專利名稱：一種磷脂酶水解制備甘油磷酸膽堿(gpc)的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
一種磷脂酶水解制備甘油磷酸膽堿(GPC)的方法，涉及到食品化學(xué)、精細(xì)化學(xué)、有 機化學(xué)和藥物化學(xué)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
L-α -甘油磷脂膽堿(L-α -Glycerophosphorylcholine, L-α -GPC)為體內(nèi)天然 存在的水溶性磷脂代謝產(chǎn)物，它的原子結(jié)構(gòu)示意圖如下所示。它能穿過血腦屏障，是乙酰膽 堿和磷脂酰膽堿合成的膽堿源，是一種重要的的神經(jīng)遞質(zhì)和磷脂前體。
權(quán)利要求
1.一種磷脂酶水解法制備甘油磷酸膽堿(L-a-GPC)的方法，其特征在于，包括如下工 藝步驟(1)磷脂酶水解卵磷脂反應(yīng)磷脂中加入去離子水，固液比1 1 1 30g/ml，0 75°C水浴，均質(zhì)后加入金屬鹽MxNy、磷脂酶，反應(yīng)0 36h，得到GPC溶液，過濾，得到清夜。(2)L- α -GPC混合物脫色濃縮酶解液，加入脫色劑，固液比1 5 1 100g/mL，0 900C，攪拌0 他，過濾，得到無色澄清溶液。(3)L-α-GPC純化脫色后GPC水溶液，在0 70°C，減壓旋蒸，除去水，重新溶于甲醇 中，由水相變醇相，調(diào)PH = 10，流速0 lOmL/min，陽離子樹脂吸附解析，再過陰離子樹脂， 得到L-α -GPC的水溶液，在O 70°C，減壓旋蒸，最終得到無色透明的L_a -GPC。
2.低溫結(jié)晶法制備高純卵磷脂(PC)的方法，其特征在于，包括如下工藝步驟(1)醇溶磷脂的制備把粉末磷脂中加入低碳鏈醇中(醇含量70% 100%)，固液比 為1 1 1 50(g/mL)，0 70°C水浴、攪拌O 5h，分離得到磷脂的醇溶液，不溶物用 相同醇溶液萃取1 10次，將所得到醇溶液合并，減壓濃縮、干燥得到PC含量為40 65% 左右的醇溶磷脂，低碳鏈醇回收。(2)低溫結(jié)晶法制備高純PC利用步驟(1)中的醇溶磷脂為原料，將其加入到低碳鏈醇 中(純度0% 100% )，固液比1 1 1 50&/11^)，在-30 01、靜置0 311，分離 得到磷脂的醇溶液，不溶物在相同條件下重復(fù)低溫結(jié)晶萃取1 10次，將所得到的溶液合 并，在0 55°C、減壓濃縮得到金黃色磷脂，其中PC含量為65% 85%，低碳鏈醇回收。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的磷脂酶水解法制備甘油磷酸膽堿(L-a-GPC)的方法，其特征 在于所用原料為粉末磷脂、醇溶磷脂、高純PC。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的磷脂酶水解法制備甘油磷酸膽堿(L-a-GPC)的方法，其特征 在于所述的磷脂酶解反應(yīng)中添加的磷脂酶為磷脂酶A1、磷脂酶A2。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的磷脂酶水解法制備甘油磷酸膽堿(L-a-GPC)的方法，其特征 在于所述的磷脂酶解反應(yīng)中添加的金屬鹽離子M為Mg、Ca、Ba、Fe、Mn、Cr、Cu、Zn、Co、Pd。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的磷脂酶水解法制備甘油磷酸膽堿(L-a-GPC)的方法，其特征 在于所述的磷脂酶解反應(yīng)中添加的金屬鹽中的負(fù)離子X為F、Cl、Br、I、S。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的磷脂酶水解法制備甘油磷酸膽堿(L-a-GPC)的方法，其特征 在于所述的磷脂酶解反應(yīng)中添加的金屬鹵化物的分子式為仏隊。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的磷脂酶水解法制備甘油磷酸膽堿(L-a-GPC)的方法，其特征 在于所述的酶解液的脫色劑為活性炭、凹凸棒土等中的一種或多種。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的磷脂酶水解法制備甘油磷酸膽堿(L-a-GPC)的方法，其特征 在于所述酶解液的樹脂純化用的陽離子樹脂為強酸性、弱酸性、大孔吸附陽離子樹脂的Na 型和H型。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的磷脂酶水解法制備甘油磷酸膽堿(L-a-GPC)的方法，其特 征在于所述酶解液的樹脂純化用的陰離子樹脂為強堿性、弱堿性、大孔吸附性陰離子樹脂 的Cl型和OH型。
11.根據(jù)權(quán)利要求2所述的醇溶磷脂的制備，其特征在于所述的醇溶磷脂提取用的低 碳鏈醇為甲醇、乙醇、丙醇、正丁醇、異丁醇、戊醇、己醇或戊醇和己醇的異構(gòu)體。
12.根據(jù)權(quán)利要求2所述的低溫結(jié)晶法制備高純PC，其特征在于所述的低溫結(jié)晶醇溶磷脂提取用的低碳鏈醇為甲醇、乙醇、丙醇、正丁醇、異丁醇、戊醇、己醇或戊醇和己醇的異 構(gòu)體。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種酶法水解制備甘油磷酸膽堿(GPC)的方法，屬于脂質(zhì)開發(fā)應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域。包括如下步驟以粉末磷脂、醇溶磷脂、高純PC為原料，在水相中，用磷脂酶水解磷脂酰膽堿(PC)制備甘油磷酸膽堿(GPC)；活性炭脫色，得到GPC水溶液，轉(zhuǎn)化成醇相，采用陽離子樹脂吸附解析和陰離子吸附的方法純化，得到純度比較高的GPC水溶液，低溫、減壓旋蒸得到無色透明的L-α-GPC溶液，化學(xué)純度98.8％，光學(xué)純度ee99％，mp142-143℃，H2O含量14％，pH＝5.8)。本發(fā)明為制備甘油磷酸膽堿提供了一種新的思路和方法，也增加了磷脂酶在脂質(zhì)科學(xué)中的應(yīng)用。
文檔編號C12P13/00GK102041281SQ20101024859
公開日2011年5月4日 申請日期2010年8月9日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月9日
發(fā)明者劉元法, 周麗, 張康逸, 王興國, 錢祥云 申請人:江南大學(xué)