專利名稱：微陣列的檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及使用微陣列檢測(cè)探針多核苷酸和靶多核苷酸的雜交的方法。
背景技術(shù)：
不僅明確多種多樣的生物的基因構(gòu)造，而且在嘗試用基因組序列闡明其基因功能的同時(shí)，也在快速進(jìn)行用于高效解析基因功能的技術(shù)開發(fā)。微陣列是在載玻片等載體上使 多數(shù)多核苷酸排列固定在每個(gè)規(guī)定的區(qū)域上的高密度陣列，其對(duì)于基因的堿基序列的確定，以及基因的表達(dá)、變異、多態(tài)性等的同時(shí)解析非常有用。使用該微陣列的基因信息的解析對(duì)新藥研究，疾病的診斷或預(yù)防的研發(fā)等極其有用。在使用微陣列的檢測(cè)中，首先用放射性同位素或熒光色素標(biāo)記后的靶多核苷酸與在載體表面高密度排列的探針多核苷酸雜交。此時(shí)，具有與探針多核苷酸互補(bǔ)的堿基序列的靶多核苷酸與探針多核苷酸互補(bǔ)性地雜交，未雜交的多核苷酸通過清洗除去。在使用微陣列的雜交的檢測(cè)中，有時(shí)由于微陣列的性能退化或清洗不充分等而引起誤判。但是，判斷是否為誤判被委托于使用微陣列的用戶，這非常不可靠。在這樣的狀況下，不能用組合檢測(cè)器和反應(yīng)裝置的自動(dòng)裝置處理多個(gè)試樣。專利文獻(xiàn)I中記載有為了消除在點(diǎn)的亮度為檢測(cè)器的檢測(cè)下限以下的情況及為檢測(cè)上限以上的情況下產(chǎn)生的判定誤差，使用點(diǎn)化有改變濃度的探針DNA的微陣列，僅用具有特定范圍的亮度的點(diǎn)判定結(jié)果的方法。但是，在該方法中，不能判定每個(gè)微陣列的性能退化或清洗不充分等。在專利文獻(xiàn)2記載有使探針陣列共價(jià)結(jié)合標(biāo)志物質(zhì)(7—力一物質(zhì))，基于該標(biāo)志物質(zhì)的位置，迅速且正確地進(jìn)行各探針的點(diǎn)的位置的鑒定的方法。但是，在該方法中，即使能夠判定每個(gè)探針陣列的性能退化或清洗不充分等，也不能判定在雜交或PCR上是否具有
缺陷等?，F(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)專利文獻(xiàn)I :專利第0880361號(hào)專利文獻(xiàn)2 :專利第4261661號(hào)

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明要解決的問題本發(fā)明的問題是提供一種客觀地判定每個(gè)微陣列的性能退化或清洗不充分等及靶多核苷酸雜交不良的方法，以及點(diǎn)的定位方法。用于解決問題的手段本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)具有分別添加多種探針多核苷酸的多個(gè)固定的檢測(cè)用點(diǎn)上，及一處以上的固定有兩種以上固定于檢測(cè)用點(diǎn)上的探針多核苷酸的基準(zhǔn)點(diǎn)的微陣列，使其接觸熒光標(biāo)記的靶多核苷酸并進(jìn)行雜交反應(yīng)，首先通過測(cè)定基準(zhǔn)點(diǎn)的熒光，能夠定位檢測(cè)用點(diǎn)，同時(shí)能夠判定每個(gè)微陣列的可靠性以及雜交反應(yīng)的可靠性，至此完成了本發(fā)明。
即，本發(fā)明包含以下方面。(I) 一種方法，其使用微陣列檢測(cè)探針多核苷酸和祀多核苷酸的雜交，包含I)使具有分別添加多種探針多核苷酸的多個(gè)固定的檢測(cè)用點(diǎn)，及一處以上的固定有兩種以上固定于檢測(cè)用點(diǎn)上的探針多核苷酸的基準(zhǔn)點(diǎn)的微陣列與熒光標(biāo)記的靶多核苷酸接觸的工序，2)通過清洗微陣列，除去未反應(yīng)的靶多核苷酸的工序，3)測(cè)定基準(zhǔn)點(diǎn)上的熒光，若滿足規(guī)定值則判斷為可測(cè)定的工序，及4)若判斷為可測(cè)定，則測(cè)定固定有探針多核苷酸的各檢測(cè)用點(diǎn)上的熒光的工序。(2)如⑴所述的方法，在基準(zhǔn)點(diǎn)上固定有各類固定于檢測(cè)用點(diǎn)上的探針多核苷酸。(3)如(I)或(2)所述的方法，與微陣列接觸的靶多核苷酸必須包含與固定于基準(zhǔn)點(diǎn)上的探針多核苷酸雜交的多核苷酸。(4)如⑴ (3)中任一方面所述的方法，在微陣列中，排列配置有檢測(cè)用點(diǎn)和基準(zhǔn)點(diǎn)，基準(zhǔn)點(diǎn)至少存在兩處，將連結(jié)任意兩處的基準(zhǔn)點(diǎn)的線作為基準(zhǔn)線，基于距基準(zhǔn)點(diǎn)的距離和與基準(zhǔn)線的角度檢測(cè)檢測(cè)用點(diǎn)的位置。(5)如⑷所述的方法，檢測(cè)用點(diǎn)和基準(zhǔn)點(diǎn)配置成外周為四角形的格子形狀，在四角形的不同的頂點(diǎn)上存在基準(zhǔn)點(diǎn)。(6)如⑴ (5)中任一方面所述的方法，在微陣列中，檢測(cè)用點(diǎn)和基準(zhǔn)點(diǎn)排列配置成外周為正方形或長(zhǎng)方形的格子狀，在其對(duì)角線上的頂點(diǎn)上存在兩處基準(zhǔn)點(diǎn)，檢測(cè)穿過各基準(zhǔn)點(diǎn)的兩條直線垂直相交的交點(diǎn)，檢測(cè)連結(jié)所述交點(diǎn)和各基準(zhǔn)點(diǎn)的兩條結(jié)線的長(zhǎng)度，由所述結(jié)線的長(zhǎng)度和點(diǎn)數(shù)檢測(cè)結(jié)線上的各檢測(cè)用點(diǎn)位置。