專利名稱：：桔?；ǚ垭x體萌發(fā)液體培養(yǎng)基及利用其測定花粉活力的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于植物花粉活力測定
技術(shù)領(lǐng)域：
，特別涉及一種桔?；ǚ垭x體萌發(fā)液體培養(yǎng)基，以及基于該液體培養(yǎng)基的利用桔?；ǚ鄣碾x體萌發(fā)培養(yǎng)測定花粉活力的方法。
背景技術(shù)：
：桔梗(戶/a(ycocfowgra"^/7oraw(7ac^U.ZX:)屬于桔?？啤⒔酃?，為多年生雙子葉草本植物，是一種藥、食、賞兼用植物。桔梗根部可入藥，其主要活性成分是皂甙，具有鎮(zhèn)咳、抗炎、降血壓、降血糖、減肥、抗腫瘤、提高人體免疫力等廣泛的藥理活性。桔梗嫩苗、根均可食用，在我國東北地區(qū)以及日本、韓國、朝鮮等東亞國家是一種常見蔬菜，具有很高的營養(yǎng)價值。桔?；ㄆ陂L，花色鮮艷，有紫色、白色、黃色和粉色等多種；花冠鐘形，合瓣花，近年還發(fā)現(xiàn)漏斗形花冠桔梗和重瓣桔梗2個變種，提高了桔梗的觀賞價值。近年來，隨著桔?？顾ダ稀⒁职?、抗蟲殺菌和氣味掩飾劑等功效相繼被發(fā)現(xiàn)，促使對桔梗原材料的需求迅速增加，單靠野生桔梗資源已不能滿足需求。在此情況下，各地普遍開展了桔梗野生種馴化和種質(zhì)資源基礎(chǔ)研究。豐富的種質(zhì)資源是進(jìn)行桔梗遺傳研究和種質(zhì)改良的物質(zhì)基礎(chǔ)，具有特異性狀桔梗種質(zhì)的研究鑒定及其保存是科學(xué)開展良種培育的前提。鑒于桔梗花粉作為桔梗遺傳資源的主要載體，因此，進(jìn)行桔?；ǚ刍盍y定的研究，對桔梗種質(zhì)資源保存與創(chuàng)新、優(yōu)良品種的選育具有非常重要的理論和實(shí)踐意義。桔梗為兩性花，開花后花粉成熟并自花粉囊中散出附著在花藥與柱頭上，成熟的花粉粒具有一定的活力，在田間條件下其活力能保持一定時間，但隨時間的推移其活力會發(fā)生一定的變化，了解桔梗開花后花粉活力在田間的變化規(guī)律，對桔梗雜交體系的建立以及桔梗傳粉類型的花粉都具有十分重要的意義。目前，花粉活力測定的方法主要有顯微鏡形態(tài)觀察法、染色法、離體萌發(fā)法等。形態(tài)觀察法是依據(jù)不育花粉在生長過程中由于受到某些因素的影響，發(fā)育不完全或不良的花粉粒形態(tài)常常呈畸形，而正常花粉有規(guī)則的外形。桔梗正常花粉粒為正五邊形或六邊形，而不育花粉呈不規(guī)則形，根據(jù)形態(tài)可以鑒別花粉生活力。然而，桔梗花粉成熟后常常需要貯藏一段時間，貯藏過程中花粉活力會逐漸下降，由于桔梗正?；ǚ墼谫A藏過程中活力可能喪失，但形態(tài)并不發(fā)生明顯變化；從而使得花粉粒形態(tài)觀察法就不能鑒別貯藏后正?；ǚ刍盍ψ兓闆r。染色法是通過使用染色試劑對花粉粒進(jìn)行染色，依據(jù)顏色變化判斷花粉活力的高低，常用的染色試劑有I2-KI溶液和氯化三苯基四氮唑(TTC)等。用I2-KI溶液對發(fā)育良好的桔梗成熟花粉進(jìn)行染色，花粉粒而沒有被染成藍(lán)色，而呈淺黃褐色，表明I2-KI溶液染色法不能測定桔?；ǚ刍盍Γ欢鳷TC染色法測定花粉活力實(shí)驗(yàn)重復(fù)性較差，會造成很大的實(shí)驗(yàn)誤差，也不能準(zhǔn)確測定花粉的實(shí)際活力高低。花粉離體萌發(fā)與花粉管生長測定結(jié)果較為穩(wěn)定，更能反應(yīng)花粉活力的實(shí)際狀況。