專利名稱：：清潔酶和芳香物的產(chǎn)生的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明提供包含?；D(zhuǎn)移酶和該酰基轉(zhuǎn)移酶的醇底物的組合物。在一些特別優(yōu)選實施方案中，組合物用于芳香酯的產(chǎn)生。在一些其他實施方案中，組合物用于衣物洗滌劑中以清潔包含至少一種甘油三酯的污物。在一些另外的實施方案中，組合物用于產(chǎn)生具有清潔性質(zhì)的化合物(例如表面活性劑酯)。
背景技術(shù)：
：當在含有脂肪酶的衣物洗滌劑中洗滌衣物，特別是污染了乳制品(例如，牛奶、冰淇^^或黃油)的衣物時，在干燥衣物后，類似于嬰兒"嘔出物"或哈喇的黃油的難聞氣味通常從織物中M出來。據(jù)認為，這種難聞的味道是由脂肪酶催化存在于織物和/或洗劑物中的短鏈甘油三酯(例如，含C4至Cu的甘油三酯)水解而產(chǎn)生的。該水解反應產(chǎn)生難聞的氣P未，揮發(fā)性的并且引起持久臭味的短鏈脂肪酸(例如，丁酸)。盡管在防止臭味和/或向洗滌的衣物賦予怡人的香氣方面進行了許多研究，但在本領(lǐng)域仍然需要解決該問題的洗衣組合物。發(fā)明概述本發(fā)明提供了包含?；D(zhuǎn)移酶和?；D(zhuǎn)移酶的醇底物的組合物。在一些特別優(yōu)選實施方案中，組合物用于芳香酯的產(chǎn)生。在一些其他實施方案中，組合物用于衣物洗滌劑中以清潔包含至少一種甘油三酯的污物。在一些另外的實施方案中，組合物用于產(chǎn)生具有清潔性質(zhì)的化合物(例如表面活性劑酯)。本發(fā)明提供了用于產(chǎn)生芳香酯的組合物，其包含下列組分SGNH?；D(zhuǎn)移酶、SGNH?；D(zhuǎn)移酶的醇底物和酰基供體，其中SGNH酰基轉(zhuǎn)移酶在水性環(huán)境中催化酰M?；w轉(zhuǎn)移至醇底物，從而產(chǎn)生芳香酯。在一些實施方案中，組合物是還包含芳香酯的水性組合物。在一些另外的實施方案中，醇底物和酰基供體經(jīng)選擇可以產(chǎn)生特定的芳香酯。在一些優(yōu)選實施方案中，?；w是d至C1()?；w。在一些備選的實施方案中，將SGNH酰基轉(zhuǎn)移酶固定在固相載體上。在一些另外的實施方案中，組合物是脫水的組合物，并且其中芳香酯在組合物再水化后產(chǎn)生。在一些另外的實施方案中，組合物是食品。在另外的實施方案中，組合物是包含至少一種表面活性劑的清潔組合物。在一些另外的實施方案中，組合物是包含過氧化氫的清潔組合物。本發(fā)明還提供了用于產(chǎn)生至少一種芳香酯的方法，其包括混合SGNH?；D(zhuǎn)移酶、SGNH?；D(zhuǎn)移酶的醇底物和?；w，其中SGNH?；D(zhuǎn)移酶催化酰M?；w至醇底物的轉(zhuǎn)移，從而產(chǎn)生至少一種芳香酯。在一些實施方案中，醇底物和?；w4皮選擇用于產(chǎn)生特定的芳香酯。在一些另外的實施方案中，?；w是C2至d。酰基供體。在另外的實施方案中，該方法包括在將組分混合后再水化這些組分。在一些備選實施方案中，再水化在咀嚼(mastication)過程中發(fā)生。在另外的實施方案中，在水性環(huán)境中混合SGNH?；D(zhuǎn)移酶、醇底物和?；w。在一些備選實施方案中，將SGNH?；D(zhuǎn)移酶固定在固相栽體上。本發(fā)明還提供了用于同時產(chǎn)生漂白劑和芳香物的方法，該方法包括混合SGNH?；D(zhuǎn)移酶、SGNH?；D(zhuǎn)移酶的醇底物和?；w，其中SGNH?；D(zhuǎn)移酶催化酰Mi^供體至醇底物的轉(zhuǎn)移，從而產(chǎn)生芳香物和漂白劑。在一些實施方案中，漂白劑是過酸。在一些特別優(yōu)選實施方案中，過^A過乙酸。在一些另外的優(yōu)選實施方案中，SGNH?；D(zhuǎn)移酶是恥垢分枝桿菌(Mwwe^wfl&)酰基轉(zhuǎn)移酶。在一些另外的優(yōu)選實施方案中，芳香物是酯。在一些另外的實施方案中，酯是伯醇的C2至C6酯。在另外的實施方案中，對污物施用漂白劑導致污物的去除。本發(fā)明提供了包含酰基轉(zhuǎn)移酶(例如，SGNH?；D(zhuǎn)移酶)和該?；D(zhuǎn)移酶的醇底物的清潔組合物。在一些此類實施方案中，酰基轉(zhuǎn)移酶和醇底物以在清潔組合物與包含?；w的物體接觸時有效地產(chǎn)生可檢測的酯的量存在。在一些實施方案中，清潔組合物還包含含有?；w的物體和酯，所述酯作為由?；D(zhuǎn)移酶催化的醇底物和?；w之間的反應的結(jié)果產(chǎn)生。在一些優(yōu)選實施方案中，?；w是d至do?；w。在一些其它實施方案中，清潔組合物還包含添加的與醇底物反應的?；w(例如，甘油三酯、脂肪酸酯等)。在一些特別優(yōu)選實施方案中，由組合物產(chǎn)生的酯是芳香酯、表面活性劑酯、表面活性劑或織物護理劑(fabriccareagent)或其組合。在一些實施方案中，包含?；w的物體是浮皮跣基供體污染的。在一些優(yōu)選實施方案中，酰基供體是含油物質(zhì)，例如動物脂肪、植物脂肪或乳制品等。在一些另外的優(yōu)選實施方案中，酰基供體和醇底物的組合導致芳香酯、表面活性劑酯、水溶性酯或織物護理劑或其任何組合的產(chǎn)生。事實上，本發(fā)明意欲提供這些益處的組合。在一些實施方案中，清潔組合物還包含至少一種酯酶。在一些另外的實施方案中，清潔組合物還包含至少一種表面活性劑和/或至少一種過氧化物源。在一些實施方案中，清潔組合物中的表面活性劑或乳化劑充當醇底物用于酰基轉(zhuǎn)移。在一些另外的實施方案中，本發(fā)明的清潔組合物還包含至少一種額外的酶，包括但不限于半纖維素酶、過氧化物酶、蛋白酶、纖維素酶、木聚糖酶、脂肪酶、磷脂酶、酯酶、角質(zhì)酶(cutinase)、果膠酶、果膠酸裂合酶(pectatelyase)、淀粉酶、甘露聚糖酶、角蛋白酶、還原酶、氧化酶、酚氧化酶、脂加氧酶、木質(zhì)素酶、支鏈淀粉酶、鞣酸酶、戊聚糖酶、malanases、P-葡聚糖酶、阿拉伯糖苷酶、透明質(zhì)酸酶、軟骨素酶、漆酶和淀粉酶或其混合物。在一些實施方案中，使用包含常規(guī)可應用的酶(如蛋白酶、脂肪酶、角質(zhì)酶和/或纖維素酶)以及酰基轉(zhuǎn)移酶的酶組合(即，"雞尾酒式混6合物，，)。在一些另外的實施方案中，清潔組合物還包,含至少一種表面活性劑、助洗劑、聚合物、鹽、漂白活化劑、溶劑、緩沖劑或香料等，如在本文中更詳細描述的。在一些實施方案中，清潔組合物是水性組合物。在一些優(yōu)選實施方案中，清潔組合物包含至少大約卯％的水(排除任何固體組分)。本發(fā)明還提供了利用本文中提供的清潔組合物的清潔方法。此類方法通常包括混合跳基轉(zhuǎn)移酶(例如，SGNH酰基轉(zhuǎn)移酶)、?；D(zhuǎn)移酶的醇底物和被含有酰基供體的物質(zhì)污染的物體(例如，織物)，其中?；D(zhuǎn)移酶催化酰^酰基供體至醇底物的轉(zhuǎn)移，從而產(chǎn)生酯。在一些實施方案中，物體被含油物質(zhì)(例如，含有三?；视王サ奈镔|(zhì)，例如包含C4-ds三酰基甘油酯的物質(zhì))污染。在一些優(yōu)選實施方案中，組合含油物質(zhì)和醇，產(chǎn)生的酯是芳香酯，而在其他實施方案中，產(chǎn)生非芳香酯，在其他實施方案中，產(chǎn)生表面活性劑或其他織物護理劑或這些酯的組合。在一些此類實施方案中，酰基轉(zhuǎn)移酶的使用減少通常由于甘油三酯的水解產(chǎn)生的臭味的量，其中該酶與脂肪酶協(xié)同作用從而增加?；湉娜８视偷娜コ俾?；和/或?qū)Ⅴ；溸B接至醇底物，從而形成酯產(chǎn)物而不是揮發(fā)性脂肪酸。.在一些特別優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明還提供了用于產(chǎn)生芳香酯的組合物。在一些實施方案中，組合物包含?；D(zhuǎn)移酶(例如，SGNH?；D(zhuǎn)移酶)、?；D(zhuǎn)移酶的醇底物和?；w，其中?；D(zhuǎn)移酶在水性環(huán)境中催化?；鶑孽；w至醇底物的轉(zhuǎn)移，從而產(chǎn)生芳香酯。在一些特別優(yōu)選實施方案中，醇底物和?；w用于產(chǎn)生特定的芳香酯。在一些實施方案中，組合物是還包含芳香酯的水性組合物。在一些其他實施方案中，組合物是脫水的組合物，其中芳香酯在隨后組合物的再7jc化時產(chǎn)生。在一些實施方案中，?；w為醇底物提供d至d。?；?。在一些特別優(yōu)選實施方案中，用于產(chǎn)生芳香酯的組合物是清潔組合物。在一些實施方案中，將?；D(zhuǎn)移酶固定在固相載體上。在一些另外的實施方案中，組合物包括食品。在一些其他實施方案中，組合物是清潔組合物。在一些另外的實施方案中，組合物還包含至少一種表面活性劑。本發(fā)明還提供了利用本文中提供的組合物產(chǎn)生至少一種芳香酯的方法。一般說來，這些方法包括混合酰基轉(zhuǎn)移酶(例如，SGNH?；D(zhuǎn)移酶)、?；D(zhuǎn)移酶的醇底物和?；w，其中?；D(zhuǎn)移酶催化酰基從?；w至醇底物的轉(zhuǎn)移，從而產(chǎn)生芳香酯。在一些實施方案中，醇底物和?；w產(chǎn)生特定的芳香酯。在其中組合物是脫水組合物的一些實施方案中，該方法還包括在混合組分后再水化組分的步驟。在一些實施方案中，再水化通過加入任何適宜的水性介質(zhì)(包括水、奶或唾液)來發(fā)生。因此，在一些實施方案中，再7jc化在咀嚼過程中發(fā)生，從而釋放芳香酯。在一些其它實施方案中，在水性環(huán)境中混合醇底物和?；w。附圖概述當結(jié)合附圖一起閱讀時，下列詳細描述的某些方面可以得到最好的理解。要強調(diào)的是，根據(jù)通常的實踐，附圖的各個特征不是按比例繪制的。相反，為了清楚起見，各特征的尺寸可以任意地放大或縮小。圖l顯示使用甘油三丁酸酯和兩種酰基轉(zhuǎn)移酶將順-3-己烯醇、2-苯基乙醇和2-甲基-l-丁醇轉(zhuǎn)化成它們各自的丁?；ァD2顯示在第10、30和120分鐘比較?；D(zhuǎn)移酶(AcT)的游離和溶膠-凝膠(sol-gel)包封的形式利用甘油三乙酸酯對順-3-己烯醇的酯化。圖3提供了一組LC/MS數(shù)據(jù)圖，顯示在洗滌劑背景中使用甘油三丁酸酯和AcT對四甘醇進行的轉(zhuǎn)酯。圖4提供了一組LC/MS數(shù)據(jù)圖，顯示在洗滌劑背景中使用甘油三丁酸酯和AcT對"C-U-甘油進行的轉(zhuǎn)酯。圖5顯示在脂肪酶和AcT存在的情況下從乳脂和苯曱醇產(chǎn)生丁酸卡酯。圖6提供了用于從乳脂產(chǎn)生芳香酯的示例性方法的圖解。