專利名稱：一種流式細(xì)胞電融合儀的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種流式細(xì)胞電融合儀，屬于生物醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
電融合技術(shù)是上世紀(jì)80年代建立起來的一種新型促融合技術(shù)。1981年Zimmerman 發(fā)明了電融合儀，并首次提出了電融合概念；1987年，Schweiger建立了單對(duì)原生質(zhì)體電融合技術(shù)程序。其基本原理是將兩種細(xì)胞的混合液置于低壓交流電場中，使細(xì)胞聚集成串珠狀，然后施加高壓電脈沖，以促使細(xì)胞融合。細(xì)胞融合的主要目的是研究異種細(xì)胞融合后基因重組的影響因素，產(chǎn)生雜交瘤細(xì)胞，以及植物和微生物細(xì)胞雜交育種等。通過幾十年的發(fā)展，電融合技術(shù)已經(jīng)日臻成熟，它的許多優(yōu)點(diǎn)也越來越得到顯現(xiàn)，表現(xiàn)在如下幾個(gè)方面(1) 誘導(dǎo)細(xì)胞融合的頻率是所有融合方法中最高的，比傳統(tǒng)方法高出10-100倍，特別是對(duì)遠(yuǎn)緣細(xì)胞、難融合的細(xì)胞的融合具有較好的效果；(2)對(duì)細(xì)胞無毒害作用，優(yōu)于化學(xué)融合和病毒介導(dǎo)的細(xì)胞融合；(3)適用范圍廣泛，動(dòng)物、植物和微生物都可以用該技術(shù)進(jìn)行細(xì)胞融合研允。盡管細(xì)胞電融合技術(shù)在育種、雜交研究和細(xì)胞克隆方面得到了成功應(yīng)用，但是還存在一些問題，即細(xì)胞自由接觸而導(dǎo)致的有效融合率低。在傳統(tǒng)的電融合過程中，細(xì)胞在交流電場中形成串珠狀排隊(duì)是隨意發(fā)生的，既兩種相同的細(xì)胞也可排隊(duì)，在接下來的直流電場中的融合就會(huì)發(fā)生多種情況，同種細(xì)胞融合以及兩個(gè)以上細(xì)胞融合都會(huì)發(fā)生，而試驗(yàn)所需的異種細(xì)胞直接的融合所占比例就非常小。這樣將導(dǎo)致隨后的篩選工作非常復(fù)雜，嚴(yán)重地降低了試驗(yàn)效率。本發(fā)明可以有效的達(dá)到不同種細(xì)胞一對(duì)一融合，很好的解決了一上問題。細(xì)胞融合后，異種細(xì)胞融合子的檢出也是關(guān)鍵一步，這直接關(guān)系到后續(xù)試驗(yàn)的效率。傳統(tǒng)的篩選方法是通過選擇性培養(yǎng)基篩選，如單克隆抗體制備中用HAT培養(yǎng)基來篩選融合子，微生物原生質(zhì)體融合用兩種不同抗藥性的原生質(zhì)體融合后用含有兩種抗生素的培養(yǎng)基篩選，選擇培養(yǎng)基法對(duì)于親本細(xì)胞的要求都很高，要求有特殊篩選標(biāo)記的親本細(xì)胞。在原生質(zhì)體融合育種中有通過核酸和蛋白質(zhì)的不同性質(zhì)進(jìn)行雙親滅活，對(duì)一株親本進(jìn)行熱滅活，另一株進(jìn)行紫外線滅活，通過異種融合后活性發(fā)生互補(bǔ)來篩選，該方法的缺點(diǎn)是沒有特異性假陽性率很高?；钚詿晒馊玖系氖褂檬辜?xì)胞融合后可實(shí)現(xiàn)大規(guī)模分選，該方法用紅綠兩種熒光染料染兩株親本，融合后通過流式細(xì)胞儀雙通道檢測雙染細(xì)胞并把他們分選出來收集，但該方法會(huì)有大量的假陽性細(xì)胞出現(xiàn)，在電擊過程中發(fā)生染料滲透會(huì)使大量未融合細(xì)胞呈雙染狀態(tài)。