專利名稱：轉(zhuǎn)基因抗旱大豆土壤環(huán)境安全評(píng)價(jià)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種轉(zhuǎn)基因大豆環(huán)境安全評(píng)價(jià)方法，尤其是轉(zhuǎn)基因抗旱大豆土壤環(huán)境安全評(píng) 價(jià)方法。
背景技術(shù)：
轉(zhuǎn)基因大豆是把目的基因通過(guò)一定方法導(dǎo)入大豆后創(chuàng)制的大豆新品種。轉(zhuǎn)基因大豆從創(chuàng) 制到生產(chǎn)中應(yīng)用，需要經(jīng)過(guò)環(huán)境和生物安全性評(píng)價(jià)，只有安全評(píng)價(jià)合格的轉(zhuǎn)基因大豆才能夠 進(jìn)入生產(chǎn)中應(yīng)用。對(duì)轉(zhuǎn)基因作物商品化前的環(huán)境安全評(píng)價(jià)是防止轉(zhuǎn)基因作物大面積種植所可 能帶來(lái)的對(duì)生態(tài)系統(tǒng)和人類生存潛在威脅的重要手段。中國(guó)在轉(zhuǎn)基因大豆新品種創(chuàng)制研究方 面剛剛起步，轉(zhuǎn)基因抗旱大豆土壤環(huán)境評(píng)價(jià)方法是結(jié)合中國(guó)目前創(chuàng)制的自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的轉(zhuǎn)基 因抗旱大豆而建立的土壤環(huán)境安全評(píng)價(jià)方法。

發(fā)明內(nèi)容
轉(zhuǎn)基因大豆目前在歐盟、美國(guó)、加拿大已經(jīng)廣泛種植，但目前種植的品種僅為轉(zhuǎn)基因抗 除草劑大豆，因此歐美等國(guó)家所建立的轉(zhuǎn)基因大豆環(huán)境安全評(píng)價(jià)方法也只適用于對(duì)轉(zhuǎn)基因抗 除草劑大豆的環(huán)境安全評(píng)價(jià)。轉(zhuǎn)基因抗旱大豆是為解決干旱這一制約中國(guó)大豆主產(chǎn)區(qū)產(chǎn)量和 品質(zhì)瓶頸問(wèn)題而創(chuàng)制的，由于轉(zhuǎn)基因抗旱大豆與歐美等國(guó)目前種植的轉(zhuǎn)基因抗除草劑大豆導(dǎo) 入的目的基因不同，因此歐美等國(guó)建立的轉(zhuǎn)基因抗除草劑大豆安全評(píng)價(jià)方法則不適合對(duì)我國(guó) 自主研制的轉(zhuǎn)基因抗旱大豆進(jìn)行環(huán)境安全性評(píng)價(jià)。本項(xiàng)發(fā)明提出轉(zhuǎn)基因抗旱大豆土壤環(huán)境安 全評(píng)價(jià)方法，應(yīng)用轉(zhuǎn)基因抗旱大豆土壤環(huán)境安全評(píng)價(jià)方法可檢測(cè)轉(zhuǎn)基因抗旱大豆種植后是否 會(huì)對(duì)土壤功能微生物、病原微生物和土壤酶產(chǎn)生影響，對(duì)確保這一應(yīng)用前景廣闊的轉(zhuǎn)基因抗 旱大豆安全地投入生產(chǎn)，提高中國(guó)大豆生產(chǎn)的產(chǎn)量和品質(zhì)具有重要作用。此外，本項(xiàng)方法也 適用于對(duì)其他轉(zhuǎn)基因抗旱作物進(jìn)行土壤環(huán)境的安全性評(píng)價(jià)。
本項(xiàng)發(fā)明解決其技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案是利用轉(zhuǎn)基因抗旱大豆根系提取物添加到 培養(yǎng)基中，把已經(jīng)從土壤中分離并鑒定的土壤功能微生物和病原微生物接種到上述培養(yǎng)基中 培養(yǎng)，觀察并測(cè)定轉(zhuǎn)基因抗旱大豆根系分泌物對(duì)土壤功能微生物和病原微生物生長(zhǎng)及其功能 微生物所產(chǎn)生相應(yīng)酶活性的影響。
