專(zhuān)利名稱(chēng)：一種桑黃黃酮及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種真菌的有效成分提取，具體地說(shuō)涉及一種桑黃黃酮及 其制備方法和用途。 背景資料
桑黃(尸力e^i77ws Z^朋h'Pilat)，屬擔(dān)子菌綱、多孔菌目、多孔菌
科、針層孔菌屬的真菌。桑黃最早記載于《本草綱目》中，《神農(nóng)本草經(jīng)》
描述桑黃"久服輕身不老延年"。其味微苦，性寒，能利五臟，宣腸氣，排
毒氣，壓丹石，人熱發(fā)，衄腸風(fēng)，止血，瀉血。民間認(rèn)為桑黃能增強(qiáng)肝臟
機(jī)能，治療肝硬化，肝腹水等。
現(xiàn)代研究表明，桑黃主要的藥理作用有抗腫瘤、保護(hù)肝損傷、降血糖、
抗氧化及抗病毒等。研究表明，桑黃能抑制腫瘤細(xì)胞增殖，提高機(jī)體免疫 力；桑黃對(duì)S180、胃癌的抑制作用較靈芝、巴西蘑菇等藥用真菌還強(qiáng)。桑 黃還具有明顯的保護(hù)肝細(xì)胞作用，能減輕肝細(xì)胞變性、壞死，維護(hù)肝組織 正常結(jié)構(gòu)，促進(jìn)肝功能恢復(fù)，其保肝的作用機(jī)理可能是桑黃能抑制自由基 活性，抗脂質(zhì)過(guò)氧化；能顯著提高IFN-Y水平，抑制炎癥反應(yīng)。
桑黃中不僅含有豐富的活性多糖類(lèi)物質(zhì)，同時(shí)還含有黃酮類(lèi)物質(zhì)。在桑 黃中發(fā)現(xiàn)的黃酮類(lèi)化合物屬于生物類(lèi)黃酮，是植物次生代謝產(chǎn)物，在針層 孔屬真菌中是首次發(fā)現(xiàn)。類(lèi)黃酮是自然界藥用植物中主要活性成分之一， 具有調(diào)節(jié)血脂、消除氧自由基、抗氧化、抗腫瘤、抗病毒等生理活性，因 此生物類(lèi)黃酮已引起國(guó)內(nèi)外學(xué)者的廣泛關(guān)注。大量的流行病學(xué)調(diào)查、動(dòng)物 實(shí)驗(yàn)及體外實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明黃酮類(lèi)物質(zhì)具有廣泛的抑癌和防癌作用， 尤其是對(duì)一些認(rèn)為與人體雌激素分泌有關(guān)的癌，如乳腺癌、卵巢癌、前列
腺癌等具有較好作用。目前的研究認(rèn)為，生物類(lèi)黃酮的抗癌作用主要通過(guò) 抗氧化和抗自由基作用、抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)、抗致癌因子、抑制血管生成及 提高機(jī)體免疫力等途徑實(shí)現(xiàn)。類(lèi)黃酮屬酚類(lèi)物質(zhì)，可整合金屬離子，從而 抑制體內(nèi)微量金屬離子參與催化的脂質(zhì)過(guò)氧化過(guò)程，同時(shí)，類(lèi)黃酮作為抗 氧化劑和自由基的淬滅劑，能有效地阻止脂質(zhì)過(guò)氧化引起的細(xì)胞破壞，起 到抗癌防癌作用。
目前，生物類(lèi)黃酮主要是從天然藥用植物中提取，這類(lèi)物質(zhì)在菌類(lèi)中 很少發(fā)現(xiàn)，桑黃是少有的含有黃酮類(lèi)的藥用真菌。從植物中獲得黃酮類(lèi)化 合物有兩種途徑， 一是直接從植物的組織中提取，二是通過(guò)誘導(dǎo)植物愈傷 組織進(jìn)行組織培養(yǎng)或懸浮培養(yǎng)獲得次生代謝產(chǎn)物類(lèi)黃酮。植物資源是有限 的，且砍伐植物會(huì)影響生態(tài)平衡；而利用植物愈傷組織進(jìn)行組織培養(yǎng)的成 本較高，培養(yǎng)條件局限。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題在于提供一種桑黃黃酮及其制備方法和用 途，以解決現(xiàn)有技術(shù)中的缺陷。
本發(fā)明發(fā)酵所用的桑黃菌種(尸力^h'加s力3WMZ 力'Pilat)來(lái)自中國(guó)微
生物菌種保藏中心上海食用菌分中心，編號(hào)為Phellinus baumii Pilat3249。
本發(fā)明首先提供了一種桑黃黃酮，其中該桑黃黃酮是通過(guò)以下方法制 備得到的
