專利名稱：蛭弧菌蛭質(zhì)體在防控生魚片生產(chǎn)過程中的細(xì)菌的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體的是一種蛭弧菌及利用該蛭弧菌蛭質(zhì)體制成的蛭 弧菌液，在防控生魚片制作關(guān)鍵環(huán)節(jié)菌落總數(shù)和致病菌的應(yīng)用，特別是應(yīng)用于制作生魚片 的生鮮原料加工初洗時生魚片減菌，操作臺、加工車間和盛放碟盤的消毒殺菌。
背景技術(shù)：
民以食為天，食品是人類賴以生存和發(fā)展的最基本的物質(zhì)條件。食品質(zhì)量安全直 接關(guān)系到人們的身體健康和生活質(zhì)量，關(guān)系到每一個消費者的切身利益。食源性疾病引起 的食品質(zhì)量安全已成為影響公共健康的重要問題。據(jù)多方面的研究和調(diào)查結(jié)果顯示，除意 外事故和人為因素以外，食源性疾病主要是由微生物和化學(xué)藥物所引起的?！吧朝煼ā弊?為膳食療法中的一種，近年來倍受到消費者的喜愛。特別是日本料理中的生魚片，它堪稱是 日本菜的代表，很受到消費者的歡迎，在中國廣東一帶也有生食魚片的習(xí)慣。生魚片的加工 工藝流程大概包括選料，暫養(yǎng)，放血，初洗，開片，去皮，磨皮，修整，分級，清潔，裝盤，如果 是立即食用，加配飾料，再加上佐料就可以馬上食用；非立即食用，裝盤后可以急凍，稱重包 裝，冷凍貯藏。由于生魚片是以鮮活(鮮凍)的魚類為原料，經(jīng)過處理后直接食用，這些產(chǎn)品 本身可能帶菌或者在生產(chǎn)加工過程中污染上病原微生物，引起食物中毒。造成生魚片食源 性中毒的微生物主要包括原料自身攜帶，海產(chǎn)魚帶有弧菌屬、假單胞菌屬、無色桿菌屬及黃 桿菌屬等致病菌，淡水魚常常有假單胞菌屬、氣單胞菌屬等。如受生活用水污染，則魚體可 能帶有腸道致病菌，如沙門氏菌屬、志賀氏菌屬、致病性大腸埃希氏菌屬等。這些細(xì)菌多分 布在魚的體表、腸腔等處。另外在整個生魚片制作操作過程中，操作臺、加工車間和盛放碟 盤也可能使生魚片染菌。蛭弧菌是寄生于其他細(xì)菌，并能導(dǎo)致宿主菌裂解的一類細(xì)菌。我 們的最新研究表明，有些蛭弧菌可以裂解包括大腸桿菌埃希氏菌屬、沙門氏菌、惡臭假單胞 菌、弧菌等一些常見生魚片攜帶致病或潛在致病性細(xì)菌。如能應(yīng)用蛭弧菌蛭質(zhì)體制成的蛭 弧菌液于生魚片制作生鮮原料加工時生魚片減菌，操作臺、加工車間和盛放碟盤的消毒殺 菌。則能有效地控制生魚片產(chǎn)品的菌落總數(shù)和致病菌含量，預(yù)防中毒事件的發(fā)生。蛭弧菌的生活史一般分兩個階段在宿主菌外，可以自由游動，不進行增殖的游泳 體階段和在特定宿主菌的周質(zhì)空間內(nèi)進行生長繁殖的蛭質(zhì)體階段。蛭弧菌蛭質(zhì)體是蛭弧菌 在特定宿主菌的周質(zhì)空間內(nèi)進行生長繁殖的形式。蛭弧菌進入宿主菌細(xì)胞周質(zhì)空間后，主 要通過降解宿主細(xì)胞的大分子營養(yǎng)物質(zhì)成為單體，然后用于提供自身生物大分子的合成。 隨著細(xì)胞增殖和水解酶作用，使宿主細(xì)胞壁膜被破壞，從而裂解釋放出蛭弧菌。蛭弧菌游泳 體是指蛭弧菌侵入宿主菌前的生長形式。蛭弧菌在游泳體階段，可以識別并與宿主發(fā)生不 可逆結(jié)合，然后侵入宿主。已有的研究表明，作為一種有益微生物制劑，無論是在食品工業(yè)還是在(海洋) 水產(chǎn)養(yǎng)殖等領(lǐng)域，蛭弧菌的應(yīng)用均是安全的。例如在國外，Lenz and Hespell (1978) 研究發(fā)現(xiàn)，蛭弧菌及對動物及人的細(xì)胞不具侵染性[Lenz R. W.