專利名稱：利用蘋果酸鈉提高次黃嘌呤核苷產(chǎn)率的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于一種食品和醫(yī)療產(chǎn)品重要的中間體次黃嘌呤核苷的生產(chǎn)方法。
背景技術(shù)：
次黃嘌呤核苷又名次黃嘌呤肌苷，英文名稱hosine，簡(jiǎn)稱IR。次黃嘌呤核苷為白色結(jié)晶性粉末或類白色結(jié)晶性粉末，無臭；味微苦；在水中略溶，在氯仿、乙醇中不溶，在稀鹽酸或氫氧化鈉等堿溶液中易溶。分子式=CltlH12N4O5,分子量』68· 23。次黃嘌呤核苷的用途十分廣泛，是食品和醫(yī)藥產(chǎn)品的重要中間體。在醫(yī)藥工業(yè)領(lǐng)域，肌苷可以直接透過細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)參與人體代謝，促進(jìn)體內(nèi)能量代謝和蛋白質(zhì)合成， 提高丙酮酸氧化酶活力，使低能、缺氧狀態(tài)細(xì)胞的腺三磷水平提高。在醫(yī)療上廣泛用于治療心臟病、肝病及由放射線和抗癌藥物所引起的白血球減少癥、血小板減少癥、視神經(jīng)萎縮、 中心性視網(wǎng)膜炎、并能預(yù)防和解除由血防藥物引起的對(duì)心臟或肝臟的副作用；另外還是作為合成利巴韋林、阿昔洛韋等核苷類抗病毒藥物的重要中間體；在食品工業(yè)領(lǐng)域，次黃嘌呤核苷是作為呈味核苷酸肌苷酸二鈉的主要原料，與鳥苷酸二鈉混合簡(jiǎn)稱I+G，添加到味精中即是第二代、第三代味精，具有十分廣闊的市場(chǎng)。目前，I+G需求量以每年10%-20%的速度增加。次黃嘌呤核苷的生產(chǎn)方法有化學(xué)合成法、菌體自溶法、發(fā)酵法。由于化學(xué)合成法需要大量有機(jī)溶劑，存在原料來源及環(huán)境污染等問題在生產(chǎn)中極少使用；菌體自溶法由于其效率太低目前也基本不用；發(fā)酵法生產(chǎn)次黃嘌呤核苷由于其產(chǎn)率高、周期短、控制容易等優(yōu)點(diǎn)，目前已經(jīng)成為工業(yè)化生產(chǎn)次黃嘌呤核苷的重要方法。以枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)為發(fā)酵菌種制備核苷具有產(chǎn)量高、產(chǎn)物中副產(chǎn)物少、便于產(chǎn)物分離提取等優(yōu)點(diǎn)， 因而，枯草芽孢桿菌成為核苷發(fā)酵工業(yè)最重要的生產(chǎn)菌。20世紀(jì)30年代日本就大規(guī)模開展了發(fā)酵法生產(chǎn)次黃嘌呤核苷研究，主要側(cè)重于傳統(tǒng)的誘變育種技術(shù)改變菌種特性，提高次黃嘌呤核苷產(chǎn)量，最高達(dá)30g/L，而且近幾年對(duì)次黃嘌呤核苷發(fā)酵研究較少。而我國對(duì)肌苷系列的化合物的研究始于70年代，隨著核苷市場(chǎng)需求激增，越來越多的科研機(jī)構(gòu)對(duì)次黃嘌呤核苷發(fā)酵進(jìn)行了全面深入的研究。據(jù)調(diào)查顯示，目前國內(nèi)次黃嘌呤核苷發(fā)酵水平與世界先進(jìn)水平有較大差距。主要原因是育種技術(shù)落后，菌種產(chǎn)苷水平不高；發(fā)酵周期長、轉(zhuǎn)化率及提取綜合收率低。