專利名稱：含有4’-去甲基川陳皮素或4’-去甲基橘皮素作為活性成分的神經(jīng)突起伸長劑、記憶力改 ...的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種4’ -去甲基川陳皮素或4’ -去甲基橘皮素的制造方法，該制造方法包括利用特定種類的曲霉菌C^/^r^/Bmmold)對特定種類的柑橘的皮進(jìn)行發(fā)酵而獲得發(fā)酵物。本發(fā)明還涉及一種含有所述化合物作為活性成分的藥物制劑(神經(jīng)突起伸長齊U、記憶力改善劑、或抗阿爾茨海默氏癥劑)。
背景技術(shù)：
作為多甲氧基黃酮類的川陳皮素(nobiletin)和橘皮素(tangeretin)是柑橘所特有的黃酮類，近年來已發(fā)現(xiàn)這類化合物具有多種生理活性，如預(yù)防癌癥、延緩衰老和抗動脈粥樣化活性。此外，已有報道川陳皮素具有阿爾茨海默氏癥改善活性(參見非專利文獻(xiàn) 1)和神經(jīng)突起伸長活性(參見專利文獻(xiàn)1)。另一方面，關(guān)于川陳皮素和橘皮素生理活性的所有研究是對于川陳皮素和橘皮素本身(未改變的化合物)進(jìn)行的，但是近來的報道指出這兩種化合物自小腸粘膜被吸收并被代謝成為一些去甲基化的化合物，這兩種化合物中的6-甲氧基均被部分地去甲基化(參見非專利文獻(xiàn)2)。使用以下的合成的去甲基化化合物對川陳皮素癌癥抑制活性的研究的實(shí)例表明 就通過抑制一氧化氮(NO)、誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶(iNOS)和環(huán)氧化酶-2(C0X-2)的合成來防止癌癥發(fā)生的效果(其中NO、iNOS和C0X-2促進(jìn)炎癥及癌癥發(fā)生)而言，三種去甲基化的去甲基川陳皮素(特別是，3’-去甲基川陳皮素、4’-去甲基川陳皮素、和3’，4’-二去甲基川陳皮素)均具有顯著高于川陳皮素本身的效果。特別是，4’-去甲基川陳皮素具有高活性(參見非專利文獻(xiàn)3)。作為存在于柑橘中且具有羥基的多甲氧基黃酮類，對在5或3’位具有羥基的從柑橘中獲得的兩種多甲氧基黃酮類(特別是，5-羥基-3，6，7，8，3’，4’ -六甲氧基黃酮和 3’ -羥基-5，6，7-三甲氧基黃酮)的生理活性研究也表明，這些化合物強(qiáng)烈抑制iNOS和 C0X-2的mRNA表達(dá)并且誘導(dǎo)乳癌細(xì)胞的凋亡。以上兩個研究均提示，通過用羥基取代部分甲氧基顯著增強(qiáng)多甲氧基黃酮類的生理功能，去甲基多甲氧基黃酮類有望用作功能成分。然而，任何目前已知天然物質(zhì)中所含有的、其中部分甲氧基已被羥基取代的這種多甲氧基黃酮類的含量卻非常低，因此使用這些物質(zhì)作為原材料來提取并應(yīng)用該成分是不現(xiàn)實(shí)的。引用文獻(xiàn)列表
專利文獻(xiàn)
專利文獻(xiàn)1:日本特開2002-60340號公報非專利文獻(xiàn)非專利文獻(xiàn) 1 J Pharmacol Exp Ther. 2008, 326:739 非專利文獻(xiàn) 2 =Koga N. et al. :Biol. Pharm. Bull.，2007，30:2317 非專利文獻(xiàn) 3:Li S. et al. :Bioorg. Med. Chem. Lett.，2007，17:5177。

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明要解決的問題
本發(fā)明的目的是解決上述問題，并且通過原材料容易獲得、步驟簡單、口服攝入安全性高的方法來制造具有優(yōu)異生理活性的去甲基多甲氧基黃酮。解決問題的手段