，HespellR. B. Attempts to grow bedellovibrios micurgically-injected into animal cells.Archives ofMicrobiology, 1978,119(3) :245_248]。在國內(nèi)，林茂等(2006)研究了蛭弧菌對魚類細(xì) 胞的作用，發(fā)現(xiàn)它對魚類細(xì)菌沒有侵染作用[林茂，楊先樂，薛暉，曹海鵬，邱軍強。蛭弧菌 BDH21 02對魚類細(xì)胞及病原菌的作用。微生物學(xué)通報，2006，33(1) :7_11]。蛭弧菌蛭質(zhì)體， 是蛭弧菌在特定宿主菌的周質(zhì)空間內(nèi)進行生長繁殖的形式。因此與游泳體相比，它具有自 己獨特的優(yōu)勢，制備、保存更為方便，環(huán)境耐受力強，殺菌作用時間雖略慢但持久。目前對生 魚片制作過程的消菌，主要用到自來水清洗，但此方法存在保質(zhì)期短，清洗不徹底，易殘留 細(xì)菌易染菌的缺陷；利用蛭弧菌蛭質(zhì)體對生魚片進行食用前的消菌，是一種無公害、無毒無 副作用的新生物方法，國內(nèi)外尚未見過有相關(guān)的報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)存在保質(zhì)期短、菌數(shù)多、有潛在危害的缺陷，提供 一種蛭弧菌蛭質(zhì)體在防控生魚片生產(chǎn)過程中的細(xì)菌的應(yīng)用。特別是應(yīng)用于制作生魚片關(guān)鍵 環(huán)節(jié)中的生鮮原料加工初洗時生魚片減菌，操作臺、加工車間和盛放碟盤的消毒殺菌。為了達到上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下蛭弧菌蛭質(zhì)體在防控生魚片生產(chǎn)過程中的細(xì)菌的應(yīng)用，將蛭弧菌蛭質(zhì)體菌液作為 殺菌劑用于生魚片制作過程中，以防控生魚片上的菌落總數(shù)和致病菌，其中菌落總數(shù)指的 是生魚片上所有的細(xì)菌，致病菌指的是沙門氏菌屬、大腸桿菌埃希氏菌屬、弧菌屬、假單胞 菌屬等對人體有害的細(xì)菌。所述蛭弧菌菌株為蛭弧菌BDFM05，由中國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，其簡稱為 CCTCC，保藏編號為CCTCC NO =M 209172，保藏時間為2009年8月7日。BDFM05呈單細(xì)胞， 橢圓形，大小為1. 43 X 0. 53 μ m,端生鞭毛，鞭毛長度至少2 μ m ；所述蛭弧菌(Bdellovibrio sp.)BDFM05以雙層平板法于28°C培養(yǎng)三天可形成直徑2 3mm的透明圓形噬菌斑，將得到 的圓形噬菌斑接種后，采用蛭質(zhì)體高密度發(fā)酵方法發(fā)酵。優(yōu)選地，所述蛭弧菌蛭質(zhì)體菌液的濃度為IO2 109pfu/mL。優(yōu)選地，所述蛭弧菌混合菌液采用擦涂、噴灑或浸泡的方式作用于生魚片生鮮原 料或盛放碟盤，或者采用擦涂、噴灑的方式作用于操作臺或加工車間。優(yōu)選地，所述浸泡時間為15 45秒。優(yōu)選地，所述浸泡時間為30秒。優(yōu)選地，對生魚片生鮮原料初洗殺菌時，蛭弧菌蛭質(zhì)體菌液的濃度為IO3 109pfu/mLo優(yōu)選地，對生魚片盛放碟盤殺菌時，蛭弧菌蛭質(zhì)體菌液的濃度為IO2 109pfu/mL。優(yōu)選地，所述擦涂、噴灑時，蛭弧菌蛭質(zhì)體菌液的使用量為10 100mL/m2。