① 對(duì)桑黃菌絲體進(jìn)行深層發(fā)酵培養(yǎng)；
② 對(duì)獲得的桑黃菌絲體用70%乙醇提取，獲得桑黃黃酮。
其中所述的步驟①中對(duì)桑黃菌絲體進(jìn)行深層發(fā)酵培養(yǎng)的具體步驟和
條件為.-
① 平板菌種培養(yǎng)將保藏的斜面菌種接入PDA平板培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度為
26-30。C，培養(yǎng)時(shí)間7-IO天；
PDA(馬鈴薯葡萄糖瓊脂)培養(yǎng)基:馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂15 20g，蒸餾水定容至1L。
② 搖瓶種子液培養(yǎng)
培養(yǎng)基PDA液體培養(yǎng)基馬鈴薯200g，葡萄糖20g，蒸餾水定容至
1L;
培養(yǎng)條件將步驟①中獲得的平板菌種接入PDA液體培養(yǎng)基中，置迴
轉(zhuǎn)式搖床培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速150-160r/min， 28 "C培養(yǎng)5-8天得搖瓶種子液； (D—級(jí)種子培養(yǎng)
搖瓶種子液勻漿后按10% (體積比)接種量接種到液體菌種培養(yǎng)基， 置迴轉(zhuǎn)式搖床培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速150-160 r/min， 28 "C振蕩培養(yǎng)4-6天得一級(jí)種 子液；
其中液體菌種培養(yǎng)基為葡萄糖20-30g/L，豆餅粉10 g/L，KH2P(U g/L ， MgS040. 5 g/L;
④發(fā)酵罐種子液培養(yǎng)
將長(zhǎng)好的一級(jí)種子液按10% (體積比)接種量接種到發(fā)酵罐種子液培 養(yǎng)基，置迴轉(zhuǎn)式搖床培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速150-160 r/niin， 28 。C振蕩培養(yǎng)3 4天得 發(fā)酵罐種子液；
其中發(fā)酵罐種子液培養(yǎng)基為葡萄糖5 10g/L，玉米粉20 25g/L，豆 餅粉5 10g/L， KH2P04 lg/L， MgSO40. 5g/L;
⑤發(fā)酵罐發(fā)酵
發(fā)酵條件為罐溫26~28 。C，攪拌轉(zhuǎn)速100 180 r/min， pH值自然， 接種量8~10%(體積比)，通氣量為'l: 0. 1 1: 1.5v/v/分，罐壓為0.2-0.8 公斤/厘米3,發(fā)酵周期為4 5天；
其中培養(yǎng)基組成為葡萄糖20 30g/L，玉米粉5 10g/L，豆餅粉5 10 g/L， KH2P04 1.5~3 g/L， MgS04 1 1. 5 g/L，消泡劑(泡敵)0.01%。
其中放罐的標(biāo)準(zhǔn)為菌絲體濃密，色金黃，菌絲體紫外檢測(cè)有熒光。
其中所述的步驟②中對(duì)桑黃菌絲體進(jìn)行乙醇提取的具體步驟為
菌絲體經(jīng)板框壓濾后，于5(TC鼓風(fēng)干燥箱中干燥，然后于18-3(TC下 在70%的食用級(jí)乙醇中浸泡12-48小時(shí)，其中料液比為l: 15 (菌絲體與乙 醇的料液比為重量公斤比體積升)，過(guò)濾后保留上清液，殘?jiān)儆?0°/。乙醇 浸泡12-48小時(shí)；合并兩次浸提液，于4CTC下減壓濃縮，待蒸去大部分乙 醇后，再加水繼續(xù)減壓濃縮，將濃縮液冷凍干燥得桑黃黃酮提取物。如此 制備的桑黃黃酮其得率為9. 6%-11%，純度為25-27%。
本發(fā)明還提供了一種制備上述桑黃黃酮的方法，該方法包括如下步驟
① 對(duì)桑黃菌絲體進(jìn)行深層發(fā)酵培養(yǎng)；
② 對(duì)獲得的桑黃菌絲體用70%乙醇提取，獲得桑黃黃酮。
其中所述的步驟①中對(duì)桑黃菌絲體進(jìn)行深層發(fā)酵培養(yǎng)的具體步驟和條
件為
① 平板菌種培養(yǎng)將保藏的斜面菌種接入PDA平板培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度為
