的變性聚丙烯酰胺凝膠(含6mol/L尿素)電泳分離，銀染法顯示電泳圖譜。
5)P7/M14227標(biāo)記的篩選與連鎖性鑒定及遺傳距離計算以Brock、京411及近等基因系為材料，在表2中隨機選取225對AFLP引物組合，用上述酶切連接、預(yù)擴增、選擇擴增及擴增產(chǎn)物檢測體系進(jìn)行AFLP分子篩選， 結(jié)果發(fā)現(xiàn)有28個引物組合出現(xiàn)擴增產(chǎn)物多態(tài)性(圖2.A、B、C、D、E)。為檢測上述篩選出的28個引物組合產(chǎn)生的多態(tài)性條帶與抗白粉病基因間的連鎖關(guān)系，我們用上述28個引物組合對Brock與京411雜交、F1代自交后分離得到79個抗病單株和27個感病單株進(jìn)行PCR擴增，其所采用的PCR擴增體系為Pst I接頭引物(50ng/μL)0.8μL，Mse I接頭引物(50ng/μL)0.8μL，10×Buffer 2.0μL，MgCl2(25mM)1.2μL，dNTP(10mM)0.45μL，TaqE(5U/μL)0.2μL，模板DNA2.0μL，ddH2O補齊20μL。PCR擴增反應(yīng)程序為94℃ 2min；94℃ 35S，65℃ 35S，72℃ 30S，以后每個循環(huán)退火溫度降低0.7℃，共12個循環(huán)；然后94℃ 35S，56℃ 35S，72℃，60S，30個循環(huán)；最后72℃ 5min。擴增在MJ Research PTC-200型PCR儀上進(jìn)行。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，圖2.B，2C，2D，2E所顯示的擴增產(chǎn)物多態(tài)性與抗白粉病特性無關(guān)，只有引物組合P7/M14產(chǎn)生的227bp特異片段與抗病基因間具有較強連鎖性(見圖2.A)。在27株感病株中有2株出現(xiàn)了特異條帶，25株未出現(xiàn)特異條帶；79株抗病株中均出現(xiàn)特異條帶(見圖3)。將該片段定名為P7/M14227。用MAPMAKER3.0軟件計算，該標(biāo)記與Brock中抗白粉病基因的遺傳距離為1.9cM。P7/M14227可作為Brock中抗白粉病未知基因的分子標(biāo)記。
表2 AFLP標(biāo)記的引物組合

·P7/M14227的克隆與測序主要參閱pGEM-T easy Vector System(Promega公司)說明書按下列順序在冰上加入以下成分建立連接反應(yīng)2×Buffer 5μl，pGEM-Teasy vector(50mg/ml)1μl，加A尾的PCR產(chǎn)物2μl，T4連接酶(3U/μl)1μl，無菌雙蒸H2O補齊10μl；輕輕吹吸混勻，4℃連接過夜。將連接產(chǎn)物2μl轉(zhuǎn)化到100μl感受態(tài)細(xì)胞DH5α中，篩選出陽性克隆子，委托上海生工生物工程公司測序。其結(jié)果AFLP分子標(biāo)記P7/M14227實際長度為227bp(見圖4)。
SEQUENCE LISTING<110>天津師范大學(xué)<120>與小麥Broek抗白粉病基因緊密連鎖的分子標(biāo)記<130>060518<160>3<170>PatentIn version 3.2<210>1<211>19<212>DNA<213>人工序列<400>1cactgcgtac atgcagagc 19<210>2<211>19<212>DNA<213>人工序列<400>2gatgagtcct gagtaaacc 19<210>3<211>227<212>DNA<213>小麥Brock(Triticum aestivum)
<400>3gatgagtcct gagtaaaccc tgagaatgca gagcacgtaa ataaatatcg acgttcaaat60ccctgaaatc cataccctga cctccctgat cccggtcgtt tctgaccttt aggttgtatc120caaacagggg gatttttacc tgggcagaga acggacggga tcaaggtgag tcatctacat180gcaggtgggt ctcatggtct cctggattgc tctgcatgta cgcagtc 22權(quán)利要求
1.與小麥Brock抗白粉病基因緊密連鎖的分子標(biāo)記，其特征在于所述的分子標(biāo)記P7/M14227，是應(yīng)用AFLP分子標(biāo)記技術(shù)采用下述方法得到的以小麥栽培種Brock為抗性供體親本，品質(zhì)優(yōu)良但對白粉病敏感的小麥品種京411為輪回親本，通過雜交、回交和自交后配制抗白粉病特性穩(wěn)定的近等基因系Brock/015//京4117(NILs)，以Brock、京411和近等基因系為材料，用苯酚-氯仿方法分別提取它們的總體DNA，采用AFLP分子標(biāo)記技術(shù)，用225對引物篩選與小麥白粉病抗性相關(guān)的分子標(biāo)記，篩選出一個AFLP分子標(biāo)記P7/M14227，經(jīng)過連鎖性鑒定，該標(biāo)記與小麥抗白粉病基因緊密連鎖，與抗性基因的遺傳距離為1.9cM；篩選P7/M14227標(biāo)記所用AFLP引物序列為P7CACTGCGTACATGCAGAGCM14GATGAGTCCTGAGTAAACC
2.按照權(quán)利要求1所述的與小麥Brock抗白粉病基因緊密連鎖的分子標(biāo)記，其特征在于P7/M14227的堿基序列為GATGAGTCCTGAGTAAACCCTGAGAATGCAGAGCACGTAAATAAATATCGACGTTCAAATCCCTGAAATCCATACCCTGACCTCCCTGATCCCGGTCGTTTCTGACCTTTAGGTTGTATCCAAACAGGGGGATTTTTACCTGGGCAGAGAACGGACGGGATCAAGGTGAGTCATCTACATGCAGGTGGGTCTCATGGTCTCCTGGATTGCTCTGCATGTACGCAGTC。
全文摘要
與小麥Brock抗白粉病基因緊密連鎖的分子標(biāo)記，屬于農(nóng)業(yè)生物工程，涉及與白粉病抗性基因連鎖的AFLP分子標(biāo)記及所用引物。本發(fā)明為尋找更逼近Brock抗白粉病未知基因新的分子標(biāo)記，我們以抗病小麥Brock和感病小麥京411及Brock與京411配制的近等基因系為材料，用225個AFLP引物組合進(jìn)行標(biāo)記篩選，其中引物組合P7/M14產(chǎn)生的227bp特異片段與抗病基因間具有較強連鎖性，定名為P7/M1文檔編號C12N15/65GK1884578SQ20061001380
公開日2006年12月27日 申請日期2006年5月23日 優(yōu)先權(quán)日2006年5月23日
發(fā)明者王振英, 彭永康, 陳宏 申請人:天津師范大學(xué)