專利名稱：一種重組蛋白a基因及其表達(dá)產(chǎn)物的制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體的說，涉及一種重組蛋白A基因，以及含有這種重 組基因的載體、轉(zhuǎn)化的菌株和重組蛋白A基因表達(dá)的產(chǎn)物，及其制備方法和用途。
背景技術(shù)：
葡萄球菌蛋白A (Staphylococal Protein A, SPA)是一種從金黃色葡萄球菌細(xì)胞 壁分離的蛋白質(zhì)。1940年，Vevwey發(fā)現(xiàn)在某些金黃色葡萄球菌中，含有一種物質(zhì)，在雙向擴(kuò) 散試驗(yàn)中，能與正常人血清形成沉淀。jensen(1959)也發(fā)現(xiàn)了類似現(xiàn)象，將其命名為A抗原。1963年Lofkvist等分離了 A抗原，并證明它是一種蛋白質(zhì)，且與糖有區(qū)別； Grov (1960)將其命名為葡萄球菌蛋白A，簡稱SPA蛋白A (ProteinA)。編碼SPA的基 因于1983年被克隆并在大腸桿菌中表達(dá)(Duggleby，C. J and Jones, SA :cloning and expression of the Staphylococcus aureus protein A gene in Escherichiacoli. Nucl Acids Res. 11(1983)3065-3076 ；Lofdahl, S. , Guss, B. , et al ；Gene forStaphylococcal protein A. Proc. Natl. Acid. Sci. USA 80(1983)697-701)。對(duì) SPA 結(jié)構(gòu)和功能的研究發(fā)現(xiàn)， SPA分子包含A、B、C、D、E五個(gè)同源結(jié)構(gòu)域，每個(gè)結(jié)構(gòu)域都有能與IgG自主結(jié)合的能力。SPA 基因有1600bp。由于葡萄球菌蛋白A上有5個(gè)結(jié)構(gòu)域可以與IgG的Fc區(qū)結(jié)合，具有與大多數(shù)哺乳 動(dòng)物IgG的Fc段結(jié)合的能力。作為一種親和配基，蛋白A被固定在瓊脂糖上面，它上面的5 個(gè)結(jié)構(gòu)域就可以與IgG的Fc自由結(jié)合，一分子固定的蛋白A可以與兩分子的IgG結(jié)合，重 組蛋白A其C端有一個(gè)胱氨酸，結(jié)合IgG的能力更強(qiáng)。重組蛋白A被廣泛應(yīng)用于單克隆抗 體或多克隆抗體的分離純化和檢測。在使用含有ProteinA的親和層析技術(shù)時(shí)，存在親和力 低、純化效率低等問題，因此在使用該親和層析技術(shù)時(shí)，需要一種改進(jìn)的ProteinA，來實(shí)現(xiàn) 更高的親和力，提高純化的效果。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明需要解決的技術(shù)問題之一是提供一種新的重組蛋白A的基因序列，以克服 現(xiàn)有技術(shù)的不足。本發(fā)明需要解決的技術(shù)問題之二是提供該重組蛋白A的氨基酸序列，以克服現(xiàn)有 技術(shù)的不足。本發(fā)明需要解決的技術(shù)問題之三是提供含有該重組蛋白A基因的載體。本發(fā)明需要解決的技術(shù)問題之四是提供被含有重組蛋白A基因的表達(dá)載體轉(zhuǎn)化 宿主細(xì)胞。