因此，現(xiàn)有的細(xì)胞融合技術(shù)以及設(shè)備無法實(shí)現(xiàn)大量特異性的細(xì)胞融合。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的技術(shù)解決問題克服傳統(tǒng)細(xì)胞融合儀和融合方法的不足，將細(xì)胞一對(duì)一電融合芯片以及流式細(xì)胞儀巧妙的結(jié)合起來，可一次性連續(xù)完成細(xì)胞一對(duì)一電融合，融合后融合子可正確檢出并將每個(gè)融合子分別培養(yǎng)。
本發(fā)明的技術(shù)解決方案一種流式細(xì)胞電融合儀，包括細(xì)胞一對(duì)一融合部分、融合細(xì)胞檢出分選部分和單細(xì)胞收集部分；所述細(xì)胞一對(duì)一融合部分1包括細(xì)胞融合室2、多對(duì)平行的細(xì)胞定位通道3和細(xì)胞吸取通道4，在細(xì)胞電融合芯片1中間設(shè)有中空密閉的細(xì)胞融合室2，細(xì)胞融合室2兩端分別為第一細(xì)胞加樣孔6和第二細(xì)胞加樣孔7 ；細(xì)胞融合室2兩側(cè)底部分布有多對(duì)平行的細(xì)胞定位通道3，每個(gè)細(xì)胞定位通道3與細(xì)胞吸取通道4連通，細(xì)胞吸取通道4逐級(jí)連通放大至末端開口延至上下兩端的第一細(xì)胞吸取口 5和第二細(xì)胞吸取口 8 ；第一細(xì)胞加樣孔6和第二細(xì)胞加樣孔7及第一細(xì)胞吸取口 5和第二細(xì)胞吸取口 8分別通過軟管與兩種不同的細(xì)胞液連接，第一細(xì)胞吸取口 5和第二細(xì)胞吸取口 8分別與注射泵或電極連接；在注射泵的吸取作用下從第一細(xì)胞加樣孔6和第二細(xì)胞加樣孔7進(jìn)入的細(xì)胞液向細(xì)胞融合室2流入，在一側(cè)每個(gè)細(xì)胞定位通道3處吸取一個(gè)細(xì)胞；另一側(cè)的細(xì)胞定位通道3吸取另一種細(xì)胞，細(xì)胞吸取完畢后，分別在細(xì)胞吸取通道4末端的第一細(xì)胞吸取口 5和第二細(xì)胞吸取口 8的電極加電，使細(xì)胞發(fā)生一對(duì)一的電融合，細(xì)胞融合后的混合細(xì)胞液被直接泵入流式細(xì)胞分選部分；所述融合細(xì)胞檢出分選部分包括樣品管9、鞘液罐10、噴嘴 12、激光器13、熒光檢測器14、分光器15、集光器16、正電荷偏轉(zhuǎn)板17、負(fù)電荷偏轉(zhuǎn)板18、收集器19、補(bǔ)液口 26、計(jì)算機(jī)24、流速調(diào)節(jié)泵25和液滴充電器21 ；所述單細(xì)胞收集部分由培養(yǎng)板定位裝置23和位于培養(yǎng)板定位裝置23上的96孔板22組成；融合后的混合細(xì)胞液被泵入樣品管9中，與鞘液罐10中的鞘液混合后進(jìn)入照射室11，照射后從噴嘴12處噴出，由流速調(diào)節(jié)泵25調(diào)節(jié)流速；激光器13發(fā)出激發(fā)光使細(xì)胞中熒光染料激發(fā)出發(fā)射光，發(fā)射光由集光器16收集，被分光器15分成紅綠熒光，然后由光檢測器14收集，收集得到的細(xì)胞信號(hào)由計(jì)算機(jī)24進(jìn)行放大、模數(shù)轉(zhuǎn)換處理后傳送到液滴充電器21，被充電；帶電液滴攜帶細(xì)胞通過正電荷偏轉(zhuǎn)板17、負(fù)電荷偏轉(zhuǎn)板18而發(fā)生偏轉(zhuǎn)，有兩種熒光的細(xì)胞落入收集器19中， 此時(shí)位于收集器19上端的補(bǔ)液口 26將細(xì)胞培養(yǎng)液補(bǔ)充到收集器19中，并同時(shí)落入收集器 19下方的96孔板22中，之后調(diào)整培養(yǎng)板定位裝置23，使下一個(gè)孔對(duì)準(zhǔn)細(xì)胞收集器19，進(jìn)行下一個(gè)融合子的收集。