26-30。C，培養(yǎng)時(shí)間7-10天；
② 搖瓶種子液培養(yǎng)
培養(yǎng)基PDA液體培養(yǎng)基；
培養(yǎng)條件將步驟①中獲得的平板菌種接入PDA液體培養(yǎng)基中，置迴
轉(zhuǎn)式搖床培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速150-160r/min， 28 。C培養(yǎng)5-8天得搖瓶種子液；
(D—級(jí)種子培養(yǎng)
搖瓶種子液勻漿后按10% (體積比)接種量接種到液體菌種培養(yǎng)基， 置迴轉(zhuǎn)式搖床培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速150-160 r/min， 28 t:振蕩培養(yǎng)4-6天得一級(jí)種 子液；
其中液體菌種培養(yǎng)基為葡萄糖20-30g/L，豆餅粉10g/L，KH2P0a g/L ， MgS04 0. 5 g/L;
④ 發(fā)酵罐種子液培養(yǎng)
將長(zhǎng)好的一級(jí)種子液按10% (體積比)接種量接種到發(fā)酵罐種子液培 養(yǎng)基，置迴轉(zhuǎn)式搖床培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速150-160 r/min， 28 。C振蕩培養(yǎng)3 4天得 發(fā)酵罐種子液；
其中發(fā)酵罐種子液培養(yǎng)基為葡萄糖5 10g/L，玉米粉20 25g/L，豆 餅粉5 10g/L， KH2P04 lg/L， MgS04 0 . 5g/L;
⑤ 發(fā)酵罐發(fā)酵
發(fā)酵條件為罐溫26 28 °C，攪拌轉(zhuǎn)速100~180 r/min， pH值自然， 接種量8 10% (體積比)，通氣量為1: 0. 1~ 1: 1. 5v/v/分，罐壓為0. 2-0. 8 公斤/厘米3,發(fā)酵周期為4 5天；
其中培養(yǎng)基組成為葡萄糖20 30g/L，玉米粉5 10g/L，豆餅粉5 10 g/L， KH2P04 1.5~3 g/L， MgS04 1 1. 5 g/L，消泡劑(泡敵)0.01%。 所述的步驟②中對(duì)桑黃菌絲體進(jìn)行乙醇提取的具體步驟為
菌絲體經(jīng)板框壓濾后，于5CTC鼓風(fēng)干燥ft中干燥，然后于i8-30'C下
在70%的食用級(jí)乙醇中浸泡12-48小時(shí)，其中料液比為1: 15 (重量公斤/
體積升)，過(guò)濾后保留上清液，殘?jiān)儆?0%乙醇浸泡12-48小時(shí)；合并兩
次浸提液，于40。C下減壓濃縮，待蒸去大部分乙醇后，再加水繼續(xù)減壓濃
縮，將濃縮液冷凍干燥得桑黃黃酮提取物。
利用真菌進(jìn)行發(fā)酵生產(chǎn)可以直接用其菌種培養(yǎng)，培養(yǎng)條件要求不高，易 于生長(zhǎng)。在真菌深層發(fā)酵的過(guò)程中，也會(huì)產(chǎn)生很多次生代謝產(chǎn)物。用這種 方法生產(chǎn)桑黃黃酮尚未見(jiàn)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。
而且通過(guò)深層發(fā)酵的途徑來(lái)獲得桑黃中的次生代謝產(chǎn)物黃酮是獲得桑 黃生物活性物質(zhì)的一個(gè)新的途徑，利用液體發(fā)酵生產(chǎn)量大、占地少、周期 短、容易控制等優(yōu)點(diǎn)可以進(jìn)行大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)桑黃黃酮，能降低成本， 具有廣闊的應(yīng)用前景。
將本發(fā)明所獲得的桑黃菌絲體黃酮提取物進(jìn)行抗氧化實(shí)驗(yàn)研究表明， 桑黃黃酮提取物對(duì)活性氧(02'—、 *0H、 H202)均有明顯的抑制作用，抑制率 與總黃酮含量之間存在一定的量效關(guān)系。桑黃黃酮提取物中的黃酮含量越 高則對(duì)活性氧的清除率越高，清除作用越強(qiáng)；說(shuō)明桑黃菌絲體中具有抗氧 化作用的主要是黃酮類(lèi)物質(zhì)。桑黃黃酮還具有抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的作用， 且抑制作用隨著濃度的增加而增加。具體數(shù)據(jù)見(jiàn)實(shí)施例。
