專利名稱：蛭弧菌游泳體在防控生魚片制作過程中的細菌的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體的是一種蛭弧菌及利用該蛭弧菌游泳體制成的蛭 弧菌液，在防控生魚片制作關(guān)鍵環(huán)節(jié)菌落總數(shù)和致病菌的應(yīng)用，特別是應(yīng)用于制作生魚片 的生鮮原料加工初洗時生魚片減菌，操作臺、加工車間和盛放碟盤的消毒殺菌。
背景技術(shù)：
近年來“生食療法”被視為一種健康的時尚，生食魚片倍受到消費者的喜愛，特別 是日本料理以生魚片最為著名，它堪稱是日本菜的代表作，在中國廣東一帶也有生食魚片 的習(xí)慣。生魚片的加工工藝流程大概包括選料，暫養(yǎng)，放血，初洗，開片，去皮，磨皮，修整， 分級，清潔，裝盤，如果是立即食用，加配飾料，再加上佐料就可以馬上食用；非立即食用，裝 盤后可以急凍，稱重包裝，冷凍貯藏。由于生魚片是以鮮活(鮮凍)的魚類為原料，經(jīng)過處理 后直接食用，這些產(chǎn)品本身可能帶菌或者在生產(chǎn)加工過程中污染上病原微生物，引起食物 中毒。造成生魚片食源性中毒的微生物主要包括原料自身攜帶，海產(chǎn)魚帶有弧菌屬、假單胞 菌屬、無色桿菌屬及黃桿菌屬等細菌，淡水魚常常有假單胞菌屬、氣單胞菌屬等。如受生活 用水污染，則魚體可能帶有腸道致病菌，如沙門氏菌屬、志賀氏菌屬、致病性大腸埃希氏菌 屬等。這些細菌多分布在魚的體表、腸腔等處。另外在整個生魚片的生產(chǎn)操作過程中，操作 工具和盛放碟盤也可能使生魚片染菌。我們的最新研究表明，有些蛭弧菌可以裂解包括大 腸桿菌埃希氏菌屬、沙門氏菌、惡臭假單胞菌、弧菌等一些常見生魚片攜帶致病或潛在致病 性細菌。因此，利用蛭弧菌控制生魚片攜帶的菌落總數(shù)和致病菌，這種新的生物技術(shù)，可以 提高和改善其食用的安全性，對人類健康和我國魚類產(chǎn)品業(yè)的發(fā)展具有十分重要的意義。蛭弧菌是一類寄生于其他細菌，并能導(dǎo)致其裂解的一類細菌。研究表明它比一般 細菌小，能通過細菌過濾器，有類似噬菌體的作用。單細胞，呈弧形或逗點狀，有時呈螺旋 狀，大小0. 2 0. 6X0. 8 1. 2微米，端生鞭毛，多為一根。革蘭氏染色呈陰性，可以裂解 致病性細菌。我們的最新研究表明，有些蛭弧菌可以裂解包括嗜水氣單胞菌、惡臭假單胞菌 等一些常見魚片攜帶的人畜共患致病菌。蛭弧菌的生活史分兩個階段自由生活，能運動， 不進行增殖的游泳體階段和在特定宿主細菌的周質(zhì)空間內(nèi)進行生長繁殖的蛭質(zhì)體階段。已有的研究表明，作為一種有益微生物制劑，無論是在食品工業(yè)還是在(海洋) 水產(chǎn)養(yǎng)殖等領(lǐng)域，蛭弧菌的應(yīng)用均是安全的。例如在國外，Lenz and Hespell (1978) 研究發(fā)現(xiàn)，蛭弧菌及對動物及人的細胞不具侵染性[Lenz R. W.，HespellR. B. Attempts to grow bedellovibrios micurgically-injected into animal cells. Archives of Microbiology, 1978,119(3) =245-248] 在國內(nèi)，林茂等(2006)研究了蛭弧菌對魚類細 胞的作用，發(fā)現(xiàn)它對魚類細菌沒有侵染作用[林茂，楊先樂，薛暉，曹海鵬，邱軍強。蛭弧菌 BDH2102對魚類細胞及病原菌的作用。微生物學(xué)通報，2006，33(1) :7_11]。蛭弧菌游泳體 是指蛭弧菌侵入宿主細菌前的生長形式。蛭弧菌游泳體侵入宿主細菌的過程非?？?，一般 幾秒鐘內(nèi)即可完成。