專利名稱：檢測鴨病毒性腸炎的pcr方法及試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬分子生物學(xué)領(lǐng)域，確切地說利用分子生物學(xué)檢測鴨病毒性腸炎的PCR方法及試 劑盒，特別是鴨瘟雞胚化弱毒疫苗株的檢測。
背景技術(shù)：
鴨病毒性腸炎(duck vi「al enteritis, DVE)，俗稱"鴨瘟"、"大頭瘟"或"爛腸瘟"。是鴨、 鵝和其他雁形目禽類的一種急性、熱性、敗血性傳染病。流行廣泛傳播迅速，發(fā)病率高和死 亡率大。
近十多年來，我國養(yǎng)鴨業(yè)獲得迅速發(fā)展，據(jù)2002年根據(jù)聯(lián)合國糧農(nóng)組織(FA0)統(tǒng)計， 我國鴨存欄約6. 61億只，占世界總量的69. 7%，可見我國是第一鴨生產(chǎn)大國。而且以每年10% 15%的速度遞增，新建的大規(guī)模養(yǎng)殖場逐漸增多，鴨產(chǎn)品的年產(chǎn)值己經(jīng)接近300億元人民幣， 而且遠(yuǎn)銷歐盟、東南亞、日本、韓國等地，隨著國民經(jīng)濟(jì)的進(jìn)一步發(fā)展，鴨產(chǎn)品空間還會不 斷擴(kuò)大，所以養(yǎng)鴨業(yè)存在巨大的潛力。但由于各地多渠道引進(jìn)種鴨或蛋，國內(nèi)禽產(chǎn)品市場交 流頻繁，集約化飼養(yǎng)缺乏管理經(jīng)驗(yàn)，防疫工作措施不當(dāng)，環(huán)境污染嚴(yán)重，導(dǎo)致鴨的各種疾病 不斷發(fā)生，而且越來越復(fù)雜，但危害較為嚴(yán)重的仍為病毒性傳染病，每年引起鴨死亡占到15% 20。/。，嚴(yán)重制約著我國養(yǎng)鴨業(yè)的持續(xù)穩(wěn)定發(fā)展。截止目前，我國從國外引進(jìn)種鴨(蛋)2000 萬只，鴨瘟是每次進(jìn)出境種鴨(蛋)必檢的項(xiàng)目。
目前診斷鴨病毒性腸炎的常規(guī)檢測方法有1.臨床綜合診斷；2.病毒的分離和鑒定； 3.微量血清中和試驗(yàn)；4.瓊脂糖凝膠沉淀試驗(yàn)(AGP); 5.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA); 6. 免疫熒光或免疫酶檢測技術(shù)。而且一種方法難以確定診斷，最后要經(jīng)過以上幾種方法試驗(yàn)進(jìn) 行綜合判斷。這些方法用于鴨瘟診斷耗時長，敏感性、特異性差，不利于快速、準(zhǔn)確診斷該 病。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種操作簡單、特異性強(qiáng)、敏感性高、成本低、適于大規(guī)模檢疫和 防疫監(jiān)測的檢測鴨病毒性腸炎的PCR方法及試劑盒。 檢測鴨病毒性腸炎的PCR方法的引物 Pl (37154-37173): 5 ' — CAAGGCTCTATTCGGTAATGAT—3 ' P2 (37580-37599): 5 ' — GAAGGCGGGTATGTAATGTACA—3 '。 檢測鴨病毒性腸炎的PCR方法,包括以下步驟 (1)常規(guī)方法提取待檢樣品基因；
4(2) 將引物Pl、 P2與PCR混合液加入PCR反應(yīng)管中混合后加入待檢樣品DNA，加入待 檢樣品基因；
(3) 將放入PCR反應(yīng)管放入PCR檢測儀中進(jìn)行反應(yīng)；
(4) 取PCR產(chǎn)物于1%瓊脂糖凝膠上電泳；
結(jié)果判定有擴(kuò)增產(chǎn)物約446bp,核苷酸序如序列表SEQ IDNO. 1，為陽性；無擴(kuò)增產(chǎn)物 約446bp為陰性；
步驟(2)所述的PCR混合物包括PCR緩沖液、dNTP 、 rTaq酶； 按引物P1 (10umol/L) luL 、 引物P2 (10umol/L) luL、
