專利名稱:多功能型海參養(yǎng)殖用復(fù)合微生態(tài)制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明涉及微生物制劑技術(shù)領(lǐng)域,特別涉及一種包含三種益生菌的,具有抗菌、免疫、促生長(zhǎng)等多重功效的多功能型海參養(yǎng)殖用復(fù)合微生態(tài)制劑。
背景技術(shù):
腸道益生菌是一種大多來(lái)源于消化道又作用于消化道的活菌制劑,能有效補(bǔ)充動(dòng)物消化道內(nèi)的有益微生物,抑制病原菌的生長(zhǎng),改善消化道菌群平衡,提高水產(chǎn)動(dòng)物的免疫機(jī)能或者生長(zhǎng)速度。刺參(Apostichopus japonicus Liao,又稱仿刺參),屬無(wú)脊椎動(dòng)物,棘皮動(dòng)物門, 海參綱,仿刺參屬。因其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高,養(yǎng)殖規(guī)模不斷擴(kuò)大,目前已經(jīng)發(fā)展成為我國(guó)沿海最大的海水養(yǎng)殖品種之一。近年來(lái)由于刺參高密度養(yǎng)殖和不規(guī)范運(yùn)作以及病害防治技術(shù)的相對(duì)滯后,病害問(wèn)題目趨突出,尤其養(yǎng)殖刺參“腐皮綜合征”的暴發(fā),造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失,制約了該產(chǎn)業(yè)的健康持續(xù)發(fā)展。由于刺參特殊的生活習(xí)性和養(yǎng)殖特點(diǎn),且抗生素藥物等疾病預(yù)防措施本身又存在一些缺點(diǎn)和局限性,故采用微生態(tài)制劑將成為防止刺參養(yǎng)殖疾病發(fā)生的有效措施之一。根據(jù)來(lái)源于自然,回歸自然的原則,篩選與原宿主、原生境、原微生態(tài)區(qū)系、原微生物種群相適應(yīng)的菌種是開(kāi)發(fā)微生態(tài)制劑的最好途徑。面對(duì)目前海參專用微生態(tài)制劑匱乏的局面,從海參腸道篩選益生菌并開(kāi)發(fā)成微生態(tài)制劑,避免了不同菌株之間的差異,保證微生態(tài)制劑的安全性和高效性。因此,從海參腸道中分離土著益生菌,通過(guò)對(duì)相關(guān)菌株的配伍達(dá)到抗菌、免疫、促生長(zhǎng)的多重效果,對(duì)海參健康養(yǎng)殖有現(xiàn)實(shí)意義。邁入21世紀(jì),海參養(yǎng)殖業(yè)迅速發(fā)展,養(yǎng)殖面積84200公頃,年創(chuàng)產(chǎn)值200億元,產(chǎn)生了巨大的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益,成為我國(guó)北方水產(chǎn)養(yǎng)殖的支柱產(chǎn)業(yè)之一。隨著海參養(yǎng)殖業(yè)迅速發(fā)展,高密度、工廠化、集約化的養(yǎng)殖模式使生態(tài)環(huán)境失調(diào)嚴(yán)重,各種病害接踵而至。近年來(lái),海參“腐皮綜合癥”等多種細(xì)菌性疾病的流行,使病害問(wèn)題成為該產(chǎn)業(yè)發(fā)展的主要瓶頸??股氐然瘜W(xué)藥物的應(yīng)用對(duì)控制病原菌的生長(zhǎng)繁殖、防止海參病害起到了一定的積極作用,但由于長(zhǎng)期、大量使用抗生素等化學(xué)藥物,病原菌也產(chǎn)生耐藥性,海參腸道與養(yǎng)殖環(huán)境中菌群失調(diào),海參免疫力下降,各種疾病復(fù)發(fā)率較高,同時(shí)藥物殘留嚴(yán)重,危害著養(yǎng)殖動(dòng)物機(jī)體和人類健康。因此,開(kāi)發(fā)應(yīng)用微生態(tài)制劑對(duì)海參養(yǎng)殖具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。