專利名稱：一種活性植物多酚類物質(zhì)分子的生物修飾方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種活性植物多酚類物質(zhì)分子的生物修飾方法。
背景技術(shù)：
現(xiàn)代科學研究表明植物多酚不僅是一種天然的無毒的抗氧化劑，而且也是一種 理想的天然藥物，植物多酚類物質(zhì)具有顯著的抗氧化，清除體內(nèi)自由基，抗腫瘤，抗突變，抗 衰老，抗炎，抗病毒等一系列生物學活性，對預防和治療惡性腫瘤，高血脂癥，動脈硬化，腦 血栓，糖尿病，肥胖病等均有良好作用。植物多酚類物質(zhì)的生產(chǎn)和銷售在國內(nèi)外已有十多年的歷史，目前植物多酚類物質(zhì) 產(chǎn)品主要用于以下幾個方面抗腫瘤藥物；心血管保健藥物；抗糖尿病及肥胖癥保健藥品； 抗病毒制劑；化妝品；食品抗氧化添加劑；口腔保潔劑；飲料；保鮮劑；保色劑；除臭劑等。全世界有六十多家科研院所在從事植物多酚類物質(zhì)的開發(fā)研究，美國SIGMA公司 和德國MERCK公司生產(chǎn)的植物多酚類物質(zhì)片劑和膠囊作為保健品已投入市場。但是植物多 酚類物質(zhì)脂溶性差，生物利用度低，不易被人體吸收，所以要產(chǎn)生藥效就必須加大劑量，這 就影響了其在藥物和保健品方面的應用，必須對其進行改性，增強它的脂溶性，目前有關(guān)植 物多酚類物質(zhì)改性的研究主要是化學法，反應條件復雜，不易控制。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種解決上述問題，增強植物多酚類物質(zhì)分子的脂溶性，條 件要求低，易控制，成本低的活性植物多酚類物質(zhì)分子的生物修飾方法。本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)本發(fā)明采用固定化脂肪酶在有機溶劑中選擇性修飾的特點，將2-18個碳原子的 脂肪酸鏈引入到植物多酚類物質(zhì)分子中，這樣就避免了化學法在植物多酚類物質(zhì)分子修飾 中對酚羥基的破壞，在提高植物多酚類物質(zhì)的脂溶性基礎(chǔ)上最大程度上保留植物多酚類物 質(zhì)產(chǎn)品的活性，達到設(shè)計目的。一種活性植物多酚類物質(zhì)分子的生物修飾方法的步驟如下第一步，反應體系所需試劑、原料的前處理有機溶劑首先要加入180°C干燥箱內(nèi)活化2小時的4 A分子篩，在25°C的室溫下 的水平搖床中振蕩48小時，水活度 0，濾去分子篩，得脫水有機溶劑，有機溶劑是疏水性 參數(shù)IogP在0. 7-1. 5之間的疏水性較強的有機溶劑，如叔戊醇、叔丁醇等，在25°C的室溫 下，將有機溶劑、固定化脂肪酶分別置于密閉容器中與下列不同的飽和化合物水溶液進行 氣相平衡72小時，以此來控制不同的反應體系初始水活度(aj =NaCl (aw = 0. 75)、KCl (aw =0. 85)、MgCl2 (aw = 0. 97)、Mg (NO3) 2(aw = 0. 55)、K2CO3 (aw = 0. 34)、KAC (aw = 0. 23)、 LiCl(aw = 0. 11)，固定化脂肪酶是以硅藻土、樹脂或紡織品膜為載體，載體上有酶活為 6000-1000PLU/g(脂肪酶對于酯類合成的活力可用每1克酶生成的月桂酸丙酯單位即PLU/ g來表示)的酵母類脂肪酶。
