專利名稱：：顯示出內(nèi)皮細(xì)胞特征的脂肪來源的成年基質(zhì)細(xì)胞的制作方法顯示出內(nèi)皮細(xì)胞特征的脂肪來源的成年基質(zhì)細(xì)胞發(fā)明背景人的發(fā)育中新生兒期的特征是存在"干"細(xì)胞，其具有沿著多種分化途徑發(fā)育的潛力。這些細(xì)胞的最終分化由協(xié)調(diào)器官發(fā)生和組織結(jié)構(gòu)的細(xì)胞因子和激素信號決定。已經(jīng)分離并在體外和體內(nèi)廣泛研究了來自小鼠的胚胎干(ES)細(xì)胞。使用外源體外刺激，研究人員已經(jīng)誘導(dǎo)了ES細(xì)胞沿著多種譜系途徑分化。這些途徑包括神經(jīng)元的、B譜系淋巴樣的和脂肪細(xì)胞的途徑(Dani,等人，1997,J.CellSci.110:1279;Remoncourt,等人，1998,Mech.Dev.79:185;O'Shea,1999，Anat.Rec.257:32)。在成年生物的組織中也存在多能干細(xì)胞。成年干細(xì)胞的最詳細(xì)表征的實(shí)例是從骨髓和外周血分離的造血祖細(xì)胞。不治療時(shí)，致死輻射的小鼠死亡，因?yàn)樗鼈儾荒苎a(bǔ)充它們的循環(huán)血細(xì)胞；然而，來自同源的供體動(dòng)物的骨髓細(xì)胞的移植拯救了宿主動(dòng)物。供體細(xì)胞負(fù)責(zé)恢復(fù)循環(huán)的血細(xì)胞。自那以后已經(jīng)進(jìn)行了研究來闡明未分化的造血干細(xì)胞能夠在宿主動(dòng)物中再生不同的血細(xì)胞譜系。這些研究己經(jīng)提供了骨髓移植的基礎(chǔ)癌癥和先天性代謝缺陷的廣泛接受的治療形式。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)來自骨髓的細(xì)胞能夠分化成其他細(xì)胞類型。骨髓含有至少兩種類型的干細(xì)胞造血干細(xì)胞和非造血組織的干細(xì)胞，其被不同地稱作充質(zhì)干細(xì)胞或者髓基質(zhì)細(xì)胞(MSCs)或者骨髓基質(zhì)細(xì)胞(BMSCs)。這些術(shù)語在本文全文同義使用。MSC是重要的，因?yàn)樗鼈內(nèi)菀讖墓撬璧奈鑫锓蛛x，并且它們?nèi)菀桩a(chǎn)生單細(xì)胞來源的集落。單細(xì)胞來源的集落可以在約10周內(nèi)增殖多達(dá)50群體倍增數(shù)，并且可以分化成成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、軟骨細(xì)胞(Friedenstein，等人，1970,CellTissueKinet.3:393-403;Castro-Malaspina，等人，1980，Blood56:289-301;Beresford，等人，1992，J.CellSci.102:341-351;Prockop,1997,Science276:71-74)、肌細(xì)胞(Wakitani，等人，1995,MuscleNerve18:1417-1426)、星形膠質(zhì)細(xì)胞、少突膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元(Azizi,等人，1998，Proc.Natl.Acad.Sci.USA95:3908-3913;Kopen,等人，1999,Proc.Natl.Acad.Sci.USA96:10711-10716;Chopp，等人，2000,NeuroreportII,3001-3005;Woodbury,等人，2000，NeuroscienceRes.61:364-370)。此外，MSC產(chǎn)生所有三個(gè)胚層的細(xì)胞(K叩en，等人，1999，Proc.Natl.Acad.Sci.96:10711-10716;Liechty,等人，2000,NatureMed.6:1282-1286;Kottonet,等人，2001，Development128:5181-5188;Toma,等人，2002，Circulation105:93-98;Jiang，等人，2002，Nature418:41-49)。體內(nèi)證據(jù)表明未分級分離的骨髓衍生的細(xì)胞以及MSC的純?nèi)后w產(chǎn)生上皮細(xì)胞類型，包括肺的上皮細(xì)胞類型(Krause，等人，2001,Cell105:369-377;Petersen,等人，1999，Science284:1168-1170)，并且?guī)讉€(gè)最近的研究已經(jīng)表明通過組織損傷增強(qiáng)MSC的移入(Ferrari，等人，1998，Science279:1528-1530;Okamoto等人，2002，NatureMed.8:1101-1017)。因?yàn)檫@些原因，當(dāng)前正在測試MSC在許多人類疾病的細(xì)胞和基因治療中的潛在用途(Horwitz，等人,1999,Nat.Med.5:309-313;Caplan，等人，2000，Clin.Orthoped.379:567-570)。MSC組成了多能干細(xì)胞的備選來源。在生理?xiàng)l件下，它們保持骨髓的結(jié)構(gòu)并且分別在不同細(xì)胞黏附分子的幫助下調(diào)節(jié)造血作用和細(xì)胞因子的分泌(Clark，等人，1995，Ann.NYAcad.Sci.770:70-78)。通過選擇性附著到組織培養(yǎng)塑料制品從骨髓長出的MSC可以有效擴(kuò)增(Azizi,等人，1998，Proc.Natl.Acad.Sci.USA95:3908-3913;Colter,等人，2000，Proc.Natl.Acad.Sci.USA97:3213-218)并且可以在遺傳上操作(Schwarz,等人，1999,Hum.GeneTher.10:2539-2549)。MSC也稱作充質(zhì)干細(xì)胞，因?yàn)樗鼈兡軌蚍只啥喾N中胚層組織，包括骨(Beresford，等人，1992,J.CellSci.102:341-351)、軟骨(Lennon,等人，1995，Exp.CellRes.219:211-222)、脂肪(Beresford，等人，1992，J.CellSci.102:341-351)和肌肉(Wakitani，等人，1995,MuscleNerve18:1417-1426)。此外，已經(jīng)報(bào)導(dǎo)了向表達(dá)神經(jīng)元標(biāo)記的神經(jīng)元樣細(xì)胞的分化。(Woodbury,等人，2000，J.Neurosci.Res.61:364-370;Sanchez-Ramos,等人，2000，Exp.Neurol.164:247-256;Deng，等人，2001，Biochem.Biophys.Res.Commun.282:148-152)，提示MSC能夠克服胚層定向。基于這些發(fā)現(xiàn)，已經(jīng)提出骨髓作為基質(zhì)干細(xì)胞的來源用于再生骨、軟骨、肌肉、脂肪組織、肝臟、神經(jīng)元和其他組織。然而，提取骨髓基質(zhì)細(xì)胞代表對供體的高水平的風(fēng)險(xiǎn)和不適。相反，成人髓外脂肪組織衍生的基質(zhì)細(xì)胞(ADAS)代表了基質(zhì)干細(xì)胞來源，其可以常規(guī)地收獲，對患者有最小的風(fēng)險(xiǎn)或者不適。病理學(xué)證據(jù)提示脂肪衍生的基質(zhì)細(xì)胞能夠沿著多種譜系途徑分化。此外，已經(jīng)闡明來自脂肪組織的基質(zhì)細(xì)胞能夠分化成多種中胚層組織。血管發(fā)生是稱作成血管細(xì)胞的原始內(nèi)皮祖細(xì)胞原位分化成聚集成初級毛細(xì)血管叢的內(nèi)皮細(xì)胞，負(fù)責(zé)胚胎發(fā)生期間血管系統(tǒng)的發(fā)育(Peichev,等人，2000,Blood95:952-958)。相反，血管生成定義為通過從先前存在的血管萌發(fā)的過程形成新血管，在發(fā)育和出生后生命期間都發(fā)生(Peichev,等人,2000,Blood95:952-958;Watt,等人，1995,Leuk.Lymphoma17:229-235;Reyes，等人，2001,Blood98:2615-2625)。直到最近都認(rèn)為出生后生命中血管形成通過從現(xiàn)有血管的內(nèi)皮細(xì)胞萌發(fā)介導(dǎo)。然而，最近的研究已經(jīng)表明內(nèi)皮干細(xì)胞可以持續(xù)到成年生命，在成年生命中，它們促進(jìn)新血管形成(Nishikawa，等人，1998，Development125:1747-1757;Gehling,等人，2000,Blood95:3106-3112;Rafii,等人，1994，Blood84:10-18;Asahara,等人，1997，Science275:964-967)。這又提示由于在發(fā)育期間，成體中新血管生成至少部分依賴于血管發(fā)生過程。已經(jīng)從骨髓和外周血分離了內(nèi)皮細(xì)胞的前體(Peichev,等人，2000,Blood95:952-958;Watt,等人，1995，Leuk.Lymphoma17:229-235)。這些內(nèi)皮祖細(xì)胞的個(gè)體發(fā)育還未知。因此，需要用于可以產(chǎn)生內(nèi)皮細(xì)胞的祖細(xì)胞的容易得到的來源的分離和增殖方法。當(dāng)前的用于培養(yǎng)和得到大量內(nèi)皮祖細(xì)胞的方法還沒有成功。大量內(nèi)皮祖細(xì)胞的可得性將在血管移植、組織改造、血管生成的調(diào)節(jié)、血管發(fā)生和包括心臟病的多種病癥的治療中非常有用。因此，長期以來一直需要用于標(biāo)準(zhǔn)化培養(yǎng)條件的方法和組合物，其用于使得到大量用于治療和實(shí)驗(yàn)?zāi)康牡拇祟惣?xì)胞的內(nèi)皮祖細(xì)胞的增殖最大化。本發(fā)明滿足了這些需求。發(fā)明簡述本發(fā)明包括用于產(chǎn)生顯示出前內(nèi)皮細(xì)胞(pre-endothelialcell)和/或內(nèi)皮細(xì)胞的至少一種特征的脂肪來源的成年基質(zhì)(ADAS)細(xì)胞的組合物和方法。一方面，誘導(dǎo)ADAS細(xì)胞在體外分化。另一方面，誘導(dǎo)ADAS細(xì)胞在體內(nèi)分化。再一方面，已經(jīng)改造ADAS細(xì)胞以表達(dá)外源遺傳物質(zhì)。再一方面，ADAS細(xì)胞來自人。本發(fā)明還包括被誘導(dǎo)以表達(dá)CD34和CD31的至少一種的ADAS細(xì)胞。一方面，當(dāng)分別與來自其他方面相同的、沒有被誘導(dǎo)表達(dá)前內(nèi)皮細(xì)胞的至少一種特征的ADAS細(xì)胞的CD34禾卩CD31的表達(dá)水平相比時(shí)，ADAS細(xì)胞以更高水平表達(dá)CD34和CD31的至少一種。另一方面，ADAS細(xì)胞表達(dá)CD34、CD31、CD40、CD63，或者其組合的至少一種。再一方面，當(dāng)分別與來自其他方面相同的、沒有被誘導(dǎo)表達(dá)前內(nèi)皮細(xì)胞的至少一種特征的CD34、CD31、CD40和CD63的表達(dá)水平相比時(shí)，ADAS細(xì)胞以更高水平表達(dá)CD34、CD31、CD40、CD63，或者其組合的至少一種。本發(fā)明還包括分化ADAS細(xì)胞以表達(dá)前內(nèi)皮細(xì)胞的至少一種特征的方法，該方法包括將所述細(xì)胞在Mil培養(yǎng)基中溫育，接著在MIII培養(yǎng)基中溫育所述細(xì)胞。一方面，該方法包括使用來自人的ADAS細(xì)胞。另一方面，Mil培養(yǎng)基包含N2補(bǔ)充物、B27補(bǔ)充物、谷氨酰胺和成纖維細(xì)胞生長因子(FGF)。再一方面，MII培養(yǎng)基中谷氨酰胺的濃度約為2.3mM。再一方面，Mil培養(yǎng)基中FGF的濃度約為10ng/mL。