因此，開發(fā)高產(chǎn)肌苷生產(chǎn)菌和優(yōu)化控制發(fā)酵條件是十分必要的。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)上述同類技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的是利用蘋果酸鈉提高枯草芽孢桿菌發(fā)酵生產(chǎn)次黃嘌呤核苷產(chǎn)率的方法。本發(fā)明的具體生產(chǎn)方法是1、搖瓶液體菌種培養(yǎng)①選用枯草芽孢菌Bacillus subtilis⑶IR-1005為保藏菌種；②將葡萄糖、磷酸氫二鉀、硫酸鎂、蘋果酸鈉、酵母粉、瓊脂、水按比例配制成初級(jí)菌種培養(yǎng)基并裝入茄瓶；③在初級(jí)菌種培養(yǎng)基中接入步驟①所述的保藏菌種，靜置培養(yǎng)后獲得初級(jí)菌種；④將初級(jí)菌種接入搖瓶培養(yǎng)基中，并在往復(fù)式搖床上培養(yǎng)，獲得搖瓶液體菌種。2、高產(chǎn)率次黃嘌呤核苷發(fā)酵液制?、賹⑵咸烟?、磷酸氫二鉀、硫酸鎂、蘋果酸鈉、酵母粉水按比例配制成二級(jí)菌種培養(yǎng)基，蒸汽滅菌后泵入二級(jí)種子罐，降溫后接入上述搖瓶液體菌種，并將經(jīng)壓縮、過濾的無菌空氣輸入二級(jí)種子罐，培養(yǎng)后獲得二級(jí)菌種；②將葡萄糖、磷酸氫二鉀、硫酸鎂、蘋果酸鈉、酵母粉、水按比例配制成發(fā)酵培養(yǎng)基，蒸汽滅菌后泵入發(fā)酵罐，然后接入二級(jí)菌種，并將蒸汽滅菌、降溫后的葡萄糖與蘋果酸鈉液，在無菌、保壓空氣的情況下進(jìn)行流加培養(yǎng)后，獲得高產(chǎn)率次黃嘌呤核苷發(fā)酵液。所述制初級(jí)菌種培養(yǎng)基的原料重量百分比為葡萄糖磷酸氫二鉀硫酸鎂蘋果酸鈉酵母粉瓊脂水=士0. 5% 0. 2% 士0. 2% 0. 士0. 0.2% 士 0.2% 2% 士 2% 2% 士 2% 94. 5% 士 5%。所配搖瓶菌種培養(yǎng)基的原料重量百分比為葡萄糖磷酸氫二鉀硫酸鎂 蘋果酸鈉酵母粉水=3% 士0.5% 0.2% 士0.2% 0. 1 % 士0. 1 % 0.2% 士 0.2% 1. 5% 士 1.5% 95% 士 2.5%。所述二級(jí)菌種培養(yǎng)基的原料重量百分比為葡萄糖磷酸氫二鉀硫酸鎂蘋果酸鈉酵母粉水=5% 士 0. 2% 士0. 2% 0. 1% 士0. 1% 0. 2% 士0. 2% 1. 5% 士 1. 5% 93. 5% 士2. 5%。所述發(fā)酵培養(yǎng)基的原料重量百分比為葡萄糖磷酸氫二鉀硫酸鎂蘋果酸鈉酵母粉水=15% 士3% 0. 2% 士0. 2% 0. 士0. 0. 士0. 0. 8% 士0. 8% 83. 8% 士4. 2%。以50 70g/dL葡萄糖液與重量百分比0. 1 0. 2%蘋果酸鈉的量對(duì)發(fā)酵液進(jìn)行連續(xù)流加。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是①保藏菌種GDIR-1005遺傳穩(wěn)定，菌種同步生產(chǎn)率高，產(chǎn)苷水平高；②采用發(fā)酵培養(yǎng)基添加蘋果酸鈉技術(shù)，提高枯草芽孢桿菌生物合成次黃嘌呤核苷的產(chǎn)率達(dá)到58. 