所述細(xì)胞融合室2的寬度為30-60 μ m,高度為30-60 μ m,長度為2cm。所述多個(gè)平行細(xì)胞定位通道3定位于細(xì)胞融合室2兩側(cè)底部的間隔為80-100 μ m， 每個(gè)定位通道橫截面為邊長3-10 μ m的正方形，通道長100-200 μ m。所述細(xì)胞吸取通道4逐級(jí)連通放大至末端開口的直徑為l_2mm。所述第一細(xì)胞加樣孔6和第二細(xì)胞加樣孔7的直徑為l_2mm。所述補(bǔ)液口 26為一個(gè)15ml試管，與軟管連接并通過蠕動(dòng)泵，控制流速使每次開啟可放出200 μ 1培養(yǎng)液到收集器19中。所述培養(yǎng)板定位裝置23前后和左右可調(diào)距離分別為10-20mm。所述補(bǔ)液口 26、收集器19和96孔板22的孔應(yīng)對(duì)準(zhǔn)。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比的優(yōu)點(diǎn)在于(1)本發(fā)明將細(xì)胞一對(duì)一電融合部分以及流式細(xì)胞儀巧妙的結(jié)合起來，可一次性連續(xù)完成細(xì)胞一對(duì)一電融合，融合后融合子可正確檢出并將每個(gè)融合子分別培養(yǎng)。(2)本發(fā)明的細(xì)胞融合室兩側(cè)的細(xì)胞定位通道分別吸附不同細(xì)胞，細(xì)胞完全可以特異性 配對(duì)，且配對(duì)率高，每次嚴(yán)格允許兩個(gè)異種細(xì)胞發(fā)生融合。(3)本發(fā)明對(duì)流式細(xì)胞儀進(jìn)行改進(jìn)，通過調(diào)節(jié)細(xì)胞液流速可完成單個(gè)細(xì)胞分析和收集工作。(4)本發(fā)明設(shè)置培養(yǎng)板定位裝置，方便于每個(gè)細(xì)胞收集到96孔板的一個(gè)孔中，大大方便后續(xù)工作。


圖1為本發(fā)明的實(shí)現(xiàn)流程圖；圖2為本發(fā)明的細(xì)胞一對(duì)一融合部分的結(jié)構(gòu)圖；圖3為本發(fā)明的融合細(xì)胞檢出分選部分和單細(xì)胞收集部分結(jié)構(gòu)圖。1-細(xì)胞一對(duì)一融合部分、2-細(xì)胞融合室、3-細(xì)胞定位通道、4-細(xì)胞吸取通道、5-第一細(xì)胞吸取口、6_第一細(xì)胞加樣孔、7-第二細(xì)胞加樣孔、8-第二細(xì)胞吸取口、9_樣品管、 10-鞘液罐、11-流動(dòng)室、12-噴嘴、13-激光器、14-熒光檢測器、15-分光鏡、16-集光器、 17-正電荷偏轉(zhuǎn)板、18-負(fù)電荷偏轉(zhuǎn)板、19-收集器、20-廢液收集器、21-液滴充電器、22-96 孔板、23-培養(yǎng)板定位裝置、24-計(jì)算機(jī)、25-流速調(diào)節(jié)泵、26-補(bǔ)液口。