一方面，MIII培養(yǎng)基包含N2補(bǔ)充物、B27補(bǔ)充物、谷氨酰胺，煙酰胺和胎牛血清(FBS)。另一方面，MIII培養(yǎng)基中谷氨酰胺的濃度約為2.3mM。再一方面，MIII培養(yǎng)基中煙酰胺的濃度約為10mM。再一方面，Mill培養(yǎng)基中FBS的濃度約為2%。本發(fā)明還包括在動(dòng)物中誘導(dǎo)血管發(fā)生的方法，該方法包括a)誘導(dǎo)分離的脂肪組織來源的成年基質(zhì)(ADAS)細(xì)胞以表達(dá)前內(nèi)皮細(xì)胞的至少一種特征；和b)對所述動(dòng)物施用所述這樣誘導(dǎo)的細(xì)胞。一方面，ADAS細(xì)胞是動(dòng)物自體的。另一方面，ADAS細(xì)胞從同種異體供體分離。另一方面，ADAS細(xì)胞從異種供體分離。再一方面，ADAS細(xì)胞來自人。本發(fā)明還包括確定化合物實(shí)現(xiàn)ADAS細(xì)胞分化成前內(nèi)皮細(xì)胞和/或內(nèi)皮細(xì)胞的能力的方法，該方法包括a)在基質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基中培養(yǎng)所述ADAS細(xì)胞一段時(shí)間；b)將所述基質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基用包含化合物或者對照載體的分化培養(yǎng)基更換；c)在包含所述化合物或所述對照載體的所述分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)所述ADAS細(xì)胞一段時(shí)間；d)使用來自步驟c)的包含所述化合物的所述分化培養(yǎng)基確定分化細(xì)胞的數(shù)目或者百分?jǐn)?shù)；e)使用來自步驟c)的僅含有所述載體的所述分化培養(yǎng)基確定細(xì)胞中分化細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)；f)比較來自步驟(d)和(e)的分化細(xì)胞的數(shù)目或者百分?jǐn)?shù)；g)與來自步驟(e)的分化細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)相比，來自步驟(d)的分化細(xì)胞的更大的百分?jǐn)?shù)表明所述化合物能夠誘導(dǎo)所述ADAS細(xì)胞分化成前內(nèi)皮細(xì)胞和/或內(nèi)皮細(xì)胞。一方面，ADAS細(xì)胞來自人。附圖簡述為了闡明本發(fā)明的目的，在附圖中描繪了本發(fā)明的一些實(shí)施方案。然而，本發(fā)明不限于附圖中描繪的實(shí)施方案的精確安排和手段。圖1包含圖1A到1F，是一系列描繪未處理的和用MII/MIII處理的ADAS培養(yǎng)物的圖像。圖1A和IB分別描繪了預(yù)處理的和未處理的對照ADAS培養(yǎng)物。圖1C和ID描繪了用Mil處理的ADAS培養(yǎng)物。圖IE和IF描繪了用Mill處理的ADAS培養(yǎng)物。發(fā)明詳述本發(fā)明提供了用于誘導(dǎo)脂肪組織來源的成年基質(zhì)(ADAS)細(xì)胞表達(dá)前內(nèi)皮細(xì)胞和/或內(nèi)皮細(xì)胞的至少一種特征的組合物和方法。通過本發(fā)明的方法產(chǎn)生的細(xì)胞提供了功能細(xì)胞的來源，所述功能細(xì)胞可以用于研究、移植和開發(fā)組織改造產(chǎn)物用于治療疾病和組織修復(fù)。定義如本文所用的，下面每一個(gè)術(shù)語具有與它在該部分中相關(guān)的含義。本文使用的冠詞"一個(gè)"和"一種"指一個(gè)或一個(gè)以上(即至少一個(gè))該冠詞的語法對象。例如，"一個(gè)組分"指一個(gè)或一個(gè)以上的組分。術(shù)語"約"將被本領(lǐng)域普通技術(shù)人員理解并且將在它使用的上下文中有一定的不同。本文使用的術(shù)語"脂肪來源的基質(zhì)細(xì)胞"、"脂肪組織來源的基質(zhì)細(xì)胞"或者"脂肪組織來源的成年基質(zhì)(ADAS)細(xì)胞"可以互換使用并且指來自脂肪組織的基質(zhì)細(xì)胞，其可以用作到多種不同的細(xì)胞類型，如骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞和脂肪細(xì)胞的干細(xì)胞樣前體。"脂肪"指任一種脂肪組織。脂肪組織可以是褐色或者白色的脂肪組織。優(yōu)選地，脂肪是皮下白色脂肪組織。此類細(xì)胞可以包含原代細(xì)胞培養(yǎng)物或者永生化的細(xì)胞系。脂肪組織可以來自具有脂肪組織的任一種生物。優(yōu)選地，脂肪組織是哺乳動(dòng)物的、最優(yōu)選脂肪組織是人的。人脂肪組織的方便的來源是來自脂肪抽吸外科手術(shù)。然而，脂肪組織的來源或者分離脂肪組織的方法對于本發(fā)明不是關(guān)鍵的。"同種異體的"指來自相同物種的不同動(dòng)物的移植物。本文使用的"同種異體的脂肪來源的成年基質(zhì)細(xì)胞"從與受體相同的物種的不同個(gè)體得到。"同種異體抗原"是與受體表達(dá)的抗原不同的抗原。"供體抗原"指由待移植到受體的供體組織表達(dá)的抗原。本文使用的"效應(yīng)細(xì)胞"指介導(dǎo)針對抗原的免疫應(yīng)答的細(xì)胞。在移植物被導(dǎo)入受體的情況下，效應(yīng)細(xì)胞可以是受體自身的細(xì)胞，其引起針對供體移植物中存在的抗原的免疫應(yīng)答。在另一情況下，效應(yīng)細(xì)胞可以是移植物的部分，其中移植物向受體的導(dǎo)入導(dǎo)致移植物中存在的效應(yīng)細(xì)胞引起針對移植物的受體的免疫應(yīng)答。本文使用的術(shù)語"自體的"意指來自相同個(gè)體的任何物質(zhì)，其以后再次被導(dǎo)入該個(gè)體中。本文使用的術(shù)語"血管生成"指從現(xiàn)有的血管系統(tǒng)和組織產(chǎn)生新血管的過程(Folkman，1995,Nat.Med.1:37-31)。短語"修復(fù)或者重塑"指現(xiàn)有血管系統(tǒng)的再形成。組織局部缺血的減輕嚴(yán)重依賴于血管生成。新血管的自發(fā)生長提供了局部缺血區(qū)中和周圍的側(cè)支循環(huán)，改善了血流，并減輕了局部缺血導(dǎo)致的癥狀。本文使用的術(shù)語"血管生成因子"或"血管生成蛋白"指能夠促進(jìn)從現(xiàn)有的血管系統(tǒng)生長新血管("血管生成")的任何已知的蛋白質(zhì)。用于本發(fā)明的合適的血管生成因子包括，但不限于，胎盤生長因子、巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF)、粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D、VEGF-E、神經(jīng)氈蛋白、成纖維細(xì)胞生長因子(FGF)-1、FGF-2(bFGF)、FGF-3、FGF-4、FGF-5、FGF-6、血管生成素l、血管生成素2、紅細(xì)胞生成素(EPO)、骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMP)—2、BMP-4、BMP-7、TGF-卩、IGF-1、骨橋蛋白、多效營養(yǎng)因子、激活蛋白、內(nèi)皮縮血管肽一l和其組合。血管生成因子可以獨(dú)立地作用，或者相互組合作用。當(dāng)組合時(shí)，血管生成因子還可以協(xié)同作用，其中因子的組合作用大于單獨(dú)施用的個(gè)體因子的作用之和。術(shù)語"血管生成因子"或者"血管生成蛋白"還包括此類因子的功能類似物。功能類似物包括例如，因子的功能部分。功能類似物還包括抗獨(dú)特型抗體，其結(jié)合因子的受體并從而在促進(jìn)血管生成和/或組織重塑中模擬所述因子的活性。用于產(chǎn)生此類抗獨(dú)特型抗體的方法是本領(lǐng)域中公知的并且例如在WO97/23510中描述，將其內(nèi)容引入本文作為參考。本文使用的"血管生成因子"可以從任何合適的來源產(chǎn)生或者得到。例如，因子可以從它們的天然來源純化，或者合成產(chǎn)生或者通過重組表達(dá)產(chǎn)生。因子可以作為蛋白質(zhì)組合物施用于患者。因子可以以編碼該因子的表達(dá)質(zhì)粒的形式施用。合適的表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建是本領(lǐng)域中公知的。用于構(gòu)建表達(dá)質(zhì)粒的合適的載體包括例如，腺病毒載體、反轉(zhuǎn)錄病毒載體、腺伴隨病毒載體、RNA載體、脂質(zhì)體、陽離子脂質(zhì)、慢病毒載體和轉(zhuǎn)座子。本文使用的術(shù)語"生物相容的網(wǎng)格"意指可以促進(jìn)形成有助于組織發(fā)育的三維結(jié)構(gòu)的基質(zhì)。因此，例如，可以在這種生物相容的網(wǎng)格上培養(yǎng)或接種細(xì)胞，所述網(wǎng)格為諸如包括細(xì)胞外基質(zhì)物質(zhì)、合成聚合物、細(xì)胞因子、生長因子等等的網(wǎng)格。該網(wǎng)格可以成型成希望的形式用于促進(jìn)組織類型的發(fā)育。而且，至少在細(xì)胞培養(yǎng)期間的早期，對培養(yǎng)基和/或基質(zhì)補(bǔ)充促進(jìn)合適的組織類型和結(jié)構(gòu)發(fā)育的因子(例如，生長因子、細(xì)胞因子、細(xì)胞外基質(zhì)物質(zhì)，等等)。"分化的"在本文中用于指實(shí)現(xiàn)了成熟的最終狀態(tài)的細(xì)胞，從而該細(xì)胞已經(jīng)完全發(fā)育并且顯示出生物學(xué)特化和/或適應(yīng)于特定環(huán)境和/或功能。通常，分化細(xì)胞的特征是在給定細(xì)胞中表達(dá)編碼分化的相關(guān)蛋白質(zhì)的基因。例如，內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志CD31和血管性血友病因子的表達(dá)和"鵝卵石"形態(tài)的形成是分化的成熟內(nèi)皮細(xì)胞的典型實(shí)例。當(dāng)說細(xì)胞是"分化的"時(shí)，如該術(shù)語在本文使用的，細(xì)胞處于分化的過程中。"分化培養(yǎng)基"在本文用于指細(xì)胞生長培養(yǎng)基，其包含添加劑或者缺少添加劑，從而當(dāng)在培養(yǎng)基中培養(yǎng)時(shí)不完全分化的干細(xì)胞、脂肪來源的成年基質(zhì)細(xì)胞或其他此類祖細(xì)胞發(fā)育成具有分化細(xì)胞的一些或者全部特征的細(xì)胞。"內(nèi)皮ADAS細(xì)胞"在本文中用于指表達(dá)前內(nèi)皮細(xì)胞禾n/或內(nèi)皮細(xì)胞的至少一種特征的ADAS細(xì)胞。"可擴(kuò)展性(expandability)"在本文中用于指細(xì)胞增殖的能力，例如，數(shù)目擴(kuò)大或者對于細(xì)胞群體的情況，經(jīng)歷群體加倍。"移植物"指用于移植的細(xì)胞、組織、器官或者任何生物相容的網(wǎng)格。所謂"生長因子"意指下面的特定因子，包括但不限于，生長激素、紅細(xì)胞生成素、血小板生成素、白介素3、白介素6、白介素7、巨噬細(xì)胞集落刺激因子、c-kit配體/干細(xì)胞因子、護(hù)骨蛋白配體、胰島素、胰島素樣生長因子、表皮生長因子(EGF)、成纖維細(xì)胞生長因子(FGF)、神經(jīng)生長因子、睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子、血小板衍生生長因子(PDGF)和骨形態(tài)發(fā)生蛋白，其濃度為皮克/ml到毫克/ml水平之間。