專利名稱:抗過(guò)敏的乳酸菌的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明涉及應(yīng)用在食品或醫(yī)藥中的抗過(guò)敏乳酸菌菌株組合物,及其在提高抗過(guò)敏 能力中的用途。
背景技術(shù):
近幾年來(lái),過(guò)敏疾病有逐年增加的趨勢(shì),不論是在異位性皮膚炎、過(guò)敏性鼻炎和支 氣管性氣喘的發(fā)生率都有增加的情形。目前認(rèn)為過(guò)敏疾病的發(fā)生可能與文明的進(jìn)步有關(guān), 包括空氣的污染和感染的減少都是導(dǎo)致過(guò)敏疾病增加的一些可能原因。而目前氣喘的治療 主要依靠藥物治療如使用類固醇和抑制肥大細(xì)胞釋放發(fā)炎物質(zhì)的藥物、氣管擴(kuò)張劑和免 疫療法等。但是,包括抗發(fā)炎藥物和氣管擴(kuò)張劑在內(nèi)的藥物治療還是無(wú)法真正的改變過(guò)敏 免疫反應(yīng),所以只能說(shuō)是治標(biāo)的方法。而唯一能夠說(shuō)是改變過(guò)敏免疫體質(zhì)的治療方式,便是 所謂的減敏療法,但是減敏治療通常需要較長(zhǎng)的一段時(shí)間,而且有時(shí)會(huì)出現(xiàn)一些副作用,因 此也不能用于所有的病人。
有關(guān)過(guò)敏疾病的增加,目前認(rèn)為跟大環(huán)境的變化有密切關(guān)系,特別是在環(huán)境方面 有更明顯的關(guān)系。人體腸道中的益生菌會(huì)刺激免疫系統(tǒng)作用,但如果在日常生活中食品所 含抗生素或是類固醇的含量太高的話,都會(huì)導(dǎo)致腸道內(nèi)的益生菌降低,因而無(wú)法有效地刺 激免疫細(xì)胞中輔助型T細(xì)胞1 (Thl)的生成,而這些輔助型T細(xì)胞1的生成與輔助型T細(xì)胞 2(Th2)相關(guān)過(guò)敏疾病的發(fā)生有著密切聯(lián)系。因此,如果能利用保健食品刺激免疫系統(tǒng),激發(fā) 可以調(diào)節(jié)過(guò)敏免疫反應(yīng)中的Thl型免疫反應(yīng)來(lái)平衡過(guò)敏所引發(fā)的Th2型免疫反應(yīng),將可達(dá) 到改善過(guò)敏體質(zhì)的效果。
在人類應(yīng)用微生物的歷史上,乳酸菌的應(yīng)用起源相當(dāng)早。從早期乳制品的加工上 發(fā)現(xiàn),食用以乳酸菌發(fā)酵的食品,有助于改善人類腸胃道疾病的發(fā)生率以及延長(zhǎng)平均壽命。 由此,引發(fā)許多學(xué)者開始研究探討乳酸菌在促進(jìn)人體健康中所起的作用。1%4年提出功 能性乳酸菌之后,在幾年間不斷掀起研究的熱潮,并于1965年由Lilly DM等人正式提出 Probiotic-益生菌的概念,使之成為功能性乳酸菌的統(tǒng)稱。
一般食用含乳酸菌(LAB)的產(chǎn)品僅具有調(diào)整腸道的健康效果,雖然有數(shù)以萬(wàn)計(jì)的 乳酸菌菌株存在于自然界,但僅有少數(shù)乳酸菌株具有抗過(guò)敏的特質(zhì)。少數(shù)這些細(xì)菌株所 具有的耐酸與耐膽鹽能力、吸附粘膜表皮細(xì)胞的能力及在通過(guò)腸胃道后仍可存活的能力 等特性,是篩選具有促進(jìn)健康效果的菌株時(shí)的重要依據(jù)。時(shí)至今日,僅有少數(shù)幾株乳酸菌 菌株經(jīng)證明具有抗過(guò)敏的健康效果,而乳酸菌對(duì)身體健康的功能在于菌株(strain)的特 異性而非菌種(species),這種對(duì)人類身體健康具有特殊功效的菌株被稱為功能性益生菌 (Guideline s for the evaluation of probiotics in food ;Report of joint FA0/WH0 working group on drafting guidelines for the evaluation of probiotics in food ; “食品益生菌評(píng)估指南”,F(xiàn)A0/WH0聯(lián)合工作組關(guān)于起草食品益生菌評(píng)估指南的報(bào)告,London Ontario, Canada, 2002 年 4 月 30 日和 5 月 1 日1_7)。