海參營(yíng)底棲生活,通過(guò)攝食飼料中添加的腸道微生態(tài)制劑可起到抑制有害菌、提高抗病力、促進(jìn)生長(zhǎng)等功效。益生菌大多來(lái)源于消化道又作用于消化道的活菌制劑,能有效補(bǔ)充動(dòng)物消化道內(nèi)的有益微生物,抑制病原菌生長(zhǎng),改善消化道菌群平衡,提高水產(chǎn)動(dòng)物的免疫機(jī)能或生長(zhǎng)速度,因此,微生態(tài)制劑是目前常用和研究較多的綠色、安全的飼料添加劑。近年來(lái),人們開(kāi)始利用微生態(tài)制劑改變養(yǎng)殖動(dòng)物腸道與環(huán)境中微生態(tài)組成,從而改善養(yǎng)殖生態(tài)環(huán)境、提高養(yǎng)殖動(dòng)物的免疫力,尤其是由多菌種組成的復(fù)合微生態(tài)制劑的開(kāi)發(fā)和應(yīng)用,為水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)朝著綠色健康養(yǎng)殖的方向發(fā)展起著積極作用。
在本發(fā)明之前關(guān)于水產(chǎn)動(dòng)物益生菌的報(bào)道較多,如權(quán)力敏等“水產(chǎn)養(yǎng)殖益生菌素”(專利申請(qǐng)?zhí)?00610042574. 0),王連民等“促進(jìn)淡水魚(yú)生長(zhǎng)發(fā)育的益生菌組合物”(專利申請(qǐng)?zhí)?00710057106. 5),而有關(guān)海參腸道與養(yǎng)殖環(huán)境益生菌篩選的報(bào)道較少。微生態(tài)制劑中菌種的選擇是微生態(tài)制品的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。選擇菌種的標(biāo)準(zhǔn)必須以微生態(tài)學(xué)理論為指導(dǎo),根據(jù)來(lái)源于自然,回歸自然的原則,選擇與原宿主、原生境、原微生態(tài)區(qū)系、原微生物種群相適應(yīng)的菌種最理想。來(lái)自于動(dòng)物本身的益生菌避免了不同菌株之間的差異,保證了對(duì)宿主有較高的針對(duì)性,提高了應(yīng)用于宿主的安全性和高效性。因此,從海參腸道中分離土著益生菌,通過(guò)對(duì)相關(guān)菌株的配伍達(dá)到抗菌、免疫、促生長(zhǎng)的多重效果,對(duì)海參健康養(yǎng)殖有現(xiàn)
實(shí)意義ο
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題在于,提供一種適應(yīng)海參腸道與養(yǎng)殖環(huán)境的抗菌、免疫、促生長(zhǎng)多重功效的多功能復(fù)合微生態(tài)制劑,從而減少海參養(yǎng)殖過(guò)程中抗生素等化學(xué)藥物的使用。本發(fā)明獲得益生菌安全性好,對(duì)海參病原菌抑制效果好,并且能提高海參特定生長(zhǎng)率、降低海參的死亡率、提高海參的免疫力和腸道消化酶活力,達(dá)到了抗菌、免疫、促生長(zhǎng)的多重效果。為解決上述技術(shù)問(wèn)題,本發(fā)明提供一種多功能型海參養(yǎng)殖用復(fù)合微生態(tài)制劑,其特征在于,包括萎縮芽孢桿菌Bacillus atrophaeus,枯草芽孢桿菌Bacillus subtilis, 蠟樣芽孢桿菌Bacillus cereus,以及載體。所述萎縮芽孢桿菌,優(yōu)選為分離于野生刺參腸道,保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心,保藏號(hào)為CCTCC M 2010316。所述枯草芽孢桿菌,優(yōu)選為分離于野生刺參腸道,保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心,保藏號(hào)為CCTCC M 2010314。