優(yōu)選地，蛭弧菌蛭質(zhì)體菌液的制備方法為在含有乳鏈球菌(Sti^ptococcus lactis)的 DNB(dilute nutrient broth)液 體培養(yǎng)基中接入蛭弧菌BDFM05，于20 35 "C、150 300rpm培養(yǎng)36 48h，培養(yǎng)液經(jīng) 40C 6000 8000rpm離心15 20min后，去除含蛭弧菌游泳體的上清，沉淀即是蛭弧菌蛭 質(zhì)體；然后用DNB液體培養(yǎng)基、無菌水、生理鹽水或0. 2mol/L pH值為7. 2 7. 6的磷酸鹽 緩沖液懸浮，即制得蛭弧菌蛭質(zhì)體菌液。本發(fā)明相對于現(xiàn)有技術(shù)，具有如下的優(yōu)點及效果
1、本發(fā)明所述蛭弧菌蛭質(zhì)體菌液在防控生魚片攜帶的菌落總數(shù)和致病菌效果顯著。所述的蛭弧菌蛭質(zhì)體在對生魚片中菌落總數(shù)和致病菌防控效果，如圖3、圖4、圖 5、圖8所示。所述的蛭弧菌蛭質(zhì)體菌液對生魚片菌落總數(shù)和致病菌防控作用，達到蛭弧菌 液的最低起效濃度時，能夠有效控制菌落總數(shù)含量，而致病菌在優(yōu)選范圍內(nèi)不存在。本應(yīng)用 方法特別適用于生魚片制作過程中的消菌處理，為日本料理提供優(yōu)質(zhì)原材料和加工上的便 利，確保生魚片制作過程中產(chǎn)品的優(yōu)質(zhì)，有效地解決了食品安全問題。2、采用本發(fā)明防控日本料理中的生魚片制作過程中的菌落總數(shù)和致病菌安全性 好。利用蛭弧菌蛭質(zhì)體防控生魚片制作過程中的菌落總數(shù)和致病菌，是一種生物的方 法，由于蛭弧菌具有侵染和裂解宿主菌的特性，使其具備作為抑止或清除生物體及其環(huán)境 中菌落總數(shù)和致病菌的條件，且其在裂解完宿主菌后，會因饑餓而自動消亡，因此對人和動 物無毒副作用。不僅可提高消費者生食生魚片的安全系數(shù)，保護消費者的健康，也為生魚片 的綠色加工生產(chǎn)提供保障。3、將本發(fā)明應(yīng)用于生魚片制作過程生鮮原料初洗減菌，方便、安全且效果好。把上述蛭弧菌蛭質(zhì)體應(yīng)用于生魚片生鮮原料加工過程初洗減菌，特別有利于預(yù)防 細(xì)菌的感染，減少細(xì)菌總量，避免致病菌的殘留，增加生魚片的安全性，確保生魚片的優(yōu)質(zhì)。 用于生魚片生鮮原料加工過程初洗減菌，檢測結(jié)果顯示，對細(xì)菌的清除在蛭弧菌蛭質(zhì)體濃 度彡103pfU/mL作用30秒后，效果顯著?？捎行У匮娱L在常溫或者低溫下的保藏時間，防 止或延緩腐敗變質(zhì)，操作方便、安全且效果好，直接提高了生魚片產(chǎn)品品質(zhì)。4、將本發(fā)明應(yīng)用于制作生魚片的操作臺、加工車間和盛放碟盤的消毒殺菌，方便、 安全且效果好。把上述蛭弧菌液應(yīng)用于制作生魚片的操作臺、加工車間和盛放碟盤的消毒殺菌， 有利于減少菌落總數(shù)的含量，控制致病菌的殘留，確保生魚片的優(yōu)質(zhì)。應(yīng)用于生魚片制作操 作臺和加工車間中菌落總數(shù)和致病菌的防控時，檢測結(jié)果顯示，在蛭弧菌液濃度> 102pfu/ mL，擦涂使用量> 10mL/m2菌落總數(shù)在Ih后殘留率不到0. 1%，致病菌沒有檢測出。應(yīng)用于 生魚片盛放碟盤中菌落總數(shù)和致病菌的防控時，檢測結(jié)果顯示，采用浸泡方法在蛭弧菌液 濃度彡102pfU/mL時，Ih后菌落總數(shù)殘留率不到0.2%，致病菌沒有檢測出?？梢娫摷夹g(shù)能 有效地延長生魚片產(chǎn)品在常溫或者低溫下的保藏時間，防止或延緩腐敗變質(zhì)，且操作過程 方便、安全，直接提高了產(chǎn)品品質(zhì)。