具體實(shí)施例方式如圖1、2、3所示，本發(fā)明包括細(xì)胞一對(duì)一融合部分1，細(xì)胞一對(duì)一融合部分1為整體芯片，在整體芯片中設(shè)有中空密閉的細(xì)胞融合室2。細(xì)胞融合室2寬度為30-60 μ m,高度為30-60 μ m,長度為2cm。細(xì)胞融合室2兩端分別為第一細(xì)胞加樣孔6和第二細(xì)胞加樣孔 7。細(xì)胞融合室2兩側(cè)底部分布有多個(gè)平行的細(xì)胞定位通道3。多個(gè)平行細(xì)胞定位通道3定位于細(xì)胞融合室2兩側(cè)底部的間隔為80-100 μ m,每個(gè)定位通道橫截面為邊長3-10 μ m的正方形,通道長100-200 μ m。細(xì)胞定位通道3與細(xì)胞吸取通道4連通，細(xì)胞吸取通道4末端為邊長3-10 μ m的正方形與相同大小橫截面的細(xì)胞定位通道3連接，另一末端與相鄰的細(xì)胞吸取通道末端共同與橫截面積加倍的橫向通道連接，為通道的第一次加粗放大；該橫向通道由相同截面積的縱向通道相連，兩個(gè)相鄰的縱向通道又通過橫截面積加倍的橫向通道連接，為第二次加粗放大；以此類推，經(jīng)過5次放大后，與直接約Imm的細(xì)胞吸取口相連。細(xì)胞吸取通道4逐級(jí)連通放大至末端開口的直徑為l_2mm。第一細(xì)胞加樣孔6和第二細(xì)胞加樣孔7的直徑為l_2mm。第一細(xì)胞加樣孔6和第二細(xì)胞加樣孔7以及第一細(xì)胞吸取口 5和第二細(xì)胞吸取口 8分別與直徑l_2mm軟管連接。 第一細(xì)胞加樣孔6和第二細(xì)胞加樣孔7的軟管與兩種不同的細(xì)胞液連接。第一細(xì)胞吸取口 5和第二細(xì)胞吸取口 8與注射泵連接，也可連接電極。電融合后靜置30min，第一細(xì)胞加樣孔 6和第二細(xì)胞加樣孔7分別吸出，進(jìn)入流式細(xì)胞分析部分的樣品管9與鞘液室10中的鞘液混合后進(jìn)入流動(dòng)室11，從噴嘴12處噴出，在流動(dòng)室11和噴嘴12之間裝有流速調(diào)節(jié)泵25， 目的是使噴嘴噴出的細(xì)胞速度可控。激光器13發(fā)出激發(fā)光使細(xì)胞中熒光染料激發(fā)出發(fā)射光，發(fā)射光由集光器16收集，被分光器15分成紅綠熒光，然后由熒光檢測器14收集。收集得到的細(xì)胞信號(hào)由計(jì)算機(jī)24處理，即首先對(duì)收集到的細(xì)胞信號(hào)進(jìn)行放大，再經(jīng)模-數(shù)轉(zhuǎn)換器，再將模-數(shù)轉(zhuǎn)換器后的細(xì)胞信號(hào)傳送到液滴充電器21中進(jìn)行細(xì)胞液滴充電。帶電液滴攜帶細(xì)胞通過正電荷偏轉(zhuǎn)板17、負(fù)電荷偏轉(zhuǎn)板18而發(fā)生偏轉(zhuǎn)，有兩種熒光的細(xì)胞落入收集器19中，未被收集的細(xì)胞則落入于收集器19相鄰的廢液收集器20。此時(shí)，位于收集器19上端的補(bǔ)液口 26將200 μ 1細(xì)胞培養(yǎng)液補(bǔ)充到收集器19中，補(bǔ)液口 26為一個(gè)15ml試管， 與軟管連接并通過蠕動(dòng)泵，控制流速使每次開啟可放出200 μ 1培養(yǎng)液到收集器19中。補(bǔ)液口 26將200 μ 1細(xì)胞培養(yǎng)液補(bǔ)充到收集器19中的同時(shí)落入收集器下方的96孔板22中， 之后調(diào)整培養(yǎng)板定位裝置23，進(jìn)行下一個(gè)融合子的收集。培養(yǎng)板定位裝置23前后和左右可調(diào)距離分別為10-20mm。補(bǔ)液口 26、收集器19和96孔板22的孔應(yīng)對(duì)準(zhǔn)。 