專利名稱：一種甘蔗抗黑穗病鑒定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于植物抗病性鑒定技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種甘蔗抗黑穗病鑒定方法。
背景技術(shù)：
甘蔗黑穗病是世界性的主要甘蔗病害之一，培育抗黑穗病的新品種是防治和控制 該病最經(jīng)濟(jì)、環(huán)保而有效的措施，抗黑穗病作為甘蔗品種選育中一個(gè)不可缺少的目標(biāo)，在育 種過程中需要進(jìn)行抗黑穗病鑒定篩選?？购谒氩¤b定的方法影響著抗病育種的成效，迄今 為止，國內(nèi)的甘蔗品種對(duì)黑穗病的抗性鑒定采用人工接種和田間種植鑒定法，根據(jù)最終累 積的叢感病率和莖感病率，采用固定的1 9級(jí)分類法進(jìn)行抗性分級(jí)，收獲后繼續(xù)留宿根觀 察，最后進(jìn)行評(píng)價(jià)和定級(jí)，目前采用的方法受環(huán)境互作影響較大，不易控制，試驗(yàn)操作復(fù)雜， 分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)不易掌握，鑒定的結(jié)果與田間抗性差異大，不能準(zhǔn)確反映品種的抗病性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提出一種克服上述不足的甘蔗抗黑穗病鑒定方法，該方法能夠更 客觀地反映甘蔗鑒定材料的固有抗性水平，可以把環(huán)境的互作影響減少到最小，使鑒定結(jié) 果更準(zhǔn)確。 本發(fā)明采用標(biāo)準(zhǔn)品種回歸分析鑒定法，即在供試品種中包含一套已知抗性的品 種，作為標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品種，通過回歸分析把待測(cè)無性系的抗性表現(xiàn)與標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品種相比較，進(jìn) 行評(píng)價(jià)和定級(jí)。 本發(fā)明包括以下步驟 1、通過至少3次試驗(yàn)，篩選出一套標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品種，其中包含至少兩個(gè)高抗，兩個(gè)中 抗和兩個(gè)感病標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品種。 2、將標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品種與參與試驗(yàn)鑒定材料同時(shí)進(jìn)行人工浸漬接種鑒定試驗(yàn)，參試材 料放入懸浮液中浸漬接種10min，取出后置25t:左右的溫室內(nèi)24小時(shí)后種植于大田，在試 驗(yàn)中包含至少兩個(gè)高抗，兩個(gè)中抗和兩個(gè)感病標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品種。 3、甘蔗出苗后記錄出苗數(shù)，在5-6月后收獲時(shí)進(jìn)行評(píng)價(jià)，計(jì)數(shù)每行上總叢數(shù)和感 染叢數(shù)；留宿根，同樣記錄出苗數(shù)和計(jì)數(shù)每行上總叢數(shù)和感染叢數(shù)，根據(jù)總叢數(shù)和感染叢數(shù) 進(jìn)行叢感病率評(píng)價(jià)，計(jì)算感病率。 4、通過感染百分率進(jìn)行變異分析通過感染標(biāo)準(zhǔn)百分率(X)及它們的標(biāo)準(zhǔn)分級(jí) (Y)的回歸方程來計(jì)算測(cè)定無性系從而進(jìn)行分級(jí)。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和有益效果 1、本發(fā)明能夠更客觀地反映甘蔗鑒定材料的固有抗性水平，可以把環(huán)境的互作影 響減少到最小，使鑒定結(jié)果更準(zhǔn)確，所確定的抗性等級(jí)或類型就能夠更客觀地反映所鑒定 品種固有的抗性水平。 2、試驗(yàn)中包含至少兩個(gè)高抗，兩個(gè)中抗和兩個(gè)感病標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品種，多個(gè)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照 品種可使鑒定結(jié)果更準(zhǔn)確。