目前對生魚片的加工過程的消菌，主要用到自來水清洗，但此方法存在 保質(zhì)期短，清洗不徹底，易殘留細菌易染菌的缺陷；利用蛭弧菌游泳體對生魚片進行食用前的消菌，是一種無公害、無毒無副作用的新生物方法，國內(nèi)外尚未見過有相關(guān)的報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)存在保質(zhì)期短、菌數(shù)多、有潛在危害的缺陷，提供 一種蛭弧菌游泳體在防控生魚片制作過程中的細菌的應(yīng)用。特別是應(yīng)用于制作生魚片關(guān)鍵 環(huán)節(jié)中的生鮮原料加工初洗時生魚片減菌，操作臺、加工車間和盛放碟盤的消毒殺菌。為了達到上述目的，本發(fā)明的主要技術(shù)方案如下一種蛭弧菌，其特征在于，該菌株為蛭弧菌BDFM05，由中國典型培養(yǎng)物保藏中心保 藏，其簡稱為CCTCC，保藏編號為CCTCC NO :M209172，保藏時間為2009年8月7日。BDFM05 呈單細胞，橢圓形，大小為1. 43X0. 53 μ m，端生鞭毛，鞭毛長度至少2 μ m ；所述蛭弧菌(Bdellovibrio sp.)BDFM05以雙層平板法于28°C培養(yǎng)三天可形成直 徑2 3mm的透明圓形噬菌斑，采用游泳體高密度發(fā)酵方法發(fā)酵，得到一定濃度的蛭弧菌游 泳體。將蛭弧菌游泳體菌液作為殺菌劑用于生魚片制作過程中，以消除生魚片上的菌落總 數(shù)和致病菌，其中菌落總數(shù)指的是生魚片上所有的細菌，致病菌指的是沙門氏菌屬、大腸桿 菌埃希氏菌屬、弧菌屬、假單胞菌屬等對人體有害的細菌。優(yōu)選地，所述蛭弧菌游泳體菌液的濃度為IO1 109pfu/mL。優(yōu)選地，所述蛭弧菌游泳體菌液采用擦涂、噴灑或浸泡的方式作用于生魚片生鮮 原料或盛放碟盤，或者采用擦涂、噴灑的方式作用于操作臺或加工車間。優(yōu)選地，所述浸泡時間為15 45秒。優(yōu)選地，所述浸泡時間為30秒。優(yōu)選地，對生魚片生鮮原料殺菌時，蛭弧菌游泳體菌液的濃度為IO2 109pfu/mL。優(yōu)選地，對生魚片盛放碟盤殺菌時，蛭弧菌游泳體菌液的濃度為IO1 109pfu/mL。優(yōu)選地，所述擦涂、噴灑時，蛭弧菌游泳體菌液的使用量為10 100mL/m2。優(yōu)選地，所述蛭弧菌游泳體菌液通過申請?zhí)枴?00710031166. X”，公開的高密度蛭 弧菌游泳體的發(fā)酵方法進行制備，具體為在含有乳鏈球菌(Sti^ptococcus lactis)的 DNB(dilute nutrient broth)液 體培養(yǎng)基中接種蛭弧菌BDFM05，恒溫搖床150 300rpm、25 35°C培養(yǎng)36 48h ；培養(yǎng)液 分別于4°C、6000 8000rpm離心15 20min，取上清液，再將上清液分別于4°C、16000 ISOOOrpm離心15 20min，保留沉淀，向沉淀中加入DNB液體培養(yǎng)基重新懸浮蛭弧菌沉 淀物，即制得濃度為IO9 liTpfu/mL的蛭弧菌游泳體菌液；再用水或PBS緩沖液稀釋至 IO1 109pfu/mL的蛭弧菌液，待用。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下優(yōu)點1、在生魚片制作中采用本法控制生魚片中菌落總數(shù)和致病菌效果明顯。如圖3、圖4、圖5、圖8所示，所述的蛭弧菌液對生魚片菌落總數(shù)和致病菌防控作用 顯著，當(dāng)達到蛭弧菌液的最低起效濃度時，能夠有效控制菌落總數(shù)含量，而致病菌在優(yōu)選范 圍內(nèi)不存在。本應(yīng)用方法特別適用于生魚片制作過程中的消菌處理，為日本料理提供優(yōu)質(zhì) 原材料和加工上的便利，確保生魚片生鮮原料制作過程中產(chǎn)品的優(yōu)質(zhì)，有效地解決了食品 安全問題。2、采用本發(fā)明控制日本料理中的生魚片生鮮原料加工初洗時的細菌安全性好，操作方便。