本發(fā)明的原理及使用方法如下(以K562細(xì)胞和CHO細(xì)胞配對(duì)和融合為例)(1)將整體芯片正置于試驗(yàn)臺(tái)上，將第一細(xì)胞加樣孔6連接的直接Imm軟管放入 K562細(xì)胞懸液中。將第二細(xì)胞加樣孔7和第二細(xì)胞吸取口 8連接的小軟管封死。第一細(xì)胞吸取口 5的軟管連接注射泵，開啟注射泵將K562細(xì)胞(紅色熒光)吸入細(xì)胞融合室2，持續(xù)一段時(shí)間后大量細(xì)胞吸附在與第一細(xì)胞吸取口 5連接的細(xì)胞定位通道3末端并保持較大的流速使細(xì)胞達(dá)到穩(wěn)定吸附。(2)將第一細(xì)胞加樣孔6的軟管放入無細(xì)胞電融合液中，第二細(xì)胞加樣孔7軟管連接注射泵，以較小的流速將細(xì)胞融合室2中未吸附的細(xì)胞洗出。停止。(3)將第二細(xì)胞加樣孔7連接的直接Imm軟管放入CHO細(xì)胞(綠色熒光)懸液中。 將第一細(xì)胞加樣孔6連接的小軟管封死。第二細(xì)胞吸取口 8的軟管連接注射泵，開啟注射泵將CHO細(xì)胞吸入細(xì)胞融合室2，持續(xù)一段時(shí)間后大量細(xì)胞吸附在與第二細(xì)胞吸取口 8連接的細(xì)胞定位通道3末端并保持較大的流速使細(xì)胞達(dá)到穩(wěn)定吸附。(4)將第二細(xì)胞加樣孔7的軟管放入無細(xì)胞電融合液中，第一細(xì)胞加樣孔6軟管連接注射泵，以較小的流速將細(xì)胞融合室2中未吸附的細(xì)胞洗出。停止后將第一細(xì)胞加樣孔 6封死。 (5)將第一細(xì)胞吸取口 5和第二細(xì)胞吸取口 8連接的電極與電源接通，在交流電的作用下使兩側(cè)細(xì)胞定位通道上吸附的不同細(xì)胞更加靠近，在直流電作用下使兩個(gè)細(xì)胞發(fā)生融合。(6)融合后細(xì)胞在細(xì)胞融合室3中靜置30min后從兩側(cè)的第一細(xì)胞加樣孔6或第二細(xì)胞加樣孔7吸出，進(jìn)行下一步的篩選和分析。(7)融合后的混合細(xì)胞液被泵入流式細(xì)胞分析部分的樣品管9，然后與鞘液室10 中的鞘液混合后進(jìn)入流動(dòng)室11，從噴嘴12處噴出.。(8)激光器13發(fā)出激發(fā)光使K562細(xì)胞和CHO細(xì)胞中熒光染料激發(fā)出發(fā)射光，發(fā)射光由集光器16收集，被分光器15分成紅綠熒光，然后由光電倍增管檢測器14收集。(9)收集得到的細(xì)胞信號(hào)由計(jì)算機(jī)24進(jìn)行放大、模數(shù)轉(zhuǎn)換處理后傳送到液滴充電器21，被充電。帶電液滴攜帶細(xì)胞通過正、負(fù)偏轉(zhuǎn)電極板17和18而發(fā)生偏轉(zhuǎn)，有兩種熒光的細(xì)胞落入收集器19中。(10)位于收集器19上端的補(bǔ)液口 26將200 μ 1細(xì)胞培養(yǎng)液補(bǔ)充到收集器19中， 并同時(shí)落入收集器下方的96孔板22中。(11)調(diào)整培養(yǎng)板定位裝置23，使下一個(gè)孔對(duì)準(zhǔn)細(xì)胞收集器19，進(jìn)行下一個(gè)融合子的收集。本發(fā)明不僅限于上述兩種細(xì)胞，可以通過修改細(xì)胞定位通道和細(xì)胞融合室的大小適用于不同大小的細(xì)胞之間的融合。本發(fā)明未詳細(xì)闡述部分屬于本領(lǐng)域公知技術(shù)。
權(quán)利要求