過(guò)敏疾病,例如過(guò)敏性濕疹、蕁麻疹、反復(fù)發(fā)作的過(guò)敏性鼻炎及過(guò)敏性氣喘,在臺(tái)灣及其它發(fā)達(dá)國(guó)家中已成為嚴(yán)重的社會(huì)問(wèn)題。導(dǎo)致過(guò)敏疾病流行程度的上升是有原因的, 眾所皆知的衛(wèi)生學(xué)假說(shuō)為嬰幼兒接觸免疫刺激病原體的機(jī)會(huì)愈少,愈容易引發(fā)過(guò)敏相關(guān) 疾病(Mrachan,1989)。過(guò)敏疾病發(fā)生時(shí),人體內(nèi)的免疫反應(yīng)會(huì)使Thl細(xì)胞數(shù)量下降,連續(xù) 產(chǎn)生多種細(xì)胞激素促使免疫反應(yīng)朝向Th2途徑,形成體液免疫反應(yīng),例如IgE的產(chǎn)生及嗜伊 紅細(xì)胞過(guò)多等(Romagnani,1994 ;Holt, 1995)。
在愛沙尼亞及瑞典這兩個(gè)國(guó)家的兒童人口中發(fā)現(xiàn),患過(guò)敏疾病的兒童腸道內(nèi)的乳 酸桿菌比無(wú)過(guò)敏疾病的孩童要少(BjcT'rksten等,1999)。乳酸桿菌被認(rèn)為可促進(jìn)Thl的 免疫反應(yīng)進(jìn)而改善過(guò)敏癥狀(Cross等,2001)。再者,在以卵白蛋白誘發(fā)小鼠過(guò)敏的動(dòng)物實(shí) 驗(yàn)?zāi)P椭邪l(fā)現(xiàn),讓小鼠以口服方式食用熱處理后的干酪乳酸菌Siitota株(LactcAacillus casei strain Shitota),可抑制小鼠血清中IgE的含量(Matsuzaki等,1998)。此外, 在以酪蛋白誘發(fā)小鼠過(guò)敏的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)P椭凶C明,腹腔注射熱處理后的胚芽乳酸桿菌 L-137 (Lactobacillus ρlantarum L-137),也可抑制 IgE 的產(chǎn)生(Murosaki 等,1998)。在 由豕草花粉過(guò)敏引起的過(guò)敏癥狀中,口服糞腸球菌(Enterococcus faecalis)Π(_23萃取 物,可使腹膜內(nèi)聚集的嗜伊紅細(xì)胞細(xì)胞量減少(Shimada等,200 。人體的臨床試驗(yàn)中, 于孕婦待產(chǎn)期間服用糖和鼠李糖乳桿菌菌株GG(LactcAacillus rhamnosus strain GG), 發(fā)現(xiàn)在嬰兒出生后兩年(Kallioma "ki等,2001)及嬰兒期后(Kallioma ·· ki等,2003), 可降低嬰幼兒發(fā)生過(guò)敏性濕疹的風(fēng)險(xiǎn)及發(fā)生率。鼠李糖乳桿菌19070-2及羅伊氏乳桿菌 (Lactobacillus reuteri)DSM122460也可以適度地改善患有異位性皮膚炎的兒童的嚴(yán)重 濕疹過(guò)敏癥狀(Rosenfeldt等,2003)。