10XPCR緩沖液(10mraol/L) 5nL 、 dNTP (1O國ol/L) 4 u L、 rTaq酶(5U/uL) 0.25uL、 待檢病毒DNA模板 3 n L、
加純水至總體積50uL ;
本發(fā)明檢測鴨病毒性腸炎的PCR的方法，陽性對照品為鴨瘟雞胚化弱毒疫苗株，質(zhì)量濃 度選自0.07ixg/ uL的102 109倍倍遞增稀釋液。
步驟(3)按①溫度94。C、時間5min， 1個循環(huán)；②溫度94'C、時間30s ，溫度47'C、 時間30s ,溫度72"C、時間35s ， 35個循環(huán)，進(jìn)行PCR反應(yīng)； 檢測鴨病毒性腸炎的PCR的試劑盒它包括
溶液1: 1比1比例的引物P1、 P2;
溶液2:包括5: 4: 0. 25比例的10XPCR緩沖液(1O鵬ol/L) 、 d, (10腦1/L)、 rTaq酶(5U/uL);
檢測鴨病毒性腸炎的PCR的試劑盒的使用方法
(l)將所述溶液l: 2uL與溶液2: 9.25nL加入PCR反管內(nèi)混合后，分別加入待檢 樣品DNA溶液、陽性對照品、陰性對照、空白對照3uL，加純水至總體積50uL;
(2) 將加好樣品的PCR反應(yīng)管按順序放入PCR檢測儀中；
(3) 按①溫度94。C、時間5min， 1個循環(huán)；②溫度94。C、時間30s ，溫度47'C、時間 30s ，溫度72。C、時間35s ， 35個循環(huán)，進(jìn)行PCR反應(yīng)；
(4) 取8 uL PCR產(chǎn)物于1%瓊脂糖凝膠上電泳；
陽性對照應(yīng)出現(xiàn)一條約446bp的DNA條帶，陰性對照和空白對照沒有核酸條帶，試驗(yàn)成
卞-
待檢樣品經(jīng)電泳出現(xiàn)約446bp的DNA條帶，核苷酸序如序列表SEQ ID N0， 1，可判為陽性。
待檢樣品未出現(xiàn)DNA條帶，或者出現(xiàn)的條帶不是約446bp判為陰性。
本發(fā)明根據(jù)GenBank中發(fā)表的有關(guān)鴨病毒性腸炎的序列，選定其中的基因(UL30、 UL31) 經(jīng)過篩選，設(shè)計并合成一對特異性引物，對鴨瘟雞胚化弱毒疫苗株、標(biāo)準(zhǔn)毒株以及各地野株 提取的病毒DNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，均得到446bp的與預(yù)期大小相符的特異性條帶，擴(kuò)增產(chǎn)物 經(jīng)凝膠回收后，連接到pMD18-T載體上，并進(jìn)行PCR鑒定和Hind III/EcoR I雙酶切鑒定測序， 序列測定結(jié)果與己發(fā)表UL30、 UL31區(qū)的進(jìn)行比較，同源性達(dá)100%，沒有發(fā)現(xiàn)變異現(xiàn)象。
對7種鴨易感病原體(鴨病毒性肝炎、鴨巴氏桿菌、鴨大腸桿菌、鴨沙門氏菌、鵝源禽流 感H5毒株、新城疫、小鵝瘟)，3種同類病毒(豬偽狂犬病毒、牛傳染性鼻氣病毒、馬立克氏 病病毒；均無反應(yīng)；敏感性檢測表明，最小檢測量2. lfg (或拷貝)。
抗凝血、糞便、腦、心、肝、脾、肺、腎、腸等DNA提取物用所本發(fā)明建立的PCR方法 檢測，均擴(kuò)增出大小約446 bp的DNA片段，適于臨床和口岸檢測。
本發(fā)明與常規(guī)的鴨瘟診斷以病毒分離和瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)、ELISA等血清學(xué)試驗(yàn)進(jìn)行綜合判 斷以及其它PCR方法相比，靈敏度高、快速特異、操作簡便、易標(biāo)準(zhǔn)化，與現(xiàn)有PCR方法相 比特異性強(qiáng)、靈敏度高，杜絕假陽性、假陰性的出現(xiàn)。以鴨瘟雞胚化弱毒疫苗株做陽性對照 更安全。