圖7提供了用1)KLM3突變體pLA231和2)對照從蛋黃/山梨糖醇的溫育中產(chǎn)生的脂質(zhì)的TLC分析結(jié)果。在該圖中，"PE，，是磷脂酰乙醇胺，"PC，，是磷脂酰膽堿。圖8提供了樣品2467-112-1(用KLM3，pLA231處理的蛋黃/山梨糖醇)的GLC色i昝圖。圖9提供了樣品2467-112-2(蛋黃/山梨糖醇對照樣品)的GLC色語圖。圖10提供了從GrindstedSMO鑒定的山梨糖醇單油酸酯的GLC/MS譜和在用KLM3pLA231處理的蛋黃/山梨糖醇(2467-112-l)中鑒定到的該峰的MS傳。發(fā)明詳述本發(fā)明提供了包含酰基轉(zhuǎn)移酶和?；D(zhuǎn)移酶的醇底物的組合物。在一些特別優(yōu)選實施方案中，組合物用于產(chǎn)生芳香酯。在一些其他實施方案中，組合物用于衣物洗滌劑中以清潔包含至少一種甘油三酯的污物。在一些另外的實施方案中，組合物用于產(chǎn)生具有清潔性質(zhì)的化合物(例如，表面活性劑酯)。除非另外指出，本發(fā)明的某些方面的實踐牽涉通常用于分子生物學、孩吏生物學、蛋白質(zhì)純化、蛋白質(zhì)工程、蛋白質(zhì)和DNA測序以及重組DNA領(lǐng)域的常規(guī)技術(shù)，所述技術(shù)在本領(lǐng)域技術(shù)人員的能力范圍之內(nèi)。本文(上文和下文)中提及的所有專利、專利申請、文章和出版物通過引用明確地合并入本文。此外，本文中提供的小標題不構(gòu)成對本發(fā)明的各個方面或?qū)嵤┓桨傅南拗疲景l(fā)明的各個方面或?qū)嵤┓桨缚梢詤⒖急菊f明書整體而獲得。因此，緊接下面給出的術(shù)語將參照本說明書的整體得到更全面的定義。然而，為了方便理解本發(fā)明，在下面定義了一些術(shù)語。定義除非在本文中另外定義，本文中使用的所有技術(shù)和科學術(shù)語具有本發(fā)明所屬領(lǐng)域技術(shù)人員通常理解的含義。雖然本文中描述了示例性方法和材于本文中所描述的本發(fā)明的實踐。如本文中所使用的，除非上下文明確另外指出，單數(shù)術(shù)語"a"、"an"和"the"包括對復數(shù)的提及。除非另外指出，分別地，核酸以5'至3'方向從左至右書寫；M酸序列以從氨基至氛基的方向從左至右書寫。要理解，本發(fā)明不局限于描述的特定的方法、方案和試劑，因為取決于本領(lǐng)域技術(shù)人員使用它們的背景，它們可發(fā)生變化。在整個本說明書中給出的每一個最大的數(shù)值限都旨在包括每一個較小的數(shù)值限，就如同在本文中明確地寫出了這些較小的數(shù)值限一樣。在整個本發(fā)明書中給出的每一個最小的數(shù)值限都將包括每一個較大的數(shù)值限，就如同在本文中明確寫出了這些較大的數(shù)值限一樣。在整個本說明書中給出的每一個數(shù)值范圍都將包括落在該較寬的數(shù)值范圍內(nèi)的每一個較窄的數(shù)值范圍，就如同在本文中明確地寫出了這些較窄的數(shù)值范圍一樣。如本文中所使用的，術(shù)語"?；?，，指式(IKX)-)的有機基團。如本文中所使用的，術(shù)語"?；?是指通常通過用?；脫Q底物的-OH基的氫，將?；?RCO-)從一個分子("?；w")轉(zhuǎn)移至另一個分子("底物")的化學反應。如本文中所用的，術(shù)語"?；w，，是指在?；D(zhuǎn)移酶反應中供給?；姆肿?。如本文中所使用的，術(shù)語"醇底物"是指包含與碳原子結(jié)合的反應性羥基(-OH)的任何有機分子。該術(shù)語不包括多糖和蛋白質(zhì)。水不是醇底物。示例性醇底物包括但不限于脂族醇、脂環(huán)族或芳族醇、薛烯醇和多元醇，包括單體、二聚、三聚和四聚多元醇。在一些實施方案中，醇包含多個羥基。醇底物能夠在下面描述的?；D(zhuǎn)移酶反應中接受?；?。在一些實施方案中，醇是伯醇、仲醇或叔醇。如本文中所使用的，術(shù)語"轉(zhuǎn)移酶"是指催化官能化合物轉(zhuǎn)移至一系列底物的酶。本文中使用的術(shù)語"酖基轉(zhuǎn)移酶"是指能夠?qū)Ⅴ?；w(例如，脂質(zhì))轉(zhuǎn)移至醇底物的通常分類為E.C.2丄l.x的任何酶。如本文中所使用的，術(shù)語"GDSX酰基轉(zhuǎn)移酶"是指具有獨特活性位點的?；D(zhuǎn)移酶，該活性位點包含GDSX序列基序(其中X通常是L)(通常靠近N端)。GDSX酶具有5個共有序列(I-V)。此類酶是已知的(參見例如，Upton等人，TrendsBiochem.Sci.，20:178-179[1995];和Akoh等人，Prog.LipidRes"43:534-52[2004)。GDSX?；D(zhuǎn)移酶的一個亞組在共有序列中包含保守的SG和H殘基。此類GDSX?；D(zhuǎn)移酶是"SGNH?；D(zhuǎn)移酶"。如本文中所使用的，術(shù)語"SGNH?；D(zhuǎn)移酶，，是指SGNH水解酶家族的酰基轉(zhuǎn)移酶，其中該SGNH水解酶家族的成員包含SGNH水解酶類的酯酶結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域具有三層a/p/a結(jié)構(gòu)，其中p折疊由5個平行鏈組成。包含該結(jié)構(gòu)域的酶用作酯酶、脂肪酶和酰基轉(zhuǎn)移酶，但與經(jīng)典的脂肪酶幾乎沒有序列同源性(參見，Akoh等人，Prog.LipidRes"43:534-52004〗；和Wd等人，Nat.Struct,Biol"2:218-221995)。已在許多物種中發(fā)現(xiàn)包含SGNH水解酶類的酯酶結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)，其包括但不限于來自齊痂病鏈霉菌(^/"印似附^esMflWes)的酯酶(參見，Sheffield等人，ProteinEng.,14:513-519[2001)；來自C型流感病毒、冠狀病毒和環(huán)狀病毒的病毒血細胞凝集素-酯酶表面糖蛋白的酯酶(參見，Molgaard等人，ActaCrystallogr.D58:111-119[2002]);哺乳動物乙酰水解酶(參見，Lo等人，J.Mol.Biol.，330:539-551[2003)；真菌鼠李糖半乳糖醛酸聚糖乙酰酯酶(參見，Molgaard等人，Structure8:373-382000)；和來自大腸桿菌(Esc^r/c/^fco//)的多功能酶硫酯酶I(TAP)(參見，Molgaard等人，ActaCrystallogr.D60:472-478[2004)。SGNH水解酶類酯酶結(jié)構(gòu)域包含穩(wěn)定其催化中心的獨特的氫鍵網(wǎng)絡。在一些優(yōu)選實施方案中，它們包含保守的Ser/Asp/His催化三聯(lián)體。SGNH?；D(zhuǎn)移酶也以登錄號cd01839.3描述于GENBANK⑧數(shù)據(jù)庫的保守結(jié)構(gòu)域數(shù)據(jù)庫(通過引用合并入本文)中。SGNH?；D(zhuǎn)移酶在與酰基供體接觸時形成?；?酶中間體，之后將酰基轉(zhuǎn)移給非水受體。如本文中所使用的，術(shù)語"經(jīng)典脂肪酶"是指具有脂肪酶活性和包含活性位點絲氨酸的特征性GXSXG基序的酶(參見，例如，Derewenda等人，BiochemCellBiol.，69:842-51[1991])。在一些實施方案中，經(jīng)典脂肪酶是對于三酰基甘油酯的snl和sn3位置具有特異性的三?；视王ブ久浮GNH?；D(zhuǎn)移酶和GDSL?；D(zhuǎn)移酶具有相似的結(jié)構(gòu)，并且兩者在結(jié)構(gòu)上與經(jīng)典脂肪酶均不同。本文中使用的術(shù)語"轉(zhuǎn)酯"是指酶催化的酰J^脂質(zhì)供體(非游離脂肪酸)至酰基受體(非水)的轉(zhuǎn)移。如本文中所使用的，術(shù)語"醇解"是指酶催化的通過與醇ROH反應導致的酸衍生物的共價鍵的斷裂，從而產(chǎn)物中的一個與醇的H結(jié)合，而另一個產(chǎn)物與醇的OR基結(jié)合。如本文中所使用的，術(shù)語"水解"是指酶催化的?；鶑闹|(zhì)至水分子的OH基的轉(zhuǎn)移。在本文中，術(shù)語"水性"，如在短語"水性組合物，，和"水性環(huán)境，，中所使用的，是指由至少大約50。/。的水組成的組合物。在一些實施方案中，水性組合物包含至少大約50%的水、至少大約60%的水、至少大約70%的水、至少大約80%的水、至少大約卯％的水，至少大約95%的水或至少大約97%的水。在一些實施方案中，水性組合物的其余部分包含至少一種醇。在一些優(yōu)選實施方案中，術(shù)語"水性"，是指與蒸餾水相比較，具有至少大約0.75、至少大約0.8、至少大約0.9或至少大約0.95的水分活度(Aw)的組合物。如本文中所使用的，術(shù)語"芳香酯，，是指具有怡人的芳香或味道的酯。該術(shù)語包括芳香酯和有香味的酯。此類酯在本領(lǐng)域內(nèi)是熟知的。如本文中所^吏用的，術(shù)語"織物護理劑"是指對織物具有清潔性質(zhì)和/或提供益處的化合物。此類化合物包括表面活性劑和乳化劑。在一些實施方案中織物護理劑賦予柔化、織物觸感改善、脫毛(de-pilling)、顏色保持等益處。如本文中所使用的，術(shù)語"表面活性劑酯"是指具有表面活性劑性質(zhì)的酯，其中表面活性劑是降低液體的表面張力的化合物。如本文中所使用的，術(shù)語"可檢測的香氣"是指可被人的鼻子或味蕾檢測到的芳香酯的量。以只能祐A譜儀檢測但不能^LA鼻子或味蕾檢測到的量存在的芳香酯是不可檢測的香氣。如本文中所使用的，術(shù)語"物體"是指待清潔的物品。本發(fā)明意在包括任何適宜清潔的物體，包括但不限于織物(例如，衣物)、室內(nèi)裝飾品、地毯、硬表面(例如，工作臺面、地板等)或餐具(例如，盤子、杯子、碟子、碗、刀具、4艮器等)。如本文中所使用的，術(shù)語"玷污的"或"污染的"是指臟的物體。對于被污染的物體，污物不必是人眼可見的。例如，玷污的或污染的物體可以指含有來自動物(例如，乳制品)、植物、人汗等的油脂物質(zhì)的物體(例如，織物)。如本文中所使用的，術(shù)語"乳制品"是指乳(例如，全脂、減脂、脫脂乳或酪乳(buttermilk))或從其制造的產(chǎn)品例如任何類型的干酪(例如，乳脂干酪、硬干酪、軟干酪等)、黃油、酸奶和冰淇淋。事實上，本發(fā)明無意局限于任何特定的乳制品，因為該定義包括任何基于乳的產(chǎn)品。如本文中所使用的，術(shù)語"含有酰基供體的物體"是指包含?；w(例如，甘油三酯)的物體。