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明一方面廣義上包括由下列任一種生物性純培養(yǎng)物與生理上可接受的賦形 劑或稀釋劑組成的組合物嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)PM-A0002菌株, 二〇〇七年四月六日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心,保藏號(hào)M 207038 ;加氏乳酸桿菌 (Lactobaci 1 Ius gasseri) PM-A0005菌株,二〇〇七年四月六日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保 藏中心,保藏號(hào) M 207039 ;唾液乳酸桿菌(Lactobacillus salivarius)PM-A0006 菌株, 二〇〇七年四月六日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心,保藏號(hào)M 207040 ;約氏乳酸桿菌 (Lactobaci 1 Ius johnsonii) PM-A0009菌株,二〇〇七年四月六日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物 保藏中心,保藏號(hào) M 207041 ;嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus) PM-A0013 菌株,二 〇〇七年四月六日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心,保藏號(hào)M 207042。
在本發(fā)明的一項(xiàng)具體實(shí)施方式
中,該組合物含有一種或一種以上所述菌株,優(yōu)選 的生理上可接受的賦形劑或稀釋劑是一種食品,該食品可以是酸酵乳、酸乳酪(yogurt)、乳 酪、乳制飲品、乳粉、茶飲料或咖啡中的任何一種?;蛘撸摻M合物是藥物組合物,且其賦形 劑或稀釋劑應(yīng)為藥學(xué)上可接受的賦形劑或稀釋劑。
在另一項(xiàng)具體實(shí)施方式
中,采用了具有增強(qiáng)抗過(guò)敏能力的、生理上可接受的下列 任一種菌株的同種或突變種的生物性純培養(yǎng)物嗜酸乳桿菌PM-A0002菌株、加氏乳酸桿菌 PM-A0005菌株、唾液乳酸桿菌PM-A0006菌株、約氏乳酸桿菌PM-A0009菌株或嗜酸乳桿菌 ΡΜ-Α0013 菌株。
此外,在另一項(xiàng)具體實(shí)施方式
中,本發(fā)明可廣義包括通過(guò)促進(jìn)白介素-12(IL_12)或干擾素Y調(diào)控Thl型免疫反應(yīng)而抑制免疫球蛋白IgE,改善Th2型免疫反應(yīng)過(guò)度的過(guò)敏 現(xiàn)象的方法,所述方法包括給予哺乳動(dòng)物可達(dá)到刺激Thl型免疫效果劑量的任一種前述生 物性純培養(yǎng)物。
再者,在另一項(xiàng)具體實(shí)施方式
中,采用了前述所定義菌株中一種以上生物性純培 養(yǎng)物,優(yōu)選以組合物的形式給予該培養(yǎng)物與生理上可接受的賦形劑或稀釋劑,其中所述生 理上可接受的賦形劑或稀釋劑優(yōu)選為食品,該食品優(yōu)選是酸酵乳、酸乳酪、乳酪、乳制飲品、 乳粉、茶飲料或咖啡中的任一種?;蛘撸摻M合物是藥物組合物,且其賦形劑或稀釋劑應(yīng)為 藥學(xué)上可接受的賦形劑或稀釋劑。
在另一項(xiàng)具體實(shí)施方式
中,提供了上述任一或多種生物性純培養(yǎng)物在制備用于刺 激免疫細(xì)胞分泌抗過(guò)敏相關(guān)細(xì)胞激素的藥物中的用途。
本發(fā)明亦可廣義的包括本申請(qǐng)說(shuō)明書中單獨(dú)或總合說(shuō)明的部分、其構(gòu)成要件與特 征,及任何包含這些部分、構(gòu)成要件與特征中任何一種或多種的任何組合或其全部的組合, 且若本文所述及的明確完整事物已在與本發(fā)明有關(guān)之相關(guān)技術(shù)中出現(xiàn)已知的同等物時(shí),這 些已知的同等物將視為獨(dú)立事項(xiàng)并入本文中。