本發(fā)明的有益效果是在室內(nèi)采用培養(yǎng)基中添加轉(zhuǎn)基因抗旱大豆根系提取物和適合微生
物生長(zhǎng)的純培養(yǎng)條件下，可以快速檢測(cè)轉(zhuǎn)基因抗旱大豆對(duì)土壤功能微生物、病原微生物生長(zhǎng)
和功能微生物所產(chǎn)生相應(yīng)酶活性的影響。室內(nèi)檢測(cè)，易于控制環(huán)境條件，準(zhǔn)確且檢測(cè)周期短。
該方法可為轉(zhuǎn)基因抗旱作物從研制到投入生產(chǎn)提供安全可靠的土壤環(huán)境評(píng)價(jià)方法，確保轉(zhuǎn)基 因抗旱作物安全投入生產(chǎn)，并獲得最佳經(jīng)濟(jì)效益。
具體實(shí)施例方式
分別取轉(zhuǎn)基因抗旱大豆根系和冋一品種非轉(zhuǎn)基因大豆根系100g勻漿后過(guò)濾，低溫冷凍離 心機(jī)4000g下離心后取上清液置于4。C冰箱中保存?zhèn)溆?。針?duì)每種功能微生物和病原微生物分
別配制適合其生長(zhǎng)的選擇性培養(yǎng)基，在各選擇性培養(yǎng)基中分別添加上述轉(zhuǎn)基因抗旱大豆根系 和同一品種非轉(zhuǎn)基因大豆根系提収物O， 1%， 0.1%， 0.01%， 0.001%, 0.0001%后倒平板，5次
重復(fù)。在倒平板后的每種不同的選擇性培養(yǎng)基中分別接種功能微生物如固氮菌、硅酸鹽細(xì)菌、 木霉、巨大芽孢桿菌、枯草芽孢桿茵等和大豆根部病原菌如疫霉菌。28'C 3(TC條件下培養(yǎng)5
7天后測(cè)定各平板培養(yǎng)基中功能'i:生物和病原微生物菌落直徑，比對(duì)各功能菌和病原菌在含有轉(zhuǎn)基因抗旱大豆和同一品種非轉(zhuǎn)^因大豆根系提取物培養(yǎng)基中菌落直徑的差異顯著性，確定 轉(zhuǎn)基因抗旱大豆對(duì)土壤功能微生物和病原微生物是否具有影響。
將上述接種各功能菌的選擇性培養(yǎng)基在28 3(TC條件下繼續(xù)培養(yǎng)至10天后，在28'C 30
'C條件下干燥后研細(xì)，測(cè)定每:個(gè)培養(yǎng)基中功能菌對(duì)應(yīng)的酶活性，如脲酶、磷酸酶和纖維素酶 活性。
權(quán)利要求
轉(zhuǎn)基因抗旱大豆土壤環(huán)境安全評(píng)價(jià)方法，其特征是1.分別取轉(zhuǎn)基因抗旱大豆根系和同一品種非轉(zhuǎn)基因大豆根系100g勻漿后過(guò)濾，低溫冷凍離心機(jī)4000g下離心后取上清液置于4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩ａ槍?duì)每種功能微生物和病原微生物分別配制適合其生長(zhǎng)的選擇性培養(yǎng)基，在各選擇性培養(yǎng)基中分別添加上述轉(zhuǎn)基因抗旱大豆根系和同一品種非轉(zhuǎn)基因大豆根系提取物0，1％，0.1％，0.01％，0.001％，0.0001％后倒平板，5次重復(fù)。在倒平板后的每種不同的選擇性培養(yǎng)基中分別接種功能微生物如固氮菌、硅酸鹽細(xì)菌、木霉、巨大芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌等和大豆根部病原菌如疫霉菌。28℃～30℃條件下培養(yǎng)5～7天后測(cè)定各平板培養(yǎng)基中功能微生物和病原微生物菌落直徑，比對(duì)各功能菌和病原菌在含有轉(zhuǎn)基因抗旱大豆和同一品種非轉(zhuǎn)基因大豆根系提取物培養(yǎng)基中菌落直徑的差異顯著性，確定轉(zhuǎn)基因抗旱大豆對(duì)土壤功能微生物和病原微生物是否具有影響。2.將上述接種各功能菌的選擇性培養(yǎng)基在28～30℃條件下繼續(xù)培養(yǎng)至10天后，在28℃～30℃條件下干燥后研細(xì)，測(cè)定每個(gè)培養(yǎng)基中功能菌對(duì)應(yīng)的酶活性，如脲酶、磷酸酶和纖維素酶活性。