如本文使用的術(shù)語"生長培養(yǎng)基"意指促進(jìn)細(xì)胞生長的培養(yǎng)基。生長培養(yǎng)基將通常含有動(dòng)物血清。在一些情況中，生長培養(yǎng)基可以不含有動(dòng)物血清。如本文使用的術(shù)語"多能的"或者"多能"意指中樞神經(jīng)系統(tǒng)的干細(xì)胞能夠分化成一種以上類型的細(xì)胞。"增殖"在本文中用于指特別是細(xì)胞的類似形式的繁殖或者增殖。艮口，增殖包括產(chǎn)生更大數(shù)目的細(xì)胞，并且可以通過特別是簡單地計(jì)數(shù)細(xì)胞數(shù)、測量3H胸苷向細(xì)胞的摻入等等測量。術(shù)語"前體細(xì)胞"、"祖細(xì)胞"和"干細(xì)胞"在本領(lǐng)域中和本文中可互換使用，并且指多能的或者譜系未定型(uncommitted)的祖細(xì)胞，其潛在能夠不限次數(shù)進(jìn)行有絲分裂以自我更新或者產(chǎn)生子代細(xì)胞，該子代細(xì)胞將分化成例如內(nèi)皮細(xì)胞或者內(nèi)皮樣細(xì)胞；或者譜系定型(committed)的祖細(xì)胞和它的子代，該子代能夠自我更新并且能夠分化成內(nèi)皮細(xì)胞或者內(nèi)皮樣細(xì)胞。不像多能干細(xì)胞，譜系定型的祖細(xì)胞通常被認(rèn)為不能產(chǎn)生表型上相互不同的多種細(xì)胞類型。實(shí)際上，祖細(xì)胞產(chǎn)生一種或者可能兩種譜系定型的細(xì)胞類型。術(shù)語"前內(nèi)皮細(xì)胞"指潛在能夠不限次數(shù)有絲分裂以自我更新或者產(chǎn)生將分化成內(nèi)皮細(xì)胞或者內(nèi)皮樣細(xì)胞的子代細(xì)胞的細(xì)胞。本文使用的術(shù)語"基質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基"指用于培養(yǎng)ADAS細(xì)胞的培養(yǎng)基。通常，基質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基包含基本培養(yǎng)基、血清和抗生素/抗真菌劑。然而，可以用沒有抗生素/抗真菌劑并且補(bǔ)充至少一種生長因子的基質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)ADAS細(xì)胞。優(yōu)選地，生長因子是人表皮生長因子(hEGF)。hEGF的優(yōu)選濃度為約l-50ng/ml，更優(yōu)選濃度為約5ng/ml。優(yōu)選的基本培養(yǎng)基是DMEM/F12(1:1)。優(yōu)選的血清是胎牛血清(FBS)，但是可以使用其他血清，包括胎牛血清(FCS)、馬血清或者人血清。優(yōu)選向上面的培養(yǎng)基加入多達(dá)20%FBS以便支持基質(zhì)細(xì)胞的生長。然而，如果鑒定了用于基質(zhì)細(xì)胞生長的FBS中的必要的生長因子、細(xì)胞因子和激素并且在生長培養(yǎng)基中以合適的濃度提供，那么可以使用確定成分的培養(yǎng)基。還認(rèn)識到可以向培養(yǎng)基中加入額外的組分。此類組分包括但不限于，抗生素、抗真菌劑、白蛋白、生長因子、氨基酸和本領(lǐng)域中已知的用于細(xì)胞培養(yǎng)的其他組分?？梢约尤肱囵B(yǎng)基的抗生素包括但不限于，青霉素和鏈霉素。培養(yǎng)基中青霉素的濃度為約10到約200單位/ml。培養(yǎng)基中鏈霉素的濃度為約10到約200pg/ml。然而，本發(fā)明決不應(yīng)被理解為局限于用于培養(yǎng)基質(zhì)細(xì)胞的任一種培養(yǎng)基。而是，可以使用能夠支持組織培養(yǎng)中基質(zhì)細(xì)胞的任何培養(yǎng)基。"MII/MIII培養(yǎng)基方案"指將ADAS細(xì)胞用Mil培養(yǎng)基培養(yǎng)，接著將細(xì)胞用MIII培養(yǎng)基培養(yǎng)。"移植物"指將被移植的生物相容的網(wǎng)格或者供體組織、器官或者細(xì)胞。本文使用的"治療有效量"是表達(dá)前內(nèi)皮細(xì)胞和/或內(nèi)皮細(xì)胞的至少一種特征的ADAS細(xì)胞的量，其足夠?yàn)樵摷?xì)胞所施用的受試者提供有益效果。"異源的"指來自不同物種的動(dòng)物的移植物。本文使用的"內(nèi)源的"指來自或者在生物、細(xì)胞或者系統(tǒng)中產(chǎn)生的任何物質(zhì)。"外源的"指從生物、細(xì)胞或者系統(tǒng)外面導(dǎo)入或者產(chǎn)生的任何物質(zhì)。"編碼"指多核苷酸，如基因、cDNA或者mRNA中核苷酸的特定序列的內(nèi)在性質(zhì)，其作為合成模板用于在生物過程中合成具有確定的核苷酸序列(例如，rRNA、tRNA和mRNA)或者確定的氨基酸序列，和從其得到的生物學(xué)性質(zhì)的其他聚合物和大分子。因此，如果對應(yīng)于該基因的mRNA的轉(zhuǎn)錄和翻譯在細(xì)胞或者其他生物系統(tǒng)中產(chǎn)生蛋白質(zhì)，那么該基因編碼蛋白質(zhì)。編碼鏈，即與mRNA序列相同并且通常在序列表中提供的核苷酸序列和用作基因或者cDNA的轉(zhuǎn)錄模板的非編碼鏈二者都可以稱作編碼該基因或者cDNA的蛋白質(zhì)或者其他產(chǎn)物。除非另外指出，"編碼氨基酸序列的核苷酸序列"包括相互為簡并形式并且編碼相同氨基酸序列的所有核苷酸序列。編碼蛋白質(zhì)和RNA的核苷酸序列可以包括內(nèi)含子。"分離的核酸"指核酸區(qū)段或者片段，其已經(jīng)與天然存在狀態(tài)下處于它的側(cè)翼的序列分離，該序列為例如，已經(jīng)從通常與該片段相鄰的序列除去的DNA片段，例如，與它天然存在的基因組中與該片段相鄰的序列。該術(shù)語還應(yīng)用于已經(jīng)從天然伴隨該核酸的其他組分基本上純化的核酸，例如，在細(xì)胞中天然伴隨該核酸的RNA或者DNA或者蛋白質(zhì)。因此，該術(shù)語包括例如，重組DNA，其摻入載體中、摻入自主復(fù)制的質(zhì)?；蛘卟《局校蛘邠饺朐嘶蛘哒婧松锏幕蚪MDNA中，或者作為單獨(dú)的分子(例如，作為cDNA或者基因組或者通過PCR或者限制酶消化產(chǎn)生的cDNA片段)獨(dú)立于其他序列存在。它還包括作為編碼額外的多肽序列的雜種基因的部分的重組DNA。在本發(fā)明上下文中，為通常使用的核酸堿基使用下面的縮寫。"A"指腺苷，"C"指胞嘧啶，"G"指鳥苷，"T"指胸苷，"U"指尿苷。，"載體"是物質(zhì)的組合物，其包含分離的核酸并且可以用于遞送分離的核酸到細(xì)胞內(nèi)部。許多載體是本領(lǐng)域中已知的，包括但不限于，線性多核苷酸、與離子或者兩親性化合物結(jié)合的多核苷酸、質(zhì)粒和病毒。因此，術(shù)語"載體"包括自主復(fù)制質(zhì)粒或者病毒。該術(shù)語將還可以被解釋成包括非質(zhì)粒和非病毒化合物，其促進(jìn)核酸轉(zhuǎn)移到細(xì)胞中，如例如聚賴氨酸化合物、脂質(zhì)體，等等。病毒載體的實(shí)例包括，但不限于，腺病毒載體、腺伴隨病毒載體、反轉(zhuǎn)錄病毒載體等等。"表達(dá)載體"指包含重組多核苷酸的載體，該重組多核苷酸包含可操作連接于待表達(dá)的核苷酸序列的表達(dá)控制序列。表達(dá)載體包含足夠的用于表達(dá)的順式作用元件；用于表達(dá)的其他元件可以由宿主細(xì)胞或者在體外表達(dá)系統(tǒng)中提供。表達(dá)載體包括本領(lǐng)域中已知的所有那些表達(dá)載體，如摻入重組多核苷酸的黏粒、質(zhì)粒(例如，裸露的或者包含在脂質(zhì)體中的)和病毒。描述脂肪組織提供了骨髓的替代物作為干細(xì)胞的來源。脂肪組織容易獲得并且在許多個(gè)體中很豐富。來自脂肪組織的干細(xì)胞可以通過脂肪抽吸法收獲，所述脂肪抽吸法是相對非侵入性的過程并且可以產(chǎn)生大量脂肪來源的成年基質(zhì)(ADAS)細(xì)胞。本發(fā)明涉及發(fā)現(xiàn)ADAS細(xì)胞可以用成分確定的培養(yǎng)基處理以表達(dá)前內(nèi)皮細(xì)胞和/或內(nèi)皮細(xì)胞的至少一種特征。這些細(xì)胞在本文中稱作"內(nèi)皮ADAS細(xì)胞"。因此，基于本文的公開內(nèi)容，可以產(chǎn)生和擴(kuò)增表達(dá)前內(nèi)皮細(xì)胞和/或內(nèi)皮細(xì)胞的至少一種特征而保留它們分化成成熟內(nèi)皮細(xì)胞的能力的內(nèi)皮ADAS細(xì)胞的大群體。同樣地，本發(fā)明包括用于產(chǎn)生大量用于實(shí)驗(yàn)/治療目的的內(nèi)皮ADAS細(xì)胞的組合物和方法。I.ADAS的分離和培養(yǎng)可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員己知的多種方法分離本發(fā)明的方法中使用的ADAS細(xì)胞。例如，此類方法在美國專利號6,153,432中描述，將該專利完整引入本文。在優(yōu)選方法中，從哺乳動(dòng)物受試者、優(yōu)選人類受試者分離ADAS細(xì)胞。在人中，通常從脂肪抽吸法材料分離ADAS細(xì)胞。如果本發(fā)明的細(xì)胞將移植到人類受試者，那么優(yōu)選從相同的受試者分離ADAS細(xì)胞以便提供自體移植物。在本發(fā)明的另一方面，施用的ADAS細(xì)胞可以對于受體是同種異體的。同種異體的ADAS細(xì)胞從作為與受體相同物種的不同個(gè)體的供體分離。分離后，用本文公開的方法培養(yǎng)細(xì)胞以產(chǎn)生同種異體產(chǎn)物。本發(fā)明還包括對于受體是異源的ADAS細(xì)胞。不以任何方式限制本發(fā)明，可以使用本文公開的方法從脂肪組織分離基質(zhì)細(xì)胞。簡言之，通過脂肪抽吸外科手術(shù)從皮下儲(chǔ)存的脂肪移去人脂肪組織。然后將該脂肪組織從吸脂杯轉(zhuǎn)移到500ml無菌燒杯中并允許靜置約IO分鐘。通過抽吸除去沉淀的血液。將約125ml體積(或更少)的組織轉(zhuǎn)移到250ml離心管中，并接著將管用Krebs-Ringer緩沖液充滿。讓組織和緩沖液靜置約3分鐘或者直到實(shí)現(xiàn)明顯分離，然后通過抽吸除去緩沖液?？梢詫⒔M織用Krebs-Ringer緩沖液另外洗滌4到5次或者直到組織顏色變成橙黃色和直到緩沖液顏色變成淡褐色。使用膠原酶處理可以解離脂肪組織的基質(zhì)細(xì)胞。簡言之，從組織除去緩沖液并用約2mg膠原酶/mlKrebs緩沖液(Worthington，ME)溶液以lml膠原酶溶液/ml組織的比例更換。將管在37"C水浴溫育約30到35分鐘，間斷搖動(dòng)。通過室溫下以500xg離心5分鐘從脂肪組織的其他成分分離基質(zhì)細(xì)胞。通過抽吸除去油和脂肪細(xì)胞層?？梢詫⑹Ｓ嗟募壏滞ㄟ^劇烈回蕩重懸浮在約100ml磷酸緩沖鹽水(PBS)中，分到50ml管中并以500xg離心5分鐘。通過抽吸除去緩沖液，留下基質(zhì)細(xì)胞。然后將基質(zhì)細(xì)胞重懸浮在基質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基中，并以合適的細(xì)胞密度平板接種并在37'C下5。/。C02中過夜溫育。一旦附著到組織培養(yǎng)皿或者瓶上，可以立即使用培養(yǎng)的基質(zhì)細(xì)胞或者保持培養(yǎng)一段時(shí)間或者多次傳代后誘導(dǎo)分化成希望的細(xì)胞，例如，如實(shí)施例部分中描述的表達(dá)前內(nèi)皮細(xì)胞和/或內(nèi)皮細(xì)胞的至少一種特征的細(xì)胞。然而，決不應(yīng)將本發(fā)明理解為局限于任一種分離基質(zhì)細(xì)胞的方法。相反，分離ADAS細(xì)胞的任一種方法都應(yīng)該包括在本發(fā)明內(nèi)。