圖 1 顯示分別將 IO6 至 IO8 個(gè) cfu 嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus) PM-A0002菌株、加氏乳酸桿菌(Lactobacillus gasseri)PM-A0005菌株、唾液乳酸桿菌 (Lactobacillus salivarius)PM-A0006 菌株、約氏乳酸桿菌(Lactobacillus johnsonii) PM-A0009 菌株或嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)PM-A0013 菌株與 IO5 至 IO7 個(gè) 人類外周血單核細(xì)胞(PBMC)共同培養(yǎng)48小時(shí)后,收取細(xì)胞上清液,以酶聯(lián)免疫分析法檢測(cè) 干擾素Y (IFN-gamma)在上清液中的含量。其中,以無(wú)抗過(guò)敏功能的乳酸菌(干酪乳酸菌 BCRC12249,Lactobacillus casei BCRC12M9-臺(tái)灣食品工業(yè)發(fā)展研究所)為陰性對(duì)照組, PHA為陽(yáng)性對(duì)照組,檢測(cè)干擾素γ的受刺激濃度。結(jié)果顯示試驗(yàn)組可以顯著的刺激人類外 周血單核細(xì)胞(PBMC)分泌干擾素Y,與陰性對(duì)照組有顯著性差異。
圖2顯示分別將熱滅活的IO6至IO8個(gè)cfu嗜酸乳桿菌(LactcAacillus acidophilus)PM-A0002 菌株、加氏乳酸桿菌(Lactobacillus gasseri)PM-A0005 菌株、唾 液乳酸桿菌(Lactobacillus salivarius)PM_A0006 菌株、約氏乳酸桿菌(Lactobacillus johnsonii)PM-A0009 菌株或嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)PM-A0013 菌株與 IO5至IO7個(gè)人類樹突狀細(xì)胞(dendritic cell)共同培養(yǎng)48小時(shí),收取細(xì)胞上清液,以酶 聯(lián)免疫分析法檢測(cè)白介素IL-12在上清液中的含量。其中,以無(wú)抗過(guò)敏功能的乳酸菌(干 酪乳酸菌BCRC12M9-臺(tái)灣食品工業(yè)發(fā)展研究所)為陰性對(duì)照組,PHA為陽(yáng)性對(duì)照組,檢測(cè) 白介素-12(IL-U)的受刺激濃度。結(jié)果顯示試驗(yàn)組可以顯著的刺激人類樹突狀細(xì)胞分泌 白介素-12 (IL-12),與陰性對(duì)照組有顯著性差異。
圖3顯示試驗(yàn)結(jié)果顯示市售抗過(guò)敏乳酸菌在培養(yǎng)基的活化后,經(jīng)由酸性緩沖溶 液及膽鹽處理后,菌數(shù)明顯下降;而本發(fā)明具有調(diào)節(jié)過(guò)敏作用的保藏乳酸菌株在培養(yǎng)基活 化后,用酸性緩沖溶液及膽鹽處理,PM-A0006、PM-A0009、ΡΜ-Α0013菌數(shù)并不受胃酸膽堿 改變影響而急劇下降,PM-A0002及PM-A0005不受胃酸影響(菌數(shù)證明其對(duì)胃酸具有耐受 性),而將菌株經(jīng)由膽鹽處理時(shí),雖然菌數(shù)有些許的下降,但對(duì)膽鹽仍有耐受性,證明這五株抗過(guò)敏的乳酸菌株可以通過(guò)人體消化系統(tǒng)嚴(yán)格環(huán)境的考驗(yàn)。
圖4顯示依據(jù)Jacobsen等學(xué)者(1999)的分析方法,當(dāng)每個(gè)視野的平均菌數(shù)少 于40個(gè)時(shí),判定為“不附著(nonadhesive) ”;當(dāng)每個(gè)視野的平均菌數(shù)介于41個(gè)至100個(gè) 時(shí),判定為“附著(adhesive)”;當(dāng)每個(gè)視野的平均菌數(shù)大于100個(gè)時(shí),判定為“強(qiáng)烈附著 (strongly adhesive)”。結(jié)果顯示嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus) PM—A0002 菌 株、加氏乳酸桿菌(Lactobacillus gasseri)PM-A0005菌株、唾液乳酸桿菌(Lactobacillus salivarius))PM-A0006 菌株、約氏乳酸桿菌(Lactobacillus johnsonii)PM-A0009 菌 株等四株抗過(guò)敏菌株均判定“強(qiáng)烈附著”,而嗜酸乳桿菌(LactcAacillus acidophilus) PM-A0013菌株則判定為“附著”。