但花粉離體萌發(fā)需要適宜的培養(yǎng)基，常用的培養(yǎng)基基本成分是糖和硼，蔗糖濃度一般為10%~20%，硼酸為0.001%~0.005%，pH5.5~6.5。不同植物花粉萌發(fā)需要的培養(yǎng)基種類和濃度不同，二核型花粉較易萌發(fā)，在一般基本培養(yǎng)基上培養(yǎng)即可，而三核型花粉較難萌發(fā)，要在基本培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上添加其它促進(jìn)花粉萌發(fā)的元素，如Ca2、Mg2+，K2+，PEG等成分。近年來，人們對藥用植物花粉離體萌發(fā)和花粉管生長進(jìn)行了較多研究，趙宏波等認(rèn)為PEG對菊花、梅花花粉離體萌發(fā)生長具有顯著促進(jìn)作用；牛東玲等報道了肉蓯蓉花粉離體萌發(fā)的適宜培養(yǎng)基，陳和明等研究了黃藤花粉離體萌發(fā)條件及低溫貯藏對花粉活力的影響。然而，關(guān)于桔?；ǚ垭x體萌發(fā)與花粉管生長的研究國內(nèi)外尚未見報道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明解決的問題在于提供一種桔?；ǚ鄣碾x體萌發(fā)培養(yǎng)測定花粉活力的方法，在確定桔?；ǚ垭x體萌發(fā)培養(yǎng)體系的基礎(chǔ)上，對桔?；ǚ垭x體培養(yǎng)，可靠、有效的測定桔?；ǚ刍盍Α１景l(fā)明是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)一種桔?；ǚ垭x體萌發(fā)液體培養(yǎng)基，以蒸餾水為溶劑，其包含的組分為ME3、BK、100g'L"的蔗糖和150g.U1的PEG,PH為5.8;所述ME3的組成為MgS04'7H20370mg'I/1、KN03950mg'U1、KH2P0485mg'U1、CaCl'21120880mg'I/1、NH4N03412.5mg'I/1、KC1175mg.1/1、H3B0350mg'L"、Na2EDTA7,45mg.L-1、FeS04'7H200.025mg.1/1、KI0.83mg.L-1、Na2Mo04.2H200.25mg.1/1、CuS04.5H200.025mg.L-1、CoCl2.6H200.025mg'U1、VB11.0mg'U1和VB61.0mg.L";所述BK的組成為H3B03100mg'U1、Ca(N03)2'4H20300mg七"、MgS04'7H20200mg,L"和KN03100mg.U1。本發(fā)明提供的利用桔梗花粉的離體萌發(fā)培養(yǎng)測定花粉活力的方法，包括以下步驟1)花粉采集選取發(fā)育正常、無病蟲危害的健壯植株，于桔梗盛花期選取正開花的花序，連同枝葉采取，移入盛有清水的容器瓶，室內(nèi)放置待花蕾自然開放，花粉從花藥中散出，收集花粉；2)花粉離體萌發(fā)及花粉管生長將花粉均勻撒在桔?；ǚ垭x體萌發(fā)液體培養(yǎng)基上，光照條件下3(TC恒溫培養(yǎng);所述的桔梗花粉離體萌發(fā)及花粉管生長液體培養(yǎng)基為:ME3培養(yǎng)基+BK培養(yǎng)基+100g七"的蔗糖+150g七—1的PEG,PH為5.8;花粉離體萌發(fā)培養(yǎng)10min后部分花粉開始萌發(fā)，花粉萌發(fā)后花粉管長度超過花粉粒直徑后，花粉管開始快速生長；3)花粉活力的測定離體培養(yǎng)1.5h后，以花粉管長度大于花粉離直徑為花粉萌發(fā)標(biāo)準(zhǔn)；每次隨機(jī)觀察3個視野，每視野觀察花粉數(shù)不少于50粒，統(tǒng)計花粉萌發(fā)率，重復(fù)3次取平均數(shù)作為花粉萌發(fā)率測定結(jié)果，花粉萌發(fā)率反應(yīng)有生活力花粉所占比例；同時，用顯微測微尺測量花粉管長度，每視野隨機(jī)測量10個花粉，每處理共測90個花粉管長度，計算其平均值，花粉離體萌發(fā)花粉管生長情況反應(yīng)花粉粒生理狀況的優(yōu)劣。