(7)如⑴ (6)中任一方面所述的方法，標(biāo)志多核苷酸(7—力一 1J ^ ^ >才千卜''〃)與固定于檢測(cè)用點(diǎn)上的探針多核苷酸中任意種和互補(bǔ)的多核苷酸具有95%以上的同源性。(8) 一種試劑盒，其用于檢測(cè)探針多核苷酸和靶多核苷酸的雜交，包含具有分別添加多種探針多核苷酸的多個(gè)固定的檢測(cè)用點(diǎn)，及一處以上的固定有兩種以上固定于檢測(cè)用點(diǎn)上的探針多核苷酸的基準(zhǔn)點(diǎn)的微陣列，以及與固定于檢測(cè)用點(diǎn)上的探針多核苷酸中的任意種雜交的熒光標(biāo)記的標(biāo)志多核苷酸。(9)如⑶所述的試劑盒，在基準(zhǔn)點(diǎn)上固定有各類固定于檢測(cè)用點(diǎn)上的探針多核苷酸。本說明書是包含日本專利申請(qǐng)2010-000251號(hào)的說明書及/或附圖所述的內(nèi)容，該申請(qǐng)是本申請(qǐng)的優(yōu)先權(quán)的基礎(chǔ)。根據(jù)本發(fā)明，能夠判定每個(gè)微陣列的可靠性，使用具有可靠性的微陣列能夠?qū)嵤y(cè)定。另外，能夠判定雜交反應(yīng)的可靠性。因此，能夠抑制誤判。另外，通過與自動(dòng)反應(yīng)裝置等組合，能夠以高的可靠性自動(dòng)實(shí)施微陣列的測(cè)定。另外，在試樣中不添加額外的試劑等就能夠檢測(cè)基準(zhǔn)點(diǎn)這一點(diǎn)也是有利的。


圖I表示微陣列中的探針DNA (檢測(cè)用點(diǎn))及探針DNA混合物(基準(zhǔn)點(diǎn))的點(diǎn)配置的一方式；圖2表示用于微陣列的熒光檢測(cè)的檢測(cè)器的一方式；圖3表不在微陣列中實(shí)施雜交反應(yīng)后，測(cè)定滅光的圖像；圖4表示在微陣列中實(shí)施雜交反應(yīng)后，測(cè)定熒光強(qiáng)度的結(jié)果；圖5表示微陣列中的探針DNA (檢測(cè)用點(diǎn))及探針DNA混合物(基準(zhǔn)點(diǎn))的點(diǎn)配置的一方式；圖6表示使兩種微陣列(傳統(tǒng)方法及本發(fā)明)與源自試樣的靶DNA雜交測(cè)定熒光的結(jié)果；圖7表示將在從試樣中提取的核酸中不加入引物下進(jìn)行PCR得到的PCR產(chǎn)物滴加在微陣列上得到的熒光圖像； 圖8表示微陣列中的探針DNA (檢測(cè)用點(diǎn))及探針DNA混合物(基準(zhǔn)點(diǎn))的點(diǎn)配置的一方式。點(diǎn)I 17為檢測(cè)用點(diǎn)，點(diǎn)A為基準(zhǔn)點(diǎn)；圖9表示使微陣列與源自試樣的靶DNA雜交測(cè)定熒光的結(jié)果。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明涉及一種用微陣列檢測(cè)探針多核苷酸和靶多核苷酸的雜交的方法。在本發(fā)明中，多核苷酸包含寡核苷酸，包含含有DNA及RNA的核酸。DNA包含單鏈DNA及雙鏈DNA。另外，核酸中也包含修飾磷酸二酯部位的人工核酸、修飾呋喃部位的糖基鍵及羥基的人工核酸、修飾核酸堿基部位的人工核酸、及利用糖、磷酸骨架以外的構(gòu)造的人工核酸等，更具體而言，包含以硫原子取代磷酸部位的氧原子的硫代磷酸酯型、二硫代磷酸酯型、磷二酰胺型、甲基磷酸酯型或甲基硫代磷酸酯型的人工核酸；呋喃環(huán)上的取代基修飾型、增加一個(gè)碳糖環(huán)骨架的吡喃型、或多環(huán)式糖骨架型的人工核酸；嘧啶C-5位修飾堿基型、嘌呤C-7位修飾堿基型、或環(huán)擴(kuò)大修飾堿基型的人工核酸等。在本發(fā)明中，探針多核苷酸具有在該技術(shù)領(lǐng)域通用的含義，是指用于檢測(cè)目的基因的多核苷酸，即是指專門與對(duì)應(yīng)于目的基因的多核苷酸或其片段雜交的多核苷酸。作為探針多核苷酸，通常使用變性的多核苷酸(例如，從雙鏈變性為單鏈的那些)，可使用合成寡核苷酸、cDNA及基因組DNA以及它們的片段等。探針多核苷酸通常具有3 5000個(gè)堿基，優(yōu)選具有10 1000個(gè)堿基，進(jìn)一步優(yōu)選15 70個(gè)堿基。固定于微陣列上的探針多核苷酸的濃度通常為0. 2iiM 50iiM的范圍。在本發(fā)明中，靶多核苷酸具有在該技術(shù)領(lǐng)域通用的含義，是指檢測(cè)對(duì)象即多核苷酸。靶有時(shí)稱為目標(biāo)。通常，使用源自被檢試樣的多核苷酸及以其為基礎(chǔ)利用酶合成/擴(kuò)增的多核苷酸，具體而言，使用變性的多核苷酸、mRNA、cDNA、aRNA、它們的片段、等。雜交(7、^ 7'' 'J夕' ^文)、雜交反應(yīng)(7、^ 7'' 'J夕' ^文反応)或雜交(/、^ 7'' 'J夕'^七一'> 3 > )具有在該技術(shù)領(lǐng)域通用的含義，是指具有互補(bǔ)的序列的多核苷酸之間，例如，單鏈的DNA之間、單鏈的RNA之間、或單鏈的DNA和單鏈的RNA在適當(dāng)?shù)臈l件下形成雙鏈。在本發(fā)明中，雜交優(yōu)選在嚴(yán)格的條件下實(shí)施。 