圖5顯示抗過(guò)敏乳酸菌改善過(guò)敏實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)流程,將管飼抗過(guò)敏乳酸菌的階段 分為四期第一期為0 22天;第二期為23 36天;第三期為37 50天;第四期為51 53天。其間以腹腔注射卵白蛋白(OVA)致敏小鼠,分四次致敏,第一次為開始管飼的第2 天;第二次為開始管飼的第16天;第三次為開始管飼的第30天;第四次為開始管飼的第44 天。對(duì)通過(guò)腹腔注射卵白蛋白(ovalbumin ;0VA)致敏的小鼠進(jìn)行隔周抽血,檢查小鼠體內(nèi) IgE含量的變化。于處死小鼠前4天(第M天)以鼻粘膜吸入方式致敏小鼠連續(xù)2天后, 檢測(cè)小鼠的肺呼吸阻力反應(yīng),隔天處死小鼠進(jìn)行其它生化值的檢測(cè)。
圖6顯示為小白鼠補(bǔ)充唾液乳酸桿菌PM-A0006乳酸菌株時(shí),以卵白蛋白致敏的 小白鼠血清中卵白蛋白(OVA)特異性抗體效價(jià)部分,隨著喂食劑量增加,卵白蛋白(OVA)致 敏小鼠血清中的卵白蛋白(OVA)特異性IgE抗體有減少的趨勢(shì)。
圖7顯示為小白鼠補(bǔ)充唾液乳酸桿菌PM-A0006乳酸菌株時(shí),以卵白蛋白致敏的 小白鼠肺呼吸阻力部分,相對(duì)于對(duì)照組,均可在高濃度乙酰甲膽堿(methacholine)刺激下 顯著減低小鼠Penh值。
圖8顯示為小白鼠補(bǔ)充唾液乳酸桿菌PM-A0006乳酸菌株時(shí),以卵白蛋白致敏的 小白鼠肺沖洗液中細(xì)胞組成部分,相對(duì)于對(duì)照組,有顯著較低的嗜伊紅細(xì)胞(eosinophil) 浸潤(rùn)比例。
圖9顯示相對(duì)于對(duì)照組,喂食PM-A0006乳酸菌可顯著降低肺沖洗中嗜酸粒細(xì)胞 趨化因子(eotaxin)的分泌量。
圖10顯示相對(duì)于對(duì)照組,喂食PM-A0006乳酸菌可顯著降低肺沖洗中PGE2分泌量。
圖11顯示脾臟細(xì)胞經(jīng)ConA或卵白蛋白(OVA)刺激培養(yǎng)48小時(shí)后,在ConA刺激 下,喂食PM-A0006乳酸菌組的脾臟細(xì)胞分泌的干擾素γ顯著高于對(duì)照組。
具體實(shí)施方式
本發(fā)明可廣義的包括下列任一種生物性純培養(yǎng)物嗜酸乳桿菌(LactcAaciIlus acidophilus) PM-A0002菌株,二〇〇七年四月六日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心,保藏 號(hào)M 207038 ;加氏乳酸桿菌(Lactobacillus gasseri)PM-A0005菌株,二〇〇七年四月 六日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心,保藏號(hào)M 207039 ;唾液乳酸桿菌(LactcAaciIlus salivarius)PM-A0006菌株,二〇〇七年四月六日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心,保藏 號(hào)M 207040 ;約氏乳酸桿菌(Lactobacillus johnsonii)PM-A0009菌株,二〇〇七年四月六日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心,保藏號(hào)M 207041 ;嗜酸乳桿菌(LactcAacillus acidophilus)PM-A0013菌株,二〇〇七年四月六日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心,保藏 號(hào) M 207042。