3、本發(fā)明隨著越來越多的標(biāo)準(zhǔn)品種的獲得，標(biāo)準(zhǔn)分級(jí)通過多次試驗(yàn)結(jié)果的均值， 不斷精確化，從而可以把環(huán)境互作的影響降低到最小，且分級(jí)值為精確到小數(shù)點(diǎn)后1位的 連續(xù)數(shù)值，使分級(jí)更加精細(xì)，參試材料感染百分率(X)及它們的分級(jí)(Y)回歸曲線圖為連續(xù) 的對(duì)數(shù)函數(shù)曲線。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明的方法步驟是
—、篩選標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品種 1、通過至少3次試驗(yàn)，篩選出一套標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品種。 2、在試驗(yàn)中包含至少兩個(gè)高抗，兩個(gè)中抗和兩個(gè)感病標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品種。 二、人工浸漬接種鑒定試驗(yàn) 1 、采集甘蔗黑穗病病菌孢子。 a、收集帶病的部分，從帶病位置以下10-20cm剪下，除去綠葉，放在包里，只收集 帶有很多孢子的部分。 b、把收集回來的帶病部分放在相應(yīng)較低溫、干燥、但不結(jié)冰的地方，用塑料或者蠟
紙墊著。 c、讓它們充分干燥1-2周直到徹底干燥為止，這對(duì)維持孢子的成活是很必要的。
孢子必須在濕度很低的環(huán)境下保存。 d、通過篩網(wǎng)篩帶病部分從而收集孢子。 e、稱量收集孢子的重量，然后放入一個(gè)大廣口瓶中的紙包內(nèi)，大廣口瓶中放有硅 膠干燥劑，用凡士林給廣口瓶封口 。 f 、在種植試驗(yàn)的前幾個(gè)星期，對(duì)孢子進(jìn)行存活試驗(yàn)。取2-3克的少量孢子，并數(shù)孢 子數(shù)-100毫升消過毒的蒸餾水放入最少0. 1克孢子(加0. 05%的Tween 20來使孢子分 散，為了方便準(zhǔn)確計(jì)數(shù)，稀釋液可能需要調(diào)節(jié)到和孢子數(shù)量相當(dāng)?shù)乃?，數(shù)血球計(jì)中的孢 子，計(jì)算每克中的孢子數(shù)。成活情況——在瓊脂液中放0. 5ml孢子懸浮液，以28-3(TC過夜 并計(jì)數(shù)萌發(fā)孢子的百分比。 2、每個(gè)供試材料取80個(gè)均為雙芽莖段的健康芽，分成四捆，檢測(cè)接種黑穗病病菌 孢子萌芽率，并配制黑穗病病菌濃度為5X 106孢子/ml的懸浮液，將參試材料放入懸浮液 中浸漬接種10min，取出后用塑料袋保濕，置25t:左右的溫室內(nèi)24小時(shí)后播種于大田，試驗(yàn) 采用隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)，設(shè)4個(gè)重復(fù)，單行區(qū)，行長5. 0米，行距1. 0米，每小區(qū)每品種20個(gè)芽， 接種后種植大田。 3、在鑒定試驗(yàn)中將標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品種與參試鑒定材料同時(shí)進(jìn)行人工浸漬接種鑒定，在 試驗(yàn)中包含至少兩個(gè)高抗，兩個(gè)中抗和兩個(gè)感病標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品種。
三、感病百分率調(diào)查 1、甘蔗出苗后記錄出苗數(shù)，在5-6個(gè)月后進(jìn)行評(píng)價(jià)，計(jì)數(shù)每行上總叢數(shù)和感染叢 數(shù)。留宿根，5-6個(gè)月后進(jìn)行評(píng)價(jià)，計(jì)數(shù)每行上總叢數(shù)和感染叢數(shù)。
2、根據(jù)總叢數(shù)和感染叢數(shù)進(jìn)行叢感病率評(píng)價(jià)，計(jì)算感病率。