在一些實施方案中，?；鶅€沐以污染物形式存在。如本文中所使用的，術(shù)語"固定"，在固定化酶的情況下，是指附著(例如，固定)至基質(zhì)(例如，固體或半固體栽體)上而非游離于溶液中的酶。如本文中所使用的，術(shù)語"在溶液中"是指未被固定在基質(zhì)上的游離于液體組合物中的分子(例如，酶)。如本文中所使用的，術(shù)語"有效的量，，和"有效量"在短語"有效地產(chǎn)生可檢測的酯的量"中是指組分(例如，酶、底物、?；w或其任何組合)的量在所使用的條件下能產(chǎn)生期望產(chǎn)物。如本文中所使用的，術(shù)語"過氧化氫源，，包括過氧化氫以及可自發(fā)或酶促產(chǎn)生過氧化氫作為反應產(chǎn)物的系統(tǒng)的組分。如本文中所使用的，"個人護理產(chǎn)品"是指用于清潔、漂白和/或消毒頭發(fā)、皮膚、頭皮和牙齒的產(chǎn)品，包括但不限于洗發(fā)香波、身體乳液(bodylotion)、洗浴凝膠、局部保濕液(topicalmoisturizer)、牙骨和/或其他局部清潔劑。在一些特別的實施方案中，此類產(chǎn)品用于人，而在其他實施方案中，此類產(chǎn)品用于非人動物(例如，用于獸醫(yī)應用)。如本文中所使用的，"清潔組合物"和"清潔制劑"是指用于從待清潔的物品例如織物、餐具、隱形眼鏡、其他固體基質(zhì)、頭發(fā)(洗發(fā)香波)、皮膚(皂和骨)、牙齒(漱口劑、牙膏)等上除去不期望的化合物的組合物。該術(shù)語包括選擇用于期望的特定類型的清潔組合物和產(chǎn)品形式(例如，液體、凝膠、顆?；驀婌F組合物)的任何材料/化合物，只要該組合物與存在于組合物中的?；D(zhuǎn)移酶和任何其他酶和/或組分相容即可。通過考慮待清潔的物體/表面和對于應用過程中應用的清潔條件而言期望的組合物形式，可容易地具體選擇清潔組合物材料。該術(shù)語還指適用于對任何物體和/或表面進行清潔、漂白、消毒和/或滅菌的任何組合物。該術(shù)語意在包括但不限于洗滌劑組合物(例如，液體和/或固體洗衣洗滌劑和精細織物洗滌劑；適合用于清潔玻璃、木頭、陶乾和金屬工作臺面和窗戶等的硬表面清潔制劑；地趙清潔劑；炊具清潔劑；織物清新劑(freshener);織物軟化劑；紡織品和衣物預去斑劑(pre-spotter)以及餐具洗滌劑)。事實上，除非另外指出，本文中使用的術(shù)語"清潔組合物"包括顆?；蚍勰┬问降耐ㄓ没蛑匾坌?heavy-duty)洗滌劑，特別地清潔洗滌劑；液體、凝膠或糊劑形式的通用洗滌劑，特別地重;(殳型液體洗滌劑(HDL)類型；液體精細織物洗滌劑；手洗餐具洗滌劑或輕役型餐具洗滌劑，特別地高泡型的；機用餐具洗滌劑，包括家庭和公共場所使用的各種片劑、顆粒劑、液體和漂清助劑類型；液體清潔和消毒劑，包括抗細菌手洗類型、清潔棒、漱口劑、假牙清潔劑、汽車或地毯液體洗滌劑、浴室清潔劑；頭發(fā)香波和護發(fā)素；淋浴露和泡沫浴和金屬清潔劑；以及清潔助劑例如漂白添加劑和"去污棒"、"預處理"和/或"預洗"類型。如本文中所使用的，術(shù)語"洗滌劑組合物"和"洗滌劑制劑"指旨在于清潔被污染物體的洗滌介質(zhì)中使用的混合物。在一些實施方案中，該術(shù)語用于指洗滌織物和/或衣物(例如，"洗衣洗滌劑")。在一些備選實施方案中，該術(shù)語指其他洗滌劑，例如用于清潔盤子、銀器、刀具等的洗滌劑(例如，"餐具洗滌劑")。本發(fā)明無意局限于任何特定的洗滌劑制劑或組合物。事實上該術(shù)語旨在涵蓋，除了酰基轉(zhuǎn)移酶外，還包含表面活性劑、其他轉(zhuǎn)移酶、水解酶和其他酶、氧化還原酶、助洗劑、漂白劑、漂白活化劑、上藍劑和熒光染料、抗結(jié)塊劑(cakinginhibitor)、掩蔽劑、酶激活劑、抗氧化劑和/或增溶劑的洗滌劑。如本文中所使用的，術(shù)語"硬表面清潔組合物"是指用于清潔硬表面例如地板、工作臺面、櫥拒、墻壁、瓷磚、浴室和廚房設備等的洗滌劑組合物。此類組合物可以以任何形式提供，包括但不限于固體、液體、乳劑等。如本文中所使用的，"餐具洗滌組合物"是指用于清潔餐具和旨在用于食物消費和/或食物處理的其他器具的所有組合物形式，包括但不限于凝膠、顆粒和液體形式。如本文中所使用的，"織物清潔組合物"是指用于清潔織物的所有洗滌劑組合物形式，包括但不限于凝膠、顆粒、液體和棒狀(bar)形式。如本文中所使用的，"紡織品"是指機織織物以及適于轉(zhuǎn)化成或用作紗、機織織物、針織織物和無紡織物的人造纖維和絲。該術(shù)語涵蓋從天然的以及合成的(例如，制造的)纖維制成的紗。如本文中所4吏用的，"紡織品材料"是纖維、紡紗半制品、紗、織物和由織物制造的產(chǎn)品(例如，衣物和其他物品)的一般術(shù)語。如本文中所^使用的，"織物，，包括任何紡織品材料。因此，該術(shù)語意在包括衣物、以及織物、紗、纖維、無紡材料、天然材料、合成材料和任何其他紡織品材料。如本文中所使用的，術(shù)語"相容的"是指清潔組合物材料不使?；D(zhuǎn)移酶的酶促活性減少至不如在正常使用狀況下期望的那樣有效的程度。在下文中詳細地舉例說明了具體的清潔組合物材料。如本文中所使用的，"酶的有效量"是指獲得特定應用(例如，個人護理產(chǎn)品、清潔組合物等)中所需的除&活性所必需的酶的量。這樣的有效量可由本領(lǐng)域技術(shù)人員容易地確定并且基于許多因素，例如使用的具體的酶或變體、清潔應用、清潔組合物的具體組成以及需要液體、凝膠還是干燥(例如，顆粒、棒狀)組合物等。如本文中所使用的，"非織物清潔組合物"包括硬表面清潔組合物、餐具洗滌組合物、個人護理清潔組合物(例如，口腔清潔組合物、假牙清潔組合物、個人清潔組合物等)以及適合用于紙漿和造紙工業(yè)的組合物。如本文中所使用的，術(shù)語"酶轉(zhuǎn)化"是指通過將底物或中間體與酶接觸來將底物^"飾成中間體或?qū)⒅虚g體修飾成終產(chǎn)物。在一些實施方案中，通過直接將底物或中間體暴露于合適的酶來進行接觸。在一些其他實施方案中，接觸包括將底物或中間體暴露于生物，所述生物可以表達和/或分泌酶和/或?qū)⑵谕牡孜锖?或中間體分別代謝成期望的中間體和/或終產(chǎn)物。如本文中所使用的，"目的蛋白質(zhì)"是指正在分析、鑒定和/或修飾的蛋白質(zhì)(例如，酶或"目的酶")。天然發(fā)生的以及重組的目的蛋白均可以用于本發(fā)明。如本文中所4吏用的，"蛋白質(zhì)"是指由氨基酸組成的并且被本領(lǐng)域技術(shù)人員公認為蛋白質(zhì)的任何組合物。術(shù)語"蛋白質(zhì)"、"肽"和多肽在本文中可互換使用。當肽是蛋白質(zhì)的一部分時，本領(lǐng)域技術(shù)人員理解該術(shù)語在上下文中的用法。如本文中所^^用的，功能和/或結(jié)構(gòu)相似的蛋白質(zhì)被認為是"關(guān)聯(lián)蛋白"。在一些實施方案中，這些蛋白質(zhì)來源于不同的屬和/或種，包括生物種類之間的差異(例如，細菌蛋白質(zhì)和真菌蛋白質(zhì))。在另外的實施方案中，關(guān)聯(lián)蛋白由相同物種提供。事實上，本發(fā)明無意局限于來源于任何特定來源的關(guān)聯(lián)蛋白。此外，術(shù)語"關(guān)聯(lián)蛋白"包括三級結(jié)構(gòu)同源物和一級序列同源物。在另外的實施方案中，該術(shù)語包括免疫交叉反應的蛋白質(zhì)。如本文中所^使用的，術(shù)語"衍生物"是指通過向C和N末端的任一端或兩端加入一個或多個氨基酸、在JL^酸序列內(nèi)的一個或多個不同位置置換一個或多個氨基酸、和/或在蛋白質(zhì)的任一端或兩端或在M酸序列內(nèi)的一個或多個位置缺失一個或多個氨基酸、和/或在氨基酸序列內(nèi)的一個或多個位置插入一個或多個M酸而從蛋白質(zhì)衍生的蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)衍生物的制備可通過改變編》馬天然蛋白質(zhì)的DNA序列，將該DNA序列轉(zhuǎn)化入適當?shù)乃拗鳎缓蟊磉_經(jīng)改變的DNA序列以形成衍生蛋白質(zhì)來進行。關(guān)聯(lián)(和衍生)蛋白質(zhì)包括"變體蛋白質(zhì)"。在一些實施方案中，變體蛋白質(zhì)與親本蛋白質(zhì)之間以及彼此之間相差少數(shù)M酸殘基。相異的氨基酸殘基的數(shù)目可以是一個或多個(例如，大約l、大約2、大約3、大約4、大約5、大約IO、大約15、大約20、大約30、大約40、大約50或更多個)氨基酸殘基。在一些實施方案中，變體之間不同的氨基酸的數(shù)目在大約1至大約10個之間。在一些特定的實施方案中，關(guān)聯(lián)蛋白質(zhì)，特別地變體蛋白質(zhì)包含至少大約35。/。、大約40%、大約45%、大約50%、大約55%、大約60%、大約65%、大約70%、大約75%、大約80%、大約85%、大約90%、大約95%、大約97%、大約98%或大約99%的>^酸序列同一性。此外，本文中使用的關(guān)聯(lián)蛋白質(zhì)或變體蛋白質(zhì)還指與另一個關(guān)聯(lián)蛋白質(zhì)或親本蛋白質(zhì)的不同之處在主要區(qū)域(prominentregion)的數(shù)目上不同的蛋白質(zhì)。例如，在一些實施方案中，變體蛋白質(zhì)具有大約l、大約2、大約3、大約4、大約5或大約IO個與親本蛋白質(zhì)不同的相應主要區(qū)域。適合用于產(chǎn)生本發(fā)明酶的變體的幾個方法在本領(lǐng)域內(nèi)是已知的，包括但不限于點飽和豫變(site-saturationmutagenesis)、掃描請變(scanningmutagenesis)、插入i秀變、隨機i秀變、定向i秀變和定向進化(directed-evolution)以及各種其他的重纟且方法。在一些實施方案中，對同源蛋白質(zhì)工程改造以產(chǎn)生具有期望活性的酶。在一些實施方案中，經(jīng)工程改造的蛋白質(zhì)落入SGNH水解酶蛋白質(zhì)家族內(nèi)。在一些實施方案中，經(jīng)工程改造的蛋白質(zhì)包含下列保守殘基中的至少一個或其組合L6、W14、W34、L38、R56、D62、L74、L78、H81、P83、M90、K97、GllO、L114、L135、F180、G205。在備選實施方案中，此類經(jīng)工程改造的蛋白質(zhì)包含GDSL-GRTT和/或ARTT基序。在另外的實施方案中，酶是多聚體，包括但不限于二聚體、八聚體和四聚體。在一些實施方案中，為了確定與一級結(jié)構(gòu)的同源性，將酰基轉(zhuǎn)移酶的氨基酸序列直接與序列已知的?