2g/L，③采用連續(xù)流加葡萄糖和蘋果酸鈉的技術(shù)，提高次黃嘌呤核苷對(duì)葡萄糖的轉(zhuǎn)化率達(dá)到43.6%。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明的具體生產(chǎn)方法是1、搖瓶液體菌種培養(yǎng)①選用枯草芽孢菌⑶IR-1005為保藏菌種；②將葡萄糖磷酸氫二鉀硫酸鎂蘋果酸鈉酵母粉瓊脂水按 1% 0. 2% 0. 1% 0. 2% 2% 2% 94. 5%的重量百分比，配制成初級(jí)菌種培養(yǎng)基并裝入茄瓶；③將步驟②中的初級(jí)培養(yǎng)基接入保藏菌種，接種量為0. 1%，在溫度37士0. 5°C條件下靜置培養(yǎng)20h 士池后獲得初級(jí)菌種；④將步驟③得到的初級(jí)菌種，放入按葡萄糖磷酸氫二鉀硫酸鎂蘋果酸鈉酵母粉水=3%% 0. 2%% 0. 1%% 0. 2%% 1. 5%% 95%%重量百分比配制成的搖瓶培養(yǎng)基中，并在往復(fù)式搖床上培養(yǎng)，160士 10轉(zhuǎn)/分，溫度37°C 士0. 5°C，時(shí)間周期 10 12h，當(dāng)菌種鏡檢及OD等各項(xiàng)指標(biāo)達(dá)標(biāo)后即獲得搖瓶液體菌種。2、高產(chǎn)率次黃嘌呤核苷發(fā)酵液制取①將葡萄糖、磷酸氫二鉀、硫酸鎂、蘋果酸鈉、酵母粉、水按 5% 0.2% 0. 1% 0.2% 1.0% 93. 5%的重量百分比配制成二級(jí)菌種培養(yǎng)基，并經(jīng) 121°C 士 l°C、15min士 Imin蒸汽滅菌后泵入二級(jí)種子罐，后降溫至37°C 士0. 5°C接入搖瓶菌種，接種量為0. 士0.02% ；同時(shí)將經(jīng)過0. 25 0. 3Mpa壓縮、過濾后的無菌空氣輸入二級(jí)種子罐；此時(shí)通風(fēng)比1 0. 2 0. 4v/V. min, pH6 8，壓力0. 03 0. IMPa，培養(yǎng)IOh 12h，經(jīng)菌種鏡檢及OD等各項(xiàng)指標(biāo)達(dá)標(biāo)后即獲得二級(jí)菌種；②將葡萄糖、磷酸氫二鉀、硫酸鎂、蘋果酸鈉、酵母粉、水按 15% 0. 2% 0. 1% 0. 1% 0. 8% 83. 8%的重量百分比配制成發(fā)酵培養(yǎng)基， 經(jīng)121°C 士 l°C、15min 士 Imin蒸汽滅菌后泵入發(fā)酵罐，后降溫至37°C 士 0. 5°C接入二級(jí)菌種，接種量為10% 士0.5% ；同時(shí)在上述步驟①中保壓、無菌空氣輸入的條件下，將經(jīng) 120士 l°C、8min蒸汽滅菌后50 70g/dL的葡萄糖液與0. 2% 士0. 02%蘋果酸鈉同時(shí)進(jìn)行連續(xù)流加；此時(shí)通風(fēng)比為1 0. 3 0. 6v/V. min, pH 6 8，壓力0. 04MPa 0. IMPa，發(fā)酵 50h 60h進(jìn)行培養(yǎng)；當(dāng)產(chǎn)苷達(dá)到55士2g/L時(shí)，即獲得次黃嘌呤核苷發(fā)酵液。實(shí)例1 1、取葡萄糖lg，磷酸氫二鉀0. 2g，硫酸鎂0. Ig,蘋果酸鈉0. 2g，酵母粉2g，瓊脂 2g，水94. 