在本發(fā)明中，使用熒光標(biāo)記的靶多核苷酸。標(biāo)記方法及標(biāo)記的種類只要是能夠檢測(cè)探針多核苷酸和靶多核苷酸的雜交的物質(zhì)就沒有特別限制，在該技術(shù)領(lǐng)域是公知的。例如，通過在合成或擴(kuò)增靶多核苷酸時(shí)導(dǎo)入共價(jià)結(jié)合熒光標(biāo)記的底物(主要是UTP)，能夠得到熒光標(biāo)記的靶多核苷酸。作為熒光標(biāo)記，可列舉Cy3以及Cy5等CyDye、FITC、RITC、若丹明、德克薩斯紅、TET、TAMRA, FAM、HEX、ROX等。在本發(fā)明中，作為微陣列，使用具有添加探針多核苷酸的多個(gè)固定的檢測(cè)用點(diǎn)及一處以上固定有兩種以上固定于檢測(cè)用點(diǎn)上的探針多核苷酸的基準(zhǔn)點(diǎn)的微陣列，探針多核苷酸優(yōu)選全部種類，基準(zhǔn)點(diǎn)優(yōu)選至少兩處，更優(yōu)選2 4處，進(jìn)一步優(yōu)選兩處。固定于基準(zhǔn)點(diǎn)上的探針多核苷酸的濃度合計(jì)通常為0. 2 y M 100 y M的范圍。固定于基準(zhǔn)點(diǎn)上的探針多核苷酸的濃度優(yōu)選為分別相同的濃度，合計(jì)為上述濃度。
在本發(fā)明中，固定于微陣列的檢測(cè)用點(diǎn)上的探針多核苷酸的種類為兩種以上，通常為256種以下，優(yōu)選為64種以下。在本發(fā)明中，在基準(zhǔn)點(diǎn)上，優(yōu)選以相同的濃度使兩種以上固定于檢測(cè)用點(diǎn)上的探針多核苷酸固定，探針多核苷酸優(yōu)選全部種類，因此，若探針多核苷酸的種類過多，則基準(zhǔn)點(diǎn)上的每一種探針多核苷酸的濃度變低，基準(zhǔn)點(diǎn)上的熒光變?nèi)酢Ｔ诒景l(fā)明中，通常與微陣列接觸的靶多核苷酸必須包含與固定于基準(zhǔn)點(diǎn)上的探針多核苷酸雜交的多核苷酸。因此，若使微陣列接觸熒光標(biāo)記的靶多核苷酸，則微陣列不會(huì)退化，只要正常進(jìn)行核酸擴(kuò)增反應(yīng)等檢測(cè)步驟，就一定能在基準(zhǔn)點(diǎn)上檢測(cè)信號(hào)。而且，通過判定在基準(zhǔn)點(diǎn)上有無信號(hào)，能夠判定每個(gè)微陣列的可靠性，使用具有可靠性的微陣列能夠?qū)嵤y(cè)定。另外，也能夠判定雜交反應(yīng)的可靠性，能夠抑制誤判。另外，將基準(zhǔn)點(diǎn)的位置作為基準(zhǔn)，能夠自動(dòng)確定檢測(cè)用點(diǎn)的位置，因此，通過與自動(dòng)反應(yīng)裝置等組合，能夠以高度的可靠性自動(dòng)實(shí)施微陣列的測(cè)定。固定于檢測(cè)用點(diǎn)上的探針多核苷酸是指為了該微陣列檢測(cè)對(duì)象的目的而實(shí)質(zhì)上使用的探針多核苷酸。“固定有各類固定于檢測(cè)用點(diǎn)上的探針多核苷酸全種類”是指固定有各類為了如上所述的微陣列檢測(cè)對(duì)象的目的而實(shí)質(zhì)上使用的探針多核苷酸。因此，在微陣列上，固定有為了檢測(cè)對(duì)象而實(shí)質(zhì)上未使用的多核苷酸，即使該多核苷酸不固定在基準(zhǔn)點(diǎn)上，這樣的方式也包含于固定有全部種類的方式。靶多核苷酸必須包含與固定于微陣列的檢測(cè)用點(diǎn)上的多個(gè)探針多核苷酸中的任意種雜交的多核苷酸，以檢測(cè)與哪個(gè)檢測(cè)用點(diǎn)雜交，在鑒定靶多核苷酸的情況下，優(yōu)選使用固定有各類固定于檢測(cè)用點(diǎn)上的探針多核苷酸的方式。換而言之，優(yōu)選與微陣列接觸的靶多核苷酸必須包含與固定于檢測(cè)用點(diǎn)上的探針多核苷酸中的任意種雜交的多核苷酸的方式。原因是這樣的靶多核苷酸一定與固定于基準(zhǔn)點(diǎn)上的探針多核苷酸中的任意種雜交，因此，微陣列不會(huì)退化，只要正常進(jìn)行核酸擴(kuò)增反應(yīng)等檢測(cè)步驟，就一定能在基準(zhǔn)點(diǎn)上檢測(cè)信號(hào)。而且，通過在基準(zhǔn)點(diǎn)上有無信號(hào)，能夠判定每個(gè)微陣列的可靠性，使用具有可靠性的微陣列能夠?qū)嵤y(cè)定。另外，也能判定雜交反應(yīng)的可靠性，能夠抑制誤判。另外，將基準(zhǔn)點(diǎn)的位置作為基準(zhǔn)，能夠自動(dòng)確定檢測(cè)用點(diǎn)的位置，因此，通過與自動(dòng)反應(yīng)裝置等組合，能夠以高度的可靠性自動(dòng)實(shí)施微陣列的測(cè)定。作為這樣的方式，可列舉對(duì)于源自活體試樣的靶核苷酸，使用固定有必須包含于該活體試樣的核酸的探針多核苷酸的微陣列的情況。例如，源自必須包含于該活體試樣的基因的核酸，在該基因具有多個(gè)基因組型(多態(tài)性或變異)的情況下，各類與該所有的基因組型的核酸對(duì)應(yīng)的探針多核苷酸分別固定于微陣列的檢測(cè)用點(diǎn)上。更具體而言，可列舉為了判定ABO血型，將所有的分別與ABO糖基轉(zhuǎn)移酶基因的多態(tài)性(Yamamoto et al. ,990, Nature345 (17) :229-233)對(duì)應(yīng)的探針多核苷酸分別固定于微陣列的檢測(cè)用點(diǎn)上，使作為靶多核苷酸，源自從人的細(xì)胞、組織或血液等體液中提取的核酸的靶多核苷酸(例如，將該核酸設(shè)定為模板使ABO糖基轉(zhuǎn)移酶基因擴(kuò)增得到的靶多核苷酸)與其接觸的情況等。