；D(zhuǎn)移酶的一級氨基酸序列比較和與已知在所有?；D(zhuǎn)移酶中不變的一組殘基比較。在比對(align)保守殘基后(為了保持比對，允許進行必要的插入和缺失，即，通過任意的缺失和插入來避免保守殘基的消除)，定義與?；D(zhuǎn)移酶的一級序列中的特定氛基酸等同的殘基。在一些實施方案中，通過保守殘基的比對來定義100%的等同殘基。然而，大于大約75%或少至大約50%的保守殘基的比對也足以定義等同殘基。在一些實施方案中，催化性絲氨酸和組氨酸殘基的保守性得到保持。在一些實施方案中，保守殘基用于在其他酰基轉(zhuǎn)移酶(例如，來自其他分枝桿菌屬(AfycMflcteW"加)物種以及任何其他生物的?；D(zhuǎn)移酶)中定義恥垢分枝桿菌?；D(zhuǎn)移酶的相應等同氨基酸殘基。在本發(fā)明的一些實施方案中，修飾在WO05/056782中提供的編碼恥垢分枝桿菌?；D(zhuǎn)移酶的DNA序列。在一些實施方案中，修飾下列殘基Cys7、AsplO、Serll、Leul2、Thrl3、Trpl4、Trpl6、Pro24、Thr25、Leu53、Ser54、Ala55、Thr64、Asp65、Arg67、Cys77、Thr91、Asn94、Asp95、Tyr99、Val125、Pro138、Leul40、Pro146、Pro148、Trpl49、Phel50、Ilel53、Phel54、Thrl59、Thrl86、Ilel92、Ilel94和Phel96。然而，本發(fā)明無意局限于在這些位置上進行修飾的序列。事實上，本發(fā)明意欲包括各種修飾和修飾的組合。在一些另外的實施方案中，針對三級和四級結(jié)構(gòu)已通過X射線晶體學確定的?；D(zhuǎn)移酶，通過在三級和四級結(jié)構(gòu)水平上確定同源性來定義等同殘基。在此情況下，"等同殘基"定義為這樣的殘基，在比對后，對于該殘基，羰基水解酶和恥垢分枝桿菌酰基轉(zhuǎn)移酶的特定氨基酸殘基的兩個或更多個主鏈原子的原子坐標(N對N、CA對CA、C對C和O對O)在大約0.13nm和大約O.lnm之內(nèi)。在確定最佳模型的取向和位置從而使得所論及的酰基轉(zhuǎn)移酶與恥垢分枝桿菌?；D(zhuǎn)移酶的非氫蛋白質(zhì)原子的原子坐標達到最大重疊后，實現(xiàn)所述比對。如本領(lǐng)域內(nèi)已知的，最佳才莫型是對于可獲得的最高分辨率下的實驗衍射數(shù)據(jù)給出最低R因子的晶體學模型。與恥垢分枝桿菌酰基轉(zhuǎn)移酶的特定殘基在功能和/或結(jié)構(gòu)上類似的等同殘基定義為該?；D(zhuǎn)移酶中優(yōu)先采用如下構(gòu)象的氨基酸，所述構(gòu)象使得這些氨基酸可以以確定于和歸因于恥垢分枝桿菌?；D(zhuǎn)移酶的特定殘基的方式改變、修飾或調(diào)節(jié)該蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)，從而實現(xiàn)底物結(jié)合和/或催化的變化。此外，等同殘基是酖基轉(zhuǎn)移酶(在已通過X射線晶體學獲得三級結(jié)構(gòu)的情況下)中的這些殘基，所述殘基占據(jù)類似位置，以致于盡管該給定的殘基的主鏈原子可能不滿足以占據(jù)同源位置為^5出的等同性標準，但該殘基的至少兩個側(cè)鏈原子的原子坐標位于恥垢分枝桿菌?；D(zhuǎn)移酶的相應側(cè)鏈原子的0.13nm內(nèi)。恥垢分枝桿菌?；D(zhuǎn)移酶的三維結(jié)構(gòu)的坐標已被測定并且示于WO05/056782的實施例14中，并且如上概述的，其可以用于在三級結(jié)構(gòu)的水平上確定等同殘基。野生型和突變型蛋白質(zhì)的表征可以通過任何合適的方法來進行并且優(yōu)選基于對目的性質(zhì)的評估來進行。例如，在本發(fā)明的一些實施方案中測定pH和/或溫度以及洗滌劑和/或氧化穩(wěn)定性。事實上，考慮使用在一個或多個此類特征(pH、溫度、蛋白水解穩(wěn)定性、洗滌劑穩(wěn)定性和/或氧化穩(wěn)定性)中具有不同程度的穩(wěn)定性的酶。如本文中所使用的，"相應于"是指在蛋白質(zhì)或肽中于所計數(shù)的位置上的殘基，或與蛋白質(zhì)或肽中所計數(shù)的殘基類似、同源或等同的殘基。如本文中所使用的，"相應區(qū)域"通常是指根據(jù)關(guān)聯(lián)蛋白質(zhì)或親本蛋白質(zhì)的類似位置。術(shù)語"編碼......的核酸分子"、"編碼......的核酸序列"、"編碼......的DNA序列"和"編碼......的DNA，，是指沿著脫氧核糖核酸鏈的脫氧核糖核苷酸的順序或序列。這些脫氧核糖核苷酸的順序確定了氨基酸沿著多肽(蛋白質(zhì))鏈的順序。因此該DNA序列編碼該^J^酸序列。如本文中所使用的，術(shù)語"類似序列"是指蛋白質(zhì)中提供與目的蛋白質(zhì)(即，通常為初始目的蛋白質(zhì))相似的功能、三級結(jié)構(gòu)和/或保守殘基的序列。例如，在包含a螺旋或P折疊結(jié)構(gòu)的表位區(qū)域中，類似序列中的替代氨基酸保持相同的特定結(jié)構(gòu)。該術(shù)語還指核苷酸序列和氨基酸序列。在一些實施方案中，產(chǎn)生類似序列，其中替代M酸導致顯示相似或改進功能的變體酶。在一些優(yōu)選實施方案中，目的蛋白質(zhì)的三級結(jié)構(gòu)和/或保守M酸殘基位于目的區(qū)段或片段上或其附近。因此，當目的區(qū)段或片段包含例如a螺旋或p折疊結(jié)構(gòu)時，替代氨基酸保持該特定的結(jié)構(gòu)。如本文中所^使用的，"同源蛋白質(zhì)"是指具有與目的蛋白質(zhì)(例如，來自另一來源的?；D(zhuǎn)移酶)相似作用和/或結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)(例如，酰基轉(zhuǎn)移酶)。同源物不必一定是進化上相關(guān)的。因此，該術(shù)語意在包括從不同物種獲得的相同或相似(即，在結(jié)構(gòu)和功能方面)的酶。在一些優(yōu)選實施方案中，期望鑒定具有與目的蛋白質(zhì)相似的四級、三級和/或一級結(jié)構(gòu)的同源物，因為用來自該同源物的類似區(qū)段置換目的蛋白質(zhì)中的區(qū)段或片段將減少該變化的破壞性。在一些實施方案中，同源蛋白質(zhì)誘導與目的蛋白質(zhì)相似的免疫反應。如本文中所使用的，"同源基因"是指至少一對來自不同物種的基因，所述基因彼此相應并且所述基因彼此相同或非常相似。該術(shù)語包括通過物種形成(即，新物種的發(fā)生)而分離的基因(例如，直系同源基因)以及通過基因復制而分離的基因(例如，旁系同源基因)。此類基因編碼"同源蛋白質(zhì)"。如本文中所使用的，"直系同源物"和"直系同源基因"是指不同物種中通過物種形成而從共同祖先基因(即，同源基因)進化而來的基因。通常，直系同源物在進化過程中保持相同的功能。直系同源物的鑒定可以用于在新測序的基因組中可靠地預測基因功能。如本文中所使用的，"旁系同源物"和"旁系同源基因"是指通過基因組內(nèi)的復制而相關(guān)聯(lián)的基因。雖然直系同源物在進化過程中保持相同功能，但旁系同源物進化出新功能，即使一些功能通常與原始功能相關(guān)。旁系同源基因的實例包括但不限于編碼胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、彈性蛋白酶和凝血酶的基因，所述蛋白酶都是絲氨酸蛋白酶并且一起發(fā)生在相同的物種中。如本文中所使用的，"野生型"、"天然的，，和"天然發(fā)生的"蛋白質(zhì)是在自然界中發(fā)現(xiàn)的蛋白質(zhì)。術(shù)語"野生型序列"和"野生型基因"在本文中可互換使用，指在宿主細胞中是天然的或天然發(fā)生的序列?？砂凑毡绢I(lǐng)域技術(shù)人員已知的一般方法獲得編碼天然發(fā)生的蛋白質(zhì)的基因。方法通常包括合成具有編碼目的蛋白質(zhì)的區(qū)域的推定序列的標記探針，從表達該蛋白質(zhì)的生物制備基因組文庫，然后通過與探針雜交來就目的基因篩選文庫。然后對陽性雜交克隆作圖和測序。序列之間的同源程度可使用本領(lǐng)域內(nèi)已知的任何適當?shù)姆椒?參見，例如，Smith和Waterman,Adv.Appl.Math.，2:482[1981];Needleman和Wunsch，J.Mol.Biol"48:443[1970"Pearson和Lipman，Proc,Natl.Acad.Sci.USA85:2444[1988；WisconsinGenetics軟件包中的程序例如GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA(GeneticsComputerGroup,Madison,WI);和Devereux等人，Nucl.AcidRes.，12:387-395[1984)來測定。如本文中所4吏用的，"百分數(shù)(％)核酸序列同一性，，定義為候選序列中與該序列的核苷酸殘基同一的核苷酸殘基的百分數(shù)。如本文中所使用的，術(shù)語"雜交"是指如本領(lǐng)域中已知的，核酸鏈通過堿基配對與互補鏈結(jié)合在一起的過程。如本文中所使用的，短語"雜交條件"是指進行雜交反應的條件。此類條件通常通過量度雜交的條件的"嚴格"度來分類。嚴格度可基于例如核酸結(jié)合復合物或探針的解鏈溫度(1V)。例如，"最大嚴格度，，通常在大約1V5。C(比探針的Tj氐5。)下發(fā)生；"高嚴格度"在低于乙大約5-10。C下發(fā)生；"中等嚴格度，，在低于探針Tm大約10-20。C下發(fā)生；以及"低嚴格度，，在低于Tm大約20-25。C下發(fā)生。備選地，或此外，雜交條件基于雜交和/或一個或多個嚴格性洗滌的鹽或離子強度條件。例如，6xSSC=非常低的嚴格度；化88€=l氐至中等嚴格度；lxSSC-中等嚴格度；和0.5xSSC=高嚴格度。在功能上，最大嚴格度條件可用于鑒定與雜交探針精確相同或幾乎精確相同的核酸序列；而高嚴格度條件用于鑒定具有與探針大約80%或更大的序列同一性的核酸序列。對于需要高選擇性的應用，在一些實施方案中，可能期望使用相對嚴格的條件來形成雜交體(例如，使用相對低的鹽和/或高的溫度條件)。短語"基本上相似的"和"基本上同一(相同)的"在至少兩個核酸或多肽的情況下通常是指多核苦酸或多肽包含如下序列，所述序列與參照(即，野生型)序列相比，具有至少大約40%的同一性、至少大約50%的同一性、至少大約60%的同一性、至少大約75%的同一性、至少大約80%的同一性、至少大約90%、至少大約95%、至少大約97%的同一性，有時高至大約98%和大約99%的序列同一性。