所述蠟樣芽孢桿菌,優(yōu)選為分離于野生刺參腸道,保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心,保藏號(hào)為CCTCC M 2010315。所述載體優(yōu)選為粒徑< 80目的沸石粉。所述復(fù)合微生態(tài)制劑中,萎縮芽孢桿菌Bacillus atrophaeus,枯草芽孢桿菌 Bacillus subtilis,蠟樣芽孢桿菌Bacillus cereus,的重量份數(shù)比優(yōu)選為1 2份1 2份1 2份。為解決上述技術(shù)問(wèn)題,本發(fā)明還提供一種枯草芽孢桿菌菌株,所述菌株分離于野生刺參腸道,保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心,保藏號(hào)為CCTCCM 2010314。為解決上述技術(shù)問(wèn)題,本發(fā)明又提供一種飼料添加劑,包括枯草芽孢桿菌菌株,所述菌株分離于野生刺參腸道,保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心,保藏號(hào)為CCTCC M 2010314。為解決上述技術(shù)問(wèn)題,本發(fā)明另提供一種所述枯草芽孢桿菌菌株作為飼料添加劑、微生物制劑和/或腸道益生元的應(yīng)用。為解決上述技術(shù)問(wèn)題,本發(fā)明再提供一種所述枯草芽孢桿菌菌株在飼料添加劑、 微生物制劑和/或腸道益生元的制備中的應(yīng)用。本發(fā)明具有以下有益的技術(shù)效果,
1)篩選益生菌之間共生性好,對(duì)海參病原菌有較好的拮抗作用,并且具有提高海參生長(zhǎng)速度、免疫力和腸道消化酶活力的功能,通過(guò)益生菌之間的配伍達(dá)到了抗菌、免疫、 促生長(zhǎng)的多重功效。2)篩選益生菌是從海參腸道中篩選的土著菌,對(duì)海參安全無(wú)毒、繁殖速度快、易于培養(yǎng)、對(duì)環(huán)境適應(yīng)能力強(qiáng),能較快的繁殖形成優(yōu)勢(shì)菌。3)使用方法簡(jiǎn)便,只需將該制劑按照配比添加到飼料中進(jìn)行投喂即可,適用于幼參養(yǎng)殖培育和各種養(yǎng)殖模式的海參疾病控制。4)使用本發(fā)明可減少或替代抗生素的使用,對(duì)減少藥殘、提高海參商品質(zhì)量、保障食品安全具有重要作用。
圖1為本發(fā)明實(shí)施例所述微生態(tài)制劑對(duì)海參體腔液酸性磷酸酶活力的影響結(jié)果圖;圖2為本發(fā)明實(shí)施例所述微生態(tài)制劑對(duì)海參體腔液堿性磷酸酶活力的影響結(jié)果圖;圖3為本發(fā)明實(shí)施例所述微生態(tài)制劑對(duì)海參腸道蛋白酶活性的影響結(jié)果圖;圖4為本發(fā)明實(shí)施例所述微生態(tài)制劑對(duì)海參腸道淀粉酶活性的影響結(jié)果圖。
具體實(shí)施例方式以下將結(jié)合附圖及實(shí)施例來(lái)詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)施方式,借此對(duì)本發(fā)明如何應(yīng)用技術(shù)手段來(lái)解決技術(shù)問(wèn)題,并達(dá)成技術(shù)效果的實(shí)現(xiàn)過(guò)程能充分理解并據(jù)以實(shí)施。實(shí)施例1 潛在益生菌的篩選及安全性實(shí)驗(yàn)取野生健康海參,在無(wú)菌條件下對(duì)海參進(jìn)行活體解剖,取其腸道,擠出腸道內(nèi)容物,用滅菌的15%。的生理鹽水沖洗腸道三次,將沖洗后的腸道勻漿,等比稀釋后涂布在 TSB培養(yǎng)基和2216E海水瓊脂培養(yǎng)基上,選擇合適稀釋度的平板進(jìn)行細(xì)菌的分離,共得到 240株細(xì)菌。