許多文獻(xiàn)指出增加輔助型T細(xì)胞1的細(xì)胞激素包括白介素-12(IL_12)、干擾素 Y (IFN-gamma)的分泌增加,可以有效改善過(guò)敏癥狀;進(jìn)一步的研究也指出特定的乳酸菌 株和樹突狀細(xì)胞上iToll樣受體(Toll-like receptor)結(jié)合,活化細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)譯蛋白移 至核內(nèi)而釋放大量細(xì)胞激素,屬于先天免疫的一個(gè)環(huán)節(jié),因此某些特定的乳酸菌菌種借由 其細(xì)胞壁多糖類物質(zhì)如肽聚糖(peptidoglycan)、脂多糖(lipopolysaccharide)、多糖 (polysaccharide)等,經(jīng)先天免疫系統(tǒng),確實(shí)能活化T細(xì)胞的發(fā)育。
該五株細(xì)菌菌株的冷凍干燥培養(yǎng)物已保藏在中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心,地址為 中國(guó)武漢市武漢大學(xué)。保藏的詳細(xì)資料如表1所示
表 權(quán)利要求
1.一種食品組合物,其包含刺激免疫細(xì)胞分泌抗過(guò)敏相關(guān)細(xì)胞激素濃度的加氏乳酸桿菌(LactcAacillus gasseri)PM-A0005 =CCTCC NO =M 207039,及生理上可接受的賦形劑與稀釋劑中的任何一 種。
2.如權(quán)利要求1所述的食品組合物,其特征在于,所述菌株是活菌或死菌。
3.如權(quán)利要求1所述的食品組合物,其特征在于,所述的生理上可接受的賦形劑或稀 釋劑為一種食品。
4.如權(quán)利要求1所述的食品組合物,其特征在于,所述的食品為發(fā)酵乳、乳酪、乳制飲 品、乳粉、茶或咖啡中的任一種。
5.如權(quán)利要求4所述的食品組合物,其特征在于,所述的乳酪為酸乳酪。
6.一種用于抗過(guò)敏的藥物組合物,其包含刺激免疫細(xì)胞分泌抗過(guò)敏相關(guān)細(xì)胞激素濃度 的加氏乳酸桿菌(Lactobacillus gasseri)PM-A0005 =CTCC NO :M 207039,及藥學(xué)上可接受 的賦形劑或稀釋劑。
7.如權(quán)利要求6所述的藥物組合物,其特征在于,所述菌株是活菌或死菌。
8.—種生物性純培養(yǎng)物在制備用于刺激免疫細(xì)胞分泌抗過(guò)敏相關(guān)細(xì)胞激素的藥 物中的用途,其特征在于該生物性純培養(yǎng)物是加氏乳酸桿菌(LactcAacillus gasseri) PM-A0005 CCTCC NO :M 207039。
全文摘要
本發(fā)明涉及新的乳酸菌菌株,及含一種或多種所述菌株的組合物,其中所述菌株具有現(xiàn)有技術(shù)中未知的可用于增進(jìn)抗過(guò)敏的能力,且該組合物為食品或藥物組合物形式。本發(fā)明還公開了篩選測(cè)定乳酸菌菌株的方法,以及通過(guò)增進(jìn)Th1型免疫反應(yīng)來(lái)調(diào)控因過(guò)敏而反應(yīng)過(guò)度的Th2型免疫反應(yīng)的方法。
文檔編號(hào)A23F5/40GK102028224SQ20101053533
公開日2011年4月27日 申請(qǐng)日期2007年6月21日 優(yōu)先權(quán)日2007年6月21日
發(fā)明者吳奇璋, 楊瓊英, 蘇偉志, 蔡宜鈞, 謝佩珊, 郭仲偉, 陳怡君 申請(qǐng)人:東宇生物科技股份有限公司