專利名稱：魷魚墨天然黑色素的制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種魷魚墨天然黑色素的制備方法。
背景技術：
魷魚墨占魷魚體重的I. 3%左右，其主要成分是真黑素與蛋白質結合的黑素蛋白、酪氨酸的聚合物、水和脂肪等。雖然近幾年國內對魷魚加工副產物，如魷魚卵、肝臟、精巢組織等提取物的生物活性進行了相關研究，但是有關魷魚墨的綜合利用程度還遠遠滯后于魷魚加工現狀。我國中醫(yī)素有“逢黑必補”的養(yǎng)生理念，但長久以來我國對魷魚墨的利用價值未受重視。在國外，美國和日本已把魷魚墨黑色素作為一種天然黑色素應用于食品生產中。目前天然黑色素純品國際市場售價高達30萬元/噸，因此，魷魚墨黑色素作為食品添加劑生產黑色營養(yǎng)保健食品市場空間巨大。此外，研究證實魷魚墨天然黑色素具有抗氧化、 提高免疫力、體外抑制流感病毒及艾滋病病毒的功效。所以，魷魚墨天然黑色素在新藥開發(fā)方面前景廣闊。魷魚墨黑色素不溶于常見的有機溶劑，具有在堿性溶液中溶解而在酸性溶液中沉淀的特性，通常采用堿溶酸沉法，酸性溶液可以除去與黑色素結合的蛋白質、碳水化合物以及脂類物質，但需要經過多次酸堿交替處理，才能得到精制的黑色素。酸堿法提取的黑色素通常會使其天然形態(tài)和化學結構受到一定程度的損傷，1979年Giesen提出用溫和的蛋白酶水解法來提取黑色素，可以不損傷黑色素原有結構。國內學者閻克路等曾采用木瓜蛋白酶水解牦牛絨黑色素，得到黑色素的形態(tài)結構和化學組成改變均小于鹽酸水解法。目前也出現了采用酶解法制備魷魚墨黑色素，如專利號為CN200610146291. O的中國專利《一種魷魚墨黑色素的制備方法及其應用》，其特征在于取魷魚墨汁，加入蒸餾水攪拌、洗滌，用粗濾布除去雜物后，用堿液調pH至5. O 10. O ;在攪拌下，加酶水解12 24h，酶解溫度為35 70°C，90 100°C加熱終止反應；用酸液調pH至I. O 5.0，3000 5000 Xg室溫下離心收集沉淀；所得沉淀物經蒸餾水反復洗滌、離心，至洗滌水為中性，真空冷凍干燥。但是它是采用單一的蛋白酶來進行水解，制備時間長，生產效率低且比較麻煩。

發(fā)明內容
本發(fā)明所要解決的技術問題是提供一種魷魚墨天然黑色素的制備方法，采用復合酶解法進行制備，具有工藝簡單、酶解時間短、水解率高的特點。本發(fā)明解決上述技術問題所采用的技術方案為一種魷魚墨天然黑色素的制備方法，其特征在于包括以下步驟I)加熱預處理將魷魚墨搗碎后，加入一定量水，使料液質量比為I : 9 11，在95 100°C加熱3 8min，然后快速冷卻至室溫；2)采用中性蛋白酶和酸性蛋白酶進行復合酶解其中中性蛋白酶的酶解pH值為
5 6，酸性蛋白酶的酶解pH值為I. 5 2. 5，酶解溫度為50 60°C，總酶解反應時間為
3 5h，總加酶量為魷魚墨質量的I. 5 4. 0% ;
3)滅酶離心處理將魷魚墨水解液在95 100°C下加熱3 8min，然后快速冷卻至室溫，經6000 8000r/min下離心處理,取黑色素沉淀留用；4)最后將得到的黑色素沉淀反復用水清洗，除去可溶性成分，然后30 40°C烘干即可。作為改進，所述步驟2)中的中性蛋白酶、酸性蛋白酶的加入量之比為2. 5 3.5 1，所述中性蛋白酶和酸性蛋白酶的酶解時間相等。作為優(yōu)選，所述中性蛋白酶的酶解pH值為5. 5，酸性蛋白酶的酶解pH值為2. 0，酶解溫度為55°C，總酶解反應時間為4h，總加酶量為魷魚墨質量的3. 0%。最后，所述步驟I)中的料液質量比優(yōu)選為I . 10。與現有技術相比，本發(fā)明的優(yōu)點在于本發(fā)明以魷魚墨為原料，采用中性蛋白酶和酸性蛋白酶復合酶解法來制備魷魚墨黑色素，使得酶解時間從原來的12 24h降低至只需4h就能完成，大大縮短了制備時間，提高了生產效率，并且魷魚墨的水解度大，制得的魷魚墨黑色素純度高，可用于保健食品及醫(yī)藥制劑中。本發(fā)明原料豐富易得、制備工藝簡單、生產效率高，適于工業(yè)化生產。