另外可舉出由基因多態(tài)性的判定進(jìn)行的藥物響應(yīng)性檢查、藥效檢查等。本發(fā)明也包含靶多核苷酸不包含與固定于微陣列的檢測(cè)用點(diǎn)上的多個(gè)探針多核苷酸中的任意種雜交的多核苷酸的情況。在這樣的情況下，在基準(zhǔn)點(diǎn)上也檢測(cè)不出信號(hào)。因此，首先檢測(cè)基準(zhǔn)點(diǎn)的熒光，若不滿足規(guī)定值則能夠判斷為不可測(cè)定。例如，在通過鑒定人可能感染的病毒(例如，BK病毒)中的基因(例如，VPl基因)的多態(tài)性判定人的出身地等的情況下，考慮使用固定有各類與該病毒基因的多態(tài)性對(duì)應(yīng)的探針多核苷酸的微陣列。若試樣感染了病毒，則在任一個(gè)檢測(cè)用點(diǎn)中檢測(cè)到熒光，同時(shí)在基準(zhǔn)點(diǎn)上也檢測(cè)到熒光，因此，首先，在測(cè)定基準(zhǔn)點(diǎn)的熒光滿足規(guī)定值的情況下，僅測(cè)定檢測(cè)用點(diǎn)的熒光即可。假設(shè)，在基準(zhǔn)點(diǎn)上檢測(cè)不到熒光，則能夠判定為由于微陣列退化、或核酸擴(kuò)增反應(yīng)的不良、或試樣未感染該病毒等理由不可測(cè)定，因此，不需要測(cè)定檢測(cè)用點(diǎn)的熒光。因此，本發(fā)明也能用于螨、霉菌的檢查，食品及環(huán)境下的微生物檢查，對(duì)人體的細(xì)菌、病毒感染的檢查等，還有調(diào)查測(cè)定對(duì)象有無的情況等。在本發(fā)明中，通過使上述微陣列與熒光標(biāo)記的靶多核苷酸接觸實(shí)施雜交反應(yīng)，通過清洗除去未反應(yīng)的靶多核苷酸后，首先，測(cè)定基準(zhǔn)點(diǎn)上的熒光。在本發(fā)明中，另外，除了熒光標(biāo)記的靶多核苷酸外，也可以使與固定于檢測(cè)用點(diǎn)上的探針多核苷酸中的任意種雜交的熒光標(biāo)記的標(biāo)志多核苷酸與微陣列接觸。該標(biāo)志多核苷酸通常是指在嚴(yán)格的條件下與固定于檢測(cè)用點(diǎn)上的探針多核苷酸中的任意種雜交的熒光標(biāo)記的標(biāo)志多核苷酸。嚴(yán)格的條件是指形成特異性雜交體而不形成非特異性雜交體的條件，雖然可舉出低嚴(yán)格的條件及高嚴(yán)格的條件，但優(yōu)選高嚴(yán)格的條件。低嚴(yán)格的條件為在雜交后的清洗中，例如以42°C、5XSSC、0. 1% SDS進(jìn)行清洗的條件，優(yōu)選為以50°C、5XSSC、0. 1% SDS進(jìn)行清洗的條件。高嚴(yán)格的條件為在雜交后的清洗中，例如以65°C、0. I X SSC以及0. I % SDS進(jìn)行清洗的條件。在如上所述的嚴(yán)格的條件下，由與同任意的探針多核苷酸互補(bǔ)的多核苷酸具有高的同源性(同源性為80%以上，優(yōu)選90%以上，更優(yōu)選95%以上，進(jìn)一步優(yōu)選98%以上)的堿基序列構(gòu)成的多核苷酸是能夠雜交的。如上所述，標(biāo)志多核苷酸以與固定于基準(zhǔn)點(diǎn)上的任意的探針多核苷酸雜交的方式進(jìn)行設(shè)計(jì)，且具有熒光標(biāo)記，因此，即使靶多核苷酸不與探針雜交在基準(zhǔn)點(diǎn)上也應(yīng)該能檢測(cè)到熒光。未檢測(cè)到熒光或熒光的值較低是指在基準(zhǔn)點(diǎn)上探針多核苷酸從微陣列上消失，即，檢測(cè)用點(diǎn)上的探針多核苷酸也同樣消失。或者，是指在雜交反應(yīng)中具有缺陷。因此，測(cè)定基準(zhǔn)點(diǎn)上的熒光，判定是否滿足規(guī)定值，從而，能夠判斷微陣列是否退化，換而言之，能夠判斷微陣列的可靠性。另外，能夠判定雜交反應(yīng)的可靠性。雖然標(biāo)志多核苷酸的熒光標(biāo)記沒有特別限制，但優(yōu)選與靶多核苷酸的熒光標(biāo)記相同的物質(zhì)。通過使用相同的物質(zhì)，使用相同的檢測(cè)器能夠整體測(cè)定雙方的熒光標(biāo)記，能夠迅速且簡(jiǎn)便地實(shí)施測(cè)定。在用于本發(fā)明的微陣列中，優(yōu)選，探針多核苷酸的點(diǎn)(檢測(cè)用點(diǎn))和基準(zhǔn)點(diǎn)排列，優(yōu)選配置成格子形狀。而且，優(yōu)選至少存在兩處基準(zhǔn)點(diǎn)，將連結(jié)任意兩處的基準(zhǔn)點(diǎn)的線作為、基準(zhǔn)線，基于距基準(zhǔn)點(diǎn)的距離及與基準(zhǔn)線的角度檢測(cè)各檢測(cè)用點(diǎn)的位置(點(diǎn)的中心)。更具體而言，由距基準(zhǔn)點(diǎn)的距離及與基準(zhǔn)線的角度(連結(jié)各檢測(cè)用點(diǎn)和基準(zhǔn)點(diǎn)的線和基準(zhǔn)線所成的角度)、以及期望的點(diǎn)間距等能夠確定各點(diǎn)的中心位置。另外，將檢測(cè)用點(diǎn)和基準(zhǔn)點(diǎn)排列配置成外周為正方形或長(zhǎng)方形的格子形狀，能夠使基準(zhǔn)點(diǎn)存在于兩處其對(duì)角線上的相對(duì)的頂點(diǎn)上。