利用蛭弧菌游泳體防控生魚片生鮮原料加工初洗時菌落總數(shù)和致病菌的方法是 生物方法，蛭弧菌游泳體控制生魚片中的細菌具有起效快、活力強的優(yōu)點，該特征使其適合 作為抑止或清除生物體及其環(huán)境中有害菌的生物凈化因子，且其在裂解完宿主細菌后，會 因饑餓而自動消亡，因此對人和動物無毒副作用。不僅可提高消費者生食生魚片的安全系 數(shù)，保護消費者的健康，也為生魚片的綠色加工生產(chǎn)提供保障。操作采用浸泡、噴灑或者擦 涂的方法，過程簡單。3、將本發(fā)明應(yīng)用于生產(chǎn)生魚片的操作臺、加工車間和盛放碟盤的消毒殺菌，方便、 安全且效果好。把上述蛭弧菌液應(yīng)用于制作生魚片的操作臺、加工車間和盛放碟盤的消毒殺菌， 效果好可確保生魚片的優(yōu)質(zhì)。應(yīng)用于生魚片產(chǎn)品加工操作臺和車間中菌落總數(shù)和致病菌的 防控時，檢測結(jié)果顯示，在蛭弧菌液濃度> IO1PfuAiL,噴灑使用量> 10mL/m2菌落總數(shù)在Ih 后殘留率不到0. 1 %，致病菌沒有檢測出。應(yīng)用于生魚片盛放碟盤中菌落總數(shù)和致病菌的防 控時，檢測結(jié)果顯示，采用浸泡方法在蛭弧菌液濃度> IO1PfuAiL時，Ih后菌落總數(shù)殘留率 不到0. 2%，致病菌沒有檢測出?？梢娫摷夹g(shù)能有效地延長生魚片產(chǎn)品在常溫或者低溫下的 保藏時間，防止或延緩腐敗變質(zhì)，且操作方便、安全且效果好，直接提高了產(chǎn)品品質(zhì)。4、蛭弧菌游泳體控制生魚片中的細菌具有起效快、活力強的優(yōu)點，這些優(yōu)點使得 蛭弧菌游泳體同樣適合作為抑止或清除生物體及其環(huán)境中有害菌的生物凈化因子，從而避 免了細菌感染對生魚片品質(zhì)的不利影響。


圖1為自來水用浸漬的方法在控制三文魚制成生魚片生鮮原料加工初洗時菌落 總數(shù)殘留率-時間圖；圖2為自來水用浸漬的方法在控制三文魚制成生魚片生鮮原料加工初洗時致病 菌殘留率-時間圖；圖3為蛭弧菌液用浸漬的方法在控制三文魚制成生魚片生鮮原料加工初洗時菌 落總數(shù)殘留率_濃度圖；圖4為蛭弧菌液用浸漬的方法在控制三文魚制成生魚片生鮮原料加工初洗時，時 間2h時制得致病菌留率-濃度圖；圖5為蛭弧菌液用擦涂的方法應(yīng)用于生魚片生產(chǎn)過程中操作臺和加工車間的消 毒殺菌時，采用最低蛭弧菌液濃度IO1PfuAiL,時間Ih時制得的菌落總數(shù)殘留率-擦涂量 圖；圖6為自來水用擦涂的方法應(yīng)用于生魚片制作操作臺和加工車間的減菌時，菌落 總數(shù)殘留率-時間圖；圖7為自來水用擦涂的方法應(yīng)用于生魚片制作操作臺和加工車間的減菌時，致病 菌殘留率-時間圖；圖8為蛭弧菌液用浸漬的方法應(yīng)用于生魚片盛放碟盤的消毒殺菌，時間Ih時制得 的菌落總數(shù)殘留率-濃度圖；圖9為自來水用浸漬的方法應(yīng)用于生魚片盛放碟盤的消毒殺菌，菌落總數(shù)殘留率-時間圖；圖10為自來水用浸漬的方法應(yīng)用于生魚片盛放碟盤的消毒殺菌，致病菌殘留 率-時間圖。
具體實施例方式下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步具體詳細描述，但本發(fā)明的實施方式不限 于此，對于未特別注明的工藝參數(shù)，可參照常規(guī)技術(shù)進行。所述沙門氏菌屬、大腸桿菌埃希氏菌屬、弧菌屬、假單胞菌屬等致病菌同時出 現(xiàn)均有效，但為實驗結(jié)果及圖表數(shù)據(jù)表達清晰，致病菌以鼠傷寒沙門氏菌(Salmonella typhimurium，購自廣東省微生物菌種保藏中心，編號GMl. 237)、嗜水氣單胞菌(Aeromonas hydrophila，購自廣東省微生物菌種保藏中心，編號GIM1. 