對(duì)240株純培養(yǎng)的細(xì)菌用酪素水解培養(yǎng)基和淀粉水解培養(yǎng)基培養(yǎng)對(duì)其產(chǎn)酶活力進(jìn)行測(cè)定,同時(shí)以海參常見(jiàn)病原菌-燦爛弧菌(Vibrio splendidus)、假交替單胞菌 (Pseudoalteromonas nigrifaciens)禾口嗜水氣單胞菌(Aeromonas hydrophlia)為才旨不菌, 利用點(diǎn)種法、十字交叉法和牛津杯法檢測(cè)所分離細(xì)菌對(duì)海參病原菌的抑菌作用,共篩選出了 3株抑菌效果好和產(chǎn)酶能力強(qiáng)的細(xì)菌。通過(guò)對(duì)這3株菌進(jìn)行形態(tài)、生理生化和分子鑒定, 結(jié)果顯示篩選得到的3株益生菌分別為萎縮芽孢桿菌(Bacillus atrophaeus)、枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)、蠟樣芽孢桿菌(Bacillus cereus),將這3株細(xì)菌保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(簡(jiǎn)稱CCTCC),保藏號(hào)分別為萎縮芽孢桿菌CCTCC M 2010316、枯草芽孢桿菌CCTCC M 2010314、蠟樣芽孢桿菌CCTCC M 2010315。3株菌之間的拮抗實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示3株菌之間均無(wú)拮抗作用,等比進(jìn)行配伍,可顯著提高對(duì)致病菌的拮抗作用,結(jié)果見(jiàn)表 1。表1 配伍菌株和單株菌拮抗作用對(duì)比結(jié)果組別燦爛弧菌致病菌假交替單胞菌嗜水氣單胞菌復(fù)合微生態(tài)制劑30.91 mm33.44 mm35.13 mm萎縮芽孢桿菌21.58 mm24.32 mm22.92 mm枯草芽孢桿菌19.47 mm30.11 mm33.56 mm蠟樣芽孢桿菌29.67 mm19.12mm15.51mm挑取活化18h的3株待檢測(cè)菌株,分別用15%。滅菌的生理鹽水制成1 X 1010CFU/mL 的菌懸液,等比稀釋至ι χ 105CFU/mL。用注射的方法進(jìn)行感染試驗(yàn),每頭海參注射0. 2mL菌懸液,陰性對(duì)照設(shè)為注射相同劑量的滅菌生理鹽水組,空白組為不對(duì)其進(jìn)行任何處理的組, 陽(yáng)性對(duì)照設(shè)為注射相同劑量的不同濃度梯度的假交替單胞菌(P.nigrifaciens),感染后, 每天觀察海參的攝食活動(dòng)、生理反應(yīng)、體表變化及死亡情況。結(jié)果顯示陽(yáng)性對(duì)照海參出現(xiàn)不同程度的死亡,而3株益生菌實(shí)驗(yàn)組均未出現(xiàn)死亡情況,只是在1 X 1010CFU/mL注射組出現(xiàn)攝食差和個(gè)別海參吐臟的現(xiàn)象,在IX 109CFU/mL以下組均未出現(xiàn)不良反應(yīng)。通過(guò)上述試驗(yàn)證實(shí)3株菌對(duì)海參安全無(wú)毒。實(shí)施例2 三種益生菌活性制劑的制備萎縮芽孢桿菌(Bacillus atrophaeus) CCTCC M 2010316菌粉、枯草芽孢桿菌 (Bacillus subtil is) CCTCC M 2010314 菌粉、賭樣芽孢桿菌(Bacilluscereus)CCTCC M 2010315菌粉的制備方法,包括如下步驟A、平板培養(yǎng)復(fù)壯分別將-80°C保存的萎縮芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、蠟樣芽孢桿菌接種于TSB平板培養(yǎng)基上,于培養(yǎng)Mh,使菌種復(fù)壯并形成單菌落;B、種子液的制備將步驟A培養(yǎng)的菌種用15%。滅菌的生理鹽水制成1 X 105CFU/mL 的菌懸液,以5%的接種量接種于盛有IOOmL無(wú)菌的TSB液體培養(yǎng)基的250mL三角燒瓶中, 280C,170rpm 振蕩培養(yǎng) 18 20h ;C、發(fā)酵培養(yǎng)將步驟B中的種子液以5%的接種量接種于盛有2L無(wú)菌發(fā)酵培養(yǎng)基的5L三角瓶中,280C,170rpm振蕩培養(yǎng)84h,至活菌數(shù)為2 4X 109CFU/mL,中止發(fā)酵;