在該情況下，檢測(cè)穿過各個(gè)基準(zhǔn)點(diǎn)的兩條直線垂直相交的交點(diǎn)，檢測(cè)連結(jié)該交點(diǎn)和兩處的基準(zhǔn)點(diǎn)的兩條結(jié)線。而且，算出結(jié)線的長(zhǎng)度，通過以預(yù)先確定的個(gè)數(shù)(四角形的外周上的點(diǎn)數(shù)-I)分割該距離，求出結(jié)線上的各點(diǎn)間隔，能夠由該點(diǎn)間隔檢測(cè)各點(diǎn)位置。例如，假設(shè)使用點(diǎn)為4行X4列的微陣列。此時(shí)，結(jié)線上的點(diǎn)數(shù)為四點(diǎn)。若結(jié)線的長(zhǎng)度為900 iim，則900+(4-1) = 300，點(diǎn)間隔為300 y m。使用上述微陣列，能夠?qū)⒃诮Y(jié)線上從基準(zhǔn)點(diǎn)移動(dòng)300 y m的位置設(shè)定為點(diǎn)的中心，另外，在結(jié)線上從該中心移動(dòng)300 iim的位置為下一點(diǎn)的中心。構(gòu)成基準(zhǔn)線的兩處基準(zhǔn)點(diǎn)優(yōu)選存在于在微陣列上排列的點(diǎn)群中較遠(yuǎn)的位置。檢 測(cè)用點(diǎn)和基準(zhǔn)點(diǎn)配置成外周為四角形的格子形狀，優(yōu)選基準(zhǔn)點(diǎn)存在于四角形的不同的頂點(diǎn)上。作為用于測(cè)定檢測(cè)用點(diǎn)和基準(zhǔn)點(diǎn)上的熒光的檢測(cè)器，使用例如激光熒光顯微鏡、冷卻CCD相機(jī)及連結(jié)計(jì)算機(jī)的熒光掃描裝置，能夠自動(dòng)測(cè)定微陣列上的熒光強(qiáng)度。代替CCD相機(jī)也可以使用共聚焦型或非聚焦型的激光器。由此，得到圖像數(shù)據(jù)。由得到的數(shù)據(jù)能夠相對(duì)于固定于微陣列上的探針多核苷酸鑒定具有互補(bǔ)性的靶多核苷酸，據(jù)此，可制成基因表達(dá)譜，確定多核苷酸的堿基序列。用于本發(fā)明的微陣列在載體上固定有探針多核苷酸及探針多核苷酸混合物。作為載體的材料，能夠使用在該技術(shù)領(lǐng)域公知物質(zhì)，沒有特別限制。例如，可列舉鉬、鉬黑、金、鈀、銠、銀、水銀、鎢及它們的化合物等貴金屬，及石墨、碳纖維所代表的碳等導(dǎo)電材料；單晶硅、非晶硅、碳化硅、氧化硅、氮化硅等所代表的硅材料，SOI (絕緣體上硅)等所代表的這些硅材料的復(fù)合材料；玻璃、石英玻璃、氧化鋁、藍(lán)寶石、陶瓷、鎂橄欖石、感光性玻璃等無機(jī)材料；聚乙烯、乙烯、聚丙烯、環(huán)狀聚烯烴、聚異丁烯、聚對(duì)苯二甲酸乙二酯、不飽和聚酯、含氟樹脂、聚氯乙烯、聚偏二氯乙烯、聚醋酸乙烯酯、聚乙烯醇、聚乙烯醇縮醛、丙烯酸樹脂、聚丙烯腈、聚苯乙烯、縮醛樹脂、聚碳酸酯、聚酰胺、酚醛樹脂、脲醛樹脂、環(huán)氧樹脂、密胺樹脂、苯乙烯-丙烯腈共聚物、丙烯腈-丁二烯-苯乙烯共聚物、聚苯醚及聚砜等有機(jī)材料等。雖然載體的形狀也沒有特別限制，但優(yōu)選為平板狀。作為載體，優(yōu)選使用在表面具有碳層和化學(xué)修飾基團(tuán)的載體。在表面具有碳層和化學(xué)修飾基團(tuán)的載體包含在基質(zhì)的表面具有碳層和化學(xué)修飾基團(tuán)的物質(zhì)，及在由碳層構(gòu)成的基質(zhì)的表面上具有化學(xué)修飾基團(tuán)的物質(zhì)。作為基質(zhì)的材料，能夠使用在該技術(shù)領(lǐng)域公知的物質(zhì)，沒有特別限制，能夠使用與作為上述的載體材料列舉的物質(zhì)一樣的物質(zhì)。優(yōu)選使用具有微細(xì)的平板狀構(gòu)造的載體。雖然形狀不限于長(zhǎng)方形、正方形及圓形等，但通常使用I 75mm四方的形狀,優(yōu)選使用I IOmm四方的形狀,更優(yōu)選使用3 5mm四方的形狀。因?yàn)槿菀字圃煳⒓?xì)的平板狀構(gòu)造的載體，所以優(yōu)選使用由硅材料或樹脂材料構(gòu)成的基質(zhì)，特別優(yōu)選在由單晶硅構(gòu)成的基質(zhì)的表面具有碳層及化學(xué)修飾基團(tuán)的載體。在單晶硅中，也包含結(jié)晶軸的方向逐部分極小地變化的物質(zhì)(也有時(shí)稱為嵌鑲晶體)及含有原子尺度的混亂(晶格缺陷)的物質(zhì)。
作為基底上形成的碳層，雖然沒有特別限制，但優(yōu)選使用合成金剛石、高壓合成金剛石、天然金剛石、軟金剛石(例如，類金剛石碳)、無定形碳、碳系物質(zhì)(例如，石墨、富勒烯、碳納米管)中的任意種，或它們的混合物，或使它們層疊的物質(zhì)。另外，也可以使用碳化鉿、碳化鈮、碳化硅、碳化鉭、碳化釷、碳化鈦、碳化鈾、碳化鎢、碳化鋯、碳化鑰、碳化鉻、碳化鑰;等碳化物。在此，軟金剛石統(tǒng)稱為所謂的類金剛石碳(DLC :Diamond LikeCarbon)等,金剛石和碳的混合物即不完全金剛石構(gòu)造體，其混合比例沒有特別限定。碳層的形成能夠用公知的方法進(jìn)行。例如，可列舉微波等離子體CVD(Chemicalvapor deposit)法、ECRCVD(Electric cyclotron resonance chemical vapor deposit)法、ICP(Inductive coupled plasma)法、直流灘身寸法、ECR(Electric cyclotronresonance)派射法、離子蒸氣沉積法、電弧蒸鍍法、激光蒸鍍法、EB(Electron beam)蒸鍍法、電阻加熱蒸鍍法等。