專利名稱：：一種酪酸梭菌的孢子生產方法及其在禽畜飼養(yǎng)上的應用的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及酪酸梭菌的培養(yǎng)方法，具體涉及一種酪酸梭菌的孢子生產方法及在預防禽畜腹瀉上的應用。
背景技術：
：酪酸梭菌(Clostridiumbutyricum)即丁酸梭菌，存在于土壤、人和動物腸道、干酪及自然酸奶中，為革蘭氏陽性厭氧芽孢桿菌，培養(yǎng)后期可變?yōu)殛幮跃毡咀畛鯇⑵鋺糜谂R床作為整腸劑，開發(fā)了酪酸菌液劑、粉末劑、膠囊劑等保健食品。后來將其作為獸醫(yī)藥品，用來治療畜禽腸道菌群紊亂。酪酸菌為梭狀芽孢桿菌，菌體為直或微彎，孢子圓形或橢圓形，為內生芽孢，對外界環(huán)境有較強的抵抗力，經80°C、30min和90°C、10min熱處理后全部存活；耐熱、耐酸，PH值為1.05.0時仍能存活。因此，酪酸梭菌能夠在復雜的環(huán)境中維持較強的活力，與目前廣泛應用的非芽孢類活菌制劑相比，更具廣闊的市場前景。由于酪酸梭菌在禽畜飼養(yǎng)及飼料行業(yè)上廣闊的應用性，目前以有較多的相關研究及專利申請。在酪酸梭菌的生產方面，如何獲得酪酸菌最大菌體得率的同時提高芽孢轉化率，以提高其對各種惡劣的環(huán)境因素的抗性，延長制劑保存期和活性，是這一領域最重要的技術問題之一。除此，如何降低生產的周期和成本，也是酪酸梭菌得以在禽畜飼養(yǎng)上廣泛應用的重要條件。盡管目前以公開了多種酪酸梭菌的培養(yǎng)方法，但是，這些方法存在或者生產成本高、設備要求高，或者生產周期長，孢子轉化率低下的問題。首先，由于酪酸梭菌是一種厭氧菌，多數生產方法均需要在石蠟油、氮氣或二氧化碳維持的厭氧環(huán)境中進行，儀器設備復雜昂貴，專利200610125586.X公開了一種酪酸梭菌活菌制劑的生產方法，培養(yǎng)基需經過高壓滅菌后經石蠟油維持厭氧環(huán)境45-60小時。專利200410068185.6公開了運用PYG培養(yǎng)基培養(yǎng)嗜酸乳桿菌、糞腸球菌、酪酸梭菌，經混合后制成飼料添加劑用于禽畜養(yǎng)殖，其培養(yǎng)基消耗量大，成本昂貴?？锶旱葘宜崴缶呐囵B(yǎng)條件進行了研究，采用葡萄糖、蔗糖、乳糖、可溶性淀粉、胰蛋白胨、酵母膏、牛肉浸膏、NaCl、(NH4)2S04、K2HP04、MgS04、MnS04、NaHC03、CaC03作為培養(yǎng)基，同樣存在價格昂貴的問題，同時培養(yǎng)時間需長達36h。
發(fā)明內容本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術的不足，提供一種生產設備、工藝簡單，生產成本低廉，同時能在短周期內生產出產量大、孢子轉化率高的酪酸梭菌生產方法。本發(fā)明的另一個目的是提供該種酪酸梭菌生產方法在禽畜飼養(yǎng)領域的應用。本發(fā)明通過以下技術方案實現(xiàn)上述目的—種酪酸梭菌的孢子生產方法，包括如下步驟(1)酪酸梭菌經活化后，接種到以大豆餅粉或玉米淀粉或玉米漿為主要原料的培養(yǎng)基上，密封后2538。C下靜置1824h。(2)將培養(yǎng)液用自來水或飼料稀釋到1X1055X105cfu/g。所述的活化過程是在強化梭菌培養(yǎng)基(RCM)中進行。3所述的培養(yǎng)劑含有以下重量份數的原料大豆餅粉10-30份，玉米淀粉10-30份，玉米漿5-25份，碳酸鈣0.5-1份，蘇打粉0.06-0.6份，硫酸錳0.006-0.06份，自來水1000份。所述的培養(yǎng)基經煮沸1030min后，冷卻到常溫備用。所述接種的接種量為O.001-0.01%。