所述發(fā)酵培養(yǎng)基為葡萄糖1 2 %,大豆粉餅1 2 %,氯化鈉1 %,其余為水;D、益生菌活性菌劑的制備向步驟D的發(fā)酵液中加入沸石粉,每IOOmL發(fā)酵液中加入IOg沸石粉,170rpm振蕩40min后靜止40min,將上述發(fā)酵液于4°C 6000rpm離心 20min,棄上清,每IOOg沉淀中再加入20 40g的沸石粉混合均勻后,于45 50°C烘干 3 4h,分別得到3株菌的益生菌活性菌劑,活菌測(cè)定結(jié)果顯示所制得的菌劑活菌含量達(dá)到 1 X 109CFU/g 以上。實(shí)施例3 多功能海參養(yǎng)殖用復(fù)合微生態(tài)制劑的制備將萎縮芽孢桿菌CCTCC M2010316菌粉、枯草芽孢桿菌CCTCC M 2010314菌粉、蠟樣芽孢桿菌CCTCCM 2010315菌粉,按照重量配比1 1 1進(jìn)行配伍,混勻,制備得到復(fù)合微生態(tài)制劑。實(shí)施例4 復(fù)合微生態(tài)制劑對(duì)海參的生長(zhǎng)、存活率、免疫指標(biāo)及腸道消化酶活力的影響。將所制備的復(fù)合微生態(tài)制劑按照飼料重量的3%。添加到飼料中,進(jìn)行投喂海參試驗(yàn)。試驗(yàn)用海參采自某海參養(yǎng)殖公司,暫養(yǎng)7天后,挑選大小相似、活力較好的海參進(jìn)行試驗(yàn),海參體重初始為11. 94士 2. 38g,體長(zhǎng)4. 96 士 1. 87cm,試驗(yàn)期間,海水鹽度為四 31,pH值為7. 46 8. 02,溶解氧為5. Og/L以上,水溫為12 16°C,試驗(yàn)周期為60天。試驗(yàn)分為3組,對(duì)照組投喂不添加微生態(tài)制劑的海參飼料,試驗(yàn)組2為投喂添加3%。單一枯草芽孢桿菌制劑的海參飼料,試驗(yàn)組3為投喂添加3%。本發(fā)明的復(fù)合微生態(tài)制劑的海參飼料, 每組3個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù)15頭海參。在試驗(yàn)的第0d、30d和60d測(cè)定海參體重并計(jì)算特定生長(zhǎng)率(SGR)和存活率,測(cè)定海參腸道蛋白酶活性和淀粉酶活性,測(cè)定海參體腔液的酸性磷酸酶(ACP)、堿性磷酸酶 (AKP)活性。在投喂試驗(yàn)結(jié)束后,從每個(gè)重復(fù)組中隨機(jī)抽取10頭海參,用燦爛弧菌進(jìn)行人工攻毒感染試驗(yàn),每頭海參注射200 μ L濃度為1 X 109CFU/mL的燦爛弧菌菌液,記錄攻毒后三周內(nèi)兩組的死亡率。試驗(yàn)結(jié)果如下在促生長(zhǎng)方面,利用單一枯草芽孢桿菌制劑和本發(fā)明的復(fù)合微生態(tài)制劑采用拌飼投喂,進(jìn)行海參養(yǎng)殖試驗(yàn),試驗(yàn)結(jié)果如表2所示,添加單一枯草芽孢桿菌制劑和本發(fā)明的復(fù)合微生態(tài)制劑組,均能顯著提高海參的特定生長(zhǎng)率(SGR,Ρ<0. 05),并且能提高海參的存活率。表2 微生態(tài)制劑對(duì)海參存活率及特定生長(zhǎng)率的影響,
權(quán)利要求
1.一種多功能型海參養(yǎng)殖用復(fù)合微生態(tài)制劑,其特征在于,包括萎縮芽孢桿菌 Bacillus atrophaeus, 古 H 包 If lif Bacillus subtilis, ifa # ^ If lif Bacillus cereus,以及載體。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述多功能型海參養(yǎng)殖用復(fù)合微生態(tài)制劑,其特征在于,所述萎縮芽孢桿菌,分離于野生刺參腸道,保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心,保藏號(hào)為CCTCC M 2010316。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述多功能型海參養(yǎng)殖用復(fù)合微生態(tài)制劑,其特征在于,所述枯草芽孢桿菌,分離于野生刺參腸道,保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心,保藏號(hào)為CCTCC M 2010314。