組裝的標(biāo)準(zhǔn)化的試劑盒，性能穩(wěn)定，操作方便、迅速，擴(kuò)增產(chǎn)量高，并制定了準(zhǔn)確的判 定標(biāo)準(zhǔn)。


圖l PCR電泳圖，其中h正常SPF雞胚2: CEF細(xì)胞對照；3:標(biāo)準(zhǔn)毒株目的基因擴(kuò)增
片段；M: DL2000。
圖2標(biāo)準(zhǔn)毒株目的基因的PCR敏感性圖，其中1、 2,3,4,5,6,7,8,9,10,11: 100-1010稀 釋模板；M: DL2000。
圖3特異性PCR電泳結(jié)果圖，其中l(wèi):鴨病毒性肝炎；2:鴨巴氏桿菌；3:鴨大腸桿菌； 4:鴨沙門氏菌；5:鵝源禽流感H5毒株；6:新城疫；7:小鵝瘟；8:標(biāo)準(zhǔn)毒株陽性對照；M:
DL2000
圖4同類病毒特異性結(jié)果圖，1:豬偽狂犬病毒，2:牛傳染性鼻氣病毒，3:馬立克氏病 病毒；4:標(biāo)準(zhǔn)毒株；M: DL2000
圖5已知毒株的檢測結(jié)果，種l, 2， 3:己知鴨病毒性腸炎病毒；4， 5， 6: 3株疫苗毒株。
6圖6疑似病料的PCR檢測結(jié)果，其中1， SP070405; 2: SP080325; 3: TM050211; 4: CC070322; 5: CC070326; 6: CC041217; 7:陰性對照；8:標(biāo)準(zhǔn)毒株對照；M: DL2000。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例l
鴨瘟雞胚化弱毒疫苗株，購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，寶生物工程(大連)有限公司的DNA 提取試劑盒提取DNA;
選取GenBank (登錄號:EF417996)中UL30、 UL31 一段序列為模板，用Primer 5. 0軟 件設(shè)計并合成一對引物P1、 P2,理論擴(kuò)增片段為446bp，引物的位置和序列如下 Pl (37154-37173): 5 一 一CAAGGCTCTATTCGGTAATGAT—3 ' P2 (37580-37599): 5 ' —GAAGGCGGGTATGTAATGTACA — 3 '
由大連寶生物工程有限公司合成；
按表l的反應(yīng)體系；
表1 PCR反應(yīng)體系組成
溶液種類體積(ia)
10 X PCR緩沖液(10mmol/L)5
dNTP (10,1/L)4
引物P1 (10nmol/L)1
引物P2 (10umol/L)1
rTaq酶(5U/ u L)0.25
病毒DNA模板3
純H2。35. 75
總體積50
按表2的PCR反應(yīng)條件;
表2 PCR擴(kuò)增程序
循環(huán)階段循環(huán)數(shù)溫度(°c)時間
11945min
9430s
2354730s
7235s3 1 4'C 保存
同時用正常SPF雞胚和CEF細(xì)胞作陰性對照；
取8 UL上述的PCR產(chǎn)物于iy。瓊脂糖凝膠上電泳，鴨瘟雞胚化弱毒疫苗株(簡稱鴨胚毒) 擴(kuò)增產(chǎn)物約446 bp，結(jié)果大小相符；正常SPF雞胚和CEF細(xì)胞對照液均未檢出產(chǎn)物，電泳結(jié) 果見附圖l。
實(shí)施例2
將實(shí)施1中鴨瘟雞胚化弱毒疫苗株(簡稱鴨胚毒)PCR產(chǎn)物，在1.0%低熔點(diǎn)瓊脂糖凝膠 上進(jìn)行電泳，切下目的條帶，按微量凝膠回收試劑盒的使用說明回收目的DNA;將純化的目 的DNA 4. 5 u L、 T載體0. 5 U L和連接液5 P L混勻，16°C連接過夜，轉(zhuǎn)化DH5 a感受態(tài) 細(xì)胞，挑取白色菌落接種5 mL LB液體培養(yǎng)基，37°C水浴中搖振培養(yǎng)12 h;經(jīng)堿裂解法提 取質(zhì)粒，Hind III/EcoR I雙酶切鑒定為陽性質(zhì)粒，送上海鼎安生物科技有限公司測序，測序 結(jié)果見序列表SEQ ID NO. 1。測序結(jié)果表明，PCR擴(kuò)增片段長度為446bp,將所得序列與GenBank (登錄號EF417996)己發(fā)表的序列比較，二者的同源性為100%。