本發(fā)明需要解決的技術(shù)問題之五是提供該重組蛋白A的制備方法。本發(fā)明需要解決的技術(shù)問題之六是提供該重組蛋白A的用途。本發(fā)明需要解決的技術(shù)問題之七是提供一種由該重組蛋白A和層析介質(zhì)載體組 成的親和層析介質(zhì)。本發(fā)明的技術(shù)方案如下本發(fā)明提供的重組蛋白A基因是以3個(gè)人工合成的重組蛋白A基因單體串連而 成，5 ‘端Ala-Asp突變成Val-Asp，以形成AccI酶切位點(diǎn)(GTAGAC)，各重組蛋白A基因單體 間以AccI酶切位點(diǎn)相連，其中第一個(gè)重組蛋白A基因單體前端加入與表達(dá)載體相連的NcoI 酶切位點(diǎn)，6個(gè)His(用于親和層析，與鎳柱結(jié)合，減少純化步驟)和EK酶切位點(diǎn)(將His和 DDDDK切去，形成正確的ProteinA)，最后一個(gè)重組蛋白A基因單體末端加入中止密碼子TAA 和與表達(dá)載體pET32a相連的BamH I酶切位點(diǎn)。該基因由621個(gè)核苷酸構(gòu)成，編碼180個(gè) 氨基酸。該基因序列及其編碼的氨基酸序列見序列表SEQ ID No. 1和SEQ ID No. 2。本發(fā)明還構(gòu)建了含有上述重組蛋白A基因的載體，這些載體的構(gòu)建方法是按照常 規(guī)方法，將通過人工合成的重組蛋白A基因單體酶切后接入相應(yīng)載體的相應(yīng)酶切位點(diǎn)之 間，再以Acc I內(nèi)切酶酶切，連接成包含多個(gè)串連重組蛋白A基因單體的重組蛋白A基因表 達(dá)載體。上述含重組蛋白A基因的大腸桿菌表達(dá)載體優(yōu)先由本發(fā)明合成的重組蛋白A基因 與大腸桿菌表達(dá)載體PET32構(gòu)建成的重組表達(dá)載體，命名為pET32a-P。本發(fā)明還提供了利用上述含大腸桿菌重組表達(dá)載體的大腸桿菌重組株生產(chǎn)重組 蛋白A的方法，該方法是將菌種進(jìn)行培養(yǎng)發(fā)酵使其高效表達(dá)重組蛋白A，再收集菌體，經(jīng)分 離純化得到重組蛋白A產(chǎn)品。本發(fā)明上述能表達(dá)重組蛋白A的大腸桿菌菌株優(yōu)先為由含有重組蛋白A基因的表 達(dá)載體pET32a-P轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21/DE3得到的菌株，命名為BL21/pET32a。本發(fā)明生產(chǎn)的重組蛋白A表達(dá)于大腸桿菌胞周質(zhì)中，有利于表達(dá)產(chǎn)物的分離純 化。利用本發(fā)明表達(dá)生產(chǎn)重組蛋白A，具有表達(dá)效率高，表達(dá)量大(占細(xì)菌可溶性蛋白總量 的60-80% )，表達(dá)時(shí)間短(僅3-5小時(shí))，易于純化等優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明采用大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)生產(chǎn)重組蛋白A，還具有生產(chǎn)周期短(1天)，生產(chǎn)成 本低的特點(diǎn)，有利于基因工程重組蛋白A的產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用。本發(fā)明的重組蛋白A基因的表達(dá)產(chǎn)物重組蛋白A用于與各種不同的層析介質(zhì)載體 如瓊脂糖凝膠、葡聚糖、纖維素、帶羥基的高分子聚合物、硅膠等偶聯(lián)成為親和層析介質(zhì)用 于抗體的分離純化。本發(fā)明生產(chǎn)的重組蛋白A具有蛋白結(jié)合特異性強(qiáng)，親和力高，純化效率大大改善 的優(yōu)點(diǎn)，與市售的ProteinA Sepharose 4Fast Flow相比，其動(dòng)態(tài)吸附載量明顯提高。


圖1是本發(fā)明構(gòu)建的重組表達(dá)載體pET32a_P，是在載體pET32a中連入proteinA基因。圖2 菌體的SDS-PAGE凝膠電泳結(jié)果，其中泳道1和5是marker ；泳道2是空載 體；泳道3是經(jīng)誘導(dǎo)的BL21/pET32a的碎菌后的上清；泳道4是經(jīng)誘導(dǎo)的BL21/pET32a的碎菌后的沉淀。圖3 重組蛋白A瓊脂糖凝膠5S CP從小鼠腹水中分離純化IgG2aSDS_PAGE電泳 結(jié)果泳道1為標(biāo)準(zhǔn)蛋白Marker，泳道2為腹水，泳道3為本發(fā)明的重組蛋白A瓊脂糖凝膠 5S CP親和介質(zhì)的洗脫峰。