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益的技術(shù)效果1、桔梗花粉在本發(fā)明提供的桔?；ǚ垭x體萌發(fā)液體培養(yǎng)基上，3(TC光照條件下培養(yǎng)，桔梗花粉萌發(fā)率可達(dá)到96.0%，花粉管也能得到較好生長；由于添加了PEG，桔?；ǚ酃苌L較直，便于觀察測量。2、利用桔梗花粉離體萌發(fā)與花粉管生長測定技術(shù)測定花粉活力測定結(jié)果穩(wěn)定可靠，花粉萌發(fā)率反應(yīng)有生活力花粉所占比例，花粉管生長的觀察與測量反應(yīng)花粉粒生理狀況的優(yōu)劣，桔?；ǚ垭x體萌發(fā)與花粉管生長測定技術(shù)為桔?；ǚ刍盍Φ臏y定提供了一種可靠、有效的方法。圖1為桔?；ǚ垭x體培養(yǎng)不同時間的花粉萌發(fā)率和花粉管的統(tǒng)計圖；具體實(shí)施例方式本發(fā)明提供一種桔?；ǚ鄣碾x體萌發(fā)培養(yǎng)測定花粉活力的方法，在確定桔?；ǚ垭x體萌發(fā)培養(yǎng)體系的基礎(chǔ)上，對桔?；ǚ垭x體培養(yǎng)，測定花粉的萌發(fā)率和花粉管的生長情況，可靠、有效的測定桔?；ǚ刍盍?。下面結(jié)合附圖對本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)描述，所述是對本發(fā)明的解釋而不是限定。1、桔?；ǚ鄣牟杉酃；ǚ塾?008年7月中旬采自陜西商洛香菊制藥公司藥用植物園2年桔梗群體，采集方法為選取發(fā)育正常、無病蟲危害的健壯植株，于盛花期上午7:008:00選取正開花的花序，連同一段枝葉一同將花序采下，迅速移入盛有清水的三角瓶中，放置室內(nèi)待花蕾自然開放，花粉從花藥中散出，收集花粉備用。2、花粉離體萌發(fā)培養(yǎng)條件的篩選2.1花粉離體萌發(fā)培養(yǎng)基的篩選培養(yǎng)基種類對植物花粉離體萌發(fā)有較大影響，不同植物花粉萌發(fā)的適宜培養(yǎng)基不同。設(shè)置3種不同的培養(yǎng)基分別為(1)BK+150g-U1PEG4000+100g.L"蔗糖；(2)ME3+150g'U1PEG4000+100g.1/1蔗糖；(3)BK+ME3+150g.L"PEG4000+100g.！/1蔗糖；其中，ME3組成為(mg.L"):MgSO4.7H2O370mg.L-1、KN03950mg'L國1、KH2P0485mg'L"、CaCl'21120880mg'I/1、NH4N03412.5mg.L-1、KC1175mg.L"、H3BO350mg.L匿1、Na2EDTA7.45mg'L"、FeS04'7H200.025mg.L"、KI0.83mg.L-1、Na2Mo04.2H200.25mg.L歷1、CuS04.5H200.025mg.L"、CoCl2.6H200.025mg'L"、VB11.0mg'I/1和VB61.0mg.L";所述BK的組成為H3B03100mg.L"、Ca(N03)2.4H20300mg'I/1、MgS04.7H20200mg.L"和KN03100mg丄"。