實(shí)施例3 敏感性試驗(yàn)
將鴨瘟雞胚化弱毒疫苗株雞胚培養(yǎng)物提取DNA，核酸測定儀上測定核酸質(zhì)量濃度為 0.07ug/ uL，用配制的TE (pH8.0) 10倍遞增稀釋提取的DNA模板，每個稀釋度各取3 uL 模板DNA，按實(shí)施例l檢測，觀察陽性條帶，以出現(xiàn)陽性預(yù)期條帶所用模板量的最高稀釋度 計算其敏感性，結(jié)果最小檢出量為2.1 fg，見圖2。
實(shí)施例4
按實(shí)施例1方法，以鴨瘟雞胚化弱毒疫苗株(簡稱鴨胚毒)作對陽性對照，分別對鴨病 毒性肝炎、巴氏桿菌、大腸桿菌、沙門氏菌、鵝源禽流感H5毒株、新城疫、小鵝瘟，以及與 鴨病毒性腸炎病毒同類皰疹病毒豬偽狂犬病毒、牛傳染性鼻氣病毒、馬立克氏病病毒；鴨 病毒性肝炎、鴨巴氏桿菌、鴨大腸桿菌、鴨沙門氏菌、鵝源禽流感H5毒株、新城疫、小鵝瘟 進(jìn)行檢測，未能擴(kuò)增出任何條帶，鴨瘟雞胚化弱毒疫苗株(簡稱鴨胚毒)擴(kuò)增出約446bp條 帶，見圖3，圖4。
實(shí)施例5
對本實(shí)驗(yàn)室保存的3株已知鴨病毒性腸炎病毒和購買的3株疫苗毒株，按實(shí)施例1方法 檢測，結(jié)果6個樣品均觀察特異性擴(kuò)增條帶，見圖5。
6個樣品的擴(kuò)增產(chǎn)物按實(shí)施例2測序，將所得核苷酸序列與GenBank (登錄號EF417996)已發(fā)表的序列比較，同源性為100%。 實(shí)施例6按實(shí)例1方法，以正常健康鴨組織作為陰性對照，分別收集吉林省部分地區(qū)送檢的，經(jīng) 臨床綜合診斷、病毒的分離和鑒定、微量血清中和試驗(yàn)綜合診斷為鴨病毒性腸炎的病料6份 (SP070405， SP080325, TM050211, CC070322, CC070326, CC041217),均觀察到特異性擴(kuò)增 條帶，而正常健康鴨組織無擴(kuò)增條帶，見附圖6。6個樣品的擴(kuò)增產(chǎn)物按實(shí)施例2測序，將所得核苷酸序列與GenBank (登錄號EF417996) 已發(fā)表的序列比較，同源性為100%。實(shí)施例7將鴨病毒性腸炎標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)毒DPV-F37 (購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所)1000倍滅菌生理鹽水稀 釋后，按每只0.2mL劑量給健康北京鴨肌肉注射，共注射4只；另設(shè)2只對照，肌肉注射滅 菌生理鹽水，每只0. 2 mL;攻毒組4只北京鴨(人工感染)在攻毒后1周內(nèi)全部死亡，分別采集抗凝血0. 5mL，分別 收集糞便、腦、心、肝、脾、肺、腎、腸0.5 g，加入10倍量滅菌PBS，研磨，反復(fù)凍融3 次，分別以3000r/min離心15min后取上清，按實(shí)例1方法檢測，觀察特異性擴(kuò)增條帶；結(jié) 果見表5對照組2只北京鴨處死，和攻毒同樣方法采樣，按實(shí)例1方法檢測無特異性擴(kuò)增條帶為 陰性，見表5。表5鴨組織病料PCR檢測結(jié)果組織類別攻毒鴨編號對照組編號12341 2抗凝血+++一 —糞++++— —腦++++一 —心++++— —肝++++一 —脾++++— —肺++— —腎++++一 一腸+十++— —9攻毒組擴(kuò)增產(chǎn)物按實(shí)施例2測序，將所得核苷酸序列與GenBank (登錄號EF417996) 已發(fā)表的序列比較，同源性為100%。 