能夠支持細(xì)胞培養(yǎng)物中成纖維細(xì)胞生長的任何培養(yǎng)基可以用以培養(yǎng)ADAS。支持成纖維細(xì)胞生長的培養(yǎng)基制劑包括，但不限于，Eagle極限必需培養(yǎng)基、ADC-1、LPM(無牛血清白蛋白)、F10(HAM)、F12(HAM)、DCCM1、DCCM2、RPMI1640、BGJ培養(yǎng)基(有和沒有Fitton-Jackson改良的)、Eagle基礎(chǔ)培養(yǎng)基(BME，加入Earle鹽堿)、Dulbecco改良的Eagle培養(yǎng)基(DMEM，無血清)、Yamane、IMEM-20、Glasgow改良的Eagle培養(yǎng)基(GMEM)、LeibovitzL-15培養(yǎng)基、McCoy's5A培養(yǎng)基、培養(yǎng)基M199(M199E-具有Earle鹽堿)、培養(yǎng)基M199(M199H-具有Hank鹽堿)、Eagle極限必需培養(yǎng)基(MEM-E-具有Earle鹽堿)、Eagle極限必需培養(yǎng)基(MEM-H-具有Hank鹽堿)和Eagle極限必需培養(yǎng)基(MEM-NAA，具有非必需氨基酸)、等等。用于培養(yǎng)ADAS的優(yōu)選培養(yǎng)基是DMEM，更優(yōu)選DMEM/F12(1:1)。用于本發(fā)明方法中的培養(yǎng)基的另外的非限制性實(shí)例可以含有牛或者其他物種的胎兒血清，其濃度為至少1%到約30%，優(yōu)選至少約5%到15%，最優(yōu)選約10%。雞或者其他物種的胚胎提取物可以以約1%到30%，優(yōu)選至少約5%到15%，最優(yōu)選約10%的濃度存在。分離后，將ADAS細(xì)胞在培養(yǎng)裝置中基質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基中培養(yǎng)一段時(shí)間或者直到細(xì)胞達(dá)到匯合，然后細(xì)胞進(jìn)入另一個(gè)培養(yǎng)裝置。培養(yǎng)裝置可以是通常用于體外培養(yǎng)細(xì)胞的任何培養(yǎng)裝置。優(yōu)選的培養(yǎng)裝置是培養(yǎng)瓶，更優(yōu)選的培養(yǎng)裝置是T-225培養(yǎng)瓶。ADAS細(xì)胞可以用基質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)，所述基質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基沒有抗生素/抗真菌劑并且補(bǔ)充至少一種生長因子。優(yōu)選地，生長因子是人表皮生長因子(hEGF)。hEGF的優(yōu)選濃度為約1-50ng/ml，更優(yōu)選地濃度為約5ng/ml?？梢栽谘a(bǔ)充hEGF、不存在抗生素/抗真菌劑的基質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基中培養(yǎng)ADAS細(xì)胞一段時(shí)間或者直到細(xì)胞達(dá)到一定的匯合水平。優(yōu)選地，匯合水平大于70%。更優(yōu)選地，匯合水平大于90%。一段時(shí)間可以是適于在體外培養(yǎng)細(xì)胞的任何時(shí)間。在ADAS細(xì)胞培養(yǎng)期間的任何時(shí)間可以更換基質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基。優(yōu)選地，每3到4天更換基質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基。然后從培養(yǎng)裝置收獲ADAS細(xì)胞，其中可以立即使用ADAS細(xì)胞或者冷藏貯存以在以后的時(shí)間使用。通過胰蛋白酶消化、EDTA處理或者用于從培養(yǎng)裝置收獲細(xì)胞的任何其他步驟收獲ADAS細(xì)胞。II.ADAS細(xì)胞的處理本發(fā)明包括處理ADAS細(xì)胞以誘導(dǎo)它們表達(dá)前內(nèi)皮和/或內(nèi)皮細(xì)胞的至少一種特征(這些細(xì)胞稱作內(nèi)皮ADAS細(xì)胞)。盡管不希望被任何具體理論束縛，認(rèn)為用含有血清、胚胎提取物，優(yōu)選非人胚胎提取物、純化的或者重組生長因子、細(xì)胞因子、激素、和/或化學(xué)劑的組合的確定成分培養(yǎng)基，在二維或者三維生物相容的網(wǎng)格中處理ADAS細(xì)胞以誘導(dǎo)ADAS細(xì)胞分化。MII培養(yǎng)基新鮮分離的或者冷藏的ADAS細(xì)胞可以用于用分化培養(yǎng)基進(jìn)行下面的處理以便誘導(dǎo)ADAS細(xì)胞來顯示前內(nèi)皮和/或內(nèi)皮細(xì)胞的至少一種特征。在任一生長培養(yǎng)基，例如包含DMEM/F12(1:1)、10%FBS、5ng/mLhEGF和1ng/mLhFGF的培養(yǎng)基中培養(yǎng)未處理的ADAS細(xì)胞以便比較用分化培養(yǎng)基處理其他方面相同的ADAS細(xì)胞的效果。例如，可以用包含DMEM/F12、N2補(bǔ)充物、B27補(bǔ)充物、谷氨酰胺和FGF的Mil培養(yǎng)基培養(yǎng)治療組中的ADAS細(xì)胞。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，MII培養(yǎng)基不含有血清。優(yōu)選地，MII培養(yǎng)基中谷氮酰胺的濃度為至少0.5mM到約25mM，優(yōu)選至少約lmM到20mM，更優(yōu)選地，至少約1.5mM到15mM，甚至更優(yōu)選地至少約1.5mM到10mM，最優(yōu)選地至少約2mM到5mM。在本發(fā)明的一方面，谷氨酰胺的濃度為約2.3mM。Mil培養(yǎng)基中hFGF的濃度為至少0.5ng/mL到約100ng/mL,優(yōu)選至少約1ng/mL到75ng/mL、更優(yōu)選至少約1.5ng/mL到50ng/mL、甚至更優(yōu)選至少約2ng/mL到25ng/mL、最優(yōu)選至少約3ng/mL到15ng/mL。在本發(fā)明的一方面，Mil培養(yǎng)基中hFGF的濃度為約10ng/mL?？梢杂肕il培養(yǎng)基處理ADAS細(xì)胞一段時(shí)間，該段時(shí)間足以改變ADAS的表型/形態(tài)以顯示出前內(nèi)皮和/或內(nèi)皮細(xì)胞的至少一種特征。優(yōu)選地，ADAS細(xì)胞進(jìn)行逐步處理方案，最初以MII培養(yǎng)基起始處理約6天，在第1、3和5天用Mil培養(yǎng)基更換培養(yǎng)基，接著開始平板接種。基于本公開內(nèi)容，本領(lǐng)域技術(shù)人員將明白可以用Mil培養(yǎng)基處理ADAS細(xì)胞多于6天，例如，可以處理ADAS細(xì)胞約一周、兩周、一個(gè)月、兩個(gè)月、或者甚至六個(gè)月；并且在處理期間任一時(shí)間可以改變Mil培養(yǎng)基。將ADAS細(xì)胞在MII培養(yǎng)基中培養(yǎng)一段時(shí)間或者直到細(xì)胞達(dá)到一定的匯合水平。優(yōu)選地，匯合水平大于70%。更優(yōu)選地，匯合水平大于90%。細(xì)胞在Mil培養(yǎng)基中培養(yǎng)的時(shí)間可以是適合在體外培養(yǎng)細(xì)胞的任何時(shí)間。不希望被任何具體理論束縛，認(rèn)為用Mil培養(yǎng)基處理ADAS細(xì)胞改變ADAS細(xì)胞的表型和形態(tài)。例如，當(dāng)與未處理的或者預(yù)處理的ADAS細(xì)胞比較時(shí)，用Mil培養(yǎng)基處理ADAS細(xì)胞顯示出較少的成纖維細(xì)胞形態(tài)并且形態(tài)上更圓，形成細(xì)胞一細(xì)胞連接的網(wǎng)絡(luò)。用Mil培養(yǎng)基處理ADAS細(xì)胞后，可以收獲ADAS細(xì)胞立即用于實(shí)驗(yàn)/治療用途或者冷藏以在以后的時(shí)間使用。在本發(fā)明的一方面，用Mil培養(yǎng)基處理的ADAS細(xì)胞用如下面更充分描述的Mil培養(yǎng)基進(jìn)一步處理。MIII培養(yǎng)基用Mil培養(yǎng)基處理ADAS細(xì)胞后，可以用Mill培養(yǎng)基進(jìn)一步處理細(xì)胞，所述MIII培養(yǎng)基包含DMEM/F12、N2補(bǔ)充物、B27補(bǔ)充物、谷氨酰胺、煙酰胺、FBS。Mil后用Mill培養(yǎng)基處理ADAS細(xì)胞也稱作MII/MIII培養(yǎng)基。不希望被任何具體理論束縛，認(rèn)為用Mil培養(yǎng)基處理ADAS細(xì)胞后用Mill培養(yǎng)基處理ADAS細(xì)胞進(jìn)一步使細(xì)胞向內(nèi)皮譜系分化。用Mil處理和使用PBS的洗滌步驟后通常接著進(jìn)行用Mill培養(yǎng)基處理ADAS細(xì)胞。使用PBS的洗滌步驟用于從細(xì)胞培養(yǎng)物除去Mil培養(yǎng)基的組分，然后用Mill培養(yǎng)基培養(yǎng)ADAS細(xì)胞。然而，本發(fā)明將不限于用Mil培養(yǎng)基處理ADAS后用Mill培養(yǎng)基處理ADAS細(xì)胞。本發(fā)明將包括在任何時(shí)間使用Mill培養(yǎng)基以使ADAS細(xì)胞向內(nèi)皮譜系分化。優(yōu)選地，Mill培養(yǎng)基中谷氨酰胺的濃度為至少0.5mM到約25mM，優(yōu)選至少約1mM到20mM，更優(yōu)選至少約1.5mM到15mM，甚至更優(yōu)選至少約1.5mM到10mM，最優(yōu)選地至少約2mM到5mM。在本發(fā)明的一方面，谷氨酰胺的濃度為約2.3mM。Mill培養(yǎng)基中煙酰胺的濃度為至少0.5mM到約100mM，更優(yōu)選至少約1mM到75mM，更優(yōu)選至少約1.5mM到50mM，甚至更優(yōu)選至少約2mM到25mM，最優(yōu)選至少約3mM到15mM。在本發(fā)明的一方面，Mill培養(yǎng)基中煙酰胺的濃度為約10mM。Mill培養(yǎng)基中FBS的濃度為至少0.5%到約20%，優(yōu)選至少約0.75%到15%,更優(yōu)選至少約1%或10%，甚至更優(yōu)選至少約1.5%到7.5%，更優(yōu)選至少約1.75%到5%。在本發(fā)明的一方面，Mill培養(yǎng)基中FBS的濃度為約2。％?？梢杂肕ill培養(yǎng)基處理ADAS細(xì)胞一段時(shí)間，該時(shí)間足以改變每種細(xì)胞類型的表型以顯示出前內(nèi)皮和/或內(nèi)皮細(xì)胞的至少一種特征。優(yōu)選地，ADAS細(xì)胞用Mill培養(yǎng)基處理約4天?；诒竟_內(nèi)容，本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解可以用MIII培養(yǎng)基處理細(xì)胞任一段時(shí)間。例如，可以用MIII培養(yǎng)基處理細(xì)胞4天以上(即，可以處理細(xì)胞約l周、2周、l個(gè)月、2個(gè)月或者甚至6個(gè)月)。此外，可以用MIII培養(yǎng)基處理細(xì)胞少于4天(即，可以處理細(xì)胞約1天、2天、或者甚至3天)?？梢栽谔幚砥陂g任何時(shí)間改變MIII培養(yǎng)基。將ADAS細(xì)胞在Mill培養(yǎng)基中培養(yǎng)一段時(shí)間或者直到細(xì)胞達(dá)到一定水平的匯合。優(yōu)選地，匯合水平大于70%。更優(yōu)選地，匯合水平大于90%。在MIII培養(yǎng)基中的時(shí)間期限可以是適于體外細(xì)胞培養(yǎng)的任何時(shí)間。用Mill培養(yǎng)基處理ADAS細(xì)胞進(jìn)一步改變細(xì)胞的表型和形態(tài)以顯示出前內(nèi)皮和/或內(nèi)皮細(xì)胞的至少一種特征。