專利名稱：一種測定大豆子葉細胞數(shù)的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種測定大豆子葉細胞數(shù)的方法。
背景技術(shù)：
大豆的單粒重是大豆產(chǎn)量的重要構(gòu)成因素之一。大豆單粒重是由兩個因素所決定的， 一是大豆子葉細胞數(shù)目，二是大豆子葉細胞的體積或重量。然而，在國內(nèi)有關(guān)大豆子葉細胞數(shù)目的測定方法報道很少。國外有關(guān)子葉細胞數(shù)目的
測定方法有少量報道，如孚爾根染色法(1966)和鉻酸離析法(1987)等。雖然這些測定方法可用，但是測定步驟繁瑣，在實驗中常使得測定結(jié)果很不理想。特別是在成熟籽粒的測定過程中，由于成熟籽粒的子葉細胞內(nèi)貯藏性物質(zhì)增多，即細胞內(nèi)存在蛋白質(zhì)、淀粉顆粒及油脂滴，這就使得細胞染色和離析的結(jié)果很不理想，導(dǎo)致估算的子葉細胞數(shù)目與實際數(shù)值存在相當大的誤差。鉻酸離析法(1987)所用的鉻酸濃度為5%，此濃度偏低導(dǎo)致子葉細胞離析不充分，在視野中含有大量未離析的細胞團，容易導(dǎo)致未離析細胞數(shù)目的損失，影響最終的測定結(jié)果，從而測定不夠準確且測定步驟繁瑣，操作復(fù)雜；該方法中子葉溶于鉻酸72小時后，再除去絡(luò)酸會導(dǎo)致部分子葉細胞數(shù)目的損失，之后充分碾細會導(dǎo)致子葉細胞破裂，進一步引起子葉細胞數(shù)目的減少；該方法還需要用濾紙濾出未溶解的余渣，然后烘干，稱重濾紙，求得余渣重量。由于余渣重量相對于濾紙重量來說是非常微小的，二者重量相差近百倍，導(dǎo)致測定的余渣重量不精確。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有大豆子葉細胞數(shù)目測定方法存在測定步驟繁瑣、操作復(fù)雜、測定結(jié)果準確的問題，而提供一種測定大豆子葉細胞數(shù)的方法。
本發(fā)明測定大豆子葉細胞數(shù)的方法按如下步驟進行 一、烘干、研磨將大豆籽粒放置于烘箱中，于30 35'C條件下烘干24 48小時，用萬分之一天平對籽粒進行稱重，然后置于研缽中充分研磨；二、溶解取50 100mg的粉末
3燒杯中，加入質(zhì)量濃度為10~20%鉻酸溶液10ml，放置48小時后再加入質(zhì)量濃度為10 20%鉻酸溶液10ml，放置24小時后，再次加入質(zhì)量濃度為10~20%鉻酸溶液10ml放置12小時，期間用渦旋器攪拌直至粉末完全溶解；三、取樣、測定測定時用玻璃棒緩慢攪拌使懸浮液中細胞分布均勻，用移液槍取3 5pl懸浮液置于血球計數(shù)板上，于顯微鏡下讀數(shù)，記錄顯微鏡視野下的子葉細胞數(shù)目；清洗血球計數(shù)板，再次用移液槍取3~5^1懸浮液置于血球計數(shù)板上，于顯微鏡下讀數(shù)并記錄顯微鏡視野下的子葉細胞數(shù)目，以上操作共進行15次重復(fù)；四、計算由已知血球計數(shù)板計數(shù)池的容積及全部懸浮液的容積算出溶液中全部子葉細胞數(shù)目；設(shè)大豆籽粒干重為W，籽粒中子葉細胞數(shù)目為X，粉末干重為W1，已測定溶液中全部子葉細胞數(shù)目為A;則大豆子葉細胞數(shù)目的計算公式為，W : Wl= X : A, B卩X=AX( W/ Wl)。