5g配制成初級(jí)菌種培養(yǎng)基并裝入茄瓶，經(jīng)121°C，22min蒸汽滅菌后，靜置冷卻至 37°C，接入保藏菌種，37°C無菌狀態(tài)下靜置培養(yǎng)20小時(shí)，得到初級(jí)菌種。2、取葡萄糖36g，磷酸氫二鉀2. 4g，硫酸鎂1. 2g，蘋果酸鈉2. 4g，酵母粉18g，水 1140. Og配制成搖瓶菌種培養(yǎng)基，裝入搖瓶經(jīng)121°C，20min蒸汽滅菌后，冷卻至37°C，接入上步得到的初級(jí)菌種培養(yǎng)基液，在往復(fù)式搖床上培養(yǎng)，接種量為0. 1%，轉(zhuǎn)速160轉(zhuǎn)/分，溫度36. 5°C，時(shí)間周期10h，獲搖瓶液體菌種。所得菌種鏡檢菌體均勻，粗壯，無污染，用752 分光光度計(jì)測(cè)量(量程10mm，波長600nm)得OD為0. 71。3、取葡萄糖^Kg,磷酸氫二鉀1. 4Kg，硫酸鎂0. 7Kg，蘋果酸鈉1. 4Kg，酵母粉7Kg， 水661.5Kg配制成二級(jí)菌種培養(yǎng)基，泵入二級(jí)種子罐，經(jīng)12rC、15min蒸汽滅菌后，無菌狀態(tài)降溫至37°C，接入搖瓶液體菌種。接種量為0. 1%，同時(shí)將經(jīng)過0. 25Mpa壓縮、過濾后的無菌空氣輸入二級(jí)種子罐；通風(fēng)量10 25m7h，pH6. 8 7. 2，二級(jí)種子罐壓力0. 05MPa，培養(yǎng)12h，獲得二級(jí)菌種。二級(jí)菌種鏡檢菌體均勻，粗壯，無污染，用752分光光度計(jì)測(cè)量(量程10mm，波長600nm)得 OD 為 0. 83。4、取葡萄糖1050Kg，磷酸氫二鉀14Kg，硫酸鎂7Kg，蘋果酸鈉7Kg，酵母粉56Kg， 水5866Kg配制成發(fā)酵培養(yǎng)基，泵入發(fā)酵罐，經(jīng)121°C、15min蒸汽滅菌后，無菌狀態(tài)降溫至 37 °C，接入二級(jí)液體菌種，接種量為0. 1 %，同時(shí)將經(jīng)過0. 25Mpa壓縮、過濾后的無菌空氣輸入發(fā)酵罐；通風(fēng)量80 420m3/h，pH6. 8 7. 2 (通入液氨控制PH值)，發(fā)酵罐壓力0. 05MPa, 將經(jīng)120°C、Smin蒸汽滅菌后的700L的500g/L的葡萄糖液與0. 1 %蘋果酸同時(shí)連續(xù)流加的方式加入發(fā)酵罐中，使發(fā)酵罐中葡萄糖液濃度始終保持在20-40g/L之間，流加結(jié)束后，葡萄糖濃度穩(wěn)步下降到0 0. 5g/L，發(fā)酵終止，發(fā)酵停止后得鳥嘌呤核苷發(fā)酵液8500L，發(fā)酵55h，產(chǎn)酸達(dá)到58. 2g/L、轉(zhuǎn)化率43. 6%0實(shí)例2 1、取葡萄糖lg，磷酸氫二鉀0. 2g，硫酸鎂0. Ig,蘋果酸鈉0. Og,酵母粉2g，瓊脂 2g，水94. 7g配制成初級(jí)菌種培養(yǎng)基，裝入茄瓶經(jīng)121 °C，22min蒸汽滅菌后，靜置冷卻至 37°C，接入保藏菌種，37°C無菌狀態(tài)下靜置培養(yǎng)20小時(shí)，得到初級(jí)菌種。2、取葡萄糖36g，磷酸氫二鉀2. 4g，硫酸鎂1. 2g，蘋果酸鈉0. Og,酵母粉18g，水 1142. 4g配制成搖瓶菌種培養(yǎng)基，裝入搖瓶經(jīng)121°C，20min蒸汽滅菌后，冷卻至37°C，接入上步得到的初級(jí)菌種培養(yǎng)基液，在往復(fù)式搖床上培養(yǎng)，接種量為0. 