1. 分別取轉(zhuǎn)基因抗旱大豆根系和同一品種非轉(zhuǎn)基因大豆根系100g勻漿后過(guò)濾，低溫冷凍離 心機(jī)4000g下離心后取上清液置于4'C冰箱中保存?zhèn)溆?。針?duì)每種功能微生物和病原微生物 分別配制適合其生長(zhǎng)的選擇性培養(yǎng)基，在各選擇性培養(yǎng)基中分別添加上述轉(zhuǎn)基因抗旱大豆根 系和同一品種非轉(zhuǎn)基因大豆根系提取物O， 1%， 0.1%， 0.01%， 0.001%， 0.0001%后倒平板， 5次重復(fù)。在倒平板后的每種不同的選擇性培養(yǎng)基中分別接種功能微生物如固氮菌、硅酸鹽 細(xì)菌、木霉、巨大芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌等和大豆根部病原菌如疫霉菌。28'C 3(TC條件 下培養(yǎng)5 7天后測(cè)定各平板培養(yǎng)基中功能微生物和病原微生物菌落直徑，比對(duì)各功能菌和病 原菌在含有轉(zhuǎn)基因抗旱大豆和同一品種非轉(zhuǎn)基因大豆根系提取物培養(yǎng)基中菌落直徑的差異顯 著性，確定轉(zhuǎn)基因抗旱大豆對(duì)土壤功能微生物和病原微生物是否具有影響。
2. 將上述接種各功能菌的選擇性培養(yǎng)基在28 3(TC條件下繼續(xù)培養(yǎng)至10天后，在28'C 30 'C條件下干燥后研細(xì)，測(cè)定每個(gè)培養(yǎng)基中功能菌對(duì)應(yīng)的酶活性，如脲酶、磷酸酶和纖維素酶 活性。
全文摘要
本發(fā)明提供一種轉(zhuǎn)基因抗旱大豆土壤環(huán)境安全評(píng)價(jià)方法。分別取轉(zhuǎn)基因抗旱大豆根系和同一品種非轉(zhuǎn)基因大豆根系100g勻漿后過(guò)濾，低溫冷凍離心機(jī)4000g下離心后取上清液置于4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩ａ槍?duì)每種功能微生物和病原微生物分別配制適合其生長(zhǎng)的選擇性培養(yǎng)基，在各選擇性培養(yǎng)基中分別添加上述轉(zhuǎn)基因抗旱大豆根系和同一品種非轉(zhuǎn)基因大豆根系提取物0，1％，0.1％，0.01％，0.001％，0.0001％后倒平板，5次重復(fù)。在倒平板后的每種不同的選擇性培養(yǎng)集中分別接種功能微生物如固氮菌、硅酸鹽細(xì)菌、木霉、巨大芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌等和大豆根部病原菌如疫霉菌。28℃～30℃條件下培養(yǎng)5～7天后測(cè)定各平板培養(yǎng)基中功能微生物和病原微生物菌落直徑，比對(duì)各功能菌和病原菌在含有轉(zhuǎn)基因抗旱大豆和同一品種非轉(zhuǎn)基因大豆根系提取物培養(yǎng)基中菌落直徑的差異顯著性，確定轉(zhuǎn)基因抗旱大豆對(duì)土壤功能微生物和病原微生物是否具有影響。將上述接種各功能菌的選擇性培養(yǎng)基在28～30℃條件下繼續(xù)培養(yǎng)至10天后，在28℃～30℃條件下干燥后研細(xì)，測(cè)定每個(gè)培養(yǎng)基中功能菌對(duì)應(yīng)的酶活性，如脲酶、磷酸酶和纖維素酶活性。
文檔編號(hào)C12Q1/18GK101665819SQ20091007298
公開(kāi)日2010年3月10日 申請(qǐng)日期2009年9月28日 優(yōu)先權(quán)日2009年9月28日
發(fā)明者偉 丁, 李文濱, 王振華, 閆春秀 申請(qǐng)人:東北農(nóng)業(yè)大學(xué)