將花粉分別以相同的光照、溫度條件下在上述3種培養(yǎng)基上培養(yǎng)，分析培養(yǎng)基對花粉離體萌發(fā)的影響;花粉的萌發(fā)率和花粉管的長度的測量方法為以花粉管長度大于花粉離直徑為花粉萌發(fā)標(biāo)準(zhǔn)，每處理重復(fù)3次，每重復(fù)隨機(jī)觀察3個視野，每視野觀察花粉數(shù)不少于50粒，統(tǒng)計花粉萌發(fā)率；用顯微測微尺測量花粉管長度，每視野隨機(jī)測量10個花粉，每處理共測90個花粉管長度，計算其平均值；結(jié)果如表1所示，桔?；ǚ墼谠O(shè)計的3種培養(yǎng)基溶液中均可萌發(fā)，但花粉萌發(fā)率和花粉管生長速度存在顯著差異，其中在150g七"PEG+100g丄"蔗糖+ME3+BK培養(yǎng)基上桔?；ǚ勰軌蜉^好萌發(fā)，其萌發(fā)率可達(dá)到96.0%，花粉管也能得到較好生長。表1培養(yǎng)基對桔梗花粉萌發(fā)率的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>2.2PEG濃度篩選PEG4000是一種高分子量化合物，主要起到滲透調(diào)節(jié)作用。把新鮮花粉分別均勻散布在添加了0g丄'1、100g'L"、150g1/1、200g1/1、250g七"的PEG4000的BK培養(yǎng)基(所述0g丄—1為不添加PEG)中，蓋上蓋玻片于光照培養(yǎng)箱培養(yǎng)o結(jié)果如表2所示，ME3+BK+100g丄"蔗糖培養(yǎng)基中加入不同濃度的PEG4000，可明顯提高桔?；ǚ勖劝l(fā)率，其中添加150g乇"PEG4000效果最為顯著，花粉萌發(fā)率達(dá)到96.0%;低濃度PEG(lOOg.L-^SOOg.L")促進(jìn)花粉管生長，且隨濃度增加，促進(jìn)作用逐漸減弱，高濃度PEG(》250g丄")抑制花粉管生長；在顯微觀察時還發(fā)現(xiàn)，在添加了PEG的培養(yǎng)基中，桔梗花粉管生長較直，而未加PEG的培養(yǎng)基花粉管生長彎曲，常交織在一起，不便觀察測量。表2不同濃度PEG對花粉萌發(fā)生長的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>10084.383.379.082.2520.7501.5463.0495.115099.690.997.496.0446.7552.6441.9480.420076.686.189.684.1240.0277.8270.7262.925085.181.382.883.0160.0277.4317.0251.52.3蔗糖濃度試驗(yàn)蔗糖是一種滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)，同時也是花粉管生長的能源物質(zhì)。在150g丄"PEG4000+BK的培養(yǎng)基中分別增加50g七"、100g丄'1、150g丄"、200g-L—1的蔗糖，比較不同濃度的蔗糖對花粉萌發(fā)和花粉管生長的影響。結(jié)果如表3所示，ME3+BK+150g/LPEG培養(yǎng)基中不同濃度蔗糖對桔?；ǚ勖劝l(fā)率和花粉管生長影響不同，低濃度蔗糖(《100g，L")對花粉萌發(fā)和花粉管生長具有明顯促進(jìn)作用，而高濃度的蔗糖(》150g丄'1)可明顯抑制花粉萌發(fā)和花粉管生長，且隨著蔗糖濃度的增加，受到抑制程度越明顯。在含有100g丄"蔗糖的ME3+BK+150g/LPEG培養(yǎng)基上桔?