1%，轉(zhuǎn)速160轉(zhuǎn)/分，溫度36. 5°C，時(shí)間周期10h，獲搖瓶液體菌種。所得菌種鏡檢菌體均勻，粗壯，無污染，用752 分光光度計(jì)測(cè)量(量程10mm，波長600nm)得OD為0. 60。3、取葡萄糖^Kg,磷酸氫二鉀1. 4Kg，硫酸鎂0. 7Kg，蘋果酸鈉0. OKg，酵母粉7Kg， 水662. 9Kg配制成二級(jí)菌種培養(yǎng)基，泵入二級(jí)種子罐，經(jīng)121°C、15min蒸汽滅菌后，無菌狀態(tài)降溫至37°C，接入搖瓶液體菌種，接種量為0. 1%，同時(shí)將經(jīng)過0. 25Mpa壓縮、過濾后的無菌空氣輸入二級(jí)種子罐；通風(fēng)量10 25m3/h，pH6. 8 7. 2，二級(jí)種子罐壓力0. 05MPa，培養(yǎng) 14h，獲得二級(jí)菌種。二級(jí)菌種鏡檢菌體均勻，粗壯，無污染，用752分光光度計(jì)測(cè)量(量程 IOmm,波長600nm)得 OD 為 0. 75。4、取葡萄糖1050Kg，磷酸氫二鉀14Kg，硫酸鎂7Kg，蘋果酸鈉0. OKg，酵母粉56Kg， 水5873Kg配制成發(fā)酵培養(yǎng)基，泵入發(fā)酵罐，經(jīng)121°C、15min蒸汽滅菌后，無菌狀態(tài)降溫至 37 °C，接入二級(jí)液體菌種，接種量為0. 1%，同時(shí)將經(jīng)過0. 25Mpa壓縮、過濾后的無菌空氣輸入發(fā)酵罐；通風(fēng)量80 420m3/h，pH6. 8 7. 2 (通入液氨控制PH值)，發(fā)酵罐壓力0. 05MPa, 將經(jīng)120°C、Smin蒸汽滅菌后的650L的500g/L的葡萄糖液與0. 1 %蘋果酸同時(shí)連續(xù)流加的方式加入發(fā)酵罐中，使發(fā)酵罐中葡萄糖液濃度始終保持在20 40g/L之間，流加結(jié)束后，葡萄糖濃度穩(wěn)步下降到0 0. 5g/L，發(fā)酵終止，發(fā)酵停止后得鳥嘌呤核苷發(fā)酵液8500L，發(fā)酵 60h，產(chǎn)酸達(dá)到47. 3g/L、轉(zhuǎn)化率35. 16%。實(shí)例3 1、取葡萄糖lg，磷酸氫二鉀0. 2g，硫酸鎂0. Ig,蘋果酸鈉0. 4g，酵母粉2g，瓊脂 2g，水94. 3g配制成初級(jí)菌種培養(yǎng)基，裝入茄瓶經(jīng)121 °C，22min蒸汽滅菌后，靜置冷卻至 37°C，接入保藏菌種，37°C無菌狀態(tài)下靜置培養(yǎng)20小時(shí)，得到初級(jí)菌種。2、取葡萄糖36g，磷酸氫二鉀2. 4g，硫酸鎂1. 2g，蘋果酸鈉4. 8g，酵母粉18g，水 1137. 6g配制成搖瓶菌種培養(yǎng)基，裝入搖瓶經(jīng)121°C，20min蒸汽滅菌后，冷卻至37°C，接入上步得到的初級(jí)菌種培養(yǎng)基液，在往復(fù)式搖床上培養(yǎng)，接種量為0. 1%，轉(zhuǎn)速160轉(zhuǎn)/分，溫度36. 5°C，時(shí)間周期10h，獲搖瓶液體菌種。所得菌種鏡檢菌體均勻，粗壯，無污染，用752 分光光度計(jì)測(cè)量(量程10mm，波長600nm)得OD為0. 78。3、取葡萄糖^Kg,磷酸氫二鉀1. 4Kg，硫酸鎂0. 7Kg，蘋果酸鈉2. 