實(shí)施例8對三個種鴨場，在鴨瘟雞胚化弱毒疫苗(簡稱鴨胚毒)免疫后的三個月后，隨機(jī)抽取30 只分別采集抗凝血0.5mL，加入10倍量滅菌PBS,研磨，反復(fù)凍融3次，分別以3000 r/min 離心15min后取上清，按實(shí)施例l方法進(jìn)行檢測，均擴(kuò)增出了擴(kuò)增出約446 bp條帶。實(shí)施例9利用已建立的PCR方法，分別對來自10個不同地區(qū)的散養(yǎng)鴨采集的55份樣品，梅河口、雙 遼兩家大型種鴨場的100份樣品，以及近3年來進(jìn)境檢疫保存的驗(yàn)余樣品的30份隨機(jī)樣品分別 按實(shí)施例進(jìn)行了測定，結(jié)果臨床樣品有3份出現(xiàn)特異性擴(kuò)增條帶；見表6對3份出現(xiàn)特異性擴(kuò)增條帶的擴(kuò)增物按實(shí)施例2測序，將所得核苷酸序列與GenBank (登 錄號EF417996)己發(fā)表的序列比較，同源性為100%。表6采集樣品的檢測結(jié)果散戶/鴨場 樣品數(shù) 陽性數(shù) 陰性數(shù)德惠303磬石202四平1019長春16016圖們312臨江404長白615白城606前郭505雙遼某鴨場50050梅河口某鴨場50050本實(shí)驗(yàn)室30030合計185318210SEQUENCE LISTING<110> 吉林大學(xué)〈120> 檢測鴨病毒性腸炎的PCR方法及試劑盒<160> 1〈210〉 1〈211> 446〈212〉 DNA〈213> 鴨病毒性腸炎雞胚化弱毒疫苗株C-KCE 〈■> 1CMGGCTCTATTCGGTMTG ATCACAAAAC TTCGGAAGCTGTTTTAAAACGCTTTATTCC60AGAAACATACTGTGAGAGTG ACGAAACCGC AGCACTGCTATCTTCGGCCGGGTTTGCAGA120AGTGCGCTTGTACCCAGGGA TGCCACTCAG CGAGGAGGAGGAAAATCGTCAAAAGCTGCG180TAGAGCTTTCGATATTCTAG CAGAAGTTCC CCATCG嵐TTMGGTCGCACATTTTACAA240TAAATATCTTCMTACTTAT CTGTGGTACG CTGTCCACGTCAGTTTGCCGTTCGCGGTCG300CGCCTCACGACAAGTACGAA TGTAGMTGC CAAACATGAGCCATTAGACGGTATCCCCGG360CMGCAGATTTMGGCAGTC GATGAGACGA TAGTGTAGATGTACGGCATTTCCAGTAAAT420GGMTGTACATTACATACCC GCCTTC44權(quán)利要求
1、檢測鴨病毒性腸炎的PCR方法的引物P1(37154-37173)5′-CAAGGCTCTATTCGGTAATGAT-3′P2(37580-37599)5′-GAAGGCGGGTATGTAATGTACA-3′。
2、 檢測鴨病毒性腸炎的PCR方法，包括以下步驟(1) 常規(guī)方法提取待檢樣品基因；(2) 將引物Pl、 P2與PCR混合液加入PCR反應(yīng)管中混合后加入待檢樣品DNA，加入待 檢樣品基因；(3) 將放入PCR反應(yīng)管放入PCR檢測儀中進(jìn)行反應(yīng)；(4) 取PCR產(chǎn)物于1%瓊脂糖凝膠上電泳；結(jié)果判定有擴(kuò)增產(chǎn)物約446bp,為陽性；無擴(kuò)增產(chǎn)物約446bp為陰性。
3、 根據(jù)權(quán)利要求2所述的檢測鴨病毒性腸炎的PCR方法，其特征在于步驟(2)所述的 PCR混合物包括PCR緩沖液、dNTP 、 rTaq酶；按引物P1 (10nmol/L) luL、 引物P2 (10umol/L) 1 y L、10XPCR緩沖液(10咖ol/L) 5uL 、 dNTP (10mmol/L) 4 P L、 rTaq酶(5U/ti L) 0. 25 y L、 待檢病毒DNA模板 3uL、加純水至總體積50uL 。