當(dāng)與未處理/預(yù)處理的ADAS細(xì)胞相比時(shí)，用Mil培養(yǎng)基接著用Mill培養(yǎng)基處理的ADAS細(xì)胞顯示出培養(yǎng)細(xì)胞的總體形態(tài)的改變，例如，產(chǎn)生與在MII處理期間觀察到的細(xì)胞相似的細(xì)胞和與培養(yǎng)的內(nèi)皮細(xì)胞相似的形成"鵝卵石"型區(qū)域的細(xì)胞的異質(zhì)混合物。表征在用MII/MIII培養(yǎng)基方案處理細(xì)胞期間的任何時(shí)間點(diǎn)，可以通過胰蛋白酶消化收獲本發(fā)明的細(xì)胞，并收集用于立即實(shí)驗(yàn)/治療用途或者冷藏用于在以后的時(shí)間使用。如本文別處討論的，MII/MIII培養(yǎng)基方案指用MII培養(yǎng)基培養(yǎng)ADAS細(xì)胞，接著用Mill培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞。在本發(fā)明的一方面，在ADAS細(xì)胞的培養(yǎng)或者處理方案期間的任何步驟冷藏細(xì)胞。冷藏是本領(lǐng)域中常見的步驟并且如本文使用的包括當(dāng)前用于冷藏細(xì)胞用于將來分析和使用的所有步驟。在另一方面，可以收獲細(xì)胞并進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)以評估細(xì)胞表面標(biāo)記以評估根據(jù)治療方案的細(xì)胞的表型的改變。可以用本領(lǐng)域中多種方法和本文公開的方法的任一種表征ADAS細(xì)胞和/或內(nèi)皮ADAS細(xì)胞。通過鑒定指示細(xì)胞分化以表達(dá)前內(nèi)皮細(xì)胞和/或內(nèi)皮細(xì)胞的至少一種特征的表面和細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)、基因和/或其他標(biāo)記，可以表征細(xì)胞。這些方法將包括，但不限于，(a)通過細(xì)胞表面蛋白如CD80、CD86、CD14、CD45、CD34、CD133、CD卯、CD105、HLA-DR、CD63、CD166、I類MHC;CD44、CD73、CD54;CD31、CD13、CD40;CD29、CD49a、CDll、CD44、CD146的免疫熒光測定法如流式細(xì)胞術(shù)或者原位免疫染色檢測細(xì)胞表面蛋白；(b)通過免疫熒光方法，如流式細(xì)胞術(shù)或者使用特異單克隆抗體的原位免疫染色檢測細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)；(c)通過諸如聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)、原位雜交和/或其他印跡分析的方法檢測表達(dá)mRNAs。目的細(xì)胞的表型標(biāo)記是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。額外的表型標(biāo)記不斷被公開或者可以不用過度實(shí)驗(yàn)鑒定。這些標(biāo)記的任一種可以用于證實(shí)ADAS細(xì)胞顯示出前內(nèi)皮細(xì)胞和/或內(nèi)皮細(xì)胞的至少一種特征。譜系特異性表型特征可以包括細(xì)胞表面蛋白、細(xì)胞骨架蛋白、細(xì)胞形態(tài)和分泌產(chǎn)物。內(nèi)皮細(xì)胞特征包括內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)記如CD29、CD31、CD34、CD54、CD61、CD62E、CD105、CD144、CD184/CXC4、CD202b和Mad-CAM-l的表達(dá)。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員根據(jù)本公幵內(nèi)容將認(rèn)識到已知的量熱法、熒光、免疫化學(xué)、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)、化學(xué)或者放射化學(xué)方法可以容易地確定前內(nèi)皮或內(nèi)皮細(xì)胞特異標(biāo)記的存在或不存在。本發(fā)明包括溫育根據(jù)本文公開的方案培養(yǎng)ADAS細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞群體。例如，本發(fā)明包括包含內(nèi)皮ADAS細(xì)胞的細(xì)胞群體，所述內(nèi)皮ADAS細(xì)胞已經(jīng)根據(jù)MII/MIII培養(yǎng)基方案培養(yǎng)。在本發(fā)明的一方面，內(nèi)皮ADAS細(xì)胞在MII/MIII培養(yǎng)基中培養(yǎng)后至少對于CD34是陽性的，如使用本文公開的方法測量。在另一方面，當(dāng)與來自不根據(jù)MII/MIII培養(yǎng)基方案培養(yǎng)的其他方面相同的ADAS的CD34的表達(dá)水平比較時(shí)，內(nèi)皮ADAS細(xì)胞以較高水平表達(dá)至少CD34。在本發(fā)明的另一方面，內(nèi)皮ADAS細(xì)胞在MII/MIII培養(yǎng)基中培養(yǎng)后至少對于CD34和CD31之一是陽性的。在另一方面，當(dāng)分別與來自不根據(jù)MII/MIII培養(yǎng)基方案培養(yǎng)的其他方面相同的ADAS的CD34和CD31的表達(dá)水平比較時(shí)，內(nèi)皮ADAS細(xì)胞以較高水平表達(dá)CD34和CD31的至少一種。在本發(fā)明的一方面，內(nèi)皮ADAS細(xì)胞至少對于CD34、CD31、CD40、CD63或者其組合的一種是陽性的。在另一方面，當(dāng)分別與來自不根據(jù)MII/MIII培養(yǎng)基方案培養(yǎng)的其他方面相同的ADAS的CD34、CD31、CD40、CD63或者其組合的表達(dá)水平比較時(shí)，內(nèi)皮ADAS細(xì)胞以較高水平表達(dá)CD34、CD31、CD40、CD63或者其組合的至少一種。本發(fā)明還提供了鑒定和研究增強(qiáng)ADAS細(xì)胞向表達(dá)前內(nèi)皮細(xì)胞和/或內(nèi)皮細(xì)胞的至少一種特征的細(xì)胞分化的化合物的方法。因此，提供了確定化合物影響ADAS細(xì)胞向表達(dá)前內(nèi)皮細(xì)胞和/或內(nèi)皮細(xì)胞的至少一種特征的ADAS分化的能力的方法，其包括a)在基質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基中培養(yǎng)ADAS細(xì)胞一段時(shí)間；b)用包含化合物或者對照載體的分化培養(yǎng)基更換基質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基；c)在包含化合物或者對照載體的分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)ADAS細(xì)胞一段時(shí)間；d)使用包含來自步驟c)的化合物的所述分化培養(yǎng)基確定分化的細(xì)胞的數(shù)目或者百分?jǐn)?shù)；e)使用含有僅來自步驟(c)的所述載體的所述分化培養(yǎng)基確定細(xì)胞中分化細(xì)胞的百分比數(shù)目；f)比較來自步驟(d)和(e)的分化細(xì)胞的數(shù)目或者百分?jǐn)?shù)；g)與來自步驟(e)的分化細(xì)胞的百分比數(shù)目相比，來自步驟(d)的分化細(xì)胞的更大的百分比數(shù)目表明所述化合物能夠誘導(dǎo)所述ADAS細(xì)胞分化成表達(dá)前內(nèi)皮細(xì)胞和/或內(nèi)皮細(xì)胞的至少一種特征的ADAS細(xì)胞。使用ADAS細(xì)胞的方法在根據(jù)MII/MIII培養(yǎng)基方案培養(yǎng)ADAS細(xì)胞以誘導(dǎo)ADAS細(xì)胞表達(dá)前內(nèi)皮細(xì)胞和/或內(nèi)皮細(xì)胞的至少一種特征后，內(nèi)皮ADAS細(xì)胞可以用于治療患有與血管發(fā)生和/或血管生成中損傷有關(guān)的病癥或者疾病的患者。本發(fā)明包括在使用內(nèi)皮ADAS細(xì)胞用于細(xì)胞療法以改善需要其的患者中血管發(fā)生和/或血管生成中的組合物和方法。根據(jù)本文的方法產(chǎn)生的內(nèi)皮ADAS細(xì)胞可以用于修復(fù)或者替代損傷的/破壞的內(nèi)皮組織，以改善現(xiàn)有的內(nèi)皮組織、導(dǎo)入新的或者改變的組織，修飾人工假體，或者連接生物組織或者結(jié)構(gòu)。例如，細(xì)胞可以用于替代心瓣膜細(xì)胞。此外，細(xì)胞可以用于在心肌梗塞后治療心肌缺血。不希望被任何具體理論束縛，認(rèn)為內(nèi)皮ADAS細(xì)胞通過調(diào)節(jié)血管發(fā)生和肌發(fā)生、心肌細(xì)胞程序性細(xì)胞死亡和缺血心臟組織中的重塑，促進(jìn)缺血心肌的再生。本發(fā)明的細(xì)胞還可以用于治療心血管疾病和病癥。通過本發(fā)明的方法得到的細(xì)胞具有幾種性質(zhì)，其可以促進(jìn)減輕和/或使損傷最少化并促進(jìn)損傷后心肌或心血管修復(fù)和再生。這些性質(zhì)包括但不限于，合成和分泌刺激新血管形成的生長因子的能力、合成和分泌血管生成因子的能力、合成和分泌刺激細(xì)胞存活和增殖的生長因子的能力、增殖和分化成直接參與新血管形成的細(xì)胞的能力，和移入損傷的心肌和抑制瘢痕形成(膠原沉積和交聯(lián))的能力。本發(fā)明的細(xì)胞可以表達(dá)在血管形成和血管發(fā)育中起作用的多種生血管生長因子，包括但不限于，胎盤生長因子(PGF)和血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)，支持缺血組織存活，誘導(dǎo)下肢的阻塞/再灌注損傷后的再灌注，當(dāng)心臟損傷后注射到動(dòng)物時(shí)返回到心臟，和分化成表達(dá)標(biāo)記的細(xì)胞，與它們分化成參與血管發(fā)生和血管生成的細(xì)胞相一致。本領(lǐng)域技術(shù)人員將明白本發(fā)明的細(xì)胞可以在例如四肢、視網(wǎng)膜和心肌中組織缺血后摻入血管生成部位。本發(fā)明還包括使用根據(jù)本發(fā)明產(chǎn)生的內(nèi)皮ADAS細(xì)胞治療多種疾病的方法。技術(shù)人員基于本文提供的公開內(nèi)容將理解，再生性藥物在治療多種疾病，包括但不限于局部缺血、心臟病，包括動(dòng)脈粥樣硬化性心血管疾病、冠狀動(dòng)脈疾病、閉塞性動(dòng)脈病、心肌缺血、周圍血管閉塞病等等中的價(jià)值和潛力。本發(fā)明包括對動(dòng)物，包括人施用內(nèi)皮ADAS細(xì)胞以便治療疾病的方法，其中新的、未損傷的細(xì)胞的導(dǎo)入將提供某種形式的治療緩解。技術(shù)人員將容易理解可以對動(dòng)物施用內(nèi)皮ADAS細(xì)胞，從而當(dāng)接受來自周圍環(huán)境的信號和信息時(shí)，細(xì)胞可以通過周圍細(xì)胞環(huán)境的指導(dǎo)進(jìn)一步在體內(nèi)分化成成熟的內(nèi)皮細(xì)胞。在體外分化ADAS細(xì)胞以表達(dá)前內(nèi)皮細(xì)胞和/或內(nèi)皮細(xì)胞的至少一種特征的方法在本文中公開，并且可以以本文描述的方式對動(dòng)物施用內(nèi)皮ADAS細(xì)胞。備選地，內(nèi)皮ADAS細(xì)胞可以進(jìn)一步在體外分化成更成熟的內(nèi)皮細(xì)胞并且可以對需要其的動(dòng)物施用成熟的內(nèi)皮細(xì)胞?？梢灾苽鋬?nèi)皮ADAS細(xì)胞用于移植以確保在體內(nèi)環(huán)境中長期存活。