鑒于上述情況，本發(fā)明的發(fā)明人利用以高含量含有多甲氧基黃酮類的柑橘皮嘗試了多種生物轉(zhuǎn)化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)通過利用特定種類的曲霉菌進(jìn)行發(fā)酵可產(chǎn)生部分去甲基化的多甲氧基黃酮類。然后，本發(fā)明人闡明了這些化合物具有4’-去甲基川陳皮素和4’_去甲基橘皮素的分子結(jié)構(gòu)，它們均具有優(yōu)異的癌癥預(yù)防活性并且在4’位被羥基取代。同時，本發(fā)明的發(fā)明人首次發(fā)現(xiàn)4’ -去甲基川陳皮素和4’ -去甲基橘皮素均具有神經(jīng)突起伸長活性。此外，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)這兩個合物與未改變的化合物(即，川陳皮素和橘皮素)相比具有顯著增強(qiáng)的活性。此外，本發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)這兩個化合物具有優(yōu)異的記憶改善活性。本發(fā)明基于上述發(fā)現(xiàn)而完成。亦即，本發(fā)明的第一方面涉及4’ -去甲基川陳皮素的制造方法，該方法包括 禾1J 用選自白曲霉(Aspergillus kawachii)、泡盛曲霉(Aspergillus awamori)、米曲霉(Aspergillus oryzae)、醬油曲霉{Aspergillus sojae)、齋藤曲霉(Aspergillus ■saitoi)、宇佐美曲霉(Aspergillus usamii)的一種以上曲霉菌對柑橘皮或其水提取物進(jìn)行發(fā)酵而獲得發(fā)酵物，其中所述皮來源于選自屬于柑橘屬后生柑橘(Metacitrus)亞屬柑組的柑橘類或者屬于柑橘屬初生柑橘(Archicitrus)亞屬橙組的柑橘類中的至少一種柑橘。此外，本發(fā)明的第二發(fā)明涉及一種4’ -去甲基橘皮素的制造方法，該方法包括利用選自白曲霉、泡盛曲霉、米曲霉、醬油曲霉、齋藤曲霉和宇佐美曲霉的一種以上曲霉菌對柑橘皮或其水提取物進(jìn)行發(fā)酵而獲得發(fā)酵物，其中所述皮來源于選自屬于柑橘屬后生柑橘亞屬柑組的柑橘類或者屬于柑橘屬初生柑橘亞屬橙組的柑橘類中的至少一種柑橘。此外，本發(fā)明的第三方面涉及一種神經(jīng)突起伸長劑，其含有4’_去甲基川陳皮素作為活性成分。此外，本發(fā)明的第四方面涉及一種神經(jīng)突起伸長劑，其含有4’_去甲基橘皮素作為活性成分。此外，本發(fā)明的第五方面涉及一種神經(jīng)突起伸長劑，其含有4’_去甲基川陳皮素和4’ -去甲基橘皮素作為活性成分。此外，本發(fā)明的第六方面涉及一種記憶改善劑或抗阿爾茨海默氏癥劑，其含有 4’ -去甲基川陳皮素作為活性成分。此外，本發(fā)明的第七方面涉及一種記憶改善劑或抗阿爾茨海默氏癥劑，其含有 4’ -去甲基橘皮素作為活性成分。
此外，本發(fā)明的第八方面涉及一種記憶改善劑或抗阿爾茨海默氏癥劑，其含有 4’ -去甲基川陳皮素和4’ -去甲基橘皮素作為活性成分。發(fā)明的效果
本發(fā)明通過利用特定的曲霉菌對用作原材料的特定柑橘進(jìn)行發(fā)酵(利用原材料非常容易獲得且步驟非常簡單的方法)，而使作為優(yōu)異功能成分的4’ -去甲基川陳皮素和4’ -去甲基橘皮素的簡單大規(guī)模生產(chǎn)成為可能。本發(fā)明還使得可提供來源于天然食用植物的、安全的4’_去甲基川陳皮素和 4’-去甲基橘皮素。本發(fā)明還使得可提供一種含有上述4’ _去甲基川陳皮素或4’ _去甲基橘皮素作為活性成分的功能食品或飲料或藥物制劑(癌癥預(yù)防劑、神經(jīng)突起伸長劑、記憶改善劑、或抗阿爾茨海默氏癥劑)。