將桑黃黃酮作用于鰓鯉魚(yú)籽醬的抗氧化實(shí)驗(yàn)表明，桑黃黃酮的抗氧化 能力接近于BHA (叔丁基羥基茴香醚)，強(qiáng)于Vc。添加后一周其抗氧化能力 就明顯的表現(xiàn)出來(lái)，在0.5g魚(yú)籽醬中添加0.05 mg桑黃黃酮時(shí)其抗氧化抑 制率達(dá)到79. 8%， BHA的抑制率為89. 5°/。。到第八天桑黃黃酮的抗氧化能力表 現(xiàn)接近于BHA，達(dá)到103%。說(shuō)明桑黃黃酮對(duì)鰓鯉魚(yú)籽醬油脂的抗氧化起到很
好的效果。因此在食品中添加桑黃黃酮既可以起到抗氧化、防衰老、減少 癌癥的危險(xiǎn)，又可以延長(zhǎng)食品的保質(zhì)期。
因此本發(fā)明所提供的桑黃黃酮可用于制備抗氧化制劑、防衰老制劑、 預(yù)防或治療腫瘤的藥物、添加劑。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例一
用桑黃菌(尸力eJh'/ ^Z^/鵬j7Pilat)菌種進(jìn)行發(fā)酵產(chǎn)桑黃黃酮的生產(chǎn)工
藝過(guò)程如下
1. 平板菌種培養(yǎng)
將保藏的斜面菌種接入新配制的PDA平板培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度26°C，培 養(yǎng)時(shí)間7天。
2. 搖瓶種子液培養(yǎng)
培養(yǎng)基PDA液體培養(yǎng)基。
培養(yǎng)條件接種母種4塊，每塊0.5 cm2，置迴轉(zhuǎn)式搖床培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速 150r/min， 28 'C振蕩培養(yǎng)7天得搖瓶種子液。
3. —級(jí)種子培養(yǎng) 搖瓶種子液勻漿后按10X接種量接種到液體菌種培養(yǎng)基，葡萄糖30g/L，
豆餅粉10 g/L， KH2P04 1 g/L ， MgSO, 0. 5 g/L;置迴轉(zhuǎn)式搖床培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速 150 r/min， 28 'C振蕩培養(yǎng)5天得一級(jí)種子液。
4. 發(fā)酵罐種子液培養(yǎng)
發(fā)酵罐種子液培養(yǎng)基葡萄糖10g/L，玉米粉25 g/L，豆餅粉10g/L，KH2P04 1g/L， MgS0,0.5g/L。將長(zhǎng)好的一級(jí)種子液按10%接種量接種到發(fā)酵 罐種子液培養(yǎng)基，置迴轉(zhuǎn)式搖床培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速150 r/min， 28 "振蕩培養(yǎng)3 天得發(fā)酵罐種子液。
5. 發(fā)酵罐發(fā)酵 、
培養(yǎng)基葡萄糖20g/L，玉米粉5g/L，豆餅粉10g/L， KH2P041.5g/L， MgS04 1 g/L，泡敵O. 01%。
發(fā)酵條件為罐溫28。C，攪拌轉(zhuǎn)速160 r/min， pH值自然，接種量10%， 通氣量l: l.Ov/v/分，罐壓0.6公斤/厘米3，發(fā)酵時(shí)間為96小時(shí)。
6. 桑黃菌絲體黃酮的提取
放罐后的菌絲體經(jīng)板框壓濾后，于5(TC鼓風(fēng)干燥箱中干燥，干燥后的 菌絲體用70%的食用級(jí)乙醇(料液比l: 15)室溫浸泡24小時(shí)，過(guò)濾后保 留上清液，殘?jiān)儆?0%乙醇浸泡20小時(shí)，條件同上。合并兩次浸提液， 于40。C下減壓濃縮，蒸去大部分乙醇后，再加水繼續(xù)減壓濃縮，濃縮至原 體積的1/10，將濃縮液冷凍干燥得桑黃黃酮提取物。提取物真空包裝。 實(shí)施例二
用桑黃菌(尸力W"72^Z^Wffl^i'Pilat)菌種進(jìn)行發(fā)酵產(chǎn)桑黃黃酮的工藝過(guò)
程
1. 平板菌種培養(yǎng)
將保藏的斜面菌種接入新配制的PDA平板培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度26"C，培 養(yǎng)時(shí)間8天。
