專利名稱：一種用hplc測定納豆激酶純度的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種高效液相測定納豆激酶純度的方法，屬于分析檢測領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
納豆激酶作為新一代溶栓藥物，具有藥理作用直接且多元化、體內(nèi)半衰期長、分子量相對較小，可直接通過胃腸系統(tǒng)被人體吸收、安全性高、價格便宜等諸多優(yōu)點。此外，納豆激酶還可以調(diào)節(jié)體內(nèi)其他酶的活性以進一步加強溶栓效果，因此，納豆激酶具有良好的開發(fā)成為新一代溶栓藥物的潛力。關(guān)于納豆激酶純度的測定方法通常采用電泳法，該法無法進行定量檢測，也無法測定產(chǎn)品的具體純度，為納豆激酶精制及其藥物的工業(yè)化生產(chǎn)帶來很大障礙。目前未見文獻報道有關(guān)于納豆激酶純度測定的有效方法，致使納豆激酶的產(chǎn)品仍然停留在保健食品的階段，而納豆激酶廣闊的藥用前景亟待開發(fā)成藥物用于治療血栓等疾病，在國外，也尚未見有國家正式批準納豆激酶作為藥品治療、生產(chǎn)的文件；在我國，以納豆激酶為主體的溶栓藥物尚未見于藥物應(yīng)用，僅有納豆激酶制劑一恩開膠囊2000年進入中試階段。高效液相色譜法分離效率高、選擇性好、靈敏度高、應(yīng)用范圍廣和分析速度快，不僅適于各種多元組分復(fù)雜混合物的分析，而且能從一些復(fù)雜的混合物中排除干擾物質(zhì)，并分析其中微量成分，定量分析目標物含量，為食品和藥物成分的定性和定量提供了迅速可靠的途徑。本發(fā)明提出的納豆激酶高效液相色譜檢測方法不僅可以準確對其純度進行定量，為其開發(fā)成藥物提供可靠原材料，而且為分離純化過程的得率計算提供可靠依據(jù)，納豆激酶HPLC純度標準檢測方法的建立為客觀的表述納豆激酶的純度提供了可能。

發(fā)明內(nèi)容
考慮到目前國內(nèi)外沒有建立納豆激酶純度的相關(guān)檢測技術(shù)指標以及檢測標準，本發(fā)明對其進行深入研究，制定檢測方法相關(guān)標準，為納豆激酶開發(fā)成藥物提供技術(shù)支持。本發(fā)明采用適合蛋白分析的Agilent ZORBAX 30( 8-(^8色譜柱或Waters XBridge BEH300 C4色譜柱，乙腈和0. 1 % TFA作為流動相，采用梯度洗脫程序進行分析，面積歸一化法進行定量，建立能夠在短時間內(nèi)檢測納豆激酶純度的HPLC方法。高效液相色譜法對納豆激酶的純度進行測定，使用Waterd695液相色譜儀，配紫外檢測器。具體檢測條件為色譜柱AgilentZORBAX 300SB_CW 色譜柱，75mmX 2. Imm ；Waters XBridge BEH300 C4 色譜柱，3. 5 μ m ；流動相乙腈/0. 三氟乙酸(TFA)溶液，梯度洗脫程序見下表；流速1. OmL/min ；柱溫40°C;進樣量20μ L。流動相梯度表
權(quán)利要求
1.納豆激酶純度的檢測方法采用的是HPLC。
2.根據(jù)權(quán)利1所要求的納豆激酶純度的HPLC檢測方法，其特征在于采用適合蛋白分析的 Agilent ZORBAX 300SB_C18 色譜柱或 Waters XBridge BEH300 C4 色譜柱。
3.根據(jù)權(quán)利1所要求的納豆激酶純度的HPLC檢測方法，其特征在于采用紫外檢測器或二極管陣列檢測器進行檢測。
4.根據(jù)權(quán)利1所要求的納豆激酶純度的HPLC檢測方法，其特征在于采用乙腈和0.1% TFA作為流動相。
5.根據(jù)權(quán)利1所要求的納豆激酶純度的HPLC檢測方法，其特征在于采用乙腈和0.1% TFA梯度洗脫進行分析。
6.根據(jù)權(quán)利1所要求的納豆激酶純度的HPLC檢測方法，其特征在于采用面積歸一化法進行定量。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種用HPLC測定納豆激酶純度的方法，選用適合蛋白分析的Agilent ZORBAX 300SB-C18色譜柱或Waters XBridge BEH300 C4色譜柱，用紫外檢測器或二極管陣列檢測器進行檢測，采用乙腈/0.1％三氟乙酸(TFA)梯度洗脫，該檢測方法高效、便捷、準確，為納豆激酶藥物的研發(fā)和質(zhì)量控制提供了可靠的檢測手段和技術(shù)支持。
文檔編號C12Q1/48GK102465169SQ20101055384
公開日2012年5月23日 申請日期2010年11月17日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月17日
發(fā)明者張云峰, 胡伶俐, 謝明利, 陳曉煒 申請人:湖北國力生物技術(shù)開發(fā)有限公司