1.一種流式細(xì)胞電融合儀，其特征在于包括細(xì)胞一對(duì)一融合部分、融合細(xì)胞檢出分選部分和單細(xì)胞收集部分；所述細(xì)胞一對(duì)一融合部分(1)包括細(xì)胞融合室(2)、多對(duì)平行的細(xì)胞定位通道(3)和細(xì)胞吸取通道(4)，在細(xì)胞電融合芯片(1)中間設(shè)有中空密閉的細(xì)胞融合室(2)，細(xì)胞融合室(2)兩端分別為第一細(xì)胞加樣孔(6)和第二細(xì)胞加樣孔(7)；細(xì)胞融合室(2)兩側(cè)底部分布有多對(duì)平行的細(xì)胞定位通道(3)，每個(gè)細(xì)胞定位通道(3)與細(xì)胞吸取通道(4)連通，細(xì)胞吸取通道(4)逐級(jí)連通放大至末端開口延至上下兩端的第一細(xì)胞吸取口(5)和第二細(xì)胞吸取口(8)；第一細(xì)胞加樣孔(6)和第二細(xì)胞加樣孔(7)及第一細(xì)胞吸取口(5)和第二細(xì)胞吸取口(8)分別通過軟管與兩種不同的細(xì)胞液連接，第一細(xì)胞吸取口(5)和第二細(xì)胞吸取口(8)分別與注射泵或電極連接；在注射泵的吸取作用下從第一細(xì)胞加樣孔(6)和第二細(xì)胞加樣孔(7)進(jìn)入的細(xì)胞液向細(xì)胞融合室(2)流入，在一側(cè)每個(gè)細(xì)胞定位通道(3)處吸取一個(gè)細(xì)胞；另一側(cè)的細(xì)胞定位通道(3)吸取另一種細(xì)胞，細(xì)胞吸取完畢后，分別在細(xì)胞吸取通道(4)末端的第一細(xì)胞吸取口(5)和第二細(xì)胞吸取口(8)的電極加電，使細(xì)胞發(fā)生一對(duì)一的電融合，細(xì)胞融合后的混合細(xì)胞液被直接泵入流式細(xì)胞分選部分；所述融合細(xì)胞檢出分選部分包括樣品管(9)、鞘液罐(10)、噴嘴(12)、激光器(13)、熒光檢測器(14)、分光器(15)、集光器(16)、正電荷偏轉(zhuǎn)板(17)、負(fù)電荷偏轉(zhuǎn)板(18)、收集器 (19)、補(bǔ)液口(26)、計(jì)算機(jī)(24)、流速調(diào)節(jié)泵(25)和液滴充電器(21)；所述單細(xì)胞收集部分由培養(yǎng)板定位裝置(23)和位于培養(yǎng)板定位裝置(23)上的96孔板(22)組成；融合后的混合細(xì)胞液被泵入樣品管(9)中，與鞘液罐(10)中的鞘液混合后進(jìn)入照射室(11)，照射后從噴嘴(12)處噴出，由流速調(diào)節(jié)泵(25)調(diào)節(jié)流速；激光器(13)發(fā)出激發(fā)光使細(xì)胞中熒光染料激發(fā)出發(fā)射光，發(fā)射光由集光器(16)收集，被分光器(15)分成紅綠熒光，然后由光檢測器(14)收集，收集得到的細(xì)胞信號(hào)由計(jì)算機(jī)(24)進(jìn)行放大、模數(shù)轉(zhuǎn)換處理后傳送到液滴充電器(21)中被充電；帶電液滴攜帶細(xì)胞通過正電荷偏轉(zhuǎn)板(17)、負(fù)電荷偏轉(zhuǎn)板(18)而發(fā)生偏轉(zhuǎn)，有兩種熒光的細(xì)胞落入收集器(19)中，此時(shí)位于收集器(19)上端的補(bǔ)液口(26) 將細(xì)胞培養(yǎng)液補(bǔ)充到收集器(19)中，并同時(shí)落入收集器(19)下方的96孔板(22)中，之后調(diào)整培養(yǎng)板定位裝置(23)，使下一個(gè)孔對(duì)準(zhǔn)細(xì)胞收集器(19)，進(jìn)行下一個(gè)融合子的收集。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的流式細(xì)胞電融合儀，其特征在于所述細(xì)胞融合室(2)的寬度為30-60 μ m,高度為30-60 μ m,長度為2cm。