圖4 重組蛋白A葡聚糖凝膠從小鼠腹水中分離純化IgG2aSDS_PAGE電泳結(jié)果泳 道1為標(biāo)準(zhǔn)蛋白Marker，泳道2為腹水，泳道3為本發(fā)明的重組蛋白A葡聚糖凝膠親和介質(zhì) 所裝的柱子的洗脫峰。泳道3中，上、下兩條帶分別是IgG2a的重鏈和輕鏈。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1重組蛋白A基因單體的合成通過化學(xué)合成的方法，設(shè)計(jì)合成重組蛋白A基因一個(gè)重復(fù)片段的序列，其序列包 括長度為168bp，前端加入與表達(dá)載體相連的NcoI酶切位點(diǎn)，6個(gè)His (用于親和層析，與鎳 柱結(jié)合，減少純化步驟)和EK酶切位點(diǎn)，以及用于連入多個(gè)重復(fù)片段的AccI酶切位點(diǎn)。另 外，還包括終止密碼子TAA，及克隆用BamH I限制性內(nèi)切酶接頭共9bp。還須通過化學(xué)合成 的方法，設(shè)計(jì)合成重組蛋白A基因一個(gè)重復(fù)片段的序列，其序列包括長度為168bp，兩端為 AccI酶切位點(diǎn)，用于構(gòu)建含有多個(gè)重復(fù)片段的序列。實(shí)施例2含一個(gè)重組蛋白A基因單體的pET32a載體的構(gòu)建用限制型內(nèi)切酶NcoI和BamH I將上述重組蛋白A基因單體切下，與經(jīng)NcoI及 BamHI酶切的載體pET32a連接，轉(zhuǎn)化大腸桿菌，篩選具有氨芐青霉素抗性的轉(zhuǎn)化子，經(jīng)質(zhì)粒 提取，酶切鑒定后證明重組蛋白A基因單體已克隆至pET32a中。實(shí)施例3含有重組蛋白A基因的pET32a_P載體的構(gòu)建將上述含一個(gè)重組蛋白A基因單體的pET32a載體及重組蛋白A基因單體以AccI 酶切，回收相應(yīng)片段后連接，轉(zhuǎn)化大腸桿菌，篩選具有氨芐青霉素抗性的轉(zhuǎn)化子，經(jīng)質(zhì)粒提 取，酶切篩選獲得含有3個(gè)蛋白A基因單體的重組蛋白A的pET32a-P載體。實(shí)施例4表達(dá)重組蛋白A的大腸桿菌菌株BL21/pET32a的構(gòu)建用CaC12法將pET32a_P轉(zhuǎn)化BL21/DE3，在含有氨芐青霉素的LB平板上篩選轉(zhuǎn)化 子，經(jīng)質(zhì)粒檢測和酶切分析獲得含有pET32a的重組轉(zhuǎn)化子BL21/pET32a。實(shí)施例5利用大腸桿菌工程菌BL21/pET32a生產(chǎn)重組蛋白A1)菌種的培養(yǎng)發(fā)酵挑取大腸桿菌工程菌BL21/pET32a，接種于LB培養(yǎng)基中，接種量1 2 % V/V，于 30°C培養(yǎng)過夜，次日在無菌條件下將上述培養(yǎng)好的種子培養(yǎng)基按1 10-1 5接種于發(fā)酵 培養(yǎng)基上，30°C發(fā)酵至0. D600達(dá)到0. 4 0. 8，升溫至42°C誘導(dǎo)，3 5小時(shí)后離心收菌；取少量細(xì)胞加2X上樣緩沖液，按標(biāo)準(zhǔn)做SDS-PAGE凝膠電泳，結(jié)果如說明書附圖 2，經(jīng)誘導(dǎo)的BL21/pET32a的碎菌后的上清在20kD的位置出現(xiàn)一條新的蛋白帶(見圖2泳 道3)，轉(zhuǎn)化PET32空載體的BL21/DE3菌和經(jīng)誘導(dǎo)的BL21/pET32a的碎菌后的沉淀中不出現(xiàn) 此帶(見圖2泳道2和4)，證明重組蛋自A已在BL21/pET32a中誘導(dǎo)可溶表達(dá)。2)表達(dá)的重組蛋白A的純化將上述收集菌體用NaCl十磷酸鹽緩沖液(pH7. 0-8. 0)懸浮，超聲破碎，4°C離心， 收集上清，得粗提液。