5、本發(fā)明克服了之前生魚片產(chǎn)品保質(zhì)期短、菌數(shù)多、有潛在危害的缺陷。把該蛭弧 菌蛭質(zhì)體應(yīng)用于生魚片食用前的菌落總數(shù)和致病菌控制，能有效地減少菌落總數(shù)含量和致 病菌的殘留，而且所述的蛭弧菌蛭質(zhì)體作用時間長，從而能夠長時間地確保生魚片產(chǎn)品的 優(yōu)質(zhì)，從根本上避免生魚片食物中毒事件的發(fā)生，保護了消費者的健康。


圖1為自來水用浸漬的方法在防控鱸魚制成生魚片生鮮原料加工初洗時菌落總 數(shù)殘留率-時間圖；圖2為自來水用浸漬的方法在防控鱸魚制成生魚片生鮮原料加工初洗時致病菌殘留率-時間圖；圖3為蛭弧菌液用浸漬的方法在防控鱸魚制成生魚片生鮮原料加工初洗時落總 數(shù)殘留率-濃度圖；圖4為蛭弧菌液用浸漬的方法在防控鱸魚制成生魚片生鮮原料加工初洗時，時間 2h時制得致病菌殘留率-濃度圖；圖5為蛭弧菌液用擦涂的方法應(yīng)用于生魚片制作操作臺和加工車間的消毒殺菌 時，采用最低蛭弧菌液濃度102pfu/mL，時間Ih時制得的菌落總數(shù)殘留率-擦涂量圖；圖6為自來水用擦涂的方法應(yīng)用于生魚片制作操作臺和加工車間的消毒殺菌時， 菌落總數(shù)殘留率-時間圖；圖7為自來水用擦涂的方法應(yīng)用于生魚片制作操作臺和加工車間的消毒殺菌時， 致病菌殘留率-時間圖；圖8為蛭弧菌液用浸漬的方法應(yīng)用于生魚片盛放碟盤的消毒殺菌，采用最低蛭弧 菌液濃度102pfu/mL，時間Ih時制得的菌落總數(shù)殘留率-濃度圖；圖9為自來水用浸漬的方法應(yīng)用于生魚片盛放碟盤的消毒殺菌，菌落總數(shù)殘留 率-時間圖；圖10為自來水用浸漬的方法應(yīng)用于生魚片盛放碟盤的消毒殺菌，致病菌殘留 率-時間圖。
具體實施例方式下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步具體詳細(xì)描述，但本發(fā)明的實施方式不限 于此，對于未特別注明的工藝參數(shù)，可參照常規(guī)技術(shù)進行。所述沙門氏菌屬、大腸桿菌埃希氏菌屬、弧菌屬、假單胞菌屬等致病菌同時出 現(xiàn)均有效，但為實驗結(jié)果及圖表數(shù)據(jù)表達清晰，致病菌以鼠傷寒沙門氏菌(Salmonella typhimurium，購自廣東省微生物菌種保藏中心，編號GMl. 237)、嗜水氣單胞菌(Aeromonas hydrophila，購自廣東省微生物菌種保藏中心，編號GIM1. 172)和大腸桿菌(Escherichia coli，購自廣東省微生物菌種保藏中心，編號GIM 1.137)為例。實施例1蛭弧菌蛭質(zhì)體在防控生魚片制作過程中生鮮原料加工初洗時的菌落總數(shù)和致病 菌的應(yīng)用。下面生魚片以鱸魚為例。應(yīng)用方法包括以下具體步驟及其條件步驟一蛭弧菌液的制備所述蛭弧菌(Bdellovibrio sp.)BDFM05以雙層平板法于28°C培養(yǎng)三天可形成直 徑2 3mm的透明圓形噬菌斑，所用的蛭弧菌蛭質(zhì)體通過高密度蛭弧菌蛭質(zhì)體的發(fā)酵方法 進行發(fā)酵在裝有IOOmL MRS液體培養(yǎng)基(蛋白胨10g，牛肉膏粉8g，酵母膏粉4g，葡萄糖 20g，磷酸氫二鉀2g，檸檬酸三氨2g，乙酸鈉5g，硫酸鎂0. 2g，硫酸錳0. 05g, Ig吐溫80，pH 值6. 0 6. 4)的錐形瓶中接種2mL濃度為10lclcfu/mL乳鏈球菌(Streptococcus lactis, 購自廣東省微生物菌種保藏中心，編號GIM1. 