；ǚ凵L最好，培養(yǎng)3h后，其花粉萌發(fā)率和花粉管長度分別達(dá)到97.2%和531.6pm。表3不同濃度蔗糖互作對花粉萌發(fā)生長的影響蔗糖濃度(g.L")萌發(fā)率(％)花粉管長度Oun)ABC平均值BC平均值A(chǔ)064.479.071.371.6407.3427.3392.095072.389.081.580.9493.7633.0364.7497.110096.097.098.697.2618.7478.3497.7531.615038.185.086.970.0180.7301.0347.7276.42003.16.16.95.4153.3164.6181.8166.62.4PH梯度試驗(yàn)在PH分別為4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0的BK+150g.L"PEG6000+100g.L-'蔗糖培養(yǎng)基上培養(yǎng)桔梗新鮮花粉，檢測培養(yǎng)基不同PH對桔?；ǚ勖劝l(fā)和花粉管生長的影響。結(jié)果如表4所示，培養(yǎng)基PH值變化對桔梗花粉萌發(fā)和花粉管生長均有顯著影響，PH值在4.57.0范圍內(nèi)，隨PH值的增加，花粉萌發(fā)率和花粉管長度均呈"單峰"曲線變化，即在PH值較小時花粉萌發(fā)率和花粉管長度隨PH的升高而增加，PH5.5時達(dá)到最大，之后開始下降。表明培養(yǎng)基H+濃度過高或過低均不利于桔?；ǚ勖劝l(fā)生長。在PH值在4.5-7.0范圍內(nèi)，篩選培養(yǎng)基最適PH的基礎(chǔ)上，又設(shè)置PH值為5.4、5.6、5.8三種處理，最后結(jié)果表明PH5.8為桔?；ǚ垭x體萌發(fā)生長的培養(yǎng)基最適酸堿度。表4不同PH值對花粉萌發(fā)生長的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>2.5培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時間試驗(yàn)在20。C、25°C、30°C、35°C、40°C5種不同溫度條件下，用150g.L"PEG6000+100g'L'1蔗糖+BK作為花粉萌發(fā)培養(yǎng)基，分別培養(yǎng)15min、30min、lh、1.5h、2h、3h、4h、6h、7.5h后觀察花粉萌發(fā)和花粉管生長情況，篩選最適培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時間。結(jié)果如表5所示，可以看出溫度對桔?；ǚ勖劝l(fā)生長具有顯著影響，在2(TC3(TC范圍，萌發(fā)率和花粉管長度隨溫度的升高而增大，當(dāng)溫度進(jìn)一步升高時，花粉萌發(fā)率有所下降，生長也減緩；表明桔?；ǚ勖劝l(fā)的最適培養(yǎng)溫度為3(TC，再次溫度下培養(yǎng)桔?；ǚ勖劝l(fā)率和花粉管長度達(dá)到最大值分別為99.7%和654.6pm。表5培養(yǎng)溫度對花粉萌發(fā)生長的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>2.6不同培養(yǎng)時間下桔?；ǚ垭x體萌發(fā)及花粉管生長:將新鮮的桔?；ǚ蹌蛉錾显赑H為5.8的BK+150g丄"PEG4000+100g-U1蔗糖的培養(yǎng)基上，置于底部墊有雙層濕濾紙的培養(yǎng)皿中，蓋緊蓋子并放入恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)30。