經(jīng)SDS-PAGE電泳檢測表明，用本法提取表達(dá)于大腸桿菌胞周質(zhì)的重組蛋白A效 果很好，粗提后大部分重組蛋白A被粗提，殘存于菌體的量極微將粗提液進(jìn)行Sephacryl 5200分子篩純化，收集特征峰(第二洗脫峰)即為純化的重組蛋白A，其純度可達(dá)90%以 上。實(shí)施例6 ELISA方法檢測重組蛋白A與抗體結(jié)合活性的試驗(yàn)1)包被在96孔板中每孔包被重組蛋白A樣品IOOu 1，37°C，Ih ；2)封閉每孔以 IOOu 1 的 1 % 的 BSA 封閉，37°C，Ih ；3)加一抗每孔加入約IOOug人IgG抗體，37°C，Ih ；4)加二抗每孔加入約IOOu 11 1000辣根過氧化物酶標(biāo)記抗體，37°C，Ih ；5)顯色。經(jīng)ELISA檢測表明本發(fā)明提取的重組蛋白A與人IgG抗體結(jié)合活性強(qiáng)，每孔包被 4. 5ng重組蛋白A即可獲得明顯的檢測信號(hào)，結(jié)果顯示本發(fā)明提供的重組蛋白A可用于抗體 的檢測。實(shí)施例7重組蛋白A瓊脂糖凝膠5S CP的制備1、用環(huán)氧氯丙烷、氫氧化鈉與瓊脂糖(5%的交聯(lián)瓊脂糖凝膠)在水介質(zhì)中進(jìn)行反 應(yīng)，在30-60°C的溫度下反應(yīng)2-3小時(shí)，反應(yīng)完后用蒸餾水清洗至中性后抽干；2、將上述產(chǎn)物與本發(fā)明的重組蛋白A在5_25°C溫度下反應(yīng)15_20小時(shí)，反應(yīng)完后 清洗再抽干，即得到重組蛋白A瓊脂糖凝膠5S CP重組蛋白A瓊脂糖凝膠5S CP具有以下特性1)特點(diǎn)基團(tuán)脫落少，結(jié)合特異性強(qiáng)；2).配基密度^ 6mg重組蛋白A/ml ；3)吸附載量3 30mg 鼠 IgG2a/ml ；4)親和介質(zhì)的顆粒大小30-180 μ m ；5)最大流速250cm/h6)pH 范圍2-11;7)保存溫度4-8°C ；8)保存液體20%乙醇。如果待分離純化的抗體與親和層析介質(zhì)間的吸附力比較弱，則可適當(dāng)提高吸附緩 沖液的PH值和鹽濃度，即可獲得較好的分離效果。實(shí)施例8重組蛋白A瓊脂糖凝膠5S CP從小鼠腹水中分離純化IgG2a1、重組蛋白A瓊脂糖凝膠5S CP裝柱，1. 6 X 20cm，柱床體積為IOml ；2、用緩沖液A(20mM磷酸鹽緩沖液，pH7. 4，即pH7. 4的PBS溶液。配制0. 2M NaH2P0419ml，0. 2M Na2HP048lml,NaCl 9g加水至 1000ml。)平衡 5-10 個(gè)床體積，流速為 Iml/ min ；3、將2ml小鼠腹水用緩沖液A稀釋到20ml，0.45ym濾膜過濾，上樣。流速為lml/ min ；4、用緩沖液A再洗5-10個(gè)床體積，流速為lml/min ；5、用緩沖液B (20mM檸檬酸緩沖液，ρΗ4· 0。配制檸檬酸2. Ig加水950ml，用5Μ NaOH調(diào)至pH 4. 0，加水至1000ml)洗脫，流速為lml/min，收集洗脫峰；
6、用純水流洗10個(gè)柱床體積，再用20%的乙醇流洗10個(gè)柱床體積，流速為2ml/ min，柱子置于4-8°C環(huán)境中保存；7、將分離純化的IgG2a與對(duì)照品同時(shí)進(jìn)行SDS-PAGE電泳分析；(柱子每使用幾次 后應(yīng)該用以緩沖液C (0. 5M醋酸緩沖液，pH3. 0。配制0. 5M醋酸溶液用固體NaOH調(diào)至pH 3. 0)流洗1次，以便將吸附更牢的蛋白去除。)結(jié)果SDS-PAGE電泳分析結(jié)果見圖3，泳道1為標(biāo)準(zhǔn)蛋白Marker，泳道2為腹水，泳道3 為本發(fā)明的重組蛋白A瓊脂糖凝膠5S CP親和介質(zhì)所裝的柱子的洗脫峰。泳道3中，上、下 兩條帶分別是IgG2a的重鏈和輕鏈。試驗(yàn)結(jié)果表明了本發(fā)明的重組蛋白A瓊脂糖凝膠5S CP親和層析介質(zhì)一步就可以得到純度大于95%的IgG2a。 