在基質(zhì)的表面形成碳層的情況下，碳層的厚度通常為單分子層 100 Pm左右，若過薄則底層基質(zhì)的表面可能會(huì)局部露出，相反若變厚則生產(chǎn)性變差，因此，優(yōu)選2nm Ium,更優(yōu)選 5nm 500nm。 通過在形成有碳層的基質(zhì)的表面導(dǎo)入化學(xué)修飾基團(tuán)，能夠?qū)⒐押塑账崽结樌喂痰毓潭ㄓ谳d體上。只要是本領(lǐng)域的技術(shù)人員就能夠適當(dāng)選擇導(dǎo)入的化學(xué)修飾基團(tuán)，沒有特別限制，例如，可列舉氨基、羧基、環(huán)氧基、甲?；?、羥基及活性酯基。氨基的導(dǎo)入例如能夠通過在氨氣中對(duì)碳層照射紫外線或等離子體處理碳層來實(shí)施?；颍诼葰庵姓丈渥贤饩€氯化碳層，進(jìn)一步在氨氣中通過紫外線照射進(jìn)行實(shí)施?；颍材芡ㄟ^使亞甲基二氨、乙二胺等多元氨類氣體與氯化的碳層反應(yīng)實(shí)施。羧基的導(dǎo)入例如能夠通過如上所述使氨化的碳層與適當(dāng)?shù)幕衔锓磻?yīng)來實(shí)施。作為用于導(dǎo)入羧基的化合物，例如，可列舉由式A-Ri-COOIK式中，X表示鹵原子，R1表示碳數(shù)10 12的二價(jià)的烴基)所表示的鹵代羧酸，例如氯乙酸、氟乙酸、溴乙酸、碘乙酸、2-氯丙酸、3-氯丙酸、3-氯丙烯酸、4-氯苯甲酸；由式H00C-R2-C00H(式中，R2表示單鍵或碳數(shù)I 12的二價(jià)的烴基)所表示的二羧酸，例如草酸、丙二酸、丁二酸、馬來酸、富馬酸、鄰苯二甲酸、聚丙烯酸；聚甲基丙烯酸、偏苯三酸、丁烷四羧酸等多元羧酸；由式r3-co-r4-cooh(式中，R3表示氫原子或碳數(shù)I 12的二價(jià)的烴基，R4表示碳數(shù)I 12的二價(jià)的烴基)所表示的酮酸或醛酸；由式X-0C-R5-C00H(式中，X表示鹵原子，R5表示單鍵或碳數(shù)I 12的二價(jià)的烴基。)所表示的二羧酸的一鹵化物，例如一氯化丁二酸、一氯化丙二酸；鄰苯二甲酸酐、丁二酸酐、草酸酐、馬來酸酐、丁烷四羧酸酐等酸酐。環(huán)氧基的導(dǎo)入例如能夠通過如上所述使氨化的碳層與適當(dāng)?shù)亩嘣h(huán)氧化合物反應(yīng)來實(shí)施?；蛘?，能夠通過使碳層含有的碳碳雙鍵與有機(jī)過酸反應(yīng)得到。作為有機(jī)過酸，可列舉過氧乙酸、過氧苯甲酸、過氧鄰苯二甲酸、過氧蟻酸、三氟過氧乙酸等。甲?；膶?dǎo)入例如能夠通過如上所述使氨化的碳層與戊二醛反應(yīng)來實(shí)施。羥基的導(dǎo)入例如能夠通過如上所述使氯化的碳層與水反應(yīng)來實(shí)施?；钚怎セ侵冈邗セ拇紓?cè)具有酸度高的吸電子基團(tuán)活化親核反應(yīng)的酯基，即反應(yīng)活性高的酯基。該酯基在酯基的醇側(cè)具有吸電子基團(tuán)，比烷基酯活性更高?；钚怎セ哂邢鄬?duì)于氨基、硫醇基、氫氧基等基團(tuán)的反應(yīng)性。更具體而言，苯酚酯類、苯硫酚酯類、N-羥基胺基酯類、氰基甲酯、雜環(huán)羥基化合物的酯類等以具有遠(yuǎn)高于烷基酯等的活性的活性酯基被熟知。更具體而言，作為活性酯基，例如，可舉出對(duì)硝基苯基、N-羥基琥珀酰亞胺基、琥珀酰亞胺基、鄰苯二甲酰亞胺基、5-降冰片烯-2，3-二甲酰亞胺基等，特別優(yōu)選使用N-羥基琥珀酰亞胺基?；钚怎セ膶?dǎo)入例如能夠通過如上所述用氰胺或碳二亞胺(例如，1-[3_( 二甲基氨基)丙基]-3-乙基碳二亞胺)等脫水縮合劑和N-羥基琥珀酰亞胺等化合物活性酯化導(dǎo)入的羧基來實(shí)施。通過該處理，經(jīng)由酰胺鍵在烴基的末端能夠形成N-羥基琥珀酰亞胺基等活性酯基鍵合的基團(tuán)(日本特開2001-139532)。

將探針多核苷酸及探針多核苷酸混合物分別溶解在點(diǎn)化用緩沖劑中制備點(diǎn)化用溶液，將其分注到96孔或384孔的塑料板上，將分注的溶液通過點(diǎn)焊裝置等點(diǎn)化在載體上，從而能夠制造微陣列。或，也可以將點(diǎn)化溶液用微吸液管進(jìn)行手動(dòng)點(diǎn)化。點(diǎn)化后，使探針多核苷酸及探針多核苷酸混合物結(jié)合在載體上進(jìn)行反應(yīng)，優(yōu)選進(jìn)行溫育。溫育通常在-20 100°C,優(yōu)選0 90°C的溫度下,通常用0. 5 16小時(shí),優(yōu)選I 2小時(shí)進(jìn)行。溫育優(yōu)選在高濕度的氣氛，例如，濕度50 90%的條件下進(jìn)行。溫育后，為了除去未結(jié)合在載體上的DNA，因此，優(yōu)選使用清洗液(例如，50mM TBS/0. 05%Tween20,2XSSC/0. 2% SDS溶液、超純水等)進(jìn)行清洗。在本發(fā)明的一實(shí)施方式中，優(yōu)選在通過清洗微陣列，除去未反應(yīng)的靶多核苷酸的工序之后，在實(shí)際的測(cè)定，即測(cè)定固定有探針多核苷酸的各檢測(cè)用點(diǎn)上的熒光之前，進(jìn)一步實(shí)施以下的工序。下述工序可以在測(cè)定基準(zhǔn)點(diǎn)上的熒光之前實(shí)施，也可以在之后實(shí)施。