序列同一性可4吏用已知的程序例如BLAST、ALIGN和CLUSTAL，使用標準參數(shù)來測定。(參見，例如，Altschul，等人，J.Mol.Biol.215:403-410[1990；Henikoff等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA89:10915[1989；Karin等人，Proc.Natl.Acad.SciUSA90:5873[1993];和Higgins等人，Gene73:237-241988])。用于進行BLAST分析的軟件可通過美國國立生物技術(shù)信息中心公開獲得。同樣，可使用FASTA(Pearson等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA85:2444-2448[1988])來搜索數(shù)據(jù)庫。兩個多肽基本上同一的一個指標是笫一多肽與第二多肽是免疫交叉反應的。通常，差異在于保守氨基酸置換的多肽是免疫交叉反應性的。因此，例如，當多肽與第二多似目異只在于保守置換時兩個多肽基本上同一。兩個核,列基本上同一的一個指標是兩個分子在嚴格條件(例如，在中等至高嚴格度內(nèi))下彼此雜交。本文中使用的術(shù)語"回收的"、"分離的"和"分開的，，是指蛋白質(zhì)、細胞、核酸或氨基酸與至少一種和其天然相關(guān)的組分分離。在某些情況下，分離的蛋白質(zhì)是分泌入培養(yǎng)基，然后從該培養(yǎng)基回收的蛋白質(zhì)。術(shù)語"重組"是指非在宿主細胞中天然發(fā)生的多核苷酸或多肽。重組分子可包含以非天然的方式連接在一起的兩個或多個天然發(fā)生的序列。重組細胞包含重組多核苷酸或多肽。使用重組方法產(chǎn)生的蛋白質(zhì)可以是通過使用正常不產(chǎn)生此類蛋白質(zhì)的宿主細胞來產(chǎn)生的。術(shù)語"異源的，，是指正常情況下彼此不相關(guān)的元件。例如，如果宿主細胞產(chǎn)生異源蛋白質(zhì)，則該蛋白質(zhì)正常不在該宿主細胞中產(chǎn)生。同樣，與異源編碼序列有效連接的啟動子是指與該啟動子有效連接的該編碼序列在野生型宿主細胞中通常不與該啟動子有效連接。術(shù)語"同源的"，對于多核苦酸或蛋白質(zhì)的表達，是指在表達其的宿主細胞中天然發(fā)生的多核苷酸或蛋白質(zhì)。如本文中所使用的，"宿主細胞"通常是可以使用本領(lǐng)域內(nèi)已知的重組DNA纟支術(shù)構(gòu)建的載體轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染的原核或真核宿主。轉(zhuǎn)化的宿主細胞能夠復制編碼蛋白質(zhì)變體的載體或表達期望的蛋白質(zhì)變體。在編碼蛋白質(zhì)變體的前體形式或前原形式(pr印ro-form)的載體的情況下，此類變體，當表達時，通常從宿主細胞分泌入宿主細胞培養(yǎng)基。在一些實施方案中，本發(fā)明涉及在水性環(huán)境中有效地催化?；鶑孽；w(例如，C2至C2。酯)轉(zhuǎn)移至醇底物的某些?；D(zhuǎn)移酶的活性。如在本文中更詳細地描述的，在一些實施方案中，此類酶的該活性被利用來制造具有怡人的香氣或味道的酯。在一些其他實施方案中，此類酶的該活性優(yōu)選用于清潔應用中減少臭味。不旨在局限于任何特定的酶、醇底物或?；w，而是僅旨在幫助理解本文中描述的方法的一些實施方案，下面舉例說明通過本方法的一些實施方案進行的反應，其中"AcT"代表"酰基轉(zhuǎn)移酶"。OOIIACTIIX—OH+R——C一O—Y醇底物耽基供體R——C——O—X酯產(chǎn)物Y—OH例如，再次不希望局限于任何特定的酶、醇底物或?；w，并且只是幫助理解本文中描述的方法的一些實施方案，?；D(zhuǎn)移酶用于將酰M適宜的酰基供體(例如，甘油三酯例如甘油三丁酸酯或甘油三乙酸酯)轉(zhuǎn)至薛烯醇例如香葉醇或香茅醇，從而產(chǎn)生芳香酯。同樣，在其他實施方案中，酰基轉(zhuǎn)移酶用于減少油性污物的臭味。在一些特別優(yōu)選實施方案中，油性污物是乳制品污物。在減少/防止臭味的實施方案中，使用AcT酶以減少通過甘油三酯的水解產(chǎn)生的臭味揮發(fā)性脂肪酸(例如，丁酸)的量。在一些實施方案中，?；D(zhuǎn)移酶與至少一種脂肪酶協(xié)同作用來增加從三?；视王コヵ；湹乃俾?，而在其他實施方案中，酰基轉(zhuǎn)移酶的作用為將?；溸B接至醇底物，從而產(chǎn)生酯產(chǎn)物而非揮發(fā)性脂肪酸。在一些實施方案中，?；D(zhuǎn)移酶以上述兩種方式起作用。在一些實施方案中，將來自三?；视王サ孽；溸B接至醇底物，從而產(chǎn)生芳香酯。在這些實施方案中，芳香酯而非臭味的揮發(fā)性脂肪酸作為副產(chǎn)品產(chǎn)生。在圖6中示意性地舉例說明該實施方案。下面更詳細地描述這些實施方案以及許多其他實施方案。在進行更詳細描述之前，應注意，本文中描述的方法可以利用多種不同的具有催化酰M?；w轉(zhuǎn)移至醇底物從而產(chǎn)生酯的能力的酶。此類酶包括但不限于經(jīng)典的脂肪酶、依賴于?；o酶A的轉(zhuǎn)移酶、磷脂酶、角質(zhì)酶、GDSX水解酶、SGNH水解酶、絲氨酸蛋白酶和酯酶以及能夠在與?；w接觸時形成跣基-酶中間體并且將?；D(zhuǎn)移至非水受體的任何酶。在一些實施方案中，酶是野生型酶，然而在其他實施方案中，酶具有的經(jīng)修飾的M酸序列。在進一步描述這些實施方案中，提供了可以用于本發(fā)明的另外的組分。?；D(zhuǎn)移酶如上面所指出的，本發(fā)明提供了包含至少一種?；D(zhuǎn)移酶的產(chǎn)生酯的組合物和使用該酶的方法。本組合物的酰基轉(zhuǎn)移酶考慮包含可催化?；鶑孽；w轉(zhuǎn)移至醇底物的任何酶。如上面指出的，幾種類型的酶可以用于本發(fā)明的方法。在一些實施方案中，使用的酶對于醇底物比對于水具有更高的特異性。在一些此類實施方案中，酶展示相對低的水解活性(即，在水存在的情況下相對弱的水解?；w的能力)和相對高的酰基轉(zhuǎn)移酶活性(即，在水性環(huán)境中，在醇存在的情況下更好的水解酰基供體的能力)，其中醇解:水解比大于大約1.0，至少大約1.5或至少大約2.0。在一些實施方案中，?；D(zhuǎn)移酶對于過氧化物也比對于水具有更高的特異性，從而導致過酸清潔劑的產(chǎn)生，(例如，大于大約1.0的過水解(perhydrolysis):水解比，至少大約1.5或至少大約2.0的比率)。在一些實施方案中，使用GDSX酰基轉(zhuǎn)移酶，特別地SGNH?；D(zhuǎn)移酶。用于本發(fā)明的示例性SGNH酰基轉(zhuǎn)移酶包括以登錄號:YP一890535(GID:11846860;也參見，WO05/056782;恥垢分4支桿菌)、NP—436338.1(GID:16263545;苜蓿中華根瘤菌(S/w^/rZzo6/w附附e/,7oft'))、ZP—01549788.1(GID:118592396;Stappiaaggregate)、NP—066659.1(GID10954724;毛才艮農(nóng)桿菌(Jgra6acten'"附r/h^ge/i^))、YP_368715.1(GID78065946、伯克霍爾德氏菌(fi"rA^o/<sfeWs戶.))、YP674187.1(GID110633979;中慢生根瘤菌屬(A/^oW^M/"附5p.))和NP_532123.1(GID17935333;根癌農(nóng)桿菌(Jgra6""eWu附,"附e/"c/e財))保存在NCBI的GENBANK⑧數(shù)據(jù)庫中的野生型SGNH?；D(zhuǎn)移酶、具有與此類野生型酶的任一種至少大約70%的同一性，至少大約80%的同一性，至少大約90%的同一性，至少大約95%的同一性或至少大約98%的同一性的其野生型直系同源物和同源物以及其變體。這些GENBANK⑧登錄號以它們的全文(包括其中的核酸和蛋白質(zhì)序列以及這些序列的注釋)通過引用合并入本文。如，BLAST等)對NCBF的GENBANK⑧數(shù)據(jù)庫進行基于序列同源性的搜索來獲得。在一些實施方案中，?；D(zhuǎn)移酶具有與GENBANK⑧登錄號YP_890535(GID:11846860;恥垢分枝桿菌；也參見，WO05/056782)中顯示的氨基酸序列至少大約70V。的同一性的M酸序列。另外的示例性SGNH?；D(zhuǎn)移酶包括下列的酶(以它們的物種和GENBANK⑧登錄號引用)毛根農(nóng)桿菌(Q9KWA6)、毛根農(nóng)桿菌(Q9KWB1)、根癌農(nóng)桿菌(Q8UFG4)、根癌農(nóng)桿菌(Q8UAC0)、根癌農(nóng)桿菌(Q9ZI09)、才艮癌農(nóng)桿菌(ACA)、7^仍幼"^<^/"^>"《^/(10^\104532)、百樂M沐瘤菌(/^/zo6,'"/w/oft)(Q98MY5)、苜蓿根瘤菌(i./we///W)(Q92XZ1)、苜蓿根瘤菌(Q9EV56)、R.rhizogenes(NF006)、R.rhizogenes(NF00602875)、及.w/"micmw"w(Q8XQI0)、苜蓿中華根瘤菌(RSM02162)、苜蓿中華根瘤菌(RSM05666)、百脈根中慢生根瘤菌(RMLO00301)、毛根農(nóng)桿菌(Q9KWA6)、毛根農(nóng)桿菌(Q9KWB1)、根癌農(nóng)桿菌(AAD02335)、百J3^f艮中慢生根瘤菌(Q98MY5)、百脈根中慢生根瘤菌(ZP00197751)、及.s。/"wa"mmw(Q8XQI0)、及fl&to/iiVi^i^o/^fl(ZP00166901)、牛莫拉氏菌6ov/y)(AAK53448)、洋蔥伯克霍爾德菌(5wMo/^feWac卬flc/fl)(ZP00216984)、紫色色桿菌(Oifwm^icten"附Wo/ac^/附)(Q7NRP5)、小梨形菌(尸/zr/Z"to)(NP_865746)、創(chuàng)傷弧菌(v"/"iycws)(AA007232)、鼠傷寒沙門氏菌(Stf/wwme//"0^W附""'"附)(AAC38796)、苜蓿中華根瘤菌(SMal993)、苜蓿中華根瘤菌(Q92XZ1)和苜蓿中華根瘤菌(Q9EV56)。為了所有目的，來自WO05/056782的此類蛋白質(zhì)的^&斷列、序列比對以及與上述內(nèi)容相關(guān)的所有其他信息通過引用合并入本文。此類酶的幾個實例已得到結(jié)晶，提供保持或改變酶活性的變體酶的許多示例性氨基酸置換描述于WO05/056782,其通過引用合并入本文。