實(shí)施例9重組蛋白A葡聚糖凝膠的制備1、用環(huán)氧氯丙烷、氫氧化鈉與葡聚糖凝膠在水介質(zhì)中進(jìn)行反應(yīng)，在30-60°C的溫度 下反應(yīng)2-3小時(shí)，反應(yīng)完后用蒸餾水清洗至中性后抽干；2、將上述產(chǎn)物與本發(fā)明的重組蛋白A在5_25°C溫度下反應(yīng)15_20小時(shí)，反應(yīng)完后 清洗再抽干，即得到重組蛋白A葡聚糖凝膠。重組蛋白A葡聚糖凝膠具有以下特性1)特點(diǎn)基團(tuán)脫落少，結(jié)合特異性強(qiáng)；2)配基密度 6mg重組蛋白A/ml ；3)吸附載量3 30mg 鼠 IgG2a/ml ；4)親和介質(zhì)的顆粒大小20_130 μ m ；5)最大流速200cm/h6)pH 范圍2-11;7)保存溫度4_8°C ；8)保存液體20%乙醇。如果待分離純化的抗體與親和層析介質(zhì)間的吸附力比較弱，則可適當(dāng)提高吸附緩 沖液的PH值和鹽濃度，即可獲得較好的分離效果。實(shí)施例10重組蛋白A葡聚糖凝膠從小鼠腹水中分離純化IgG2a1、重組蛋白A葡聚糖凝膠裝柱，1. 6 X 20cm，柱床體積為IOml ；2、用緩沖液A(20mM磷酸鹽緩沖液，pH7. 4，即pH7. 4的PBS溶液。配制0. 2M NaH2P0419ml，0. 2M Na2HP0481ml, NaCl 9g 加水至 1000ml。)平衡 5-10 個(gè)床體積，流速為 lml/min ；3、將2ml小鼠腹水用緩沖液A稀釋到20ml，0.45ym濾膜過濾，上樣。流速為Iml/ min ；4、用緩沖液A再洗5-10個(gè)床體積，流速為lml/min ；5、用緩沖液B (20mM檸檬酸緩沖液，ρΗ4· 0。配制檸檬酸2. Ig加水950ml，用5Μ NaOH調(diào)至pH 4. 0，加水至1000ml)洗脫，流速為lml/min，收集洗脫峰；6、用純水流洗10個(gè)柱床體積，再用20%的乙醇流洗10個(gè)柱床體積，流速為2ml/ min，柱子置于4-8°C環(huán)境中保存；7、將分離純化的IgG2a與對(duì)照品同時(shí)進(jìn)行SDS-PAGE電泳分析；(柱子每使用幾次后應(yīng)該用以緩沖液C(0. 5M醋酸緩沖液，pH3. 0。配制0. 5M醋酸溶液用固體NaOH調(diào)至pH 3.0)流洗1次，以便將吸附更牢的蛋白去除。)結(jié)果SDS-PAGE電泳分析結(jié)果見圖4，泳道1為標(biāo)準(zhǔn)蛋白Marker，泳道2為腹水，泳道3 為本發(fā)明的重組蛋白A葡聚糖凝膠親和介質(zhì)所裝的柱子的洗脫峰。泳道3中，上、下兩條帶 分別是IgG2a的重鏈和輕鏈，試驗(yàn)結(jié)果表明了本發(fā)明的重組蛋白A葡聚糖凝膠親和層析介 質(zhì)一步就可以得到純度大于95%的IgG2a。實(shí)施例11 重組蛋白A瓊脂糖凝膠、葡聚糖凝膠及市售ProteinA S印harose 4Fast Flow對(duì)人IgGl動(dòng)態(tài)吸附載量的測定比較1、用緩沖液A(20mM磷酸鹽緩沖液，pH7. 4，即pH7. 4的PBS溶液。配制0. 2M NaH2P0419ml，0. 2M Na2HP048lml,NaCl 9g加水至 1000ml。)平衡 5-10 個(gè)床體積，流速為 Iml/ min ；2、已知濃度人IgGl (按中國發(fā)明專利01132225. X中公開的實(shí)施例得到)上樣，流 速為lml/min，至10%穿透時(shí)停止；3、根據(jù)樣品濃度、上樣體積及柱體積計(jì)算出10%穿透時(shí)各凝膠的動(dòng)態(tài)吸附載量。根據(jù)結(jié)果(見表1)可以判斷，本專利提供的重組蛋白A瓊脂糖凝膠及重組蛋白A 葡聚糖凝膠對(duì)人IgGl的動(dòng)態(tài)吸附載量均高于市售ProteinA Sepharose 4FastFlow0表1 各凝膠IgGl動(dòng)態(tài)吸附載量比較
權(quán)利要求