例如，在用于生長和保持細(xì)胞的合適的培養(yǎng)基中增殖細(xì)胞并允許其生長至匯合。使用例如，緩沖液，如含有0.05%胰蛋白酶、補(bǔ)充lmg/ml葡萄糖；0.1mg/mlMgCl2、0.1mg/mlCaCl2(完全PBS)加上用于失活胰蛋白酶的5%血清的磷酸緩沖鹽水(PBS)，可以從培養(yǎng)基質(zhì)釋放細(xì)胞。細(xì)胞可以用PBS通過離心洗滌然后以用于注射所選的密度重懸浮在沒有胰蛋白酶的完全PBS中。除了PBS，與宿主受試者生理相容的任何滲透平衡的溶液可以用于懸浮和向宿主中注射供體細(xì)胞。適于腸胃外施用的藥物組合物的制劑包含與藥用載體如無菌水或者無菌等滲鹽水組合的細(xì)胞。可以以適于快速濃注施用或者連續(xù)施用的形式制備、包裝或者銷售此類制劑?？梢砸詥挝粍┬?，如含有防腐劑的安瓿或者多劑量容器制備、包裝或者銷售可注射的制劑。本發(fā)明還包括與其他治療方法組合移植內(nèi)皮ADAS細(xì)胞以治療身體，包括CNS、皮膚、肝臟、腎臟、心臟、胰腺等等中的疾病或者創(chuàng)傷。因此，本發(fā)明的內(nèi)皮ADAS細(xì)胞可以與對患者發(fā)揮有益效果的其他細(xì)胞，遺傳修飾的和非遺傳修飾的細(xì)胞兩者，共同移植。因此，如本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)本文提供的教導(dǎo)將理解的，本文公開的方法可以與其他治療方法組合。本發(fā)明的內(nèi)皮ADAS細(xì)胞可以作為內(nèi)皮ADAS細(xì)胞本身移植到患者中，使用本領(lǐng)域中公知的技術(shù)，如即美國專利號5,082,670和5,618,531中公開的技術(shù)，將這些專利的每一個(gè)引入本文作為參考，或者移植到身體中任何其他合適的部位。本發(fā)明的細(xì)胞的移植可以使用本領(lǐng)域中公知的技術(shù)以及本文描述的或者如在將來開發(fā)的技術(shù)完成。本發(fā)明包括向哺乳動(dòng)物、優(yōu)選人中移植(transplanting)、移植(grafting)、灌注或者導(dǎo)入細(xì)胞的方法。本文中示例的是向多種哺乳動(dòng)物的心血管組織中移植細(xì)胞的方法，但是本發(fā)明不限于此類解剖部位或那些哺乳動(dòng)物。而且，涉及骨移植的方法是本領(lǐng)域中公知的并且例如在美國專利號4,678,470中描述，胰腺細(xì)胞移植物在美國專利號6，342,479和美國專利號5,571,083中描述，其教導(dǎo)了將細(xì)胞移植到身體中的任一解剖部位的方法。根據(jù)己知的包封技術(shù)，包括微囊化(見，例如美國專利號4,352,883;4,353,888;和5,084,350，引入本文作為參考)，或者巨囊化(macroencapsulation)(見例如，美國專利號5，284，761;5,158,881;4,976,859;和4,968,733;和國際公布號WO92/19195;WO95/05452，將它們?nèi)慷家氡疚淖鳛閰⒖?，細(xì)胞還可以被包封并用于遞送生物活性分子。對于巨囊化，裝置中的細(xì)胞數(shù)可以改變；優(yōu)選地，每個(gè)裝置含有103-109個(gè)細(xì)胞，最優(yōu)選地，約105到107個(gè)細(xì)胞?？梢詫⒁恍┚弈一b置植入患者中。細(xì)胞巨囊化和植入方法是本領(lǐng)域中公知的并且在例如美國專利6,498,018中描述。在本發(fā)明的一方面，從供體的脂肪組織提取ADAS細(xì)胞并使用本文公開的方法培養(yǎng)以施用于需要其的患者以引起對患者中損傷的或變性的心肌或者其他心血管組織的治療益處。此外，將導(dǎo)入個(gè)體的細(xì)胞可以來自不同的供體(同種異體的)或者它們可以是從將治療的個(gè)體得到的細(xì)胞(自體的)。此外，將導(dǎo)入個(gè)體的細(xì)胞可以從完全不同的物種得到(異源的)。在優(yōu)選實(shí)施方案中，從將植入的人的脂肪組織提取細(xì)胞，從而減小與對植入物的抗原性和/或免疫原性反應(yīng)有關(guān)的潛在并發(fā)癥。內(nèi)皮ADAS細(xì)胞的劑量可以在寬范圍內(nèi)改變并且可以在每個(gè)具體情況中根據(jù)個(gè)體的需要調(diào)節(jié)。使用的細(xì)胞的數(shù)目取決于受體的體重和狀況、施用的數(shù)目和/或頻率，和本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其他變量。將施用于患者的內(nèi)皮ADAS細(xì)胞的數(shù)目可以涉及例如脂肪組織處理后的細(xì)胞產(chǎn)率。細(xì)胞總數(shù)的一部分可以保留用于以后使用或者冷藏。此外，遞送的劑量取決于細(xì)胞遞送于患者的路徑。當(dāng)使用心外膜或者心內(nèi)遞送系統(tǒng)時(shí)，需要較少的細(xì)胞，因?yàn)檫@些系統(tǒng)和方法可以提供用于治療心血管疾病的最直接的途徑。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，將遞送于患者的細(xì)胞數(shù)目預(yù)期為約5.5"04個(gè)細(xì)胞。然而，可以以數(shù)量級調(diào)節(jié)該數(shù)目以實(shí)現(xiàn)所希望的治療效果?？梢詫€(gè)體施用每100kg體重約105到約1013個(gè)內(nèi)皮ADAS細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，每100kg體重施用約1.5xl()S到約1.5xl0"個(gè)細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，每100kg體重施用約lxl(^到約5xlO"個(gè)細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，每100kg體重施用約4xl(^到約2xl()U個(gè)細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，每100kg體重施用約5><109細(xì)胞到約lxlO"個(gè)細(xì)胞?？梢詫μ幱谛募」δ苁軗p的任何背景下的患者施用內(nèi)皮ADAS細(xì)胞。此類背景的實(shí)例包括，但不限于，急性心肌梗塞(心臟病發(fā)作)、充血性心力衰竭(作為療法或者移植物的橋)、和冠狀動(dòng)脈旁路搭橋術(shù)(coronaryarterybypassgraftsurgery)的補(bǔ)充?？梢蕴崆疤崛〖?xì)胞并以冷藏方式保存或者它們可以在或者大概在確定需要的時(shí)間時(shí)提取。如本文公開的，可以將細(xì)胞施用于患者，或者直接應(yīng)用于損傷的組織，或者損傷組織附近，不用進(jìn)一步處理或者進(jìn)行額外的步驟以進(jìn)一步純化、修飾、刺激或者改變該細(xì)胞后施用。例如，在施用于需要其的患者前，使用本文公開的方法體外培養(yǎng)細(xì)胞。本發(fā)明的細(xì)胞施用于患者的方式可以取決于幾種因素而變，這些因素包括治療的疾病的類型、哺乳動(dòng)物的年齡、細(xì)胞是否分化、細(xì)胞中是否導(dǎo)入異源DNA，等等?？梢酝ㄟ^直接注射，或者通過本領(lǐng)域中使用的用于導(dǎo)入將施用于患有心血管疾病或者病癥的患者的化合物的任何其他方法，將細(xì)胞導(dǎo)入目的部位?？梢砸远喾N方法施用內(nèi)皮ADAS細(xì)胞到宿主中。優(yōu)選的施用方式是血管內(nèi)、大腦內(nèi)、腸胃外、腹膜內(nèi)、靜脈內(nèi)、硬膜外、脊柱內(nèi)、胸骨內(nèi)(intrastemal)、關(guān)節(jié)內(nèi)、滑膜內(nèi)、鞘內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、心內(nèi)或者肌內(nèi)方式。在一些實(shí)施方案中，通過直接移植對心血管組織施用內(nèi)皮ADAS細(xì)胞。在其他實(shí)施方案中，通過簡單的注射對心血管組織，即血管系統(tǒng)施用內(nèi)皮ADAS細(xì)胞。還可以用添加劑應(yīng)用內(nèi)皮ADAS細(xì)胞以增強(qiáng)、控制或者指導(dǎo)預(yù)期的治療效果。例如，在一個(gè)實(shí)施方案中，通過使用抗體介導(dǎo)的陽性和/或陰性細(xì)胞選擇富集細(xì)胞群體可以進(jìn)一步純化細(xì)胞以增強(qiáng)功效、減少發(fā)病率或者促進(jìn)方法的容易性。類似地，可以用生物相容的基質(zhì)應(yīng)用細(xì)胞，所述基質(zhì)通過支持和/或指導(dǎo)植入的細(xì)胞的命運(yùn)有利于體內(nèi)組織改造。對患者施用內(nèi)皮ADAS細(xì)胞前，使用質(zhì)粒、病毒或者備選的載體策略，可以用目的核酸穩(wěn)定或者瞬時(shí)轉(zhuǎn)染或者轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞?？梢栽谶z傳操作后施用細(xì)胞，使得它們表達(dá)基因產(chǎn)物，該產(chǎn)物意在促進(jìn)細(xì)胞提供的治療應(yīng)答。操作的實(shí)例包括控制(增加或者減少)促進(jìn)血管生成或者血管發(fā)生的因子(即VEGF)的表達(dá)、促進(jìn)分化成特定細(xì)胞譜系的發(fā)育基因(即MyoD)的表達(dá)，或者刺激細(xì)胞生長和增殖的因子(即bFGF-l)的表達(dá)的操作。內(nèi)皮ADAS細(xì)胞在植入前還可以在支架材料上進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。從而，可以在天然或者合成的基質(zhì)或者支架上，在插入或者植入受體前，使用細(xì)胞合成組織改造的瓣膜、心室片、心包膜、血管和其他結(jié)構(gòu)。還可以與生血管因子組合施用本發(fā)明的細(xì)胞以誘導(dǎo)或者促進(jìn)受試者中新毛細(xì)血管或者血管形成。表達(dá)前內(nèi)皮細(xì)胞和/或內(nèi)皮細(xì)胞的至少一種特征的ADAS可以在注射生血管因子之前、同時(shí)或者之后施用。此外，本發(fā)明的細(xì)胞可以在生血管因子施用部位緊鄰處、相同部位或者遠(yuǎn)處施用。此外，本發(fā)明的細(xì)胞可以用于例如在體外篩選化合物、變應(yīng)原、生長/調(diào)節(jié)因子、藥物化合物等等對前內(nèi)皮細(xì)胞和/或內(nèi)皮細(xì)胞的功效和/或細(xì)胞毒性，以通過確定細(xì)胞的生物活性的改變(例如，增殖能力、黏附、產(chǎn)生生血管因子)闡明某些疾病的機(jī)理，研究藥物和/或生長因子借以發(fā)揮作用以調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞生物活性的機(jī)理，診斷和監(jiān)視患者中的疾病，用于基因療法、基因遞送或者蛋白質(zhì)遞送，和產(chǎn)生生物活性產(chǎn)物。通過分析體外活細(xì)胞數(shù)，例如，通過總細(xì)胞計(jì)數(shù)、和差異細(xì)胞計(jì)數(shù)，可以評估生長/調(diào)節(jié)因子對前內(nèi)皮細(xì)胞和/或內(nèi)皮細(xì)胞的影響。這可以使用標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞學(xué)和/或組織學(xué)技術(shù)，包括使用免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)，使用確定類型特異性細(xì)胞抗原的抗體來完成。多種藥物對本發(fā)明細(xì)胞的作用可以在混懸培養(yǎng)物或者三維系統(tǒng)中評估。