數(shù)百個可被耐受的和在一些實施方案中可用于改變恥垢分枝桿菌的水解活性、過水解活性、過酸降解活性和/或穩(wěn)定性的氨基酸置換的列表示于WO05/056782的表10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8和10-9。鑒于SGNH?；D(zhuǎn)移酶的結(jié)構(gòu)相似性，WO05/056782中描述的氨基酸置換可容易地轉(zhuǎn)移至SGNH酰基轉(zhuǎn)移酶家族的其他成員。WO05/056782中描述的每一個氨基酸置換和通過這些置換產(chǎn)生的Jl^酸序列通過引用合并入本文。在一些實施方案中，本文中使用的?；D(zhuǎn)移酶不是依賴于乙酰輔酶A的酶。在一些備選實施方案中，用于本方法的GDSX或SGNH酰基轉(zhuǎn)移酶是近平滑假絲酵母(Qm必《/"/flm/m7仍/s)、嗜7jC氣單孢菌(爿e/ww朋fls/^//Y/7似/fl)或殺鮭氣單胞菌(Jera/mmtfssn/附0/iz'"V/")野生型醜基轉(zhuǎn)移酵,然而在其他實施方案中，?；D(zhuǎn)移酶是與其至少大約95%同一的其變體。使用本領(lǐng)域內(nèi)已知的常規(guī)方法可以產(chǎn)生和分離用于本發(fā)明的酰基轉(zhuǎn)移酶。在一些實施方案中，使用重組方法和非天然宿主進行?；D(zhuǎn)移酶的產(chǎn)生，所述非天然宿主在細胞內(nèi)產(chǎn)生?；D(zhuǎn)移酶，或分泌?；D(zhuǎn)移酶。在一些實施方案中，向酶中加入信號序列，其通過使酶分泌入周質(zhì)間隙(即，在革蘭氏陰性生物，例如大腸桿菌中)或分泌入細胞外空間(即，在革蘭氏陽性生物例如芽孢桿菌(Bacillus)和放線菌(J"/iMwiycete)中)或真核宿主(例如，木霉屬(7WcA<wfe/7Wfl)、曲霉屬(^y/^fg,7/船)、酵母屬(SffccA"/wwj;t^)和畢赤酵母屬(i^/^Vi))來促進酶表達。在4壬何方面，本發(fā)明無意局限于這些特定的宿主，因為各種其他生物可在本發(fā)明中用作表達宿主。例如，芽孢桿菌細胞是熟知的用于表達細胞外蛋白質(zhì)(例如蛋白酶)的適宜宿主。蛋白質(zhì)的細胞內(nèi)表達是不太熟知的。通常通過在基因的5'末端不存在信號序列的情況下使用多種啟動子(包括但不限于pVeg、pSPAC、pAprE，或pAmyE)來在枯草芽孢桿菌(5ff"7/"ssw6ft7/s)中進行酶蛋白的細胞內(nèi)表達。在一些實施方案中，通過復制質(zhì)粒(高或低拷貝數(shù))來獲得表達，然而在備選實施方案中，通過將期望的構(gòu)建體整合入染色體來進行表達。整合可以發(fā)生在任何基因座上，包括但不限于aprE、amyE或pps基因座。在一些實施方案中，酶從一個或多個拷貝的整合的構(gòu)建體表達。在備選實施方案中，通過整合能夠擴增的構(gòu)建體(例如，連接至抗生素表達盒并側(cè)翼連接同向重復序列)，或通過連接多個拷貝然后隨后整合入染色體來獲得多個整合的拷貝。在一些實施方案中，在適宜的培養(yǎng)中使用pNB活性測定法監(jiān)控使用復制型質(zhì)粒或整合的構(gòu)建體進行的酶的表達。與芽孢桿菌一樣，在一些實施方案中，可以使用復制型質(zhì)粒來在革蘭氏陽性宿主鏈霉菌中進行酶的表達，而在其他實施方案中，酶的表達通過將載體整合入鏈霉菌染色體來進行。能夠在鏈霉菌中被識別的任何啟動子可用于驅(qū)動酶基因的轉(zhuǎn)錄(例如，葡萄糖異構(gòu)酶啟動子，A4啟動子)。復制型質(zhì)粒(穿梭載體或只用于鏈霉菌的載體)也可以在本發(fā)明中用于表達(例如，pSECGT)。在其他實施方案中，在其他宿主細胞，包括但不限于，真菌宿主細胞(例如畢赤酵母屬、曲霉屬或木霉屬宿主細胞等)中產(chǎn)生酶。在一些實施方案中，從宿主細胞分泌酶，這樣可從培養(yǎng)宿主細胞的培養(yǎng)基中回收酶。當酶分泌入培養(yǎng)基中時，通過任何適當?shù)暮?或常規(guī)的方法(例如，通過沉淀、離心、親和、親和層析、離子交換層析、疏7jC相互作用層析、兩相分配、乙醇沉淀、反相HPLC、在二氧化珪或在陽離子交換樹脂例如DEAE上進行的層析、色譜聚焦、SDS-PAGE、硫酸銨沉淀、凝膠過濾(例如SephadexG-75)、過濾或本領(lǐng)域內(nèi)已知的任何其他方法)回收酶。事實上，本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知多種適宜的方法。在一些備選實施方案中，不經(jīng)從培養(yǎng)基的其他組分中純化而使用酶。在一些此類實施方案中，只是濃縮培養(yǎng)基，然后在不從生長培養(yǎng)基的組分中進一步純化蛋白質(zhì)的情況下使用該培養(yǎng)基，而在其他實施方案中，不經(jīng)任何進一步的修飾而使用培養(yǎng)基。醇底物用于本發(fā)明的醇底物包括含有與碳原子結(jié)合的反應性羥基的任何有機分子，但包含羥基的多糖和蛋白質(zhì)除外。在一些實施方案中，醇底物具有式Z-OH，其中Z是任何支鏈、直鏈、環(huán)狀、芳香族或線性有機基團，或其任何取代的形式。在一些實施方案中，Z是包含2至30個碳原子的取代的或未取代的烷基、雜烷基、鏈烯基、炔基、芳基、烷芳基、烷基雜芳基或雜芳基基因。在一些另外的實施方案中，Z是脂肪族部分，被脂環(huán)族或芳族部分(例如，辟烯)取代的脂肪族部分。在一些其它的實施方案中，醇底物是多元醇，例如包含甘醇的分子(例如四甘醇、聚乙二醇、聚丙二醇或聚四氳呋喃)。適宜的醇底物包括單體多元醇(例如，甘油)以及二聚的、三聚的和四聚的多元醇，和糖醇例如赤藻糖醇、異麥芽糖醇、乳糖醇、麥芽糖醇、甘露糖醇、山梨糖醇和木糖醇。在一些實施方案中，多元醇是式(Z-OH、或Z-(OH)n的分子，其中n是至少大約l、大約2、大約3、大約4、大約5或大約6(例如，其中n是l-4)。在一些實施方案中，醇作為表面活性劑或乳化劑(例如，高級線性伯醇例如NEODOIJM洗滌劑)的一部分存在。在一些實施方案中，用于下面描述的芳香酯生產(chǎn)方法的醇底物具有式Z-OH，其中Z是例如脂環(huán)族或芳族部分或萜烯。用于本發(fā)明的方法的示例性醇底物包括但不限于乙醇、曱醇、甘油、丙醇、丁醇和下面表l至3中顯示的醇底物。?；m用于本發(fā)明的方法的?；w包括含有可轉(zhuǎn)移的?；鶊F的任何有機分子。在一些實施方案中，典型的酰基供體是式1^(:(=0)0112的酯，其中W和Rz獨立地是任何有機部分，但也可使用其他分子。在一些實施方案中，適宜的?；w是單體，然而在其他實施方案中，它們是多聚體，包括二聚體、三聚體和高級多元醇酯。如本文中所使用的，"短鏈?；w"是式！^C(-0)OR2的酯，其中R1是包含至少1至9個碳原子的鏈的任何有機部分，W是任何有機部分。在一些實施方案中，短鏈酰基酯類包含2至10個碳原子的?；?即，C2至d。碳鏈)。示例性短鏈?；グ珻6、C7、C8、C9、do碳鏈。示例性長鏈?；グ阴；?、丙基、丁基、戊基或己基基團等。"長鏈?；w"是式R，C(K))OI^的酯，其中W是包含至少10個碳原子的鏈的任何有機部分，ie是任何有機部分。例如，在一些實施方案中，長鏈酰基供體包含C、C12、C13、C14、C15、C16、C17、C18、C19、C20、c21或c22?；?。用于本發(fā)明的示例性酯包括式R^x[(R2)m(R3、lp，其中W是選自H或取代的或未取代的烷基、雜烷基、鏈烯基、炔基、芳基、烷芳基、烷基雜芳基和雜芳基的部分。在一些實施方案中，W包含大約1至大約50,000個碳原子，大約1至大約10，000個碳原子，或甚至大約2至大約100個碳原子；其中112各自是任選地取代的烷氧基化物部分(在一些實施方案中，R2各自獨立地是乙氧基化物、丙M化物或丁M化物部分)；R"是具有下式的酯形成部分R4CO-，其中"R、，是H、取代的或未取代的烷基、鏈烯基、炔基、芳基、烷芳基、烷基雜芳基和雜芳基(在一些實施方案中，W是包含5至22或更多個碳原子的取代的或未取代的直鏈或支鏈烷基、鏈烯基、或炔基部分、包含5至12或更多個碳原子的芳基、烷芳基、烷基雜芳基或雜芳基部分，或R"是取代的或未取代的C5-do或更長的烷基部分，或W是取代的或未取代的Cn-C22或更長的烷基部分)；當Ri是H時，X是l;當W不是H時，x是等于或小于Ri中的碳原子的數(shù)目的整數(shù)；p是等于或小于x的整數(shù)；m是0至50的整數(shù)，0至18的整數(shù)，或0至12的整數(shù)，以及n是至少l。在本發(fā)明的一些實施方案中，包含酯部分的分子是具有式R力x[(I^V(R^p的烷基乙氧基化物或丙氧基化物，其中R1是C2-C32取代的或未取代的烷基或雜烷基部分；R2各自獨立地是乙氧基化物或丙氧基化物部分；R3是具有下式的酯形成部分R4CO-，其中W是H、取代的或未取代的烷基、鏈烯基、炔基、芳基、烷芳基、烷基雜芳基和雜芳基，在一些實施方案中，W是包含5至22或更多個碳原子的取代的或未取代的直鏈或支鏈烷基、鏈烯基、或炔基部分、包含5至12個或更長碳原子的取代的或未取代的芳基、烷芳基、烷基雜芳基或雜芳基部分，或W是取代的或未取代的Cs-Cm或更長的烷基部分，或R"是取代的或未取代的(:5-<:22或更長的烷基部分；x是等于或小于R1中的碳原子數(shù)目的整數(shù)；p是等于或小于x的整數(shù)；m是l至12的整數(shù)，和n是至少1。在本發(fā)明的一些實施方案中，包含酯部分的分子具有下式RCM(R2;UR3)np其中W是H或包含伯、仲、叔或季胺部分的部分，其中包含胺部分的所述Ri部分選自取代的或未取代的烷基、雜烷基、鏈烯基、炔基、芳基、烷芳基、烷基雜芳基和雜芳基部分。在一些實施方案中，W包含大約l至大約50,000個碳原子，大約1至大約10,000個碳原子，或大約2至大約100個碳原子；R2各自是烷氧基化物部分(在一些實施方案中，R2各自獨立地是乙氧基化物、丙氧基化物或丁氧基化物部分)；Rs是具有下式的酯形成部分R4CO-，其中W是H、取代的或未取代的烷基、鏈烯基、炔基、芳基、烷芳基、烷基雜芳基和雜芳基(在一些實施方案中，W是包含5至22個碳原子的取代的或未取代的直鏈或支鏈烷基、鏈烯基或炔基部分、包含9至12個或更多個碳原子的取代的或未取代的芳基、烷芳基、烷基雜芳基或雜芳基部分，或R"是取代的或未取代的Cs-d?；蚋L的烷基部分，或R4是取代的或未取代的Cu-C22或更長的烷基部分；當W是H時，x是l;當W不是H時，x是等于或小于R1中的碳原子數(shù)目的整數(shù)；p是等于或小于x的整數(shù)；m是0至12或甚至l至12的整數(shù)，且n是至少1。適宜的?