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的流式細(xì)胞電融合儀，其特征在于所述多個(gè)平行細(xì)胞定位通道(3)定位于細(xì)胞融合室(2)兩側(cè)底部的間隔為80-100 μ m，每個(gè)定位通道橫截面為邊長 3-10 μ m的正方形，通道長100-200 μ m。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的流式細(xì)胞電融合儀，其特征在于所述細(xì)胞吸取通道(4)逐級(jí)連通放大至末端開口的直徑為l_2mm。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的流式細(xì)胞電融合儀，其特征在于所述第一細(xì)胞加樣孔(6) 和第二細(xì)胞加樣孔(7)的直徑為l_2mm。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的流式細(xì)胞電融合儀，其特征在于所述補(bǔ)液口(26)為一個(gè) 15ml試管，與軟管連接并通過蠕動(dòng)泵，控制流速使每次開啟可放出200 μ 1培養(yǎng)液到收集器 (19)中。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的流式細(xì)胞電融合儀，其特征在于所述培養(yǎng)板定位裝置(23) 前后和左右可調(diào)距離分別為10-20mm。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的流式細(xì)胞電融合儀，其特征在于所述補(bǔ)液口(26)、收集器 (19)和96孔板(22)的孔應(yīng)對(duì)準(zhǔn)。
全文摘要
一種流式細(xì)胞電融合儀包括細(xì)胞一對(duì)一融合部分、融合細(xì)胞檢出分選部分和單細(xì)胞收集部分；細(xì)胞一對(duì)一融合部分上設(shè)有多對(duì)平行的細(xì)胞定位通道，通道末端可吸附不同的細(xì)胞，在電流作用下兩種細(xì)胞可靠近并發(fā)生融合。融合后細(xì)胞經(jīng)放置質(zhì)膜完全融合后，進(jìn)入融合細(xì)胞檢出分選部分，融合細(xì)胞檢出分選部分主要由激光光源、熒光檢測器和偏轉(zhuǎn)板構(gòu)成，發(fā)生融合的細(xì)胞既紅綠熒光雙染的細(xì)胞被收集到收集管，每收集一個(gè)細(xì)胞，檢測器液滴將停止流動(dòng)，安裝于收集管上部的細(xì)胞培養(yǎng)液貯存器向收集管加入200μl細(xì)胞培養(yǎng)液，200μl細(xì)胞培養(yǎng)液使收集管末端打開，液體進(jìn)入下方96孔板的一個(gè)孔中。此時(shí)，流動(dòng)室液體繼續(xù)開啟，將下一個(gè)融合細(xì)胞放入96孔板下一孔中。本發(fā)明可一次性連續(xù)完成細(xì)胞一對(duì)一電融合，融合后融合子可正確檢出并將每個(gè)融合子分別培養(yǎng)。
文檔編號(hào)C12M1/42GK102206580SQ20111007496
公開日2011年10月5日 申請(qǐng)日期2011年3月28日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月28日
發(fā)明者劉姚萍, 孫艷, 崔紹艷, 樊瑜波, 王瑋 申請(qǐng)人:北京大學(xué), 北京航空航天大學(xué)