第二步，植物多酚類物質(zhì)分子的生物修飾以活性植物多酚類物質(zhì)單體和含2-18個碳原子的脂肪酸或脂肪酸乙烯酯為原 料，按摩爾比為1 1-10，與篩選的有機溶劑和固定化脂肪酶混合，固定化脂肪酶的用量是 植物多酚類物質(zhì)質(zhì)量的0. 5-10倍，在30-55°C的條件下，轉(zhuǎn)速100-200轉(zhuǎn)/分鐘，搖床振蕩 反應36-100小時，取出催化劑，反應液經(jīng)過濾、減壓濃縮、脫溶劑干燥等步驟得到植物多酚 類脂肪酸酯達到設(shè)計目的。本發(fā)明具有如下優(yōu)點1、經(jīng)由本發(fā)明的實施，整個反應條件比較溫和，避免了化學法操作復雜，不易控制 的缺點。2、經(jīng)由本發(fā)明的實施，利用固定化脂肪酶在非水有機溶劑中特異性選擇修飾的特 點，將2-18個碳原子的脂肪酸鏈引入到活性植物多酚類物質(zhì)，在保留植物多酚類物質(zhì)結(jié)構(gòu) 的基礎(chǔ)上最大程度保留其活性。3、經(jīng)由本發(fā)明的實施，反應轉(zhuǎn)化率高，反應溶劑無毒性。4、經(jīng)由本發(fā)明的實施，反應得到的脂溶性植物多酚脂肪酸酯組分明確，單取代產(chǎn) 物含量高，抗氧化品質(zhì)好，其分子結(jié)構(gòu)維持植物多酚類物質(zhì)的結(jié)構(gòu)特征，具有較好的穩(wěn)定 性。
具體實施例方式下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步說明，但不作為對本發(fā)明保護范圍的限制，該 領(lǐng)域的技術(shù)熟練人員可以根據(jù)上述發(fā)明的內(nèi)容做出一些非本質(zhì)的改進和調(diào)整。實施例一以茶多酚中的兒茶素單體表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)為例，稱取一定量 EGCG，加入一定體積經(jīng)過處理的有機溶劑，然后加入2-18個碳原子的脂肪酸或脂肪酸乙烯 酯，EGCG與脂肪酸或脂肪酸乙烯酯摩爾比為1 1-10，最后加入為EGCG質(zhì)量約0.5 10 倍的固定化脂肪酶，在30-55°C的條件下，轉(zhuǎn)速100-200轉(zhuǎn)/分鐘，搖床振蕩反應36-100小 時，取出催化劑，反應液經(jīng)過濾、減壓濃縮、脫溶劑干燥等步驟得到EGCG脂肪酸酯。實施例二以蘋果多酚中含有的綠原酸單體為例，稱取一定量綠原酸，加入一定體積經(jīng)過處 理的有機溶劑，然后加入2-18個碳原子的脂肪酸或脂肪酸乙烯酯，綠原酸與脂肪酸或脂肪 酸乙烯酯摩爾比為1 1-10，最后加入為綠原酸質(zhì)量約0.5 10倍的固定化脂肪酶，在 30-550C的條件下，轉(zhuǎn)速100-200轉(zhuǎn)/分鐘，搖床振蕩反應36-100小時，取出催化劑，反應液 經(jīng)過濾、減壓濃縮、脫溶劑干燥等步驟得到綠原酸脂肪酸酯。實施例三以葡萄多酚中含有的白藜蘆醇單體為例，稱取一定量白藜蘆醇，加入一定體積經(jīng) 過處理的有機溶劑，然后加入2-18個碳原子的脂肪酸或脂肪酸乙烯酯，白藜蘆醇與脂肪酸 或脂肪酸乙烯酯摩爾比為1 1-10，最后加入為白藜蘆醇質(zhì)量約0.5 10倍的固定化脂肪 酶，在30-55°C的條件下，轉(zhuǎn)速100-200轉(zhuǎn)/分鐘，搖床振蕩反應36-100小時，取出催化劑， 反應液經(jīng)過濾、減壓濃縮、脫溶劑干燥等步驟得到白藜蘆醇脂肪酸酯。本發(fā)明反應條件比較 溫和，避免了化學法操作復雜，不易控制的缺點，反應轉(zhuǎn)化率高，反應溶劑無毒性，在保留植物多 酚類物質(zhì)結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上最大程度保留其活性，廣泛應用 于活性植物多酚類物質(zhì)分子的生物修飾方法領(lǐng)域。