156)，200rpm、28°C搖床培養(yǎng)18小時，培養(yǎng)液 于4°C、5000rpm離心15min，棄上清。沉淀菌體用5mL無菌水重新懸浮，之后加入到裝有 IOOmL DNB (dilute nutrient broth)液體培養(yǎng)基(營養(yǎng)肉湯0. 8g，酪蛋白酸水解物0. 5g，酵母精提物0. Ig,海水晶28g，溶于IOOOmL蒸餾水，pH值為7. 2 7. 6)的錐形瓶中，再接入 2mL 濃度為 103pfu/mL 的蛭弧菌 BDFM05(CCTCC M209172)。恒溫?fù)u床 250rpm、28°C 培養(yǎng) 36h。 培養(yǎng)液于4°C 6000rpm離心20min，沉淀即為蛭弧菌蛭質(zhì)體，在沉淀中加入DNB液體培養(yǎng)基 (營養(yǎng)肉湯0. 8g，酪蛋白酸水解物0. 5g，酵母精提物0. lg，海水晶28g，溶于IOOOmL蒸餾水 中，pH值為7. 2 7. 6)重新懸浮沉淀物，制成濃度為IO9 liTpfu/mL，然后稀釋成IO2 109pfU/mL的蛭弧菌蛭質(zhì)體菌液，待用；步驟二 蛭弧菌液在防控鱸魚生魚片生鮮原料加工初洗時菌落總數(shù)和致病菌的應(yīng) 用實驗(1)鼠傷寒沙門氏菌、嗜水氣單胞菌和大腸桿菌的制備于3個含IOOmL普通營 養(yǎng)肉湯(NB)培養(yǎng)基的錐形瓶，分別接入ImL X103Cfu/mL的鼠傷寒沙門氏菌(Salmonella typhimurium,購自廣東省微生物菌種保藏中心，編號GIM1. 237)、嗜水氣單胞菌 (Aeromonashydrophila，購自廣東省微生物菌種保藏中心，編號GIM1. 172)和大腸桿菌 (Escherichia coli，購自廣東省微生物菌種保藏中心，編號GIM1. 137)，搖床培養(yǎng)，160rpm 28°C培養(yǎng)12-16。增殖培養(yǎng)液經(jīng)5000rpm、4°C離心20min，棄上清液，沉淀菌體用無菌水重 新懸浮，使其濃度為109cfu/mL，最后制備上述三種菌的混合液，每種菌的終濃度為IO5Cfu/
mLo(2)蛭弧菌液對鱸魚生魚片生鮮原料加工初洗時菌落總數(shù)和致病菌的防控實驗用浸漬的方法，具體過程如下用無菌刀把鱸魚的肉片切割成每塊重量相近的實驗樣品生魚塊，每塊重約 0. 25kg。試驗設(shè)對照組和試驗組，其中對照組三塊，為三個平行樣，剩下魚片為試驗組，每 小組三塊，為三個平行樣。先將它們浸漬于75%的酒精中殺菌，在無菌操作臺放置至酒精 發(fā)揮干，后將它們浸漬于步驟二(1)的致病菌混合液中，致病菌混合液是指鼠傷寒沙門氏 菌、嗜水氣單胞菌和大腸桿菌的終濃度分別達到1 X 105cfu/mL，30秒后取出，在無菌操作臺 放置15min使菌體自然吸附。分別測試驗組和對照組的菌落總數(shù)和致病菌含量，然后對試 驗組每個小組的魚片再直接浸漬在不同濃度的蛭弧菌液。將試驗組浸漬于濃度為IO2Pfu/ mL、103pfu/mL、104pfu/mL、105pfu/mL、107pfu/mL 或 109pfu mL 的蛭弧菌液中，每濃度均有三 個平行樣，30秒后取出；對照組的生魚片用自來水(常規(guī)方法)浸泡，30秒后取出；試驗組 和對照組的樣品，在無菌操作臺，放置于室溫下，分別于2小時和4小時檢測菌落總數(shù)和致 病菌的含量。