172)和大腸桿菌(Escherichia coli，購自廣東省微生物菌種保藏中心，編號GIM 1.137)為例。實施例1蛭弧菌游泳體在控制生魚片生鮮原料加工初洗時的菌落總數(shù)和致病菌的應(yīng)用，下 面生魚片以三文魚為例。應(yīng)用方法包括以下具體步驟及其條件步驟一蛭弧菌游泳體菌液的制備蛭弧菌游泳體通過申請?zhí)枴?00710031166. X”的國家發(fā)明專利申請公開的高密度 蛭弧菌游泳體的發(fā)酵方法進行發(fā)酵在裝有IOOmL MRS液體培養(yǎng)基(蛋白胨10g，牛肉膏粉 Sg,酵母膏粉4g，葡萄糖20g，磷酸氫二鉀2g，檸檬酸三氨2g，乙酸鈉5g，硫酸鎂0. 2g，硫酸 錳0. 05g, Ig吐溫80，pH值6. 0 6. 4)的錐形瓶中接種2mL濃度為1010cfu/mL的乳鏈球菌 (Streptococcus lactis,購自廣東省微生物菌種保藏中心，編號GIM1. 156)，200rpm、28°C 搖床培養(yǎng)18小時，培養(yǎng)液于4°C、5000rpm離心15min，棄上清。沉淀菌體用5mL無菌水重新 懸浮，之后加入到裝有IOOmL DNB(dilute nutrient broth)液體培養(yǎng)基(營養(yǎng)肉湯0. 8g， 酪蛋白酸水解物0. 5g，酵母精提物0. lg，溶于IOOOmL蒸餾水中，pH值為7. 2 7. 6)的錐 形瓶中，再接入2mL濃度為103pfu/ml的蛭弧菌BDFM05。恒溫搖床250rpm、28°C培養(yǎng)36h。 培養(yǎng)液于4°C 6000rpm離心20min，取上清液，再將上清液分別于4°C 16000rpm離心20min， 保留沉淀，加入DNB液體培養(yǎng)基(營養(yǎng)肉湯0. 8g，酪蛋白酸水解物0. 5g，酵母精提物0. Ig, 溶于IOOOmL蒸餾水中，pH值為7. 2 7. 6)重新懸浮蛭弧菌沉淀物，即制得濃度為IO9 1010pfu/mL的蛭弧菌游泳體菌液。再稀釋成IO1 109pfU/mL的蛭弧菌液，待用。步驟二 蛭弧菌游泳體控制三文魚生魚片制作生鮮原料加工初洗時菌落總數(shù)和致 病菌的應(yīng)用實驗(1)鼠傷寒沙門氏菌、嗜水氣單胞菌和大腸桿菌的制備于3個含IOOmL普通營養(yǎng)肉湯(NB)培養(yǎng)基的錐形瓶，分別接入ImL xl03cfu/ mL的鼠傷寒沙門氏菌(Salmonella typhimurium，購自廣東省微生物菌種保藏中心，編號 GIM1. 237)、嗜水氣單胞菌(Aeromonas hydrophila，購自廣東省微生物菌種保藏中心，編 號GIM1. 172)和大腸桿菌(Escherichiacoli，購自廣東省微生物菌種保藏中心，編號GIM 1. 137)，搖床培養(yǎng)，160rpm28°C培養(yǎng)12-16。增殖培養(yǎng)液經(jīng)5000rpm、4°C離心20min，棄上清 液，沉淀菌體用無菌水重新懸浮，使其濃度為109cfu/mL，最后制備上述三種菌的混合液，每種菌的終濃度為105cfu/mL。(2)蛭弧菌液對三文魚生魚片生鮮原料加工初洗時菌落總數(shù)和致病菌的控制實驗用浸漬的方法，具體過程如下用無菌刀把三文魚的肉片切割成每塊重量相近的實驗樣品生魚塊，每塊重約 0. 25kg。試驗設(shè)對照組和試驗組，其中對照組三塊，為三個平行樣，剩下魚片為試驗組，每 小組三塊，為三個平行樣。先將它們浸漬于75%的酒精中殺菌，在無菌操作臺放置至酒精 發(fā)揮干，后將它們浸漬于步驟二(1)的致病菌混合液中，致病菌混合液是指鼠傷寒沙門氏 菌、嗜水氣單胞菌和大腸桿菌的終濃度分別達到1 X 105cfu/mL，30秒后取出，在無菌操作臺 放置15min使菌體自然吸附。分別測試驗組和對照組的菌落總數(shù)和致病菌含量，然后對試 驗組每個小組的魚片再直接浸漬在不同濃度的蛭弧菌液。