圖I是本發(fā)明的魷魚墨黑色素制備方法的制備工藝流程圖；圖2是本發(fā)明的復合酶解時間對魷魚墨水解度的影響；圖3是本發(fā)明的復合酶解加入總酶量對魷魚墨水解度的影響。
具體實施方式

以下結合附圖實施例對本發(fā)明作進一步詳細描述。一種魷魚墨天然黑色素的制備方法，步驟為I)加熱預處理將魷魚墨搗碎后，加入一定量水，使料液質量比為I : 10，在95 100°C加熱5min，然后快速冷卻；2)采用中性蛋白酶和酸性蛋白酶進行復合酶解其中中性蛋白酶的酶解pH值為5. 5，酸性蛋白酶的酶解pH值為2. 0，酶解溫度為55°C，總酶解反應時間4h(中性蛋白酶和酸性蛋白酶各自水解2h)，總加酶量為魷魚墨質量的3. O %，其中中性蛋白酶和酸性蛋白酶按照3 I比例加入相應酶量；3)滅酶離心處理將魷魚墨水解液在95 100°C下加熱5min，然后快速冷卻至室溫，經7000r/min下離心處理，取黑色素沉淀留用；4)最后將得到的黑色素沉淀反復用水清洗，除去可溶性成分，然后30 40°C烘干即可。下面對本發(fā)明的制備工藝參數及制得的魷魚墨黑色素理化性能作進一步詳細說明一、蛋白酶的選擇選用木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶，分別在各酶最適pH值和最適溫度范圍下水解魷魚墨，比較水解度大小,確定實驗用酶。水解度越大,表示與魷魚墨結合在一起的蛋白質殘留量越低，黑色素的純度也就越高，具體結果見表I。
表I蛋白酶水解魷魚墨的水解效果比較
權利要求
1.一種魷魚墨天然黑色素的制備方法，其特征在于包括以下步驟； 1)加熱預處理將魷魚墨搗碎后，加入一定量水，使料液質量比為I: 9 11，在95 100°C加熱3 8min，然后快速冷卻至室溫； 2)采用中性蛋白酶和酸性蛋白酶進行復合酶解其中中性蛋白酶的酶解pH值為5 6，酸性蛋白酶的酶解pH值為I. 5 2. 5，酶解溫度為50 60°C，總酶解反應時間為3 5h,總加酶量為魷魚墨質量的I. 5 4% ; 3)滅酶離心處理將魷魚墨水解液在95 100°C下加熱3 8min，然后快速冷卻至室溫，經6000 8000r/min下離心處理，取黑色素沉淀留用； 4)最后將得到的黑色素沉淀反復用水清洗，除去可溶性成分，然后30 40°C烘干即可。
2.根據權利要求I所述的制備方法，其特征在于所述步驟2)中的中性蛋白酶、酸性蛋白酶的加入量之比為2. 5 3. 5 1，所述中性蛋白酶和酸性蛋白酶的酶解時間相等。
3.根據權利要求I所述的制備方法，其特征在于所述中性蛋白酶的酶解PH值為5.5，酸性蛋白酶的酶解pH值為2. O,酶解溫度為55°C，總酶解反應時間為4h，總加酶量為魷魚墨質量的3.0%。
4.根據權利要求I所述的制備方法，其特征在于所述步驟I)中的料液質量比為I 10。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種魷魚墨天然黑色素的制備方法，其特征在于步驟為1)加熱預處理；2)采用中性蛋白酶和酸性蛋白酶進行復合酶解其中中性蛋白酶的酶解pH值為5～6，酸性蛋白酶的酶解pH值為1.5～2.5，酶解溫度為50～60℃，總酶解反應時間為3～5h，總加酶量為魷魚墨質量的1.5～4.0％；3)滅酶離心處理，取黑色素沉淀留用；4)最后將得到的黑色素沉淀反復用水清洗，烘干即可。本發(fā)明以魷魚墨為原料，采用復合酶解法來制備魷魚墨黑色素，使得酶解時間從原來的12～24h降低至只需4h就能完成，大大縮短了制備時間，提高了生產效率，并且魷魚墨的水解度較高，制得的魷魚墨黑色素純度高，可用于保健食品及醫(yī)藥制劑中。本發(fā)明原料豐富易得、制備工藝簡單、生產效率高，適于工業(yè)化生產。
文檔編號C12P1/00GK102776238SQ201110120820
公開日2012年11月14日 申請日期2011年5月9日 優(yōu)先權日2011年5月9日
發(fā)明者宋茹, 李厚寶, 韋榮編 申請人:浙江海洋學院