8Kg，酵母粉7Kg， 水660. IKg配制成二級(jí)菌種培養(yǎng)基，泵入二級(jí)種子罐，經(jīng)12rC、15min蒸汽滅菌后，無菌狀態(tài)降溫至37°C，接入搖瓶液體菌種，接種量為0. 1%，同時(shí)將經(jīng)過0. 25Mpa壓縮、過濾后的無菌空氣輸入二級(jí)種子罐；通風(fēng)量10 25m3/h，pH6. 8 7. 2，二級(jí)種子罐壓力0. 05MPa，培養(yǎng) 10h，獲得二級(jí)菌種。二級(jí)菌種鏡檢菌體均勻，粗壯，無污染，用752分光光度計(jì)測(cè)量(量程 10mm,波長600nm)得 OD 為 0. 91。
4、取葡萄糖1050Kg，磷酸氫二鉀14Kg，硫酸鎂7Kg，蘋果酸鈉14Kg，酵母粉56Kg， 水5859Kg配制成發(fā)酵培養(yǎng)基，泵入發(fā)酵罐，經(jīng)121°C、15min蒸汽滅菌后，無菌狀態(tài)降溫至 37 °C，接入二級(jí)液體菌種，接種量為0. 1%，同時(shí)將經(jīng)過0. 25Mpa壓縮、過濾后的無菌空氣輸入發(fā)酵罐；通風(fēng)量80 420m3/h，pH6. 8 7. 2 (通入液氨控制PH值)，發(fā)酵罐壓力0. 05MPa, 將經(jīng)120°C、Smin蒸汽滅菌后的750L的500g/L的葡萄糖液與0. 1 %蘋果酸同時(shí)連續(xù)流加的方式加入發(fā)酵罐中，使發(fā)酵罐中葡萄糖液濃度始終保持在20 40g/L之間，流加結(jié)束后，葡萄糖濃度穩(wěn)步下降到0 0. 5g/L，發(fā)酵終止，發(fā)酵停止后得鳥嘌呤核苷發(fā)酵液9000L，發(fā)酵 52h，產(chǎn)酸達(dá)到44. lg/L、轉(zhuǎn)化率34. 4% ο
權(quán)利要求
1.利用蘋果酸鈉提高次黃嘌呤核苷產(chǎn)率的方法，其特征是在于如下所述(1)搖瓶液體菌種培養(yǎng)①選用枯草芽孢菌Bacillussubtilis⑶IR-1005為保藏菌種，②將葡萄糖、磷酸氫二鉀、硫酸鎂、蘋果酸鈉、酵母粉、瓊脂、水按重量百分比配制成初級(jí)菌種培養(yǎng)基并裝入茄瓶，③在初級(jí)菌種培養(yǎng)基中接入步驟(1)①所述的保藏菌種，靜置培養(yǎng)后獲得初級(jí)菌種，④將上述初級(jí)菌種接入搖瓶培養(yǎng)基中，并在往復(fù)式搖床上培養(yǎng)，獲得搖瓶液體菌種；(2)高產(chǎn)率次黃嘌呤核苷發(fā)酵液制?、賹⑵咸烟?、磷酸氫二鉀、硫酸鎂、蘋果酸鈉、酵母粉、水按重量百分比配制成二級(jí)菌種培養(yǎng)基，蒸汽滅菌后泵入二級(jí)種子罐，降溫后再接入步驟(1)④所述的搖瓶液體菌種，并將經(jīng)壓縮、過濾的無菌空氣輸入二級(jí)種子罐，培養(yǎng)后獲得二級(jí)菌種；②將葡萄糖、磷酸氫二鉀、硫酸鎂、蘋果酸鈉、酵母粉、水按重量百分比配制成發(fā)酵培養(yǎng)基，蒸汽滅菌后泵入發(fā)酵罐，降溫后再接入步驟( ①所述的二級(jí)菌種，并將經(jīng)蒸汽滅菌、 降溫后的葡萄糖與蘋果酸鈉液，在無菌、空氣保壓的情況下進(jìn)行連續(xù)流加培養(yǎng)，即可獲得高產(chǎn)率次黃嘌呤核苷發(fā)酵液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用蘋果酸鈉提高發(fā)酵生產(chǎn)肌苷產(chǎn)率的方法，其特征是初級(jí)菌種培養(yǎng)基的原料重量百分比為葡萄糖磷酸氫二鉀硫酸鎂蘋果酸鈉酵母粉瓊脂水=士0. 