將試驗組浸漬于濃度為IO1Pfu/ mL、102pfu/mL、103pfu/mL、105pfu/mL、107pfu/mL 或 109pfu mL 的蛭弧菌液中，每濃度均有三 個平行樣，30秒后取出；對照組的生魚片用自來水(常規(guī)方法)浸泡，30秒后取出；試驗組 和對照組的樣品，在無菌操作臺中于室溫下放置，分別于2小時和4小時檢測菌落總數(shù)和致 病菌的含量。菌落總數(shù)和致病菌具體檢測方法是每次檢測從每組試樣中取出魚片放入無 菌絞肉機中同時加入50mL的無菌蒸餾水?dāng)囁?，震蕩均勻后取原液依次用無菌蒸餾水進行 10倍稀釋后，每個梯度取0. ImL平板涂布，培養(yǎng)24h后采用MPN(most probable number) 方法(單位為cfu/kg)，對細菌進行計數(shù)。菌落總數(shù)采用營養(yǎng)肉湯固體培養(yǎng)基；致病菌檢 測其中鼠傷寒沙門氏菌的檢測采用XLDUylose-lysine-deoxycholate)選擇性培養(yǎng)基，嗜 水氣單胞菌的檢測采用RimLer-shotts (R-S培養(yǎng)基)選擇性培養(yǎng)基，大腸桿菌的檢測采用 TBX(Tryptone Bile X-glucuronide)選擇性瓊脂培養(yǎng)基。檢測結(jié)果如圖1、圖2、圖3和圖4所示，所有數(shù)據(jù)均為三個平行樣的平均值。由對 照組圖1、圖2、和試驗組圖3、圖4的比較可以看出，用蛭弧菌液浸泡的菌落總數(shù)和致病菌的 殘留率低于傳統(tǒng)用自來水浸泡的方法。從圖3和圖4可以看出，蛭弧菌液的濃度越高，菌落 總數(shù)和致病菌的殘留率越小，防控菌落總數(shù)和致病菌的能力越強。作用時間越久，防控效果 越好。由圖3，可知在2h時各個濃度菌落總數(shù)的殘留率可以控制在以下，使得生魚片的 菌落總數(shù)得到很好的控制。而致病菌的殘留率僅在濃度為103pfu/mL，時間2h時檢測到致 病菌，其它濃度和時間為零，如圖4所示。因此，在防控三文魚生魚片攜帶的菌落總數(shù)和致 病菌中，蛭弧菌液應(yīng)用于控制菌落總數(shù)的濃度> IO1PfuAiL,最佳使用濃度在IO1 IO9Pfu/ mL。蛭弧菌液控制致病菌的濃度彡102pfu/mL，最佳使用濃度在IO2 109pfu/mL。關(guān)于對生魚片品質(zhì)的評價，除了從上述生魚片的微生物衛(wèi)生安全方面做出檢測 外，持水力、嫩度、PH、肉色以及硬度及濕度也是考查的內(nèi)容。對持水力的考察方法采用目前通用的48小時滴水法，將肉制品懸掛在0 4°C 懸掛貯存48小時后計算失重率，結(jié)果使用蛭弧菌的試驗組的魚片在懸掛48h持水率均較 高，失重率平均為2.0%，而對照組的失重率平均則為11%。由此明顯看出對照組魚片品質(zhì) 的下降。魚片顏色評價，結(jié)果是使用蛭弧菌的試驗組三文魚呈現(xiàn)鮮紅色，稍有光澤；而未使 用蛭弧菌的對照組肉色光澤暗淡，且不斷有水外滲。主觀評價可以看出未加蛭弧菌的(對 照組)肉色明顯的劣于試驗組。pH值測定，結(jié)果顯示未加蛭弧菌的魚片(對照組)的PH值都接近5，這是肌肉的持水力下降的標志，此時的PH值對魚片的風(fēng)味產(chǎn)生較大影響，而使用蛭弧菌的試驗組pH值 維持在6. 0 6. 5，這說明肉的品質(zhì)保持的比對照組的好。從嫩度方面的考察，是通過嫩度儀來評估的，評估的結(jié)果兩者之間沒有很明顯的 區(qū)別，但實驗組嫩度略微的優(yōu)于對照組。對硬度主觀評價是通過切面是否容易變形來確定的，而對濕度評價是通過切面液 體滲出的多少來確定的，結(jié)果是4h時對照組的魚片切面很容易變形，而且還有水滲出，可 以鑒定等級為滲出。試驗組的魚片切面不容易變形，也沒有水滲出，可以鑒定等級為潮濕。