C培養(yǎng)，培養(yǎng)后5min、10min、15min、30min、45min、lh、2h、3h、4h、6h、7.5h定時觀測花粉管生長情況。桔?；ǚ勖劝l(fā)生長情況如圖l所示，其中，橫坐標(biāo)為培養(yǎng)時間，左邊縱坐標(biāo)表示花粉萌發(fā)率(％)，右邊縱坐標(biāo)表示花粉管長度(pm);桔?；ǚ?0min開始萌動，15min花粉管從花粉孔中突出，20min花粉管長度己超過花粉粒直徑，花粉管開始快速生長，在開始培養(yǎng)的lh隨培養(yǎng)時間的延長桔?；ǚ勖劝l(fā)率迅速提高，lh后多數(shù)有活力花粉均已萌發(fā)，1.5h達(dá)到最大，之后萌發(fā)率不再增加；花粉管長度在初始培養(yǎng)的1.5h之前快速生長，之后花粉管生長逐漸停頓，4h花粉管生長交織在一起，花粉管頂端開始膨大，5h許多花粉管頂端破裂，內(nèi)容物放出。因此，在桔梗花粉在PH為5.8的BK+150g丄"PEG4000+100g丄"蔗糖的培養(yǎng)基上，3(TC恒溫光照條件下離體培養(yǎng)1.5h后，測量花粉的萌發(fā)率和花粉管的長度，能夠穩(wěn)定有效的反應(yīng)桔?；ǚ鄣幕盍Α?.離體萌發(fā)培養(yǎng)測定桔?；ǚ刍盍?)待測花粉處理-待測材料為陜西香菊制藥公司商洛藥源基地的兩年生桔梗栽培群體，2008年7月中旬于桔梗開花的盛花期間，選擇生長發(fā)育健壯無病蟲單株掛牌標(biāo)記，次日早晨6:00選擇即將開放的花蕾套袋，并于11:30摘取當(dāng)天套袋開放的花朵10朵，以后每天11:30采集開花后l天、2天、3天、4天、5天、6天的套袋花朵10朵，帶回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行花粉萌發(fā)率、花粉管生長測定。2)花粉離體萌發(fā)及花粉管生長吸取23滴花粉培養(yǎng)液(ME3+BK+100g丄'1的蔗糖+150g丄.1的PEG，PH為5.8)滴入凹形載玻片凹槽中，將采集到的桔梗花粉混合均后，用毛筆蘸取適量勻撒上在上述培養(yǎng)基上，用牙簽攪勻，將凹形載玻片置于底部墊有雙層濕濾紙的培養(yǎng)皿中，蓋緊蓋子并放入3(TC恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)光照培養(yǎng)；3)3(TC恒溫光照條件下離體培養(yǎng)1.5h后，測量花粉的萌發(fā)率和花粉管的長度?；ǚ勖劝l(fā)和花粉管長度檢測以花粉管長度大于花粉離直徑為花粉萌發(fā)標(biāo)準(zhǔn)，每處理重復(fù)3次，每重復(fù)隨機(jī)觀察3個視野，每視野觀察花粉數(shù)不少于50粒，統(tǒng)計花粉萌發(fā)率；同時用顯微測微尺測量花粉管長度Oim),每視野隨機(jī)測量10個花粉，每處理共測90個花粉管長度，計算其平均值。具體如表6所示，結(jié)果說明當(dāng)天的花粉活力最好，包括萌發(fā)率和離題花粉管長度在6天的檢測中結(jié)果最好；隨著時間增加花粉的活力逐漸下降，尤其是第6天與前5天相比，下降尤為明顯。表6桔?；ǚ鄣幕盍υ?6天的檢測結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>權(quán)利要求1、一種桔?