4.根據(jù)權(quán)利要求1 3中任一項(xiàng)所述多功能型海參養(yǎng)殖用復(fù)合微生態(tài)制劑,其特征在于,所述蠟樣芽孢桿菌,分離于野生刺參腸道,保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心,保藏號(hào)為 CCTCC M 2010315。
5.根據(jù)權(quán)利要求1 4中任一項(xiàng)所述多功能型海參養(yǎng)殖用復(fù)合微生態(tài)制劑,其特征在于,所述載體為粒徑< 80目的沸石粉。
6.根據(jù)權(quán)利要求1 5中任一項(xiàng)所述多功能型海參養(yǎng)殖用復(fù)合微生態(tài)制劑,其特征在于,所述復(fù)合微生態(tài)制劑中,萎縮芽孢桿菌Bacillusatrophaeus,枯草芽孢桿菌Bacillus subtilis,賭樣芽孢桿菌Bacillus cereus,的重量份數(shù)比為1 2份1 2份1 2 份。
7.一種枯草芽孢桿菌菌株,其特征在于,所述菌株分離于野生刺參腸道,保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心,保藏號(hào)為CCTCC M 2010314。
8.—種飼料添加劑,其特征在于,包括枯草芽孢桿菌菌株,所述菌株分離于野生刺參腸道,保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心,保藏號(hào)為CCTCCM 2010314。
9.一種如權(quán)利要求7所述枯草芽孢桿菌菌株作為飼料添加劑、微生物制劑和/或腸道益生元的應(yīng)用。
10.一種如權(quán)利要求7所述枯草芽孢桿菌菌株在飼料添加劑、微生物制劑和/或腸道益生元的制備中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種多功能型海參養(yǎng)殖用復(fù)合微生態(tài)制劑,包括萎縮芽孢桿菌Bacillus atrophaeus,枯草芽孢桿菌Bacillus subtilis,蠟樣芽孢桿菌Bacillus cereus,以及載體。本發(fā)明篩選益生菌之間共生性好,對(duì)海參病原菌有較好的拮抗作用,并且具有提高海參生長(zhǎng)速度、免疫力和腸道消化酶活力的功能,通過(guò)益生菌之間的配伍達(dá)到了抗菌、免疫、促生長(zhǎng)的多重功效。從海參腸道中篩選的土著菌,對(duì)海參安全無(wú)毒、繁殖速度快、易于培養(yǎng)、對(duì)環(huán)境適應(yīng)能力強(qiáng),能較快的繁殖形成優(yōu)勢(shì)菌。使用方法簡(jiǎn)便,只需將該制劑按照配比添加到飼料中進(jìn)行投喂即可,適用于幼參養(yǎng)殖培育和各種養(yǎng)殖模式的海參疾病控制。對(duì)提高海參商品質(zhì)量、保障食品安全具有重要作用。
文檔編號(hào)C12R1/07GK102283328SQ20101060229
公開(kāi)日2011年12月21日 申請(qǐng)日期2010年12月23日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月23日
發(fā)明者廖梅杰, 張正, 李彬, 梁友, 王印庚, 王嵐, 榮小軍, 薛太山, 陳霞 申請(qǐng)人:中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所