從以上肉品質(zhì)的綜合鑒定來看，試驗組的魚片品質(zhì)明顯的優(yōu)于對照組。這說明蛭 弧菌在控制即食生魚片攜帶的常見致病菌方面效果顯著，可以推廣應(yīng)用于日本料理等生魚 片為材料的食物制作前的控制致病菌。實施例2蛭弧菌游泳體應(yīng)用于生魚片制作操作臺和加工車間的消毒殺菌試驗包括以下具體步驟及其條件步驟一同實施例1的步驟一步驟二 應(yīng)用蛭弧菌游泳體于生魚片生制作操作臺和車間的消毒殺菌實驗。采用本發(fā)明的應(yīng)用方法，選用大小規(guī)格一樣的操作臺和車間，分成多個不同試驗 組和對照組，其中對照組三個，為三個平行樣，剩下為試驗組，每小組三個，為三個平行樣。 分別測試驗組和對照組的菌落總數(shù)和致病菌含量，然后在試驗組加工生魚片操作臺和車 間的表面，均勻擦涂濃度為IO1PfuAiL的蛭弧菌液，擦涂使用量則按試驗組的不同分別為 10111171112、25111171112、50111171112、70111171112、100111171112，每個試驗組擦涂一遍；對照組(常規(guī)方法)用 自來水擦涂，每個組擦涂一遍；在室溫下放置，分別于Ih和2h檢測菌落總數(shù)和致病菌。檢 測方法同上述。隨后的操作臺和車間菌落總數(shù)的檢測結(jié)果，顯示試驗組僅在噴灑量為10mL/m2中 1小時后檢測到菌落總數(shù)的殘留率如圖5所示，沒有檢測到致病菌，其他噴灑量的試驗組沒 有檢測到菌落總數(shù)和致病菌。對照組檢測到菌落總數(shù)的殘留率如圖6所示，致病菌的檢測 結(jié)果如圖7所示；比較圖5和圖6、圖7，可知該蛭弧菌液應(yīng)用于生魚片加工操作臺和車間的 消毒殺菌方面效果顯著，可確保生魚片產(chǎn)品品質(zhì)。由此可見，該蛭弧菌液可以廣泛地推廣應(yīng) 用于生魚片制作操作環(huán)境中的消毒殺菌。實施例3蛭弧菌游泳體應(yīng)用于生魚片食用盛放碟盤的消毒殺菌試驗包括以下具體步驟及其條件步驟一同實施例1的步驟一步驟二 應(yīng)用蛭弧菌游泳體于生魚片盛放碟盤消毒殺菌實驗。采用本發(fā)明的應(yīng)用方法，分成多個不同試驗組和對照組，選規(guī)格大小一樣的碟盤， 其中對照組三個，為三個平行樣，剩下為試驗組，每小組三個，為三個平行樣。分別測試驗組 和對照組的菌落總數(shù)和致病菌含量。然后把盛放的碟盤直接浸漬在不同濃度的蛭弧菌液。 將試驗組分別漬于濃度為 lObfu/mL、102pfu/mL、103pfu/mL、105pfu/mL、107pfu/mL 或 109pfu mL的蛭弧菌液中，每濃度均有三個平行樣，浸泡30秒取出晾干，對照組(常規(guī)方法)用自來 水浸泡30秒取出晾干，在無菌操作室，室溫下放置，分別于Ih和2h檢測菌落總數(shù)和致病菌的含量。檢測方法同上述。菌落總數(shù)和致病菌殘留率的檢測結(jié)果，顯示僅在濃度為IO1PfuAiL的試驗組Ih檢 測到菌落總數(shù)，結(jié)果如圖8所示，沒有檢測到致病菌。其他濃度的試驗組沒有檢測到菌落總 數(shù)和致病菌。對照組菌落總數(shù)殘留率結(jié)果如圖9所示，致病菌的檢測結(jié)果如圖10所示。比 較圖8和圖9、圖10，可知使用蛭弧菌液優(yōu)于常規(guī)的方法。本試驗研究的結(jié)果表明該蛭弧菌 液應(yīng)用于生魚片盛放碟盤的消毒殺菌方面效果顯著，可確保生魚片產(chǎn)品品質(zhì)。由此可見，該 蛭弧菌液可以廣泛地推廣應(yīng)用于生魚片食用盛放碟盤中的消毒殺菌。上述實施例為本發(fā)明較佳的實施方式，但本發(fā)明的實施方式并不局限于上述實施 例子，其他的任何未背離本發(fā)明的精神實質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡化， 均應(yīng)為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