；w包括任何類型的甘油三酯，包括動物來源的甘油三酯、乳制品甘油三酯、植物來源的甘油三酯和合成的甘油三酯，包括但不限于甘油三乙酸酯、甘油三丁酸酯和更長鏈的分子(其分別提供乙酰基、丁酰基和更長鏈的?；?。二酰基甘油酯、單酰基甘油酯、辨脂、溶血磷脂、糖脂也可以用于本發(fā)明。在一些實施方案中，二酰基-和三?；视王グ嗤闹舅徭湥谄渌麑嵤┓桨钢?，它們包含不同的脂肪酸鏈。其他適宜的酯包括形成顏色的酯，例如對硝基苯酚酯。另外的酯包括脂肪族酯(例如，丁酸乙酯)、異戊二烯類酯(isoprenoidester)(例如，香茅醇乙酸酯)和芳族酯(例如，乙酸千酯)。在本發(fā)明的一些清潔實施方案中，^供體存在于物體上(例如，作為物體上的污染物)。在一些特別優(yōu)選實施方案中，?；w通過本發(fā)明組合物原位脫?；?。在一些實施方案中，本文中更詳細描述的一些產(chǎn)生芳香酯的方法需要短鏈(例如，CrC一?；缫阴；投□；霓D(zhuǎn)移。清潔組合物本發(fā)明還提供了包含至少一種?；D(zhuǎn)移酶和該?；D(zhuǎn)移酶的至少一種醇底物的清潔組合物。在一些實施方案中，配制清潔組合物以原位清潔被?；w分子(例如，甘油三酯)污染的物體。因此，在一些實施方案中，?；D(zhuǎn)移酶和醇底物以當清潔組合物與包含?；w的物體接觸時能有效地產(chǎn)生可檢測的酯的量存在。在一些實施方案中，清潔組合物，當與包含?；w的物體接觸時，還包含含有?；w的物體、和作為由酰基轉(zhuǎn)移酶催化的醇底物和?；w之間的反應的結(jié)果而產(chǎn)生的酯。如上面所指出的，在一些實施方案中，酖基轉(zhuǎn)移酶是SGNH?；D(zhuǎn)移酶。在一些另外的實施方案中，清潔組合物包含醇底物和酰基供體的組合，這樣當?；ㄟ^酰基轉(zhuǎn)移酶從?；w轉(zhuǎn)移至醇底物時，產(chǎn)生織物護理劑(例如，表面活性劑酯)。在一些實施方案中，醇底物是兩用分子，因為其還用作存在于清潔組合物中的表面活性劑或乳化劑。此類醇底物的實例包括但不限于脂肪醇(例如，C8-ds線性或分支脂肪族醇)，例如鯨蠟醇(例如，十六烷-l-醇)、來源于脂肪醇的脂肪醇乙氧基化物(例如NEODOLTM乙氧基化物)和通常在清潔組合物中使用的多元醇乙氧基化物(例如，甘油乙氧基化物)如在下面更詳細描述的，本發(fā)明的清潔組合物可以以任何適宜的形式提供，包括固體(例如，其中酶和醇底物被吸附在固相材料上)、液體和凝膠。在一些優(yōu)選實施方案中，以濃縮的形式提供組合物。在其他實施方案中，本發(fā)明的清潔組合物就此使用，在一些另外的實施方案中，用作噴霧或預洗組合物。在使用中，清潔組合物的工作形式(例如，清潔組合物的溶解或稀釋的形式)是水性的，從而包含至少大約50%的水，在許多情況下包含大約50至大約99.99%的水。在一些實施方案中，本發(fā)明的清潔組合物中醇底物的工作濃度是大約0.0001%至大約50%(v/v或w/v)，4氐于大約1%，低于大約0.1%，低于大約0.01%，或低于大約0.001%的醇。在一些實施方案中，本發(fā)明酰基轉(zhuǎn)移酶在清潔組合物中的工作濃度是大約0.01ppm(百萬分之…，w/v)至大約1000ppm、大約0.01ppm至大約0.05ppm、大約0.05ppm至大約0.1ppm、大約0.1ppm至大約0.5ppm、大約0.5ppm至大約1ppm、大約1ppm至大約5ppm、大約5ppm至大約10ppm、大約10ppm至大約50ppm、大約50ppm至大約100ppm、大約100ppm至大約500ppm或大約500ppm至大約1000ppm。在一些實施方案中，本發(fā)明的清潔組合物還包含至少一種脂肪酶(例如，具有按照IUBMB#名法定義為EC3.1.1.3的活性的三酰甘油脂肪酶)。在一些實施方案中，脂肪酶是上述的經(jīng)典脂肪酶?？紤]酰基轉(zhuǎn)移酶和脂肪酶協(xié)同作用以將?；湉奈矬w上的?；视王シ肿?例如，三酰甘油)上除去。然而，本發(fā)明無意局限于任何特定的作用機制。在一些實施方案中，清潔組合物包含過氧化物源，其可以是過氧化氬本身或以反應產(chǎn)物的形式產(chǎn)生過氧化氫的組合物。以反應產(chǎn)物的形式產(chǎn)生過氧化氫的適宜過氧化氫源包括但不限于選自如下的過氧源(peroxygensources):(i)大約0.01至大約50、大約0.1至大約20或大約1至10重量百分數(shù)的過酸鹽、有機過氧酸、過氧化氫脲和其混合物；(ii)大約0.01至大約50、大約0.1至大約20或大約1至10重量百分數(shù)的碳水化合物和大約0.0001至大約l、大約0.001至大約0.5、大約0.01至大約0.1重量百分數(shù)的碳水化合物氧化酶；和(iii)它們的混合物。適宜的過酸鹽包括但不限于堿金屬過硼酸鹽、堿金屬過碳酸鹽、堿金屬過磷酸鹽、堿金屬過-克酸鹽和其混合物。在一些實施方案中，糖選自單糖、二糖、三糖、斜f(例如，碳7jC化合物)和其混合物。適宜的糖包括但不限于選自如下的糖D-阿拉伯糖、L-阿拉伯糖、D-纖維二糖、2-脫氧-D-半乳糖、2-脫氧-D-核糖、D-果糖、L-巖藻糖、D-半乳糖、D-葡萄糖、D-甘油-D-古洛-庚糖(D-glycero-D-gulo-heptose)、D畫乳糖、D-來蘇糖、L-來蘇糖、D-麥芽糖、D-甘露糖、術(shù)〉三糖、L-蜜二糖、帕拉金糖(palatinose)、D-棉子糖、L-鼠李糖、D-核糖、L-山梨糖、水蘇糖、蔗糖、D-海藻糖、D-木糖、L-木糖和其混合物。適宜的碳7jC化合物氧化酶包括但不限于選自醛糖氧化酶(IUPAC分類EC1丄3.9)、半乳糖氧化酶(IUPAC分類EC1.1.3.9)、纖維二糖氧化酶(IUPAC分類EC1.1.3.25)、p比喃糖氧化酶(IUPAC分類EC1丄3.10)、山梨糖氧化酶(IUPAC分類EC1丄3.11)和/或己糖氧化酶(IUPAC分類EC1.1.3.5)、葡糖氧化酶(IUPAC分類EC1.1.3.4)和其混合物的碳水化合物氧化酶。在一些實施方案中，用清潔組合物清潔的包含?；w的物體被含油物質(zhì)(例如，含有三?；视王サ鹊奈镔|(zhì))污物。在一些實施方案中，物體(例如，織物),皮乳制品污染。雖然進行下述方法不是必需的，但在一些實施方案中，選擇醇底物以在與酰基供體反應時產(chǎn)生芳香酯。下面更詳細地描述芳香酯。在一些實施方案中，清潔組合物是織物清潔組合物(即，洗衣洗滌劑)、表面清潔組合物或餐具清潔組合物或自動餐具清潔洗滌劑組合物。示例性清潔組合物的配制詳細地描述于WO0001826中，其通過引用合并入本文。在一些實施方案中，本發(fā)明的清潔組合物包含大約1%至大約80%、大約5%至大約50%(按重量計算)的至少一種表面活性劑(例如，非離子型表面活性劑、陽離子表面活性劑、陰離子表面活性劑或兩性離子表面活性劑或其任何組合)。示例性表面活性劑包括但不限于烷基笨璜酸鹽(ABS)，包括線性烷基笨璜酸鹽和線性烷基磺酸鈉、烷基苯氧基聚乙氧基醇(例如，壬基苯氧基乙氧基化物或壬基酚)、二乙醇胺、三乙醇胺和單乙醇胺。用于洗滌劑，特別地洗衣洗滌劑的示例性表面活性劑包括美國專利3，664，961、3,919,678、4，222，905和4,239,659中描述的表面活性劉。在一些實施方案中，洗滌劑是固體，然而在其他實施方案中，其為液體，在其他實施方案中其為凝膠。在一些優(yōu)選實施方案中，洗滌劑還包含緩沖劑(例如，碳酸鈉或碳酸氫鈉)、洗滌劑助洗劑、漂白劑、漂白活化劑、另外的酶、酶穩(wěn)定劑、增泡劑、抑泡劑、防晦暗劑、抗腐蝕劑、懸污劑、釋污劑(soilreleaseagent)、殺菌劑、pH調(diào)節(jié)劑、非助洗劑堿性源、螯合劑、有機或無機填充劑、溶劑、水溶增溶劑物、熒光增白劑、染料和/或香料。在一些實施方案中，本發(fā)明的清潔組合物包含一種或多種其他酶(例如，果膠裂合酶、內(nèi)切糖苷酶、半纖維素酶、過氧化物酶、蛋白酶、纖維素酶、木聚糖酶、脂肪酶、磷脂酶、酯酶、角質(zhì)酶、果膠酶、果膠酸裂合酶、淀粉酶、甘露聚糖酶、角蛋白酶、還原酶、氧化酶、氧化還原酶、酚氧化酶、脂加氧酶、木質(zhì)素酶、支鏈淀粉酶、鞣酸酶、戊聚糖酶、甘露聚糖酶、p-葡聚糖酶、阿拉伯糖苷酶、透明質(zhì)酸酶、軟骨素酶、漆酶和淀粉酶)或其混合物。在一些實施方案中，使用包含常規(guī)可應用的酶(如蛋白酶、脂肪酶、角質(zhì)酶和/或纖維素酶)以及?；D(zhuǎn)移酶的酶組合(即，"雞尾酒混合物")。成分，包括其他活性成分、載體、水溶增溶劑、加工助劑(processingaids)、染料或色素、用于液體制劑的溶劑等。在期望起泡額外增加的實施方案中，將增泡劑例如(:1()-<:16烷醇酰胺(alkolamide)通常以大約1%至大約10%的水平摻入組合物中。在一些實施方案中，洗滌劑組合物包含水和其他溶劑作為載體。低分子量伯醇或仲醇如甲醇、乙醇、丙醇和異丙醇是合適的。一元醇對于增溶性表面活性劑是優(yōu)選的，但也可以使用多元醇例如包含大約2至大約6個碳原子和大約2至大約6個羥基的多元醇(例如，1,3-丙二醇、乙二醇、甘油和l，2-丙二醇)。在一些實施方案中，組合物包含大約5%至大約90%，通常大約10%至大約50%的此類載體。在一些實施方案中，配制本文中提供的洗滌劑組合物以便在于水性清潔操作中4吏用時，洗滌水具有大約6.8至大約11.0的pH。因此，通常以該范圍配制成品。用于控制pH在推薦的使用水平上的技術(shù)包括使用緩沖劑、堿、酸等，并且對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是熟知的。在一些實施方案中，清潔組合物包含具有范圍在大約pH9.0至大約pH11.5、大約pH9.0至大約pH9.5、大約pH9.5至大約pH10.0、大約pH10.0至大約pH10.5、大約pH10.5至大約pH11.0或大約pH11.0至大約pH11.5的工作pH的自動餐具清洗洗滌劑。在一些其他實施方案中，清潔組合物包含具有大約pH7.5至大約pH8.5、大約pH7.5至大約pH8.0或大約pH8.0至大約pH8.5的工作pH的液體洗衣洗滌劑。在一些其他實施方案中，清潔組合物包含具有大約pH9.5至大約pH10.5、大約pH9.5至大約pH10.0或大約pH10.0至大約pH10.5的工作pH的固體洗衣洗滌劑。各種漂白化合物例如過碳酸鹽，過硼酸鹽等也可以典型地以按重量計算大約1%至大約15。/的水平用于本發(fā)明的組合物。如期望，此類組合物還可以包含在本領(lǐng)域內(nèi)也是已知的漂白激活劑，例如四乙酰乙二胺、壬酰氧基笨璜酸鹽等。4吏用水平通常在按重量計算大約1%至大約10%的范圍內(nèi)。各種釋污劑，特別地陰離子低聚酯類型，各種螯合劑，特別地氨基膦酸鹽和乙二胺二琥珀酸鹽，各種粘土污物去除劑，特別地乙氧基化四亞乙基五胺，各種#劑，特別地聚丙烯酸鹽和聚天4^氨酸鹽，各種增白劑，特別地陰離子增白劑、各種抑泡劑，特別地珪酮和仲醇，各種織物軟化劑，特別地蒙脫石粘土等，全都可以以按重量計算大約1%至大約35%的水平用于本發(fā)明組合物的各種實施方案中。