2. 搖瓶種子液培養(yǎng)
培養(yǎng)基PDA液體培養(yǎng)基。培養(yǎng)條件接種母種4塊，每塊0.5 cm2，置迴轉(zhuǎn)式搖床培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速 150r/min， 26 "C振蕩培養(yǎng)7天得搖瓶種子液。
3. —級(jí)種子培養(yǎng)-
搖瓶種子液勻漿后按10%接種量接種到液體菌種培養(yǎng)基，葡萄糖 20g/L,豆餅粉10g/L，歸CUg/L ， MgS0』.5g/L;置迴轉(zhuǎn)式搖床培養(yǎng)， 轉(zhuǎn)速160 r/min， 28 。C振蕩培養(yǎng)6天得一級(jí)種子液。
4. 發(fā)酵罐種子液培養(yǎng)
發(fā)酵罐種子液培養(yǎng)基葡萄糖10g/L，玉米粉20 g/L，豆餅粉5g/L， KH2P04 1g/L， MgS040.5g/L。將長(zhǎng)好的一級(jí)種子液按10%接種量接種到發(fā)酵 罐種子液培養(yǎng)基，置迴轉(zhuǎn)式搖床培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速160 r/min， 28 。C振蕩培養(yǎng)3 天得發(fā)酵罐種子液。
5. 發(fā)酵罐發(fā)酵
培養(yǎng)基葡萄糖15g/L，玉米粉5g/L，豆餅粉7g/L， KH2P041.5g/L， MgS04 1 g/L，泡敵0.01。/0。
發(fā)酵條件為罐溫26。C，攪拌轉(zhuǎn)速160 r/inin， pH值自然，接種量10%， 通氣量l: l.Ov/v/分，罐壓0.6公斤/厘米3，發(fā)酵時(shí)間為106小時(shí)。
6. 桑黃菌絲體黃酮的提取
放罐后的菌絲體經(jīng)板框壓濾后，于5(TC鼓風(fēng)干燥箱中干燥，干燥后的 菌絲體用70%的食用級(jí)乙醇(料液比1: 15)室溫浸泡24小時(shí)，過(guò)濾后保 留上清液，殘?jiān)儆?0%乙醇浸泡20小時(shí)，條件同上。合并兩次浸提液， 于4(TC下減壓濃縮，蒸去大部分乙醇后，再加水繼續(xù)減壓濃縮，濃縮至原 體積的1/10，將濃縮液冷凍干燥得桑黃黃酮提取物。提取物真空包裝。
實(shí)施例3抗氧化，清除自由基的作用實(shí)驗(yàn)
由上述實(shí)施例得到的桑黃菌絲體黃酮提取物對(duì)活性氧(02'—、 '0H、 H202) 均有明顯的抑制作用，在濃度為5Pg/mL時(shí)(V—的清除率達(dá)到62.67%;在濃度 為8Pg/mL時(shí)'0H的清除率達(dá)到67. 76%;在濃度為4)^/110相202的清除率達(dá)到
88. 25%。對(duì)上述自由基的清除率與總黃酮含量之間存在一定的量效關(guān)系。 桑黃菌絲體黃酮提取物中的黃酮含量越高對(duì)活性氧的清除率越高，清除作
用越強(qiáng)；說(shuō)明桑黃菌絲體中具有抗氧化作用的主要是黃酮類(lèi)物質(zhì)。
將桑黃黃酮作用于鰓鯉魚(yú)籽醬， 一周后表現(xiàn)出對(duì)魚(yú)籽醬的抗氧化作用。
在O. 5g魚(yú)籽醬中添加0. 05 mg桑黃黃酮， 一周后其抗氧化抑制率達(dá)到79. 8%，
陽(yáng)性對(duì)照BHA (叔丁基羥基茴香醚)的抑制率為89.5%。到第八天桑黃黃酮
的抗氧化能力表現(xiàn)接近于BHA，達(dá)到103%。桑黃黃酮對(duì)鰓鯉魚(yú)籽醬油脂的抗
氧化起到很好的效果。
實(shí)施例4抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的作用
按上述工藝生產(chǎn)得到的桑黃菌絲體黃酮提取物在體外對(duì)腫瘤細(xì)胞有抑 制作用。用桑黃黃酮100 ^Lg/ml作用于腫瘤細(xì)胞時(shí)，其對(duì)腫瘤細(xì)胞L1210的 抑制率為46%; 250 jLig/ffll時(shí)，對(duì)腫瘤細(xì)胞L1210的抑制率為82。/。。說(shuō)明桑黃 黃酮具有抑制腫瘤.細(xì)胞生長(zhǎng)的作用，且抑制作用隨著濃度的繒加而增加。