本發(fā)明的細(xì)胞還可以用于分離和評估與內(nèi)皮細(xì)胞的分化和成熟有關(guān)的因子。從而，表達(dá)前內(nèi)皮細(xì)胞的至少一種特征的ADAS細(xì)胞可以用于測定中以確定培養(yǎng)基，如條件培養(yǎng)基的活性，評價(jià)流體的細(xì)胞生長活性，參與特定譜系的貢獻(xiàn)，等等。可以應(yīng)用并且可以設(shè)計(jì)多種系統(tǒng)來基于多種生理脅迫誘導(dǎo)前內(nèi)皮細(xì)胞的分化。使用內(nèi)皮ADAS細(xì)胞治療影響心血管系統(tǒng)的疾病、病癥或者狀況提供了額外的優(yōu)點(diǎn)，因?yàn)榭梢詫?nèi)皮ADAS細(xì)胞導(dǎo)入受體中而不需要免疫抑制劑。認(rèn)為細(xì)胞的成功移植需要永久移入供體細(xì)胞而不誘導(dǎo)受體產(chǎn)生的移植物排斥免疫反應(yīng)。通常，為了防止宿主排斥反應(yīng)，使用非特異免疫抑制劑，如環(huán)胞菌素A、甲氨蝶呤、類固醇和FK506。這些藥劑每天施用并且如果停止施用，通常導(dǎo)致移植物排斥。然而，使用非特異免疫抑制劑的不希望的結(jié)果是它們通過抑制免疫應(yīng)答的所有方面(一般性免疫抑制)起作用，從而極大地增加了受體對感染和其他疾病的易感性。本發(fā)明通過將內(nèi)皮ADAS細(xì)胞導(dǎo)入受體中而不需要免疫抑制劑，提供了治療影響心血管系統(tǒng)的疾病、病癥或者狀況的方法。本發(fā)明包括向受體中施用同種異體或者異源內(nèi)皮ADAS細(xì)胞，或者與受體在遺傳上不同的內(nèi)皮ADAS細(xì)胞，以為受體提供益處。本發(fā)明提供了當(dāng)向受體施用內(nèi)皮ADAS細(xì)胞時(shí)，使用內(nèi)皮ADAS細(xì)胞治療疾病、病癥或者狀況而不需要使用免疫抑制劑的方法。因此移植的內(nèi)皮ADAS細(xì)胞引起受體對感染和其他疾病，包括和與免疫移植療法相關(guān)的狀況有關(guān)的癌癥的易感性降低。遺傳修飾本發(fā)明的細(xì)胞還可以用于表達(dá)外源蛋白或者分子用于治療目的或者用于追蹤它們在患者組織中的整合和分化的方法中。因此，本發(fā)明包括用于將外源DNA導(dǎo)入細(xì)胞，同時(shí)在所述細(xì)胞中表達(dá)該外源DNA的表達(dá)載體和方法，如例如在Sambrook等人(2001,MolecularCloning:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratory,NewYork),禾卩Ausubel等人(1997,CurrentProtocolsinMolecularBiology,JohnWiley&Sons,NewYork沖所述的那些。分離的核酸可以編碼分子，一旦將它們置于患者中，所述分子用于追蹤細(xì)胞的遷移、整合和存活，或者它們可以用于在患者中表達(dá)突變的、缺陷或者功能異常的蛋白質(zhì)。用于追蹤的蛋白質(zhì)可以包括，但不限于綠色熒光蛋白(GFP)、任一種其他熒光蛋白(例如，增強(qiáng)的綠色、藍(lán)綠色、黃色、藍(lán)色和紅色熒光蛋白；Clontech，PaloAlto,CA))，或者本文別處公開的其他標(biāo)記蛋白(例如，LacZ、FLAG-tag、Myc、His6，等等)。備選地，導(dǎo)入細(xì)胞中的分離的核酸可以包括，但不限于CFTR、氨基己糖苷酶、和本領(lǐng)域中公知的或者將在將來研發(fā)的其他基因治療策略。追蹤本發(fā)明細(xì)胞的遷移、分化和整合不限于使用從載體或者病毒表達(dá)的可檢測的分子。使用將允許定位移植的內(nèi)皮ADAS細(xì)胞的一系列探針可以確定細(xì)胞的遷移、整合、和分化。此類探針包括人特異性Alu的探針，Alu是豐富的轉(zhuǎn)座元件，每5000個(gè)堿基對中約存在一個(gè)，從而使得技術(shù)人員可以追蹤移植細(xì)胞的進(jìn)展。通過使用本文別處詳述的細(xì)胞特異性標(biāo)記，如，但不限于CD34、CD31、CD40、CD63等等的抗體或者核酸探針，可以進(jìn)一步完成追蹤移植的細(xì)胞。本發(fā)明還包括內(nèi)源ADAS細(xì)胞，當(dāng)向其中導(dǎo)入分離的核酸，并且由希望的核酸編碼的蛋白質(zhì)在該細(xì)胞中表達(dá)，其中該蛋白質(zhì)以前不存在于該細(xì)胞或者不在該細(xì)胞中表達(dá)或者其中它目前與導(dǎo)入分離的核酸之前相比以不同的水平或者在不同的環(huán)境下表達(dá)時(shí)，得到益處。這種益處可以包括這一事實(shí)，即提供了這樣的系統(tǒng)，其中可以在實(shí)驗(yàn)室中在體外或者在細(xì)胞所處的哺乳動(dòng)物中研究所希望的核酸的表達(dá)；這樣的系統(tǒng)，其中包含導(dǎo)入的核酸的細(xì)胞可以用作研究、診斷和治療工具，和系統(tǒng)，其中產(chǎn)生了哺乳動(dòng)物模型，該模型用于開發(fā)在哺乳動(dòng)物中針對所選疾病狀態(tài)的新的診斷和治療工具。表達(dá)目的分離的核酸的細(xì)胞可以用于為另一種細(xì)胞、組織或者完整哺乳動(dòng)物提供分離的核酸的產(chǎn)物，其中較高水平的基因產(chǎn)物可以用于治療或者減輕與異常表達(dá)和/或活性有關(guān)的疾病、病癥或者狀況。因此，本發(fā)明包括表達(dá)目的分離核酸的內(nèi)皮ADAS細(xì)胞，其中增加的目的蛋白質(zhì)的表達(dá)、蛋白質(zhì)水平和/或活性可以用于治療或減輕與血管發(fā)生和/或血管生成有關(guān)的疾病、病癥或者狀況。內(nèi)皮ADAS細(xì)胞可以被遺傳改造以表達(dá)生血管因子，例如，VEGF，然后將改造的ADAS細(xì)胞施用到受體中。改造的ADAS細(xì)胞與沒有經(jīng)過遺傳修飾以表達(dá)這樣的因子的ADAS細(xì)胞相比，以更大量表達(dá)和分泌VEGF。在疾病、病癥或狀況的治療中使用影響血管發(fā)生和/或血管生成的遺傳修飾的內(nèi)皮ADAS細(xì)胞的益處是增強(qiáng)受體中存在的內(nèi)皮ADAS細(xì)胞的治療效果。增強(qiáng)的治療效果歸因于VEGF從改造的內(nèi)皮ADAS細(xì)胞的增加的分泌。隨著VEGF從被改造的內(nèi)皮ADAS細(xì)胞的增加的分泌，更大量的VEGF存在于鄰近細(xì)胞或者遠(yuǎn)基細(xì)胞以從VEGF受益。此外，在受體中存在增加量的VEGF允許患者接受治療的時(shí)間范圍的縮短。將理解本文描述的方法可以以多種方式進(jìn)行并且其具有本領(lǐng)域中公知的多種改變和更改。還理解作為細(xì)胞類型之間的作用或者相互作用方式給出的任何理論應(yīng)當(dāng)不被理解為以任何方式限制本發(fā)明，而是給出使得可以更充分地理解本發(fā)明的方法。下面的實(shí)施例進(jìn)一步闡明本發(fā)明的方面。然而，它們決不以任何方式限制如本文給出的本發(fā)明的教導(dǎo)或者公開內(nèi)容。實(shí)施例l:建立原代ADAS培養(yǎng)物將來自通過吸脂得到的白色脂肪組織的基質(zhì)血管級分(SVF)用含有0.5。/。BSA和125口g/mLI型膠原酶(終濃度)的Krebs-Ringer碳酸氫鹽緩沖液在37X:消化80分鐘，以10分鐘間隔劇烈振動(dòng)。消化后，將混懸液以1,200rpm在室溫離心5分鐘，劇烈振動(dòng)然后再次以1,200rpm在室溫離心5分鐘。吸出脂質(zhì)/脂肪細(xì)胞層并丟棄，不擾動(dòng)SVF沉淀。將沉淀用基質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基(DMEM/F121:1，10%FBS，1X抗生素/抗真菌劑)重懸浮/洗滌，并重懸浮在總體積40mL的基質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基中。將10mL該混懸液加入含有40mL基質(zhì)培養(yǎng)基的T-225瓶中。接種后1到3天洗出非貼壁細(xì)胞，并將培養(yǎng)基用補(bǔ)充5ng/mL人EGF、不存在抗生素/抗真菌劑的基質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基替換。該培養(yǎng)基每3到4天更換。接種后14天收獲匯合的培養(yǎng)物并冷藏。將這些細(xì)胞稱作ADASO代(P0)。實(shí)施例2:處理ADAS細(xì)胞在兩個(gè)單獨(dú)的實(shí)驗(yàn)中，將來自單個(gè)供體的ADAS(PO)細(xì)胞以約6xl03個(gè)細(xì)胞/cm2的密度接種在T-83瓶中(1代)。將對照ADAS細(xì)胞培養(yǎng)在包含DMEM/F12(1:1)、10%FBS、5ng/mLhEGF和1ng/mLhFGF的擴(kuò)增培養(yǎng)基中，每2到4天更換培養(yǎng)基。將處理組中的ADAS細(xì)胞進(jìn)行逐步處理方案，該方案開始6天在Mil培養(yǎng)基(DMEM/F12、N2補(bǔ)充物、B27補(bǔ)充物、2.3mM谷氨酰胺、10ng/mLhFGF)中，在接種后1、3和5天更換培養(yǎng)基。在第7天，將培養(yǎng)物用D-PBS漂洗兩次，然后將ADAS細(xì)胞在MIII培養(yǎng)基(DMEM/F12、N2補(bǔ)充物(Invitrogen,Carlsbad,CA)，B27補(bǔ)充物(Invitrogen，Carlsbad,CA),2.3mM谷氨酰胺、10mM煙酰胺、2%FBS)中培養(yǎng)4天。在第10天更換MIII并在第11天通過胰蛋白酶消化收獲對照和處理的ADAS細(xì)胞并進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)。流式細(xì)胞術(shù)對對照和MII/MIII處理的細(xì)胞進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)以進(jìn)行表型表征并鑒定對MII/Min培養(yǎng)基處理方案的可能的細(xì)胞應(yīng)答。對于接合的單克隆，將細(xì)胞用lmL流動(dòng)洗滌緩沖液(lXDPBS，0.5%BSA禾卩0.1%疊氮化鈉)洗滌一次，并以約6000xg離心20秒。將細(xì)胞懸浮在1.3ml封閉緩沖液(含有25口g/ml小鼠Ig的洗滌緩沖液)中，在冰上溫育10分鐘，然后等分成100口L等分試樣。向它們各自的等分試樣中加入合適的單克隆抗體。包括合適的同種型對照組合以對應(yīng)于實(shí)驗(yàn)中使用的單克隆同種型組合。每個(gè)試管包括三種單克隆抗體。實(shí)驗(yàn)中使用的抗體的濃度為銷售商推薦的濃度。用于ADAS細(xì)胞表型的抗體包括(除非另外指出，所有抗體都來自BD-Pharmingen,SanJose,CA):CD80(Caltag，Burlingame，CA),CD86(Caltag)、CD14;CD45、CD34、CD133(MiltenyiBiotech,Auburn,CA);CD90、CD105(Caltag)、HLA-DR;CD63、CD166、I類固C;CD44(CellSciences,Canton,MA)、CD73、CD54;CD31、CD13、CD40;CD29(Caltag)、CD49a、CDlla。所有試管都在冰上避光溫育30分鐘。將細(xì)胞用2mL洗滌緩沖液洗滌一次(約650xg5分鐘)，然后在200口L1X低聚甲醛中固定。對于未綴合的單克隆抗體，如本文別處描述的收獲、洗滌和封閉ADAS細(xì)胞。加入一級抗體(VEGFR2[KDR]和血管性血友病因子)(10口g/mL)并將細(xì)胞在冰上溫育約30分鐘。將細(xì)胞用2mL洗滌緩沖液洗滌一次(650xg5分鐘)并重懸浮在IOO口L洗滌緩沖液中。