菌落總數(shù)和致病菌具體檢測方法是每次檢測從每組試樣中取出魚片放入無 菌絞肉機中同時加入攪碎，震蕩均勻后取原液依次進行10倍稀釋后，然后采用MPNOnost probable number)方法(單位為cfu/kg)，對細(xì)菌進行計數(shù)，菌落總數(shù)采用營養(yǎng)肉湯固體培 養(yǎng)基；致病菌檢測其中鼠傷寒沙門氏菌的檢測采用XLDUylose-lysine-deoxycholate)選 擇性培養(yǎng)基，嗜水氣單胞菌的檢測采用RimLer-shotts (R-S培養(yǎng)基)選擇性培養(yǎng)基，大腸桿 菌的檢測采用TBX(Tryptone Bile X-glucuronide)選擇性瓊脂培養(yǎng)基。檢測結(jié)果如圖1、圖2、圖3、圖4、所示，從圖1、圖2、和圖3、圖4、的比較可以看出， 用蛭弧菌液浸泡的菌落總數(shù)和致病菌的殘留率低于傳統(tǒng)用自來水浸泡的方法。從圖3和圖 4可以看出，蛭弧菌液的濃度越高，菌落總數(shù)和致病菌的殘留率越小，防控菌落總數(shù)和致病 菌的能力越強。作用時間越久，防控效果越好。由圖3，可知在2h時各個濃度菌落總數(shù)的殘 留率可以控制在以下。優(yōu)于自來水浸泡，使菌落總數(shù)含量能夠得到很好的控制。而致病菌的殘留率僅在濃度為103pfu/mL，時間2h時檢測到致病菌，其它濃度和時間為零，如圖 4所示。因此，在防控鱸魚生魚片制作初洗攜帶的菌落總數(shù)和致病菌中，蛭弧菌液應(yīng)用于控 制菌落總數(shù)的濃度> 102pfu/mL，最佳使用濃度在IO2 109pfu/mL。蛭弧菌液控制致病菌 的濃度彡103pfu/mL，最佳使用濃度在IO3 109pfu/mL。關(guān)于對生魚片品質(zhì)的評價，除了從上述生魚片的微生物衛(wèi)生安全方面做出檢測 外，持水力、嫩度、PH、肉色以及硬度及濕度也是考查的內(nèi)容。對持水力的考察方法采用目前通用的48小時滴水法，將肉制品懸掛在0 4°C 懸掛貯存48小時后計算失重率，結(jié)果使用蛭弧菌液的試驗組的魚片在懸掛48h持水率均較 高，失重率平均為2.0%，而對照組的失重率平均為則為11%。由此明顯看出對照組魚片品 質(zhì)的下降。魚片顏色評價，結(jié)果是使用蛭弧菌液的試驗組鱸魚呈現(xiàn)鮮紅色，稍有光澤；而未使 用蛭弧菌液的對照組肉色光澤暗淡，且不斷有水外滲。主觀評價可以看出未加蛭弧菌液的 (對照組)肉色明顯的劣于試驗組。pH值測定，結(jié)果顯示未加蛭弧菌液的魚片(對照組)的PH值都接近5，這是肌肉 的持水力下降的標(biāo)志，此時的PH值對魚片的風(fēng)味產(chǎn)生較大影響，而使用蛭弧菌液的試驗組 PH值維持在6. 0 6. 5，這說明肉的品質(zhì)保持的比對照組的好。從嫩度方面的考察，是通過嫩度儀來評估的，評估的結(jié)果兩者之間沒有很明顯的 區(qū)別，但實驗組嫩度略微的優(yōu)于對照組。對硬度主觀評價是通過切面是否容易變形來確定的，而對濕度評價是通過切面液 體滲出的多少來確定的，結(jié)果是4h時對照組的魚片切面很容易變形，而且還有水滲出，可 以鑒定等級為滲出。試驗組的魚片切面不容易變形，也沒有水滲出，可以鑒定等級為潮濕。從以上肉品質(zhì)的綜合鑒定來看，試驗組的魚片品質(zhì)明顯的優(yōu)于對照組。這說明蛭 弧菌液在防控生魚片生鮮原料加工初洗時的菌落總數(shù)和致病菌方面效果顯著，可以推廣應(yīng) 用于日本料理等生魚片為材料的產(chǎn)品制作工程菌落總數(shù)和致病菌的防控。實施例2蛭弧菌蛭質(zhì)體應(yīng)用于生魚片制作操作臺和車間的消毒殺菌。試驗包括以下具體步驟及其條件