權(quán)利要求
1.一種桑黃黃酮，其特征在于該桑黃黃酮是通過(guò)以下提取方法制備得到的①對(duì)桑黃菌絲體進(jìn)行深層發(fā)酵培養(yǎng)；②對(duì)獲得的桑黃菌絲體用70％乙醇提取，獲得桑黃黃酮。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的桑黃黃酮，其特征在于所述的步驟①中對(duì)桑黃菌 絲體進(jìn)行深層發(fā)酵培養(yǎng)的具體步驟和條件為① 平板菌種培養(yǎng)將保藏的斜面菌種接入PDA平板培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度為26-30°C，培養(yǎng)時(shí)間7-10天；② 搖瓶種子液培養(yǎng)培養(yǎng)基PDA液體培養(yǎng)基；培養(yǎng)條件將步驟①中獲得的平板菌種接入PDA液體培養(yǎng)基中，置迴轉(zhuǎn)式搖床培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速150-160r/min， 28 。C培養(yǎng)5-8天得搖瓶種子液；③ 一級(jí)種子培養(yǎng)搖瓶種子液勻漿后按10%接種量接種到液體菌種培養(yǎng)基，置迴轉(zhuǎn)式搖床 培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速150-160 r/min， 28'C振蕩培養(yǎng)4-6天得一級(jí)種子液；其中液體菌種培養(yǎng)基為葡萄糖20-30g/L，豆餅粉10 g/L， KH2P041 g/L ， MgSO40.5 g/L;④ 發(fā)酵罐種子液培養(yǎng)將長(zhǎng)好的一級(jí)種子液按10%接種量接種到發(fā)酵罐種子液培養(yǎng)基，置迴轉(zhuǎn)式搖床培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速150-160 r/min， 28'C振蕩培養(yǎng)3 4天得發(fā)酵罐種子液；其中發(fā)酵罐種子液培養(yǎng)基為葡萄糖5 10g/L，玉米粉20 25 g/L，豆 餅粉5 10g/L， KH2P04 lg/L， MgSO40.5g/L;⑤發(fā)酵罐發(fā)酵發(fā)酵條件為罐溫26 28"，攪拌轉(zhuǎn)速100 180r/min， pH值自然，接 種量8~10%，通氣量為l: 0.1 h 1.5v/v/分，罐壓為0.2-0.8公斤/厘米3， 發(fā)酵周期為4~5天；其中培養(yǎng)基組成為葡萄糖20 30g/L，玉米粉5 10g/L，豆餅粉5~10 g/L， KH2P04 1.5~3 g/L， MgS04 1~1.5 g/L，泡敵0.01%。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2任一項(xiàng)所述的桑黃黃酮，其特征在于所述的步驟②中對(duì)桑黃菌絲體進(jìn)行乙醇提取的具體步驟為菌絲體經(jīng)板框壓濾后，于5(TC鼓風(fēng)干燥箱中干燥，然后于18-3(TC下在70%的食用級(jí)乙醇中浸泡12-48小時(shí)，其中料液比為1: 15，過(guò)濾后保留上清液，殘?jiān)儆?0%乙醇浸泡12-48小時(shí)；合并兩次浸提液，于4(TC下減壓濃縮，待蒸去大部分乙醇后，再加水繼續(xù)減壓濃縮，將濃縮液冷凍干燥得 桑黃黃酮提取物。
4. 一種制備權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述桑黃黃酮的方法，其特征在于該方法 包括如下步驟.-① 對(duì)桑黃菌絲體進(jìn)行深層發(fā)酵培養(yǎng)；② 對(duì)獲得的桑黃菌絲體用70%乙醇提取，獲得桑黃黃酮。