接種量的大小決定了發(fā)酵的增殖效果及發(fā)酵效果，本發(fā)明經過多次試驗證明，該范圍的接種量便可實現(xiàn)較高的發(fā)酵數量，發(fā)酵周期短，且方便操作。培養(yǎng)過程中產生大量氣泡，并有剌鼻性氣體產生。—種酪酸梭菌的孢子生產方法在禽畜飼養(yǎng)上的應用，其特征是將稀釋后的酪酸梭菌孢子液直接飼養(yǎng)禽畜。與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明具有以下有益效果1.本發(fā)明所提供的酪酸梭菌孢子生產方法所需設備簡單，工藝簡便，無需經過高壓滅菌，無需通過石蠟油、氮氣、二氧化碳等維持厭氧環(huán)境，不需要大型設備，同時節(jié)省了水電資源，適合在各種養(yǎng)殖場推廣應用。2.本發(fā)明所提供的酪酸梭菌孢子生產方法成本低廉，取材方便，一噸的培養(yǎng)基質的成本僅為100元左右。3.本發(fā)明所提供的酪酸梭菌孢子生產方法產率高，雹子轉化率高，接近95%，活性強，同時菌株同步性較好，可以實現(xiàn)同步成孢，提高了孢子的利用率。4.本發(fā)明所提供的酪酸梭菌孢子生產方法培養(yǎng)周期短，培養(yǎng)時間僅21h左右，菌落數即達到8X108cfu/ml。5.本發(fā)明的方法所產生的孢子菌液中含有大量具有活性的孢子，同時發(fā)酵菌液直接配置為飼養(yǎng)液，可有效保留發(fā)酵液中的多種營養(yǎng)物質，如酪酸、乳酸和醋酸等有機酸，可有效抑制常見致病菌的生長，應用于禽畜的飼養(yǎng)中，有效降低了禽畜的腹瀉率及初生禽畜的死亡率，有效地提高了產能并節(jié)約用藥成本。此法在禽畜飼養(yǎng)領域具有廣闊的應用前景。具體實施例方式以下通過具體的實施例進一步說明本發(fā)明的技術方案。通過以禽畜作為實驗對象進行動物飼養(yǎng)試驗，并將本發(fā)明的飼養(yǎng)效果以及抗生素、維生素及中草藥的治療效果相對比，進一步說明本發(fā)明所提供的方法在預防禽畜腹瀉上的效果。實施例11.菌種的活化配置如下的RCM培養(yǎng)基酵母膏3g，牛肉膏10g，蛋白胨10g，可溶性淀粉lg，葡萄糖5g，半胱氨酸鹽酸鹽0.5g，NaC13g，NaAc3g，水1000mL，刃天青3mg/L，瓊脂15g，調節(jié)pH8.5，121。C下濕熱滅菌30min。在37。C下靜置培養(yǎng)20h。2.菌株的發(fā)酵培養(yǎng)配置如下的培養(yǎng)基(g/L):大豆餅粉25，碳酸鈣0.8，蘇打粉0.48kg，玉米淀粉20，玉米漿20，硫酸錳0.008，自來水1000ml，自然pH，煮沸10-30分鐘。菌株在37°C下靜置培養(yǎng)2lh。3.飼養(yǎng)液的配制及在預防初生仔豬腹瀉上的應用將上述經過發(fā)酵培養(yǎng)的發(fā)酵菌液用自來水或飼料稀釋到5X10Scfu/g，直接進行仔豬拌料或飲水，不能自主進食的仔豬進行灌服。4.試驗結果實驗對象為溫氏商品豬的初生仔豬。實驗組初生仔豬出生后，按每頭仔豬lOmL/天的劑量灌服本發(fā)明所提供的發(fā)酵菌液，不進行抗生素注射及用藥等方法的防控，其他的飼養(yǎng)管理按豬場的常規(guī)方法進行。對照組仔豬發(fā)生腹瀉后注射抗生素及其他藥物，并結合豬場的治療管理給予一定的其他藥物如維生素及中草藥的治療，日糧、營養(yǎng)成分及飼養(yǎng)管理等完全與實驗組相同。試驗結果如表1:表1<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>試驗結果表明研究院研發(fā)的微生態(tài)制劑可以有效預防初生仔豬的腹瀉，可以有效的降低用藥成本。