5% 0. 2% 士0. 2% 0. 士0. 0. 2% 士0. 2% 2% 士2% 2% 士2% 94. 5% 士5%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用蘋果酸鈉提高發(fā)酵生產(chǎn)肌苷產(chǎn)率的方法，其特征是搖瓶菌種培養(yǎng)基的原料重量百分比為葡萄糖磷酸氫二鉀硫酸鎂蘋果酸鈉酵母粉水 =3% 士0. 5% 0. 2% 士0. 2% 0. 士0. 0. 2% 士0. 2% 1. 5% 士 1. 5% 95% 士2. 5%。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用蘋果酸鈉提高發(fā)酵生產(chǎn)肌苷產(chǎn)率的方法，其特征是二級(jí)菌種培養(yǎng)基的原料重量百分比為葡萄糖磷酸氫二鉀硫酸鎂蘋果酸鈉酵母粉水 =5% 士 0. 2% 士0. 2% 0. 士0. 0. 2% 士0. 2% 1. 5% 士 1. 5% 93. 5% 士2. 5%。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用蘋果酸鈉提高發(fā)酵生產(chǎn)肌苷產(chǎn)率的方法，其特征是發(fā)酵培養(yǎng)基的原料重量百分比為葡萄糖磷酸氫二鉀硫酸鎂蘋果酸鈉酵母粉水= 15% 士3% 0. 2% 士0. 2% 0. 士0. 0. 士0. 0. 8% 士0. 8% 83. 8% 士4. 2%。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用蘋果酸鈉提高發(fā)酵生產(chǎn)肌苷產(chǎn)率的方法，其特征是以 50 70g/dL葡萄糖液與重量百分比0. 1 0. 2%蘋果酸鈉的量進(jìn)行連續(xù)流加。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種利用蘋果酸鈉提高次黃嘌呤核苷產(chǎn)率的方法，它由搖瓶液體菌種培養(yǎng)、肌苷發(fā)酵液制取兩大工藝過程組成。選用了遺傳穩(wěn)定的保藏菌種GDIR-1005，根據(jù)調(diào)整細(xì)胞代謝流分配的原理，在發(fā)酵過程中采用添加蘋果酸鈉和流加葡萄糖液、蘋果酸鈉的新工藝，有效提高肌苷發(fā)酵過程產(chǎn)率，克服了發(fā)酵培養(yǎng)基C∶N比例失調(diào)、菌種產(chǎn)苷不高、發(fā)酵周期長、轉(zhuǎn)化率低等不足。菌種同步生產(chǎn)率和產(chǎn)苷水平高，發(fā)酵產(chǎn)苷水平高，肌苷產(chǎn)率可達(dá)58g/L以上，轉(zhuǎn)化率43％以上，達(dá)到現(xiàn)有工藝的最高水平。
文檔編號(hào)C12R1/125GK102154414SQ20111006388
公開日2011年8月17日 申請(qǐng)日期2011年3月17日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月17日
發(fā)明者王健, 蔡傳康, 閆汝東 申請(qǐng)人:許昌瑞達(dá)生物科技有限公司