向含有一級抗體以及"僅二級抗體"對照的混懸液中加入濃度為0.5口g/mL的山羊抗小鼠PE綴合的二級抗體并將細(xì)胞在冰上避光溫育15分鐘。進(jìn)行用2mL流動(dòng)洗漆緩沖液的最終洗滌(650xg5分鐘)并如上述固定細(xì)胞。使用CELLQuest采集軟件(BectonDickinson,FranklinLakes,NJ)，在BectonDickinsonFACSCaliber流式細(xì)胞儀上設(shè)置的每種抗體獲得IO，OOO個(gè)事件(細(xì)胞)，并用FlowJo分析軟件(TreeStar,Ashland,OR)分析數(shù)據(jù)。形態(tài)學(xué)圖1顯示了未處理的和MII/MIII處理的ADAS培養(yǎng)物的顯微照片表示。在預(yù)處理的和未處理的對照培養(yǎng)物中觀察到紡錘形的成纖維細(xì)胞樣形態(tài)(圖1A和圖1B)，而在開始處理后4天，在Mil處理的培養(yǎng)物中觀察到形態(tài)學(xué)改變(圖1C和圖ID)。Mil處理的細(xì)胞在外觀上較不像成纖維細(xì)胞，有許多貼壁和不貼壁的圓形的相明亮的細(xì)胞。此外，在該階段的細(xì)胞似乎形成細(xì)胞與細(xì)胞連接的"網(wǎng)絡(luò)"。用Min進(jìn)一步處理細(xì)胞再次改變了培養(yǎng)物的總體形態(tài)，得到與Mil處理期間看到的細(xì)胞相像的細(xì)胞和與培養(yǎng)的內(nèi)皮細(xì)胞相像的形成"鵝卵石"型區(qū)域的細(xì)胞的異質(zhì)混合物(圖1E和IF)。表型表征使用針對通常由基質(zhì)、造血或內(nèi)皮譜系的細(xì)胞表達(dá)的多種分子的抗體，對對照和MII/MIII處理的ADAS細(xì)胞在表型上表征表面標(biāo)記表達(dá)。表1顯示了該表征的結(jié)果(值為所列的表面標(biāo)記的陽性染色細(xì)胞的百分比)。培養(yǎng)11天后，未處理的1代ADAS細(xì)胞表達(dá)CD13、CD29、CD31、CD40、CD44、CD49a、CD54、CD63、CD73、CD80、CD90、CD105、CD133、CD166、I類MHC、和VEGF受體2(flk-l)。當(dāng)用MII/MIII方案處理時(shí)，在表達(dá)表面標(biāo)記CD31(+56,5%)、CD34(+67.9%)、CD40(+27.4%)、CD63(+38.0%)、CD105(-25.3%)和CD166(-36.1%)的細(xì)胞的平均百分比中注意到顯著改變(>20%)。表l對照和MII/MIII處理的ADAS細(xì)胞的表型表征<table>tableseeoriginaldocumentpage33</column></row><table>*BG=背景_本文的公開內(nèi)容闡明了使用培養(yǎng)基處理方案處理未分化的ADAS細(xì)胞以得到內(nèi)皮ADAS細(xì)胞群體的新方法。盡管本文給出的細(xì)胞表型表征不包括所有潛在的內(nèi)皮細(xì)胞表面標(biāo)記，但是觀察到通過本文公開的方法產(chǎn)生的細(xì)胞群體對于CD34(前內(nèi)皮細(xì)胞和造血干細(xì)胞的標(biāo)記)和CD31(成熟內(nèi)皮細(xì)胞)是強(qiáng)陽性的，并且對于CD40和CD63是陽性的，這與對向內(nèi)皮細(xì)胞類型定型的表型表征相一致。本文給出的數(shù)據(jù)表明使用本文公開的方法從容易擴(kuò)增的內(nèi)皮ADAS產(chǎn)生大量CD34+、CD31+前內(nèi)皮細(xì)胞以在臨床上使用。此外，本公開內(nèi)容允許使用本文所述的處理誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)記陽性表型在大規(guī)模環(huán)境中擴(kuò)增內(nèi)皮ADAS細(xì)胞和生產(chǎn)前內(nèi)皮細(xì)胞的有吸引力的方法。此外，在處理的ADAS細(xì)胞上CD34和CD40以及CD80(程度較低)的表達(dá)提示還可以誘導(dǎo)造血前體細(xì)胞。將本文引用的每個(gè)專利、專利申請和出版物的公開內(nèi)容都完整引入本文作為參考。盡管參考具體實(shí)施方案公開了本發(fā)明，顯然本領(lǐng)域其它技術(shù)人員可以設(shè)計(jì)本發(fā)明的其他實(shí)施方案和變通方案而不背離本發(fā)明的真實(shí)精神和范圍。意在理解后附權(quán)利要求包括所有此類實(shí)施方案和等價(jià)變通方案。權(quán)利要求1.分離的脂肪組織來源的成年基質(zhì)(ADAS)細(xì)胞，其經(jīng)誘導(dǎo)而表達(dá)前內(nèi)皮細(xì)胞的至少一種特征。2.權(quán)利要求1的細(xì)胞，其中所述細(xì)胞經(jīng)誘導(dǎo)在體外分化。3.權(quán)利要求l的細(xì)胞，其中所述細(xì)胞經(jīng)誘導(dǎo)在體內(nèi)分化。4.權(quán)利要求l的細(xì)胞，其中已經(jīng)向所述細(xì)胞中導(dǎo)入外源遺傳物質(zhì)。5.權(quán)利要求l的細(xì)胞，其中所述細(xì)胞來自人。6.權(quán)利要求1的細(xì)胞，其中所述細(xì)胞表達(dá)CD34和CD31的至少一種。7.權(quán)利要求l的細(xì)胞，其中當(dāng)與CD34和CD31各自從未經(jīng)誘導(dǎo)以表達(dá)前內(nèi)皮細(xì)胞的至少一種特征的其他方面相同的ADAS細(xì)胞的表達(dá)水平相比時(shí)，所述細(xì)胞以更高水平表達(dá)CD34和CD31的至少一種。8.權(quán)利要求1的細(xì)胞，其中所述細(xì)胞表達(dá)CD34、CD31、CD40、CD63或其組合的至少一種。9.權(quán)利要求1的細(xì)胞，其中當(dāng)與CD34、CD31、CD40和CD63各自從未經(jīng)誘導(dǎo)以表達(dá)前內(nèi)皮細(xì)胞的至少一種特征的其他方面相同的ADAS細(xì)胞的表達(dá)水平相比時(shí)，所述細(xì)胞以更高水平表達(dá)CD34、CD31、CD40、CD63或其組合的至少一種。10.分化分離的脂肪組織來源的成年基質(zhì)(ADAS)細(xì)胞以表達(dá)前內(nèi)皮細(xì)胞的至少一種特征的方法，該方法包括將所述細(xì)胞在Mil培養(yǎng)基中培養(yǎng)，接著將所述細(xì)胞在MIII培養(yǎng)基中培養(yǎng)。11.權(quán)利要求10的方法，其中所述細(xì)胞來自人。12.權(quán)利要求10的方法，其中所述MII培養(yǎng)基包含N2補(bǔ)充物、B27補(bǔ)充物、谷氨酰胺和成纖維細(xì)胞生長因子(FGF)。13.權(quán)利要求12的方法，其中所述谷氨酰胺的濃度為約2.3mM。14.權(quán)利要求12的方法，其中所述FGF的濃度為約10ng/mL。15.權(quán)利要求10的方法，其中所述MIII培養(yǎng)基包含N2補(bǔ)充物、B27補(bǔ)充物、谷氨酰胺、煙酰胺和胎牛血清(FBS)。16.權(quán)利要求15的方法，其中所述谷氨酰胺的濃度為約2.3mM。17.權(quán)利要求15的方法，其中所述煙酰胺的濃度為約10mM。18.權(quán)利要求15的方法，其中所述FBS的濃度為約2X。19.用于將分離的脂肪組織來源的成年基質(zhì)(ADAS)細(xì)胞分化成顯示前內(nèi)皮細(xì)胞的至少一種特征的細(xì)胞的分化培養(yǎng)基，其中向所述培養(yǎng)基補(bǔ)充N2補(bǔ)充物、B27補(bǔ)充物、谷氨酰胺和成纖維細(xì)胞生長因子(FGF)，此外其中將所述培養(yǎng)基稱作Mil培養(yǎng)基。20.權(quán)利要求19的培養(yǎng)基，其中所述谷氨酰胺的濃度為約2.3mM。21.權(quán)利要求19的培養(yǎng)基，其中所述FGF的濃度為約10ng/mL。22.用于將分離的脂肪組織來源的成年基質(zhì)(ADAS)細(xì)胞分化成顯示前內(nèi)皮細(xì)胞的至少一種特征的細(xì)胞的分化培養(yǎng)基，其中向所述培養(yǎng)基補(bǔ)充N2補(bǔ)充物、B27補(bǔ)充物、谷氨酰胺、煙酰胺和胎牛血清(FBS)，此外其中將所述培養(yǎng)基稱作Mill培養(yǎng)基。23.權(quán)利要求22的培養(yǎng)基，其中所述谷氨酰胺的濃度為約2.3mM。24.權(quán)利要求22的培養(yǎng)基，其中所述煙酰胺的濃度為約10mM。25.權(quán)利要求22的培養(yǎng)基，其中所述FBS的濃度為約2X。26.在動(dòng)物中誘導(dǎo)血管發(fā)生的方法，其包括a)誘導(dǎo)分離的脂肪組織來源的成年基質(zhì)(ADAS)細(xì)胞以表達(dá)前內(nèi)皮細(xì)胞的至少一種特征；和b)對所述動(dòng)物施用這樣誘導(dǎo)的所述細(xì)胞。27.權(quán)利要求26的方法，其中所述ADAS細(xì)胞從所述動(dòng)物分離。28.權(quán)利要求26的方法，其中所述ADAS細(xì)胞從同種異體供體分離。29.權(quán)利要求26的方法，其中所述ADAS細(xì)胞從異源供體分離。30.權(quán)利要求26的方法，其中所述ADAS細(xì)胞來自人。31.確定化合物實(shí)現(xiàn)分離的脂肪組織來源的成年基質(zhì)(ADAS)細(xì)胞分化成前內(nèi)皮細(xì)胞和/或內(nèi)皮細(xì)胞的能力的方法，該方法包括-a)在基質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基中培養(yǎng)所述ADAS細(xì)胞一段時(shí)間；b)將所述基質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基用包含化合物或者對照載體的分化培養(yǎng)基更換；c)在包含所述化合物或所述對照載體的所述分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)所述ADAS細(xì)胞一段時(shí)間；d)使用來自步驟C)的包含所述化合物的所述分化培養(yǎng)基確定分化細(xì)胞的數(shù)目或者百分?jǐn)?shù)；e)使用來自步驟c)的僅含有所述載體的所述分化培養(yǎng)基確定細(xì)胞中分化細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)；f)比較來自步驟(d)和(e)的分化細(xì)胞的數(shù)目或百分?jǐn)?shù)；g)與來自步驟(e)的分化細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)相比，來自步驟(d)的分化細(xì)胞的更大的百分?jǐn)?shù)表明所述化合物能夠誘導(dǎo)所述ADAS細(xì)胞分化成前內(nèi)皮細(xì)胞和/或內(nèi)皮細(xì)胞。32.權(quán)利要求31的方法，其中所述細(xì)胞來自人。全文摘要本發(fā)明包括脂肪來源的成年基質(zhì)(ADAS)細(xì)胞，其顯示出前內(nèi)皮細(xì)胞和/或內(nèi)皮細(xì)胞的至少一種特征。本發(fā)明還包括用于產(chǎn)生顯示出前內(nèi)皮細(xì)胞和/或內(nèi)皮細(xì)胞的至少一種特征的脂肪來源的成年基質(zhì)的組合物和方法。還包括在血管移植、組織改造、血管生成的調(diào)節(jié)、血管發(fā)生和包括心臟病的多種病癥的治療中使用所述細(xì)胞的方法。文檔編號C12N5/02GK101155912SQ200680010928公開日2008年4月2日申請日期2006年1月27日優(yōu)先權(quán)日2005年1月31日發(fā)明者詹姆斯·B·米切爾二世,詹姆斯·K·亨德里克斯申請人:同源治療公司