四、結(jié)果分析 1、將抗黑穗病標(biāo)準(zhǔn)品種各次試驗(yàn)的平均感病百分率(X)和標(biāo)準(zhǔn)分級(jí)(Y)用SPSS或SAS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行回歸分析，回歸分析采用對(duì)數(shù)函數(shù)模型(Logarithmic)，推出回歸方程 和回歸曲線圖。 隨著越來越多的標(biāo)準(zhǔn)品種的獲得，標(biāo)準(zhǔn)分級(jí)通過多次試驗(yàn)結(jié)果的均值，不斷精確 化，從而可以把環(huán)境互作的影響降低到最小。 2、將試驗(yàn)材料的平均感病百分率通過對(duì)數(shù)函數(shù)回歸方程式及回歸曲線圖來計(jì)算 試驗(yàn)無性系的分級(jí)值，從而進(jìn)行分級(jí)，最后確定抗病類型。 權(quán)利要求
一種甘蔗抗黑穗病鑒定方法，其特征在于包括以下步驟1)、通過至少3次試驗(yàn)，篩選出一套標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品種，其中包含至少兩個(gè)高抗，兩個(gè)中抗和兩個(gè)感病標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品種；2)、將標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品種與參與試驗(yàn)鑒定材料同時(shí)進(jìn)行人工浸漬接種鑒定試驗(yàn)，參試材料放入懸浮液中浸漬接種10min，取出后置25℃左右的溫室內(nèi)24小時(shí)后種植于大田，在試驗(yàn)中包含至少兩個(gè)高抗，兩個(gè)中抗和兩個(gè)感病標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品種；3)、甘蔗出苗后記錄出苗數(shù)，在5-6月后收獲時(shí)進(jìn)行評(píng)價(jià)，計(jì)數(shù)每行上總叢數(shù)和感染叢數(shù)；留宿根，同樣記錄出苗數(shù)和計(jì)數(shù)每行上總叢數(shù)和感染叢數(shù)，根據(jù)總叢數(shù)和感染叢數(shù)進(jìn)行叢感病率評(píng)價(jià)，計(jì)算感病率；4)、通過感染百分率進(jìn)行變異分析通過感染標(biāo)準(zhǔn)百分率(X)及它們的標(biāo)準(zhǔn)分級(jí)(Y)的回歸方程來計(jì)算測(cè)定無性系從而進(jìn)行分級(jí)。
全文摘要
一種甘蔗抗黑穗病鑒定方法，通過至少3次試驗(yàn)，其中包含至少兩個(gè)高抗，兩個(gè)中抗和兩個(gè)感病標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品種；篩選出一套標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品種，將標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品種與參與試驗(yàn)鑒定材料同時(shí)進(jìn)行人工浸漬接種鑒定試驗(yàn)，甘蔗出苗后記錄出苗數(shù)，收獲時(shí)計(jì)數(shù)每行上總叢數(shù)和感染叢數(shù)；留宿根，同樣記錄出苗數(shù)和計(jì)數(shù)每行上總叢數(shù)和感染叢數(shù)，根據(jù)總叢數(shù)和感染叢數(shù)進(jìn)行叢感病率評(píng)價(jià)，計(jì)算感病率；通過感染標(biāo)準(zhǔn)百分率(X)及它們的標(biāo)準(zhǔn)分級(jí)(Y)的回歸方程來計(jì)算測(cè)定無性系從而進(jìn)行分級(jí)；該方法能夠更客觀地反映甘蔗鑒定材料的固有抗性水平，可以把環(huán)境的互作影響減少到最小，使鑒定結(jié)果更準(zhǔn)確。
文檔編號(hào)C12Q1/18GK101696446SQ20091009508
公開日2010年4月21日 申請(qǐng)日期2009年10月26日 優(yōu)先權(quán)日2009年10月26日
發(fā)明者盧文杰, 吳才文, 夏紅明, 尹興祥, 崔杰, 羅志明, 范源洪, 趙培方, 黃應(yīng)昆 申請(qǐng)人:云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院甘蔗研究所;