4、 根據(jù)權(quán)利要求2所述的檢測鴨病毒性腸炎的PCR方法，其特征在于陽性對照品為鴨 瘟雞胚化弱毒疫苗株，質(zhì)量濃度選自0. 07 w g / w L的102 109倍倍遞增稀釋液。
5、 根據(jù)權(quán)利要求2、 3所述的檢測鴨病毒性腸炎的PCR方法，其特征在于步驟(3)按 ①溫度94'C、時間5min， 1個循環(huán)；②溫度94。C、時間30s ，溫度47。C、時間30s ，溫度 72°C、時間35s ， 35個循環(huán)，進(jìn)行PCR反應(yīng)。
6、 根據(jù)權(quán)利要求5所述的檢測鴨病毒性腸炎的PCR方法，其特征在于所述的擴(kuò)增產(chǎn)物 約446bp，其核苷酸序如序列表SEQ ID NO. 1。
7、 檢測鴨病毒性腸炎的PCR試劑盒它包括溶液l: 1比1比例的引物P1、 P2;溶液2:包括按5: 4: 0. 25比例的10X PCR緩沖液(10mmol/L) 、 dNTP (10mmol/L)、 rTaq酶(5U/nL)。
8、 根據(jù)權(quán)利要求6所述的檢測鴨病毒性腸炎的PCR試劑盒，其特征在于陽性對照品為 鴨瘟雞胚化弱毒疫苗株，質(zhì)量濃度選自0. 07 Pg / wL的102 109倍倍遞增稀釋液。
9、 檢測鴨病毒性腸炎的PCR試劑盒的使用方法(O將所述溶液h 2uL與溶液2: 9.25uL加入PCR反管內(nèi)混合后，分別加入待檢樣 品DNA溶液、陽性對照品、陰性對照、空白對照3wL，加純水至總體積50uL;(2) 將加好樣品的PCR反應(yīng)管按順序放入PCR檢測儀中；(3) 按①溫度94T:、時間5min, 1個循環(huán)；②溫度94。C、時間30s ，溫度47。C、時間 30s ，溫度72。C、時間35s , 35個循環(huán)，進(jìn)行PCR反應(yīng)；(4) 取8 uL PCR產(chǎn)物于1%瓊脂糖凝膠上電泳；陽性對照應(yīng)出現(xiàn)一條約446bp的DNA條帶，陰性對照和空白對贈沒有核酸條帶，試驗(yàn)成待檢樣品經(jīng)電泳出現(xiàn)約446bp的DNA條帶，可判為陽性；待檢樣品未出現(xiàn)DNA條帶，或者出現(xiàn)的條帶不是約446bp判為陰性。
10、根椐權(quán)利要求9所述的檢測鴨病毒性腸炎的PCR試劑盒的使用方法其特征在于所 述的約446bp的DNA條帶，其核苷酸序如序列表SEQ ID NO. 1。
全文摘要
本發(fā)明公開了檢測鴨病毒性腸炎的PCR方法，選擇鴨病毒性腸炎UL30、UL31基因片段，經(jīng)過篩選確定一對引物，對標(biāo)準(zhǔn)毒株以及各地野株提取的病毒DNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，均得到約446bp條帶，序列測定結(jié)果與已發(fā)表UL30、UL31區(qū)的進(jìn)行比較，同源性達(dá)100％，沒有發(fā)現(xiàn)變異現(xiàn)象，對6種鴨易感病毒、3種同類病毒均無反應(yīng)；各種組織DNA提取物用所建立的PCR方法檢測，均擴(kuò)增出大小約446bp的DNA片段，最小檢測量2.1fg(或拷貝)，適于臨床和口岸檢測，本發(fā)明靈敏度高、快速特異、操作簡便、易標(biāo)準(zhǔn)化；組裝的標(biāo)準(zhǔn)化試劑盒，性能穩(wěn)定，操作方便、迅速，擴(kuò)增產(chǎn)量高，以鴨瘟雞胚化弱毒疫苗株做陽性對照更安全并制定了準(zhǔn)確的判定標(biāo)準(zhǔn)。
文檔編號C12Q1/70GK101514374SQ20091006658
公開日2009年8月26日 申請日期2009年3月2日 優(yōu)先權(quán)日2009年3月2日
發(fā)明者劉靜波, 玉 周, 潘風(fēng)光 申請人:吉林大學(xué)