包括分別測(cè)定多個(gè)點(diǎn)的距點(diǎn)的中心有一定距離的位置的亮度，得到多個(gè)背景值的工序，算出代表得到的多個(gè)背景值的背景代表值的工序，及對(duì)于所有的點(diǎn)或?qū)τ跍y(cè)定背景值的所有的點(diǎn)，分別算出背景值和背景代表值的差，在存在具有規(guī)定值以上的差的點(diǎn)的情況下判斷為不可測(cè)定的工序。在此，點(diǎn)包含檢測(cè)用點(diǎn)和基準(zhǔn)點(diǎn)雙方。作為得到背景值的多個(gè)點(diǎn)，優(yōu)選測(cè)定排列配置于微陣列上的點(diǎn)中至少形成外周的所有的點(diǎn)的背景值。另外，雖然不需要對(duì)所有的點(diǎn)的背景值進(jìn)行測(cè)定，但也可以對(duì)所有的點(diǎn)的背景值進(jìn)行測(cè)定。測(cè)定背景值的多個(gè)點(diǎn)例如在檢測(cè)用點(diǎn)和基準(zhǔn)點(diǎn)配置成外周為四角形的格子形狀的情況下，通常為四角形的至少兩個(gè)頂點(diǎn)，優(yōu)選四角形的至少四個(gè)頂點(diǎn)，更優(yōu)選最外周的所有點(diǎn)。更具體而言，為16行X16列的點(diǎn)時(shí)的最外周的60點(diǎn)，或?yàn)?6行X 16列的點(diǎn)時(shí)的所有點(diǎn)即256點(diǎn)。測(cè)定距點(diǎn)的中心一定范圍的每個(gè)位置的亮度并作為背景值時(shí)，距中心一定的范圍基于點(diǎn)的大小和點(diǎn)間隔等適當(dāng)設(shè)定。例如，能夠設(shè)定在距點(diǎn)的中心一定距離以上，將點(diǎn)間隔長(zhǎng)作為一邊、將點(diǎn)的中心位置作為中心的四角形的范圍內(nèi)。例如,在距點(diǎn)中心70iim以上，一邊為1000 Pm的四角形的范圍內(nèi)，優(yōu)選在距點(diǎn)中心70 m以上，一邊為380 y m的四角形的范圍內(nèi)。另外，可以將測(cè)定的一定范圍的位置的所有點(diǎn)或一部分點(diǎn)的亮度的平均值作為背景值，也可以僅測(cè)定一定范圍的位置的一點(diǎn)的亮度并將其作為背景值。點(diǎn)的中心的定位方法沒有特別限制，例如，能夠設(shè)定檢測(cè)各點(diǎn)中具有規(guī)定熒光強(qiáng)度(例如，3000以上)的部分的中心。或者，也可以將連結(jié)兩處的基準(zhǔn)點(diǎn)的中心的線作為基準(zhǔn)線，由距基準(zhǔn)點(diǎn)的距離及與基準(zhǔn)線的角度，以及點(diǎn)間距等確定各點(diǎn)的中心位置。背景代表值雖然只要是代表測(cè)定的多個(gè)背景值的值就沒有特別限制，但優(yōu)選多個(gè)背景值的平均值或中間值。分別算出對(duì)于所有的點(diǎn)或?qū)τ跍y(cè)定背景值的所有的點(diǎn)的背景值和背景代表值的差，在存在具有規(guī)定值以上的差的點(diǎn)的情況下，能夠判定在點(diǎn)周圍的背景值中偏差較大，因此，能夠判定為由該微陣列清洗不充分、可靠性欠缺引起的不可測(cè)定。在此，規(guī)定值由于條件等而不同，例如，在圖像的顯示為16位灰度時(shí)能夠設(shè)定為1000以上。圖像的顯示為例如8位灰度時(shí)，能夠設(shè)定比50還小的值。在本發(fā)明的另一實(shí)施方式中，優(yōu)選在通過清洗微陣列除去未反應(yīng)的靶多核苷酸的工序之后，在實(shí)際的測(cè)定，即測(cè)定固定有探針多核苷酸的各檢測(cè)用點(diǎn)上的熒光之前，進(jìn)一步實(shí)施以下的工序。下述工序可以在測(cè)定基準(zhǔn)點(diǎn)上的熒光之前實(shí)施，也可以在之后實(shí)施。包括分別測(cè)定多個(gè)點(diǎn)的距點(diǎn)的中心一定距離的位置的亮度，得到多個(gè)背景值的
工序，計(jì)算多個(gè)背景值的平均值或中間值作為背景代表值的工序， 在背景代表值為規(guī)定值以上的情況下判斷為不可測(cè)定的工序。在此，點(diǎn)中包含檢測(cè)用點(diǎn)和基準(zhǔn)點(diǎn)雙方。作為得到背景值的多個(gè)點(diǎn)，優(yōu)選測(cè)定排列配置于微陣列上的點(diǎn)中至少形成外周的所有的點(diǎn)的背景值。另外，雖然不需要對(duì)所有的點(diǎn)的背景值進(jìn)行測(cè)定，但也可以對(duì)所有的點(diǎn)的背景值進(jìn)行測(cè)定。測(cè)定背景值的多個(gè)點(diǎn)例如在檢測(cè)用點(diǎn)和基準(zhǔn)點(diǎn)配置成外周為四角形的格子形狀的情況下，通常為四角形的至少兩個(gè)頂點(diǎn)，優(yōu)選四角形的至少四個(gè)頂點(diǎn)，更優(yōu)選最外周的所有點(diǎn)。更具體而言，為16行X16列的點(diǎn)時(shí)的最外周的60點(diǎn)，或?yàn)?6行X 16列的點(diǎn)時(shí)的所有點(diǎn)即256點(diǎn)。關(guān)于距點(diǎn)的中心一定的距離，及中心的確定方法，如上所述。在多個(gè)背景值的平均值或中間值即背景代表值為規(guī)定值以上的情況下，能夠判定點(diǎn)周圍的背景值整體較大，因此，能夠判定為由該微陣列清洗不充分，可靠性欠缺引起的不可測(cè)定。