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的桑黃黃酮，其特征在于所述的步驟①中對(duì)桑黃菌 絲體進(jìn)行深層發(fā)酵培養(yǎng)的具體步驟和條件為① 平板菌種培養(yǎng)將保藏的斜面菌種接入PDA平板培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度為 26-30°C，培養(yǎng)時(shí)間7-10天；② 搖瓶種子液培養(yǎng) 培養(yǎng)基PDA液體培養(yǎng)基；培養(yǎng)條件將步驟①中獲得的平板菌種接入PDA液體培養(yǎng)基中，置迴轉(zhuǎn)式搖床培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速150-160r/min， 28 "C培養(yǎng)5-8天得搖瓶種子液；③ 一級(jí)種子培養(yǎng)搖瓶種子液勻漿后按10%接種量接種到液體菌種培養(yǎng)基，置迴轉(zhuǎn)式搖床 培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速150-160 r/min, 28 "C振蕩培養(yǎng)4-6天得一級(jí)種子液；其中液體菌種培養(yǎng)基為葡萄糖20-30g/L，豆餅粉10 g/L， KH2P04 1 g/L ， MgSO40.5g/L;④ 發(fā)酵罐種子液培養(yǎng)將長(zhǎng)好的一級(jí)種子液按10%接種量接種到發(fā)酵罐種子液培養(yǎng)基，置迴轉(zhuǎn)式搖床培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速150-160 r/min， 28 "C振蕩培養(yǎng)3 4天得發(fā)酵罐種子液；其中發(fā)酵罐種子液培養(yǎng)基為葡萄糖5 10g/L，玉米粉20 25 g/L，豆 餅粉5 10g/L， KH2P04 lg/L， MgSO40.5g/L;(D發(fā)酵罐發(fā)酵發(fā)酵條件為罐溫26 28。C，攪拌轉(zhuǎn)速100-180r/min， pH值自然，接 種量8~10%，通氣量為l: 0.1 1: 1.5v/v/分，罐壓為0.2-0.8公斤/厘米3， 發(fā)酵周期為4 5天；其中培養(yǎng)基組成為葡萄糖20 30g/L，玉米粉5 10g/L，豆餅粉5~10 g/L， KH2P04 1.5 3 g/L， MgS04l 1.5g/L，泡敵0.01%。
6.根據(jù)權(quán)利要求4或5任一項(xiàng)所述的桑黃黃酮，其特征在于所述的步驟② 中對(duì)桑黃菌絲體進(jìn)行乙醇提取的具體步驟為菌絲體經(jīng)板框壓濾后，于50。C鼓風(fēng)干燥箱中干燥，然后于18-30。C下在 70%的食用級(jí)乙醇中浸泡12-48小時(shí)，其中料液比為1: 15，過(guò)濾后保留上 清液，殘?jiān)儆?0°/。乙醇浸泡12-48小時(shí)；合并兩次浸提液，于4(TC下減壓 濃縮，待蒸去大部分乙醇后，再加水繼續(xù)減壓濃縮，將濃縮液冷凍干燥得 桑黃黃酮提取物。
7. 權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述桑黃黃酮在制備抗氧化制劑中的應(yīng)用。
8. 權(quán)利要求l-3任一項(xiàng)所述桑黃黃酮在制備防衰老制劑中的應(yīng)用。
9. 權(quán)利要求l-3任一項(xiàng)所述桑黃黃酮在制備預(yù)防或治療腫瘤的藥物中的應(yīng) 用。
10. 權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述桑黃黃酮在制備添加劑中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種桑黃黃酮及其制備方法和用途，其中桑黃黃酮是通過(guò)深層發(fā)酵得到桑黃菌絲體，然后對(duì)菌絲體進(jìn)行乙醇提取得到。所制備的桑黃黃酮可用于制備抗氧化、抗衰老制劑，預(yù)防或治療腫瘤的藥物、添加劑。
文檔編號(hào)C12P1/02GK101182550SQ20071017048
公開(kāi)日2008年5月21日 申請(qǐng)日期2007年11月16日 優(yōu)先權(quán)日2007年11月16日
發(fā)明者劉艷芳, 帥 周, 唐傳紅, 唐慶九, 張勁松, 焱 楊, 薇 賈, 趙子高, 郝瑞霞 申請(qǐng)人:上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院