與對照組相比，實驗組的仔豬不僅腹瀉情況明顯降低，仔豬的毛發(fā)也較為光亮蓬松，精神狀態(tài)明顯提高，部分仔豬甚至是不經保育舍飼養(yǎng)，直接售出。實施例21.菌種的活化如實施例l。2.菌株的發(fā)酵培養(yǎng)如實施例l。3.飼養(yǎng)液的配制及在預防肉雞腹瀉上的應用實驗對象為溫氏養(yǎng)戶的全部1日齡肉雞，飼喂酪酸梭菌。實驗組1:在飲水中加入研究院研發(fā)的酪酸梭菌，添加量為5ml/kg飲水(即每公斤飲水添加5ml酪酸梭菌)，每天兩次，每次飲水四小時。實驗組2:采用拌料飼喂的方法，每次給肉雞飼喂飼料時添加酪酸梭菌3ml/kg飼料(即每公斤飼料添加酪酸梭菌3ml)，全程飼喂酪酸梭菌至肉雞出欄。對照組使用溫氏肉雞的常規(guī)飼料滿足其日糧及養(yǎng)成分要求。飼養(yǎng)管理、免疫程序、投藥程序都按溫氏常規(guī)肉雞飼養(yǎng)辦法和免疫程序進行。試驗結果如表2:表2<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>結果表明實驗組1和實驗組2的肉雞，與對照組肉雞比較，腹瀉率、死亡率大幅度降低，均約為對照組肉雞的三分之一，并且用藥大幅降低。權利要求一種酪酸梭菌的孢子生產方法，其特征在于包括如下步驟(1)酪酸梭菌經活化后，接種到以大豆餅粉或玉米淀粉或玉米漿為主要原料的培養(yǎng)基上，密封后發(fā)酵培養(yǎng)。(2)將發(fā)酵培養(yǎng)液用自來水或飼料稀釋到1×105～5×105cfu/g。2.如權利要求1所述的一種酪酸梭菌的孢子生產方法，其特征在于步驟(1)所述的活化過程是在強化梭菌培養(yǎng)基中進行。3.如權利要求1所述的一種酪酸梭菌的孢子生產方法，其特征在于步驟(1)所述的發(fā)酵培養(yǎng)是在253『C下進行。4.如權利要求1所述的一種酪酸梭菌的孢子生產方法，其特征在于步驟(1)所述的發(fā)酵培養(yǎng)時間為1824h。5.如權利要求1所述的一種酪酸梭菌的孢子生產方法，其特征在于步驟(1)所述的培養(yǎng)基含有以下重量份數的原料大豆餅粉10-30份，玉米淀粉10-30份，玉米漿5-25份，碳酸鈣0.5-1份，蘇打粉0.06-0.6份，硫酸錳0.006-0.06份，自來水1000份。6.如權利要求5所述的一種酪酸梭菌的孢子生產方法，其特征在于所述的培養(yǎng)基經煮沸1030min后，冷卻到常溫備用。7.如權利要求1所述的一種酪酸梭菌的孢子生產方法，其特征在于步驟(1)所述的接種的接種量為0.01-0.1%。8.如權利要求1所述的酪酸梭菌的孢子生產方法在禽畜飼養(yǎng)上的應用，其特征是將稀釋后的酪酸梭菌孢子液直接飼養(yǎng)禽畜。全文摘要本發(fā)明公開了一種酪酸梭菌的孢子生產方法及其在在禽畜飼養(yǎng)上的應用，目的是為了解決目前酪酸梭菌培養(yǎng)方法成本高、設備要求高，或者生產周期長，孢子轉化率低下，提供一種簡便地培養(yǎng)出具有大量穩(wěn)定活性的酪酸梭菌孢子的方法，并將發(fā)酵培養(yǎng)液應用于禽畜飼養(yǎng)過程，以降低禽畜的腹瀉率，提高產能。其方法是將酪酸梭菌經活化后，接種到以大豆餅粉或玉米淀粉或玉米漿為主要原料的培養(yǎng)基上，密封后發(fā)酵培養(yǎng)；將所得的發(fā)酵菌液用自來水或飼料稀釋到1×105～5×105cfu/g，直接飼養(yǎng)禽畜。該法工藝簡便、成本低廉、孢子的利用率、菌液營養(yǎng)豐富，有效降低了禽畜的腹瀉率及初生禽畜的死亡率，提高了產能并節(jié)約用藥成本。文檔編號C12N3/00GK101717746SQ20091019328公開日2010年6月2日申請日期2009年10月26日優(yōu)先權日2009年10月26日發(fā)明者周慶豐,杜云平申請人:廣東溫氏食品集團有限公司