一種重組蛋白A親和層析介質(zhì)的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括以下步驟(1)通過化學(xué)合成的方法設(shè)計(jì)合成重組蛋白A基因單體，5‘端Ala Asp突變成Val Asp，以形成AccI酶切位點(diǎn)，各重組蛋白A基因單體間以AccI酶切位點(diǎn)相連，第一個(gè)重組蛋白A基因單體前端加入與表達(dá)載體相連的NcoI酶切位點(diǎn)，6個(gè)His和EK酶切位點(diǎn)，最后一個(gè)重組蛋白A基因單體末端加入中止密碼子TAA和與表達(dá)載體pET32a相連的BamH I酶切位點(diǎn)；(2)將步驟(1)的重組蛋白A基因單體酶切后接入載體pET32a的相應(yīng)酶切位點(diǎn)之間，再以Acc I內(nèi)切酶酶切，連接成包含3個(gè)串連重組蛋白A基因單體的重組蛋白A基因表達(dá)載體pET32a P；(3)將步驟(2)的表達(dá)載體pET32a P轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21/DE3，篩選、酶切，獲得重組轉(zhuǎn)化子BL21/pET32a；(4)將步驟(3)的菌株BL21/pET32a進(jìn)行培養(yǎng)發(fā)酵，使其高效表達(dá)重組蛋白A，再收集菌體，經(jīng)分離、純化得到重組蛋白A產(chǎn)品；(5)用環(huán)氧氯丙烷、氫氧化鈉與瓊脂糖或葡聚糖凝膠在水介質(zhì)中進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)產(chǎn)物與步驟(4)獲得的重組蛋白A在5 25℃溫度下反應(yīng)15 20小時(shí)，反應(yīng)完后清洗再抽干，獲得重組蛋白A凝膠。
2.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(5)瓊脂糖凝膠為5%的交聯(lián) 瓊脂糖凝膠。
3.如權(quán)利要求1-2中任一項(xiàng)所述的制備方法獲得的重組蛋白A，具有SEQIDN0. 1所示 的氨基酸序列。
4.如權(quán)利要求3所述的重組蛋白A，具有SEQID NO. 2所示的核苷酸序列。
5.如權(quán)利要求1-2中任一項(xiàng)所述的制備方法獲得的重組蛋白A親和層析介質(zhì)，其中重 組蛋白A具有SEQ ID NO. 1所示的氨基酸序列。
6.如權(quán)利要求5所述的重組蛋白A親和層析介質(zhì)，其中重組蛋白A具有SEQID NO. 2 所示的核苷酸序列。
7.如權(quán)利要求1-2中任一項(xiàng)所述的制備方法獲得的重組蛋白A親和層析介質(zhì)的用途， 其特征在于，所述重組蛋白A親和層析介質(zhì)用于抗體分離純化。
8.如權(quán)利要求3-4中任一項(xiàng)所述的重組蛋白A的用途，其特征在于，所述重組蛋白A用 于抗體檢測。
9.如權(quán)利要求5-6中任一項(xiàng)所述的重組蛋白A親和層析介質(zhì)的用途，其特征在于，所述 重組蛋白A親和層析介質(zhì)用于抗體分離純化。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種重組蛋白A基因，具有SEQ ID NO1所示的核苷酸序列，及由該基因編碼的重組蛋白A。本發(fā)明還提供了表達(dá)該重組蛋白A基因的重組表達(dá)載體PET32a-P，和被它所轉(zhuǎn)化的大腸桿菌BL21/DE3，以及制備重組蛋白A的方法。本發(fā)明提供的重組蛋白A用于抗體檢測、分離、純化，并能與層析介質(zhì)載體組成親和層析介質(zhì)。本發(fā)明生產(chǎn)的重組蛋白A具有蛋白結(jié)合特異性強(qiáng)，親和力高，純化效率大大改善的優(yōu)點(diǎn)，與市售的ProteinA Sepharose 4Fast Flow相比，其動(dòng)態(tài)吸附載量明顯提高。
文檔編號(hào)C12N15/70GK101935665SQ20101024500
公開日2011年1月5日 申請(qǐng)日期2007年3月14日 優(yōu)先權(quán)日2006年3月17日
發(fā)明者胡輝, 談珉, 郭亞軍 申請(qǐng)人:上海國健生物技術(shù)研究院