[圖1]為顯示在實(shí)施例1中利用曲霉菌進(jìn)行發(fā)酵前后的HPLC分析結(jié)果的圖。[圖2]為顯示在實(shí)施例4中所確定的4’_去甲基川陳皮素的分子結(jié)構(gòu)的圖。[圖3]為在實(shí)施例5中所確定的4’-去甲基橘皮素的分子結(jié)構(gòu)的圖。[圖4]為在實(shí)施例6中對多種試樣的神經(jīng)突起伸長活性進(jìn)行比較的圖像。[圖5]為在實(shí)施例9中將試樣給予小鼠給藥時對自發(fā)變換行為(代表空間工作記憶的指標(biāo))進(jìn)行比較的圖表。
具體實(shí)施例方式在下文中對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明。本發(fā)明涉及一種4’ -去甲基川陳皮素或4’ -去甲基橘皮素的制造方法，該方法包括利用特定種類的曲霉菌對特定種類的柑橘的皮進(jìn)行發(fā)酵而獲得發(fā)酵物。本發(fā)明還涉及一種含有所述化合物作為活性成分的藥物制劑(神經(jīng)突起伸長劑、記憶改善劑、或抗阿爾茨海默氏癥劑)。[原材料]
可用于本發(fā)明的原材料，是含有多甲氧基黃酮類(具體地，川陳皮素和橘皮素)的柑橘的“皮”。應(yīng)當(dāng)指出的是也可使用水果(全果包括果皮、果汁、果肉、和種子)，但從多甲氧基黃酮含量和廢物有效利用的觀點(diǎn)來看，理想的是僅使用果皮。應(yīng)當(dāng)指出的是，也可使用包含柑橘植物其它部分(如葉、芽、莖、和花)的原材料， 但從多甲氧基黃酮含量的觀點(diǎn)來看，理想的是該材料不包含這些部分。任何屬于柑橘屬后生柑橘亞屬柑組的柑橘或者屬于柑橘屬初生柑橘亞屬橙組的柑橘，無論品種和系統(tǒng)如何均可使用。這里，后生柑橘亞屬中的柑組或者初生柑橘亞屬中的橙組是由田中長三郎的分類所定義的分類學(xué)組(Tanaka T. ,Bull. Univ. Osaka Pref.，Ser. B. 21，139-145 (1969))，柑組包括溫州蜜柑(jCitrus ω /)、蘆柑(jCitrus reticulate筆櫳柑)、橘柚(CYir^s mandarin,又名地中海橘柚)、紅橘(又名丹西橘)、地蜜柑ijOitrus mccom)、立花橘 iPitrus tachibana) >^Lffi (Pitrus kinokuni) ^jro5FIS (fitrus depressa)、Shikaikan、矢橘(Citrus 徹osa)、禾口日本酸橘(Citrus keraji) 0同時，橙組包括甜橙、伏令夏橙(C/ir狀sinensis、伊予柑(CYir狀 、日向夏蜜ttf {Citrus iaffluraaa)、禾口春光ttf、Citrus shunkokan) 0特別是從多甲氧基黃酮含量和廢物有效利用的觀點(diǎn)來看，優(yōu)選柑組的蘆柑(又名櫳柑)、扁平橘、紅橘和立花橘。本發(fā)明中用作原材料的柑橘，優(yōu)選使用剛收獲采集的新鮮水果或用水清洗的水果，但也可使用經(jīng)干燥、冷凍或長期保存的水果。此外，在本發(fā)明中用作原材料的柑橘可以原樣的形式使用，但優(yōu)選利用切割、破碎和研磨中的任一種方式對柑橘進(jìn)行處理。此步驟包括對用作原材料的柑橘的多種處理，例如切割成幾大塊、切割成小塊、破碎、研磨和粉碎。優(yōu)選地，該步驟通過將原材料切割成尺寸約為1厘米至數(shù)厘米的大塊來進(jìn)行。