步驟一同實施例1的步驟一步驟二 蛭弧菌蛭質(zhì)體應(yīng)用于生魚片生制作操作臺和車間的消毒殺菌實驗。采用本發(fā)明的應(yīng)用方法，選用大小規(guī)格一樣的操作臺和加工車間，分成多個不同 試驗組和對照組，其中對照組三個，為三個平行樣，剩下為試驗組，每小組三個，為三個平行 樣。分別測試驗組和對照組的菌落總數(shù)和致病菌含量，然后在試驗組加工生魚片操作臺和 車間的表面，均勻擦涂濃度為102pfU/mL的蛭弧菌液，擦涂使用量則按試驗組的不同分別為 10mL/m2、25mL/m2、50mL/m2、70mL/m2、或100mL/m2，每個試驗組擦涂一遍；對照組(常規(guī)方法) 用自來水擦涂，每個組擦涂一遍；室溫下放置，分別于Ih和2h檢測菌落總數(shù)和致病菌。檢 測方法同上述。隨后的操作臺和加工車間菌落總數(shù)的檢測結(jié)果，顯示試驗組僅在噴灑量為IOmL/ m2中1小時后檢測到菌落總數(shù)的殘留率如圖5所示，沒有檢測到致病菌，其他噴灑量的試驗 組沒有檢測到菌落總數(shù)和致病菌。對照組檢測到菌落總數(shù)的殘留率如圖6所示，致病菌的檢測結(jié)果如圖7所示；比較圖5和圖6、圖7，可知用蛭弧菌液的效果優(yōu)于常規(guī)的方法。本試 驗研究的結(jié)果表明該蛭弧菌液應(yīng)用于生魚片制作操作臺和加工車間的消毒殺菌方面效果 顯著，可確保生魚片產(chǎn)品品質(zhì)。由此可見，該蛭弧菌液可以廣泛地推廣應(yīng)用于生魚片產(chǎn)品的 操作環(huán)境中的消毒殺菌。實施例3蛭弧菌液應(yīng)用于生魚片盛放碟盤的消毒殺菌。試驗包括以下具體步驟及其條件步驟一同實施例1的步驟一步驟二 蛭弧菌液在生魚片盛放碟盤消毒殺菌的應(yīng)用實驗。采用本發(fā)明的應(yīng)用方法，分成多個不同試驗組和對照組，選規(guī)格大小一樣的碟盤， 其中對照組三個，為三個平行樣，剩下為試驗組，每小組三個，為三個平行樣。分別測試驗組 和對照組的菌落總數(shù)和致病菌含量。然后把盛放的碟盤直接浸漬在不同濃度的蛭弧菌液。 將試驗組分別漬于濃度為 102pfu/mL、103pfu/mL、104pfu/mL、105pfu/mL、107pfu/mL 或 109pfu mL的蛭弧菌液中，每濃度均有三個平行樣，浸泡30秒取出晾干，對照組(常規(guī)方法)用自來 水浸泡30秒取出晾干，在無菌操作室，室溫下放置，分別于Ih和2h檢測菌落總數(shù)和致病菌 的含量。檢測方法同上述。菌落總數(shù)和致病菌殘留率的檢測結(jié)果，顯示僅在濃度為102pfU/mL的試驗組Ih檢 測到菌落總數(shù)，結(jié)果如圖8所示，沒有檢測到致病菌。其他濃度的試驗組沒有檢測到菌落總 數(shù)和致病菌。對照組菌落總數(shù)殘留率結(jié)果如圖9所示，致病菌的檢測結(jié)果如圖10所示。比 較圖8和圖9、圖10，可知使用蛭弧菌液優(yōu)于常規(guī)的方法。本試驗研究的結(jié)果表明該蛭弧菌 液應(yīng)用于生魚片盛放碟盤的消毒殺菌方面效果顯著，可確保生魚片產(chǎn)品品質(zhì)。由此可見，該 蛭弧菌液可以廣泛地推廣應(yīng)用于生魚片盛放碟盤中的消毒殺菌。上述實施例為本發(fā)明較佳的實施方式，但本發(fā)明的實施方式并不局限于上述實施 例子，其他的任何未背離本發(fā)明的精神實質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡化， 均應(yīng)為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