本發(fā)明測定大豆子葉細胞數(shù)方法的優(yōu)點是能較準確地測定出子葉細胞數(shù)目，測定步驟簡單，操作簡便，測定結(jié)果更加精確。本發(fā)明為正確評價不同粒重基因型大豆的子葉細胞數(shù)目與灌漿速率、干物質(zhì)積累及激素動態(tài)的關(guān)系提供了重要的技術(shù)支持。
具體實施例方式
本發(fā)明技術(shù)方案不局限于以下所列舉具體實施方式
，還包括各具體實施方式
間的任意組合。
具體實施方式
一本實施方式測定大豆子葉細胞數(shù)的方法按如下步驟進
行 一、烘干、研磨將大豆籽粒放置于烘箱中，于30 35"C條件下烘干24 48小時，用萬分之一天平對籽粒進行稱重，然后置于研缽中充分研磨；二、溶解取50~100mg的粉末精確稱重，然后放置于50ml燒杯中，加入質(zhì)量濃度為10 20%鉻酸溶液10ml，放置48小時后再加入質(zhì)量濃度為10~20%鉻酸溶液10ml，放置24小時后，再次加入質(zhì)量濃度為10 20%鉻酸溶液10ml放置12小時，期間用渦旋器攪拌直至粉末完全溶解；三、取樣、測定測定時用玻璃棒緩慢攪拌使懸浮液中細胞分布均勻，用移液槍取3-5^tl懸浮液置于血球計數(shù)板上，于顯微鏡下讀數(shù)，記錄顯微鏡視野下的子葉細胞數(shù)目；清洗血球計數(shù)板，再次用移液槍取3~5!il懸浮液置于血球計數(shù)板上，于顯微鏡下讀數(shù)并記錄顯微鏡視野下的子葉細胞數(shù)目，以上操作共進行15次重復(fù)；四、計算由已知血球計數(shù)板計數(shù)池的容積及全部懸浮液的容積算出溶液中全部子葉細胞數(shù)目；設(shè)大豆籽粒干重為W，籽粒中子葉細胞數(shù)目為X，粉末干重為W1，己測定溶液中全部子葉細胞數(shù)目為A;則大豆子葉細胞數(shù)目的計算公式為，W : Wl= X : A，即X=AX(W/W1)。
具體實施方式
二本實施方式與具體實施方式
一的不同點為步驟一中將
大豆籽粒放置于33'C條件下烘干。其它步驟及參數(shù)與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
三本實施方式與具體實施方式
一的不同點為步驟二中加
入鉻酸溶液的質(zhì)量濃度為12 18%。其它步驟及參數(shù)與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
四本實施方式與具體實施方式
一的不同點為步驟二中加入鉻酸溶液的質(zhì)量濃度為15%。其它步驟及參數(shù)與具體實施方式
一相同。
實施例大豆品種海339成熟籽粒子葉細胞數(shù)的測定將大豆成熟籽粒放
置于烘箱中，于33。C條件下烘干48小時。用萬分之一天平對籽粒進行稱重，稱得成熟籽粒干重為280mg，然后置于研缽中充分研磨，取少量粉末干重為70mg，然后放置于50ml燒杯中，加入質(zhì)量濃度為10~20%鉻酸溶液10ml，放置48小時后再加入質(zhì)量濃度為10~20%鉻酸溶液10ml，放置24小時后，再次加入質(zhì)量濃度為10~20%鉻酸溶液10ml放置12小時，期間用渦旋器攪拌直至粉末完全溶解。
測定時用玻璃棒緩慢攪拌使懸浮液中細胞分布均勻。用移液槍取出4ul懸浮液置于血球計數(shù)板上，于顯微鏡下讀數(shù)并記錄顯微鏡視野下的子葉細胞數(shù)目，重復(fù)15次得出視野下平均子葉細胞數(shù)目為9個。已知血球計數(shù)板計數(shù)池的容積為0. lmm3，設(shè)溶液中全部子葉細胞數(shù)目為A，則有30ml : 0. lmm3= A : 9，計算得出溶液中全部子葉細胞數(shù)目A=2.7X106,大豆子葉細胞數(shù)目的計算公式為X=AX(W/W1)JUX=(2.7X106)X(280 〃0)，得出子葉細胞數(shù)目為X=10.8X106。