此外，也可使用通過預(yù)先從這種原材料中提取(特別是水提取)多甲氧基黃酮類所獲得的提取產(chǎn)品(提取物或干燥物)、或者以純多甲氧基黃酮類的形式所分離的產(chǎn)品。應(yīng)當(dāng)指出的是，就水提取物的條件而言，所述提取可通過如下方式進(jìn)行以果皮的 1至50倍(重量比)、優(yōu)選2至15倍的量加入溶劑，在0°C至溶劑沸點(diǎn)、優(yōu)選室溫至溶劑沸點(diǎn)以下范圍內(nèi)的溫度條件下，將混合物浸泡或搖動5分鐘至1個月、優(yōu)選20分鐘至1周。此外，特別理想的是在高溫下進(jìn)行水提取(熱水提取)。具體地，理想的是在90°C 以上(優(yōu)選在沸騰狀態(tài)下)進(jìn)行約數(shù)分鐘至數(shù)小時(例如，5分鐘至5小時)的提取。提取后所得提取液(提取物)可以直接用于后續(xù)的曲霉菌發(fā)酵，但理想的是對該提取液進(jìn)行過濾或離心以除去固體物(果皮的殘留物等)后再用于發(fā)酵。應(yīng)當(dāng)指出的是，可以通過將溶劑再次加入所除去的固體物中進(jìn)行多次提取，來提高提取效率?？蓪θ绱双@得的提取液(提取物)進(jìn)行干燥處理(冷凍干燥、使用蒸發(fā)器進(jìn)行干燥等)，以制備干燥物。[曲霉菌發(fā)酵]
本發(fā)明包括使用以上述方式制備的發(fā)酵原材料(果皮、或者果皮的水提取物)作為基質(zhì)利用曲霉菌進(jìn)行發(fā)酵而獲得發(fā)酵物的步驟。應(yīng)當(dāng)指出的是，優(yōu)選的是在進(jìn)行曲霉菌發(fā)酵前對上述發(fā)酵原材料進(jìn)行熱處理從而對原材料中的無用細(xì)菌進(jìn)行滅菌。作為用于原材料發(fā)酵的曲霉菌，可使用白曲霉、泡盛曲霉、米曲霉、醬油曲霉、齋藤曲霉或宇佐美曲霉。此外，這些曲霉菌也可組合使用。曲霉菌中，白曲霉、泡盛曲霉和米曲霉因?yàn)榭梢愿吆康孬@得4’_去甲基川陳皮素和4’ -去甲基橘皮素，故優(yōu)選使用。在將上述曲霉菌接種入發(fā)酵原材料的方法中，可將曲霉菌孢子直接噴灑在發(fā)酵原材料上，使得孢子粘附在原材料上。可選地，可通過散布預(yù)先利用液體培養(yǎng)由曲霉菌的預(yù)發(fā)酵所獲得的培養(yǎng)基，而將上述曲霉菌接種入整個發(fā)酵原材料中。在將上述曲霉菌接種入發(fā)酵原材料中的情況下，優(yōu)選的是在有氧條件下進(jìn)行微生物發(fā)酵，因此例如優(yōu)選的是使用具有寬底的圓柱形淺容器進(jìn)行發(fā)酵。
可將發(fā)酵原材料均勻地散布于這種容器的底部，以增加與空氣的接觸面積。同時，在發(fā)酵原材料是液體的情況下，優(yōu)選的是進(jìn)行如通氣或攪拌的處理。發(fā)酵是在適于上述曲霉菌生長的條件下，即在優(yōu)選10至40°C、更優(yōu)選20至40°C、 更優(yōu)選25至32°C的溫度下進(jìn)行。此外，發(fā)酵優(yōu)選的是在適于上述曲霉菌生長的條件下，即在暗處進(jìn)行。而且，在發(fā)酵原材料不是液體的情況下，優(yōu)選的是原材料中含有足夠量的水 (例如，水含量為25%以上)。制造大量4’ -去甲基川陳皮素和4’ -去甲基橘皮素的微生物發(fā)酵的發(fā)酵期優(yōu)選為 2至21天、更優(yōu)選為3至14天、進(jìn)一步優(yōu)選為4至12天。在發(fā)酵期短于2天的情況下，不能充分地獲得4’ -去甲基川陳皮素和4’ -去甲基橘皮素，這是因?yàn)槔蒙鲜銮咕奈⑸锇l(fā)酵難以進(jìn)行。