標準的配方對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是熟知的。酶穩(wěn)定劑也可以用于本清潔組合物的一些實施方案中。此類穩(wěn)定劑包括但不限于丙二醇(優(yōu)選大約1%至大約10%)、甲酸鈉(優(yōu)選大約0.1%至大約1%)和曱酸釣(優(yōu)選大約0.1%至大約1%)。在另外的實施方案中，本發(fā)明的清潔組合物還包含至少一種助洗劑。在一些優(yōu)選實施方案中，助洗劑以按重量計算大約5%至大約50%的水平存在于組合物中。典型的助洗劑包括1-10微米的沸石、聚羧酸鹽例如檸檬酸和氧基二琥珀酸鹽，層狀硅酸鹽、磷酸鹽等。其他常規(guī)助洗劑列于標準配方中并且對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是熟知的。其他任選組分包括螯合劑、粘土污物去除劑/抗再沉積劑、聚合物M劑、漂白劑、增白劑、抑泡劑、溶劑和美》見劑(aestheticagent)。本發(fā)明還提供了使用本文中提供的清潔組合物的方法。在一些實施方案中，清潔方法包括將至少一種?；D(zhuǎn)移酶、至少一種該?；D(zhuǎn)移酶的醇底物和被含有?；w的物質(zhì)污染的物體混合；其中?；D(zhuǎn)移酶催化酰M?；w至醇底物的轉(zhuǎn)移，從而產(chǎn)生酯。在一些實施方案中，選擇醇底物以產(chǎn)生產(chǎn)物芳香酯。在一些其他實施方案中，將?；D(zhuǎn)移至表面活性劑或乳化劑、或一種或多種上面列出的其他試劑上。在一些實施方案中，清潔組合物還包含除了用于產(chǎn)生芳香物以外不起其他清潔功能(即，不用作表面活性劑、乳化劑、氧化劑等)的?；w。此類酰基供體包括但不限于甘油三乙酸酯和甘油三丁酸酯。在一些備選實施方案中，本發(fā)明的清潔方法包括步驟產(chǎn)生具有清潔性質(zhì)的酯例如在洗滌過程中具有清潔活性的酯表面活性劑或酯乳化劑。在一些實施方案中，物體可以是織物(包括但不限于衣物、室內(nèi)裝飾品、地毯、床上用品等)或硬表面(包括但不限于廚房表面、浴室表面、瓷磚等)或餐具。在一些實施方案中，織物被含油物質(zhì)例如含有三?；视王サ奈镔|(zhì)污染。在一些實施方案中，含油物質(zhì)包含至少一種Crds三?；视王?例如，乳制品)。在一些實施方案中，清潔方法使用包含?；D(zhuǎn)移酶但不包含脂肪酶(例如，經(jīng)典脂肪酶)的清潔組合物。在一些備選實施方案中，本發(fā)明的清潔方法4吏用包含本發(fā)明的酰基轉(zhuǎn)移酶和脂肪酶(例如，LipolaseTM、LipozymTM、LipomaxTM、LipexTM、AmanoTM脂肪酶、Toyo畫Joz。TM脂肪酶、MeitoTM脂肪酶或DiosynthTM)的清潔組合物。在一些實施方案中，特定?；D(zhuǎn)移酶-脂肪酶組合的使用導致比如果只使用脂肪酶進行該方法時顯著更少的臭^^未。本發(fā)明無意局限于任何特定的機制或理論。然而，可以考慮酰基轉(zhuǎn)移酶和脂肪酶協(xié)同工作以將酰^三?；视王?例如含有丁酸的三?；视王?上除去，從而減少臭味。因此，在一些實施方案中，當與不包含酖基轉(zhuǎn)移酶的等同清潔組合物相比較時，酰基轉(zhuǎn)移酶在清潔組合物中的使用導致超過約10%的引起臭味的脂肪酸的減少、超過大約20%的引起臭味的脂肪酸的減少、超過大約30%的引起臭味的脂肪酸的減少、超過大約50%的引起臭味的脂肪酸的減少，超過大約70%的引起臭味的脂肪酸的減少、超過大約80%的引起臭味的脂肪酸的減少或超過大約卯％的引起臭味的脂肪酸的減少。在一些特別優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明的?；D(zhuǎn)移酶在清潔組合物中的使用導致無臭味產(chǎn)生。用于產(chǎn)生芳香酯的組合物如上面所指出的，本發(fā)明提供了用于產(chǎn)生芳香酯的組合物和方法。在一些實施方案中，組合物包含至少一種?；D(zhuǎn)移酶、該?；D(zhuǎn)移酶的醇底物和?；w。在一些此類實施方案中，?；D(zhuǎn)移酶在水性環(huán)境中催化?；鶑孽；w至醇底物的轉(zhuǎn)移，從而產(chǎn)生芳香酯。在一些實施方案中，該組合物是基本上干燥的(例如，脫水的)組合物，其中芳香酯僅在組合物再水化時才產(chǎn)生。在其他實施方案中，組合物是還包含芳香酯的水性組合物。在許多實施方案中，選擇組合物中的醇底物和酰基供體來產(chǎn)生特定的芳香酯。4吏用本發(fā)明組合物產(chǎn)生的示例性芳香酯以及用于產(chǎn)生此類酯的醇底物與跣基供體的適宜組合一起示于下面的表1-3中。其他芳香酯是已知的，而且給定此類芳香酯的分子結(jié)構(gòu)，可在本發(fā)明?；D(zhuǎn)移酶存在的情況下組合的醇底物和酯將是顯而易見的。在這些表中，"AcT"是恥垢分枝桿菌的野生型?；D(zhuǎn)移酶，"KLM3"是氣單胞菌屬物種(v4e/wmmfls印)的?；D(zhuǎn)移酶，如WO04/064987中所描述的，LipomaxTM是來自產(chǎn)堿假單胞菌(jRsewrfo附0wasa/cflZ/ge/ies)的月旨肪酵(Genencor)。表1.脂肪族醇的轉(zhuǎn)酯<table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table>橙花醇乙酸酯甘油三乙酸酯AcT香桃木烯醇乙酸酯甘油三乙酸酯AcT乙酸酯甘油三乙酸酯AcT表3.芳族醇的轉(zhuǎn)酯醇結(jié)構(gòu)酯?；w醉苯曱醇乙酸酯丁酸酯甘油三乙酸酯，乳脂，AcT苯乙醇乙酸酯甘油三乙酸酯AcT，KLM3，胡椒醇乙酸酯甘油三乙酸酯AcT藜蘆醇s醫(yī)o乙酸酯甘油三乙酸酯AcT在一些實施方案中，將SGNH酰基轉(zhuǎn)移酶固定在基質(zhì)(例如，固體或半固體載體)例如柱子或凝膠上，以允許通過將醇底物和酰基供體從酶上洗下來終止反應。用于產(chǎn)生芳香酯的方法上述組合物可以用于多種產(chǎn)生芳香酯的方法，所述方法一般包括將至少一種?；D(zhuǎn)移酶、至少一種該?；D(zhuǎn)移酶的醇底物和至少一種酰基供體混合，其中，在水性環(huán)境中，?；D(zhuǎn)移酶催化酰M?；w轉(zhuǎn)移至醇底物，從而產(chǎn)生芳香酯。在一些實施方案中，方法包括在將組分混合后再水化這些組分。在一些備選實施方案中，在水性環(huán)境中混合?；D(zhuǎn)移酶、醇底物和?；w。如上面所指出的，在一些備選實施方案中，?；D(zhuǎn)移酶是SGNH酰基轉(zhuǎn)移酶。這些方法可以用于期望得到芳香酯的多種操作中。例如，在一些實施方案中，將組合物并入食品以在消費過程中提高或產(chǎn)生香味或香氣，或用于清潔方法中，如上面所描述的。在一些另外的實施方案中，組合物用于制造酯的方法。在一個實例中，將產(chǎn)生芳香酯的組合物以干燥的形式(例如，吸附在基質(zhì)上)摻入食品例如口香糖或糖果。食品的再7JC化(例如，在咀嚼過程中或通過加入含有水的液體例如水或奶)將起始?；D(zhuǎn)移酶反應，從而在原位產(chǎn)生芳香酯。同樣，在一些實施方案中，方法用于食品、香料和/或洗滌工業(yè)中制造大量芳香酯。在一些實施方案中，醇底物本身是芳香醇。這樣，在一些實施方案中，上述反應的氣味隨時間而發(fā)生變化，(例如，從芳香醇底物的氣味變化至該醇的酯的氣P未)。在一些實施方案中，使用長酰基鏈(例如，長鏈脂肪酸)對芳香醇進行轉(zhuǎn)酯，從而產(chǎn)生非芳香酯。在一些此類實施方案中，非芳香酯隨時間而自發(fā)水解，或在水解酶存在的情況下水解，以再產(chǎn)生芳香醇。用于原位產(chǎn)生表面活性劑酯的方法在一些實施方案中，使用包含酰基轉(zhuǎn)移酶、磷脂和山梨糖醇的顆粒進行脂質(zhì)的原位修飾。在一些實施方案中，顆粒;i/包括通過納米嚢化、微嚢化、制片、造粒和/或通過使用蠟酯的包衣而產(chǎn)生的形式(如在本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的"Bariere系統(tǒng)"中詳細說明的)。在一些實施方案中，通過溫度保護技術(shù)(TPT)系統(tǒng)提供另外的包衣。在一些實施方案中，脂質(zhì)底物磷脂和受體分子山梨糖醇的濃度在洗滌過程中非常低，從而限制了綠色洗滌劑的產(chǎn)生。在一些實施方案中，通過將底物和受體分子與KLM3酶一起裝在封閉的小室中以確保反應物的濃度足夠高以實現(xiàn)快速生物轉(zhuǎn)化過程。在一些實施方案中，在規(guī)定的溫度和濕度條件下貯存過程中，KLM3催化原位修飾過程，從而產(chǎn)生溶血-PC(lyso-PC)和山梨糖醇?；?。為了讓磷脂(PC)完全轉(zhuǎn)化，將PC和山梨糖醇之間的比例優(yōu)化為大約1:2、大約1:5、大約1:10、大約1:50或最優(yōu)選大約1:100的PC:山梨糖醇。在一些實施方案中，為了提供最佳洗滌劑組合物，將所有磷脂轉(zhuǎn)化成溶血磷脂衍生物和等量的山梨糖醇-?；?。使用最佳的KLM3?；D(zhuǎn)移酶突變體，該酶促反應只產(chǎn)生溶血磷脂和山梨糖醇-?；?，而無顯著量的游離脂肪酸。為了實現(xiàn)該洗滌劑的強有力效果，將所有磷脂轉(zhuǎn)化成溶血磷脂衍生物。在一些實施方案中，生物化學反應在包封后發(fā)生，在一些實施方案中，其需要額外的存放期。當反應完成時，向粉狀洗滌劑中加入該顆粒。顆粒在洗滌過程中溶解，釋放洗滌劑。大范圍的多種底物(脂肪酸的甘油三酯、甘油二酯、甘油單酯、磷脂、半乳糖脂、乙烯基酯、甲基酯等)均可使用。類似地，大量受體分子也是合適的。這些受體包括山梨糖醇、木糖醇、葡萄糖、麥芽糖、蔗糖、多元醇和長鏈、中等鏈和短鏈醇、多糖例如果膠、淀粉、半乳甘露聚糖、藻酸鹽、角叉菜聚糖、殼聚糖、水解的殼聚糖和來源于此類多糖的寡聚糖。在另外的實施方案中，受體分子是多肽和肽。WO05/056782的所有公開內(nèi)容，包括但不限于有關(guān)?；D(zhuǎn)移酶、酸改變、晶體結(jié)構(gòu)、測定方法、使用方法、序列、同源物、直系同源物、序列比對、圖、表、清潔組合物等的所有描述，就所有目的通過引用合并入本文。實驗下列實施例經(jīng)提供用于闡明和進一步舉例說明本發(fā)明的某些優(yōu)選實施方案和方面并且不應解釋為限定本發(fā)明的范圍。PCT發(fā)明者A·J·保羅斯,J·B·瑟,J·C·麥考利夫,J·D·米克爾森申請人:丹尼斯科美國公司