權(quán)利要求
1、一種測定大豆子葉細胞數(shù)的方法，其特征在于測定大豆子葉細胞數(shù)的方法按如下步驟進行一、烘干、研磨將大豆籽粒放置于烘箱中，于30～35℃條件下烘干24～48小時，用萬分之一天平對籽粒進行稱重，然后置于研缽中充分研磨；二、溶解取50～100mg的粉末精確稱重，然后放置于50ml燒杯中，加入質(zhì)量濃度為10～20％鉻酸溶液10ml，放置48小時后再加入質(zhì)量濃度為10～20％鉻酸溶液10ml，放置24小時后，再次加入質(zhì)量濃度為10～20％鉻酸溶液10ml放置12小時，期間用渦旋器攪拌直至粉末完全溶解；三、取樣、測定測定時用玻璃棒緩慢攪拌使懸浮液中細胞分布均勻，用移液槍取3～5μl懸浮液置于血球計數(shù)板上，于顯微鏡下讀數(shù)，記錄顯微鏡視野下的子葉細胞數(shù)目；清洗血球計數(shù)板，再次用移液槍取3～5μl懸浮液置于血球計數(shù)板上，于顯微鏡下讀數(shù)并記錄顯微鏡視野下的子葉細胞數(shù)目，以上操作共進行15次重復(fù)；四、計算由已知血球計數(shù)板計數(shù)池的容積及全部懸浮液的容積算出溶液中全部子葉細胞數(shù)目；設(shè)大豆籽粒干重為W，籽粒中子葉細胞數(shù)目為X，粉末干重為W1，已測定溶液中全部子葉細胞數(shù)目為A；則大豆子葉細胞數(shù)目的計算公式為，W∶W1＝X∶A，即X＝A×(W/W1)。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種測定大豆子葉細胞數(shù)的方法，其特征在于 步驟一中將大豆籽粒放置于33"C條件下烘干。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種測定大豆子葉細胞數(shù)的方法，其特征在于 步驟二中加入輅酸溶液的質(zhì)量濃度為12~18%。
4、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種測定大豆子葉細胞數(shù)的方法，其特征在于 步驟二中加入鉻酸溶液的質(zhì)量濃度為15%。
全文摘要
一種測定大豆子葉細胞數(shù)的方法，它涉及一種測定大豆子葉細胞數(shù)的方法。它解決了現(xiàn)有大豆子葉細胞數(shù)目測定方法存在測定步驟繁瑣、操作復(fù)雜、測定結(jié)果不夠準確的問題。本發(fā)明測定大豆子葉細胞數(shù)的方法按如下步驟進行一、烘干、研磨；二、鉻酸溶解；三、取樣、測定；四、計算即得到大豆子葉細胞數(shù)。本發(fā)明測定大豆子葉細胞數(shù)方法的優(yōu)點是能較準確地測定出子葉細胞數(shù)目，測定步驟簡單，操作方便，測定結(jié)果更精確。本發(fā)明為正確評價不同粒重基因型大豆的子葉細胞數(shù)目與灌漿速率、干物質(zhì)積累及激素動態(tài)的關(guān)系提供了重要的技術(shù)支持。
文檔編號C12Q1/06GK101643770SQ20091007289
公開日2010年2月10日 申請日期2009年9月15日 優(yōu)先權(quán)日2009年9月15日
發(fā)明者兵 劉, 劉曉冰, 程 王, 劍 金 申請人:中國科學院東北地理與農(nóng)業(yè)生態(tài)研究所