相反，在發(fā)酵期超過21天的情況下，通過微生物轉(zhuǎn)變所產(chǎn)生的4’ -去甲基川陳皮素和4’ -去甲基橘皮素逐漸地被分解，從而導(dǎo)致來源于柑橘的香氣消失。同時，在本發(fā)明的曲霉菌發(fā)酵中，利用由曲霉菌分泌的酶使多甲氧基黃酮去甲基化而成為去甲基多甲氧基黃酮。因此，代替曲霉菌發(fā)酵，還可以對曲霉菌或發(fā)酵后所得發(fā)酵物進(jìn)行溶液提取，而制備含有能夠使多甲氧基黃酮去甲基化的酶的酶溶液，接著使用所述酶進(jìn)行與原材料的酶反應(yīng)而制備反應(yīng)產(chǎn)物，由此獲得去甲基多甲氧基黃酮。具體地，可以通過收集曲霉菌發(fā)酵后來自發(fā)酵物的水溶液并使用該水溶液作為粗酶溶液來進(jìn)行酶反應(yīng)。當(dāng)進(jìn)行本發(fā)明的曲霉菌發(fā)酵時，作為柑橘原材料中的多甲氧基黃酮類的所有川陳皮素和橘皮素均被轉(zhuǎn)化為4’ -去甲基川陳皮素和4’ -去甲基橘皮素。具體地，柑橘原材料的曲霉菌發(fā)酵可以產(chǎn)生以高含量含有4’_去甲基川陳皮素和 4’ _去甲基橘皮素的曲霉菌發(fā)酵物，即，基于干重含有約0. 5至1. 5質(zhì)量％(具體地約1質(zhì)量％)的4’ -去甲基川陳皮素，并且基于干重含有約0. 25至0. 75質(zhì)量％(具體地約0. 5質(zhì)量％)的4’-去甲基橘皮素。因此，以上述方式獲得的曲霉菌發(fā)酵物可以直接或者在對該材料進(jìn)行加工(例如，破碎、研磨、粉碎、干燥等)后用作藥物或功能食品的原材料。[溶液提取]
應(yīng)當(dāng)指出的是，從純度的觀點(diǎn)出發(fā)，理想的是以溶液提取的方式從霉菌發(fā)酵后所得發(fā)酵物中獲得提取物?？蓪η咕l(fā)酵物直接進(jìn)行溶液提取步驟，但更理想的是對利用破碎、壓碎、研磨、粉碎等中的任一方法處理曲霉菌發(fā)酵物所得產(chǎn)物進(jìn)行溶液提取步驟。溶液提取步驟中使用的溶劑可以是水、緩沖液、有機(jī)溶劑或含水溶劑。有機(jī)溶劑的實(shí)例包括低級脂肪醇(如乙醇、甲醇、異丙醇、或丁醇)、丙酮、乙酸乙酯和氯仿。這些溶劑中，從提取效率、操作性和安全性的觀點(diǎn)來看，特別優(yōu)選的是水、乙醇或含水乙醇。此外，特別優(yōu)選的是使用最終濃度為55%以上、優(yōu)選60%以上、更優(yōu)選80%以上的乙醇進(jìn)行提取，因?yàn)檫@樣能夠抑制雜質(zhì)(即多糖類)的溶出并提高去甲基多甲氧基黃酮的提取效率。
7
就提取條件而言，可通過如下方式進(jìn)行提取以原材料(優(yōu)選破碎物)的1至50 倍(重量比)、優(yōu)選2至15倍的量加入溶劑，并且在0°C至溶劑沸點(diǎn)、優(yōu)選室溫至溶劑沸點(diǎn)以下的溫度條件下，對混合物進(jìn)行5分鐘至1個月、優(yōu)選20分鐘至1周的浸泡或搖動?？蓪λ锰崛∫哼M(jìn)行冷凍干燥或者用蒸發(fā)器等進(jìn)行干燥，以制備濃縮干燥產(chǎn)物。此外，可使用多種不同溶劑來實(shí)施多次溶液提取步驟。特別是，在使用水或低濃度含水醇進(jìn)行第一次提取時，可以通過隨后使用濃度等于或大于上述特定濃度的乙醇進(jìn)行提取，而提高去甲基多甲氧基黃酮的提取效率。然后，可將以上述方式獲得的提取物(上述提取液或者濃縮干燥產(chǎn)物)用作藥物及功能食品的原材料。[純化]