在此，規(guī)定值由于條件等而不同，例如，在16位時(shí)能夠設(shè)定為1000以上。本發(fā)明另外涉及一種用于如上所述的探針多核苷酸和靶多核苷酸的雜交的檢測(cè)的試劑盒。本發(fā)明的試劑盒包含具有分別添加多種探針多核苷酸的多個(gè)固定的檢測(cè)用點(diǎn)，及一處以上的固定有兩種以上固定于檢測(cè)用點(diǎn)上的探針多核苷酸的基準(zhǔn)點(diǎn)的微陣列，以及與固定于檢測(cè)用點(diǎn)上的探針多核苷酸中的任意種雜交的熒光標(biāo)記的標(biāo)志多核苷酸。探針多核苷酸、靶多核苷酸、探針多核苷酸混合物、微陣列、及標(biāo)志多核苷酸等如上所述。本發(fā)明的試劑盒還可以包含雜交緩沖液、清洗緩沖液、微孔板、尼龍膜等。下面，雖然使用實(shí)施例更詳細(xì)地說明本發(fā)明，但本發(fā)明的技術(shù)范圍不限于以下的實(shí)施例。實(shí)施例實(shí)施例I載體的制備在3_角的硅基質(zhì)上使用離子蒸氣沉積法，以下述條件制備兩層膜的DLC層。表I
權(quán)利要求
1.ー種使用微陣列檢測(cè)探針多核苷酸和靶多核苷酸的雜交的方法，包含 1)使具有分別添加多種探針多核苷酸的多個(gè)固定的檢測(cè)用點(diǎn)、及ー處以上的固定有兩種以上固定于檢測(cè)用點(diǎn)上的探針多核苷酸的基準(zhǔn)點(diǎn)的微陣列與熒光標(biāo)記的靶多核苷酸接觸的エ序； 2)通過清洗微陣列除去未反應(yīng)的靶多核苷酸的エ序； 3)測(cè)定基準(zhǔn)點(diǎn)上的熒光，若滿足規(guī)定值則判斷為可測(cè)定的エ序；及 4)若判斷為可測(cè)定，則測(cè)定固定有探針多核苷酸的各檢測(cè)用點(diǎn)上的熒光的エ序。
2.如權(quán)利要求I所述的方法，在基準(zhǔn)點(diǎn)上固定有各類固定于檢測(cè)用點(diǎn)上的探針多核苷酸。
3.如權(quán)利要求I或2所述的方法，與微陣列接觸的靶多核苷酸必須包含與固定于基準(zhǔn)點(diǎn)上的探針多核苷酸雜交的多核苷酸。
4.如權(quán)利要求I 3中任一項(xiàng)所述的方法，在微陣列中，排列配置有檢測(cè)用點(diǎn)和基準(zhǔn)點(diǎn)，基準(zhǔn)點(diǎn)至少存在兩處，將連結(jié)任意兩處的基準(zhǔn)點(diǎn)的線作為基準(zhǔn)線，基于距基準(zhǔn)點(diǎn)的距離和與基準(zhǔn)線的角度檢測(cè)檢測(cè)用點(diǎn)的位置。
5.如權(quán)利要求4所述的方法，檢測(cè)用點(diǎn)和基準(zhǔn)點(diǎn)配置成外周為四角形的格子形狀，在四角形的不同的頂點(diǎn)上存在基準(zhǔn)點(diǎn)。
6.如權(quán)利要求I 5中任一項(xiàng)所述的方法，在微陣列中，檢測(cè)用點(diǎn)和基準(zhǔn)點(diǎn)排列配置成外周為正方形或長(zhǎng)方形的格子形狀，在其對(duì)角線上的頂點(diǎn)上存在兩處基準(zhǔn)點(diǎn)， 檢測(cè)穿過各基準(zhǔn)點(diǎn)的兩條直線垂直相交的交點(diǎn)， 檢測(cè)連結(jié)所述交點(diǎn)和各基準(zhǔn)點(diǎn)的兩條結(jié)線的長(zhǎng)度， 由所述結(jié)線的長(zhǎng)度和點(diǎn)數(shù)檢測(cè)結(jié)線上的各檢測(cè)用點(diǎn)位置。
7.如權(quán)利要求I 6中任一項(xiàng)所述的方法，標(biāo)志多核苷酸與固定于檢測(cè)用點(diǎn)上的探針多核苷酸中的任意種和互補(bǔ)的多核苷酸具有95%以上的同源性。
8.ー種試劑盒，其用于檢測(cè)探針多核苷酸和靶多核苷酸的雜交，包含 具有分別添加多種探針多核苷酸的多個(gè)固定的檢測(cè)用點(diǎn)，及ー處以上的固定有兩種以上固定于檢測(cè)用點(diǎn)上的探針多核苷酸的基準(zhǔn)點(diǎn)的微陣列，以及與固定于檢測(cè)用點(diǎn)上的探針多核苷酸中的任意種雜交的突光標(biāo)記的標(biāo)志多核苷酸。
9.如權(quán)利要求8所述的試劑盒，在基準(zhǔn)點(diǎn)上固定有各類固定于檢測(cè)用點(diǎn)上的探針多核苷酸。
全文摘要
本發(fā)明的目的在于提供一種客觀地判定每個(gè)微陣列的性能退化或清洗不充分等以及雜交失敗的方法，具體而言，涉及一種使用微陣列檢測(cè)探針多核苷酸和靶多核苷酸的雜交的方法，包含1)使具有分別添加多種探針多核苷酸的多個(gè)固定的檢測(cè)用點(diǎn)、及一處以上的固定有兩種以上固定于檢測(cè)用點(diǎn)上的探針多核苷酸的基準(zhǔn)點(diǎn)的微陣列與熒光標(biāo)記的靶多核苷酸接觸的工序，2)通過清洗微陣列除去未反應(yīng)的靶多核苷酸的工序，3)測(cè)定基準(zhǔn)點(diǎn)上的熒光，若滿足規(guī)定值則判斷為可測(cè)定的工序，及4)若判斷為可測(cè)定，則測(cè)定固定有探針多核苷酸的各檢測(cè)用點(diǎn)上的熒光的工序。
文檔編號(hào)C12N15/09GK102686746SQ201080059469
公開日2012年9月19日 申請(qǐng)日期2010年12月13日 優(yōu)先權(quán)日2010年1月4日
發(fā)明者伊藤茜, 山野博文, 平山幸一 申請(qǐng)人:東洋鋼鈑株式會(huì)社