蛭弧菌蛭質(zhì)體在防控生魚片生產(chǎn)過程中的細(xì)菌的應(yīng)用，其特征在于，所述蛭弧菌菌株為蛭弧菌BDFM05，由中國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，其簡稱為CCTCC，保藏編號為CCTCC NOM 209172，保藏時間為2009年8月7日；將上述菌株制成蛭弧菌蛭質(zhì)體菌液作為殺菌劑用于生魚片生產(chǎn)過程中。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述蛭弧菌蛭質(zhì)體菌液的濃度為IO2 109pfu/mLo
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述蛭弧菌蛭質(zhì)體菌液采用擦涂、噴灑或 浸泡的方式作用于生魚片生鮮原料或盛放碟盤，或者采用擦涂、噴灑的方式作用于操作臺 或加工車間。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述浸泡時間為15 45秒。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，所述浸泡時間優(yōu)選為30秒。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，對生魚片生鮮原料初洗殺菌時，蛭弧菌蛭 質(zhì)體菌液的濃度為IO3 109pfu/mL。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，對生魚片盛放碟盤殺菌時，蛭弧菌蛭質(zhì)體 菌液的濃度為IO2 109pfu/mL。
8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述擦涂、噴灑時，蛭弧菌蛭質(zhì)體菌液的 使用量為10 100mL/m2。
9.根據(jù)權(quán)利要求1 8任意一項所述的應(yīng)用，其特征在于，蛭弧菌蛭質(zhì)體菌液的制備方 法為在含有乳鏈球菌的DNB液體培養(yǎng)基中接入蛭弧菌BDFM05，于20 35 °C、150 300rpm 培養(yǎng)36 48h，培養(yǎng)液經(jīng)4°C 6000 8000rpm離心15 20min后，去除含蛭弧菌游泳體的 上清，沉淀即是蛭弧菌蛭質(zhì)體；然后用DNB液體培養(yǎng)基、無菌水、生理鹽水或0. 2mol/L pH值 為7. 2 7. 6的磷酸鹽緩沖液懸浮，即制得蛭弧菌蛭質(zhì)體菌液。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種蛭弧菌蛭質(zhì)體在防控生魚片生產(chǎn)過程中的細(xì)菌的應(yīng)用，所述蛭弧菌菌株為蛭弧菌BDFM05，由中國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，其簡稱為CCTCC，保藏編號為CCTCC NOM 209172，保藏時間為2009年8月7日；將上述菌株制成蛭弧菌蛭質(zhì)體菌液作為殺菌劑用于生魚片制作過程中，特別適用于生魚片制作過程中生鮮原料初洗減菌，操作臺、加工車間和盛放碟盤中攜帶細(xì)菌的消毒殺菌。本發(fā)明將蛭弧菌蛭質(zhì)體制成的蛭弧菌液用于防治生魚片生產(chǎn)過程中可能染菌的關(guān)鍵環(huán)節(jié)菌落總數(shù)和致病菌的控制，對生魚片上的常見食物中毒細(xì)菌防控效果良好，且具有無毒、對食品無副作用等特點，應(yīng)用前景良好。
文檔編號A23L1/326GK101978862SQ201010270900
公開日2011年2月23日 申請日期2010年8月31日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月31日
發(fā)明者李冬梅, 蔡俊鵬 申請人:華南理工大學(xué)