此外，可對提取物或產(chǎn)物實(shí)施純化步驟以提高純度。純化步驟可以通過液_液分離提取或者通過使用例如硅膠、化學(xué)改性硅膠、活性炭或合成吸附樹脂載體的柱純化來提高純度。作為實(shí)例，本文揭示用以提高去甲基多甲氧基黃酮純度的純化條件。首先，將通過從提取液中除去乙醇所獲得的液體(具體地，利用乙醇提取所獲得的提取液)加入到用水平衡的包含多孔合成吸附樹脂(具體地，DIAION HP-20[由三菱化學(xué)公司制造])的柱中。然后，除去用水洗脫的成分，再除去用39至41%乙醇(具體地40% 乙醇)洗脫的液體。然后，收集用44至46%乙醇(具體地45%乙醇)洗脫的成分，由此獲得純度提高的含去甲基多甲氧基黃酮的組合物。應(yīng)當(dāng)指出的是，如果在前述優(yōu)選條件下進(jìn)行提取和純化，可以獲得純度為80%以上的富含去甲基多甲氧基黃酮的組合物。此外，可進(jìn)一步對以上述方式獲得的含去甲基多甲氧基黃酮的組合物進(jìn)行ODS柱層析(具體地，用45%甲醇進(jìn)行洗脫)、薄層層析(TLC)[具體地，使用己烷/乙醇(7:3)]、 或ODS-HPLC(具體地，37%(ν/ν)乙腈溶于水中的混合溶劑)處理，并收集目標(biāo)峰，由此分離出各個去甲基多甲氧基黃酮的純產(chǎn)物。具體地，以上述方式獲得的去甲基多甲氧基黃酮類是“4’_去甲基川陳皮素”(參見下面的化學(xué)式1)和“4’ -去甲基橘皮素”(參見下面的化學(xué)式2)。所述化合物是通過在4’位進(jìn)行去甲基化而獲得的川陳皮素和橘皮素的一去甲基化產(chǎn)物。與各自未改變的化合物相比，所述化合物由于去甲基化而顯示更高的極性并且在醇類和水中的溶解性更好。[化學(xué)式1]
權(quán)利要求
1.一種4’-去甲基川陳皮素的制造方法，包括禾Ij用選自白曲霉、泡盛曲霉、米曲霉、醬油曲霉、齋藤曲霉、和宇佐美曲霉的一種以上曲霉菌對皮或其水提取物進(jìn)行發(fā)酵而獲得發(fā)酵物，其中所述皮來源于選自屬于柑橘屬后生柑橘亞屬柑組的柑橘類或者屬于柑橘屬初生柑橘亞屬橙組的柑橘類中的至少一種柑橘類。
2.—種4’-去甲基橘皮素的制造方法，包括禾Ij用選自白曲霉、泡盛曲霉、米曲霉、醬油曲霉、齋藤曲霉、和宇佐美曲霉的一種以上曲霉菌對皮或其水提取物進(jìn)行發(fā)酵而獲得發(fā)酵物，其中所述皮來源于選自屬于柑橘屬后生柑橘亞屬柑組的柑橘類或者屬于柑橘屬初生柑橘亞屬橙組的柑橘類中的至少一種柑橘類。
3.—種神經(jīng)突起伸長劑，其含有4’ -去甲基川陳皮素作為活性成分。
4.一種神經(jīng)突起伸長劑，其含有4’ -去甲基橘皮素作為活性成分。
5.一種神經(jīng)突起伸長劑，其含有4’ -去甲基川陳皮素和4’ -去甲基橘皮素作為活性成分。
6.一種記憶力改善劑或抗阿爾茨海默氏癥劑，其含有4’ _去甲基川陳皮素作為活性成分。
7.—種記憶力改善劑或抗阿爾茨海默氏癥劑，其含有4’-去甲基橘皮素作為活性成分。
8.—種記憶力改善劑或抗阿爾茨海默氏癥劑，其含有4’ -去甲基川陳皮素和4’ -去甲基橘皮素作為活性成分。
全文摘要
本發(fā)明的目的是通過原材料容易獲得、步驟簡單、口服攝入高度安全的方法來制造含有具有優(yōu)異生理活性的去甲基多甲氧基黃酮作為活性成分的藥物制劑。此外，本發(fā)明還提供一種4'-去甲基川陳皮素或4'-去甲基橘皮素的制造方法，該方法包括利用選自白曲霉、泡盛曲霉、米曲霉、醬油曲霉、齋藤曲霉、和宇佐美曲霉的一種以上曲霉菌對皮或其水提取物進(jìn)行發(fā)酵而獲得發(fā)酵物，其中所述皮來源于選自屬于柑橘屬后生柑橘亞屬柑組的柑橘類或者屬于柑橘屬初生柑橘亞屬橙組的柑橘類中的至少一種柑橘類。
文檔編號C12R1/66GK102458395SQ20108003252
公開日2012年5月16日 申請日期2010年3月10日 優(yōu)先權(quán)日2009年6月3日
發(fā)明者田村弘司, 草野崇一 申請人:富士產(chǎn)業(yè)株式會社