權(quán)利要求
一種活性植物多酚類物質(zhì)分子的生物修飾方法，其特征在于以活性植物多酚類物質(zhì)單體和含2-18個碳原子的脂肪酸或脂肪酸乙烯酯為原料，按摩爾比為1∶1-10，與篩選的有機溶劑和固定化脂肪酶混合，固定化脂肪酶的用量是植物多酚類物質(zhì)質(zhì)量的0.5-10倍，在30-55℃的條件下，轉(zhuǎn)速100-200轉(zhuǎn)/分鐘，搖床振蕩反應36-100小時。取出催化劑，反應液經(jīng)過濾、減壓濃縮、脫溶劑干燥步驟得到植物多酚類脂肪酸酯。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種植物多酚類物質(zhì)分子的生物修飾方法，其特征是所述有 機溶劑在反應前首先要加入180°C干燥箱內(nèi)活化2小時的4 A分子篩，在室溫(25°C)下的 水平搖床中振蕩48小時，濾去分子篩，得脫水有機溶劑，有機溶劑經(jīng)分子篩脫水48小時后， 水活度 0，篩選的有機溶劑是疏水性參數(shù)IogP在0. 7-1. 5之間的疏水性較強的有機溶劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種植物多酚類物質(zhì)分子的生物修飾方法，其特征是所述在 25°C的室溫下，將有機溶劑、固定化脂肪酶分別置于密閉容器中與下列不同的飽和化合物 水溶液進行氣相平衡72小時，以此來控制不同的反應體系初始水活度NaCl (Bw = 0. 75)、 KCl (aw = 0. 85) ,MgCl2 (aw = 0. 97)、Mg (NO3) 2 (aw = 0. 55) ,K2CO3 (aw = 0. 34)、KAC (aw = 0. 23)、 LiCl(aw = 0. 11)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種植物多酚類物質(zhì)分子的生物修飾方法，其特征是所述固 定化脂肪酶是以硅藻土、樹脂或紡織品膜為載體，載體上有酶活為6000-1000PLU/g(脂肪 酶對于酯類合成的活力可用每1克酶生成的月桂酸丙酯單位即PLU/g來表示)的酵母類脂 肪酶。
全文摘要
一種活性植物多酚類物質(zhì)分子的生物修飾方法，其特征是將活性植物多酚類物質(zhì)單體和含2-18個碳原子的脂肪酸或脂肪酸乙烯酯為原料，按摩爾比為1∶1-10，與篩選的有機溶劑和固定化脂肪酶混合，酶的用量是植物多酚類物質(zhì)質(zhì)量的0.5-10倍，在30-50℃的條件下，轉(zhuǎn)速100-200轉(zhuǎn)/分鐘，搖床振蕩反應36-100小時，取出催化劑，反應液經(jīng)過濾、減壓濃縮、脫溶劑干燥等步驟得到植物多酚類脂肪酸酯，本發(fā)明使用固定化脂肪酶，具有選擇性好，反應條件溫和的特點，反應轉(zhuǎn)化率高，反應溶劑無毒性，得到的脂溶性植物多酚類脂肪酸酯組分明確，單取代產(chǎn)物含量高，抗氧化品質(zhì)好，其分子結(jié)構(gòu)維持植物多酚類物質(zhì)的結(jié)構(gòu)特征，具有較好的穩(wěn)定性。
文檔編號C12P7/62GK101864462SQ20101017468
公開日2010年10月20日 申請日期2010年5月17日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月17日
發(fā)明者佘作輝, 秦易蘭, 謝君, 趙峰 申請人:成都偉暉生物科技有限公司