蛭弧菌游泳體在防控生魚片制作過程中的細菌的應(yīng)用，其特征在于，將所述蛭弧菌制備成蛭弧菌游泳體菌液，將蛭弧菌游泳體菌液作為殺菌劑用于生魚片制作過程中；所述菌株為蛭弧菌(Bdellovibrio sp.)BDFM05，由中國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，其簡稱為CCTCC，保藏編號為CCTCC NOM209172，保藏時間為2009年8月7日。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述蛭弧菌游泳體菌液的濃度為IO1 109pfu/mLo
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述蛭弧菌游泳體菌液采用擦涂、噴灑或 浸泡的方式作用于生魚片生鮮原料或盛放碟盤，或者采用擦涂、噴灑的方式作用于操作臺 或加工車間。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述浸泡時間為15 45秒。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，所述浸泡時間優(yōu)選為30秒。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述對生魚片生鮮原料初洗殺菌時，蛭弧 菌游泳體菌液的濃度為IO2 109pfu/mL。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述對生魚片盛放碟盤殺菌時，蛭弧菌游 泳體菌液的濃度為IO1 109pfu/mL。
8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，所述擦涂、噴灑時，蛭弧菌游泳體菌液的 使用量為10 100mL/m2。
9.根據(jù)權(quán)利要求2 8任意一項所述的應(yīng)用，其特征在于，所述蛭弧菌游泳體菌液的制 備方法為在含有乳鏈球菌的DNB液體培養(yǎng)基中接種蛭弧菌BDFM05，恒溫搖床150 300rpm、 25 35°C培養(yǎng)36 48h ；培養(yǎng)液分別于4°C、6000 8000rpm離心15 20min，取上清液， 再將上清液分別于4°C、16000 18000rpm離心15 20min，保留沉淀，向沉淀中加入DNB 液體培養(yǎng)基重新懸浮蛭弧菌沉淀物，即制得濃度為IO9 liTpfu/mL的蛭弧菌游泳體菌液。
全文摘要
本發(fā)明公開了蛭弧菌游泳體在防控生魚片制作過程中的細菌的應(yīng)用，該菌株為蛭弧菌BDFM05，由中國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，其簡稱為CCTCC，保藏編號為CCTCC NOM209172，保藏時間為2009年8月7日。將上述蛭弧菌制備成蛭弧菌游泳體菌液，作為殺菌劑用于生魚片制作過程中，特別是應(yīng)用于生魚片制作生鮮原料加工初洗環(huán)節(jié)減菌，操作臺、加工車間和盛放碟盤的消毒殺菌。本發(fā)明將蛭弧菌游泳體制成的蛭弧菌液用于防治生魚片制作過程中可能染菌的關(guān)鍵環(huán)節(jié)菌落總數(shù)和致病菌的防控，對生魚片上的常見食物中毒細菌防控效果良好，且具有無毒、對食品無副作用等優(yōu)點，應(yīng)用前景良好。
文檔編號C12N1/20GK101978863SQ201010270910
公開日2011年2月23日 申請日期2010年8月31日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月31日
發(fā)明者李冬梅, 蔡俊鵬 申請人:華南理工大學(xué)