；ǚ垭x體萌發(fā)液體培養(yǎng)基，其特征在于，以蒸餾水為溶劑，其包含的組分為ME3、BK、100g·L-1的蔗糖和150g·L-1的PEG，PH為5.8；所述ME3的組成為MgSO4·7H2O370mg·L-1、KNO3950mg·L-1、KH2PO485mg·L-1、CaCl·2H2O880mg·L-1、NH4NO3412.5mg·L-1、KCl175mg·L-1、H3BO350mg·L-1、Na2EDTA7.45mg·L-1、FeSO4·7H2O0.025mg·L-1、KI0.83mg·L-1、Na2MoO4·2H2O0.25mg·L-1、CuSO4·5H2O0.025mg·L-1、CoCl2·6H2O0.025mg·L-1、VB11.0mg·L-1和VB61.0mg·L-1；所述BK的組成為H3BO3100mg·L-1、Ca(NO3)2·4H2O300mg·L-1、MgSO4·7H2O200mg·L-1和KNO3100mg·L-1。2、一種利用桔梗花粉的離體萌發(fā)培養(yǎng)測定花粉活力的方法，其特征在于，包括以下步驟-1)花粉釆集選取發(fā)育正常、無病蟲危害的健壯植株，于桔梗盛花期選取正開花的花序，連同枝葉采取，移入盛有清水的容器瓶，室內(nèi)放置待花蕾自然開放，花粉從花藥中散出，收集花粉；2)花粉離體萌發(fā)及花粉管生長將花粉均勻撒在桔?；ǚ垭x體萌發(fā)液體培養(yǎng)基上，光照條件下3(TC恒溫培養(yǎng)；所述的桔?；ǚ垭x體萌發(fā)及花粉管生長液體培養(yǎng)基為ME3培養(yǎng)基+BK培養(yǎng)基+100g'L"的蔗糖+150g'U1的PEG,PH為5.8;花粉離體萌發(fā)培養(yǎng)lOmin后部分花粉開始萌發(fā)，花粉萌發(fā)后花粉管長度超過花粉粒直徑，花粉管開始快速生長；3)花粉活力的測定離體培養(yǎng)1.5h后，以花粉管長度大于花粉離直徑為花粉萌發(fā)標(biāo)準(zhǔn)；每次隨機(jī)觀察3個視野，每視野觀察花粉數(shù)不少于50粒，統(tǒng)計花粉萌發(fā)率，重復(fù)3次取平均數(shù)作為花粉萌發(fā)率測定結(jié)果，花粉萌發(fā)率反應(yīng)有生活力花粉所占比例；同時，用顯微測微尺測量花粉管長度，每視野隨機(jī)測量10個花粉，每處理共測卯個花粉管長度，計算其平均值，花粉離體萌發(fā)花粉管生長情況反應(yīng)花粉粒生理狀況的優(yōu)劣。全文摘要本發(fā)明公開了一種桔?；ǚ垭x體萌發(fā)液體培養(yǎng)基及利用其測定花粉活力的方法，在確定桔?；ǚ垭x體萌發(fā)培養(yǎng)體系后，對桔?；ǚ垭x體培養(yǎng)，可靠、有效的測定桔?；ǚ刍盍ΑＫ龅幕ǚ垭x體萌發(fā)液體培養(yǎng)基，以蒸餾水為溶劑，其包含的組分為ME₃、BK、100g·L^-1的蔗糖和150g·L^-1的PEG，pH為5.8；將花粉均勻撒在桔?；ǚ垭x體萌發(fā)培養(yǎng)基上，光照條件下30℃恒溫培養(yǎng)；離體培養(yǎng)1.5h后，測定花粉離體萌發(fā)與花粉管生長反應(yīng)花粉的活力以花粉管長度大于花粉離直徑為花粉萌發(fā)標(biāo)準(zhǔn)，統(tǒng)計花粉萌發(fā)率，花粉萌發(fā)率反應(yīng)有生活力花粉所占比例；測量花粉管長度，計算平均值，花粉離體萌發(fā)花粉管生長情況反應(yīng)花粉粒生理狀況的優(yōu)劣。文檔編號C12N5/04GK101633902SQ20091002368公開日2010年1月27日申請日期2009年8月25日優(yōu)先權(quán)日2009年8月25日發(fā)明者劉鳳霞,劉自剛,呼天明,楊亞麗,薛粉麗申請人:商洛學(xué)院