專利名稱：促抗氧化劑生成的發(fā)酵培養(yǎng)基的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及培養(yǎng)基。
背景技術(shù)：
自由基是生命活動中多種生化反應(yīng)的中間代謝物質(zhì)。自由基產(chǎn)生過多或清除過慢，會造成機體在分子水平、細(xì)胞水平及組織器官水平的各種損傷，加速機體的衰老過程并誘發(fā)各種疾病。在衰老過程中，機體內(nèi)氧化和抗氧化系統(tǒng)之間的平衡發(fā)生了變化，表現(xiàn)為氧化作用增強，抗氧化能力減弱隨著年齡的增長，抗氧化酶類如SOD等活性降低，體內(nèi)除氧自由基的能力受到影響，氧自由基濃度升高，引起膜脂質(zhì)的過氧化、蛋白質(zhì)變性、酶活性降低和DNA損傷等危害，這些生物大分子結(jié)構(gòu)與功能的改變，必然導(dǎo)致細(xì)胞功能的紊亂，從而導(dǎo)致各種疾病和引起衰老。因此說自由基攻擊生命大分子和各種細(xì)胞器造成組織損傷，是引起機體衰老的根本原因，也是誘發(fā)腫瘤等惡性疾病的重大原因?？寡趸镔|(zhì)(抗氧化劑)是指能夠清除氧自由基，抑制或消除以及減緩氧化反應(yīng)的一類物質(zhì)。抗氧化劑的開發(fā)與研究一直以來受到人們的廣泛關(guān)注，特別是當(dāng)科學(xué)家們發(fā)現(xiàn)人體的疾病與衰老是人體內(nèi)自由基作用的結(jié)果后，抗氧化劑的研究更有了廣闊的發(fā)展空間。天然抗氧化劑已從單純作為油脂和含脂食品的抗氧化劑，發(fā)展到作為體內(nèi)氧自由基的清除劑，起到保護人體細(xì)胞組織，保護心腦血管循環(huán)系統(tǒng)、抗癌及延緩衰老等生理作用。目前天然抗氧化物質(zhì)主要是從動植物中提取的，如維生素類、酶類和天然藥物類等。但是動植物中天然抗氧化物質(zhì)含量較低，提取工藝復(fù)雜，而且從這些資源提取勢必使這這些動植物資源遭到嚴(yán)重破壞，造成生物多樣性和生態(tài)環(huán)境的損失。近年來，利用一些微生物具有產(chǎn)生和宿主相同或相似生理活性物質(zhì)的特點，對植物來源菌進行了大量的研究，已從榛屬植物中分離得到多株可以產(chǎn)生具有生理活性物質(zhì)的菌株，其中包括可以產(chǎn)生抗氧化劑的青霉(產(chǎn)抗氧化劑的菌株為青霉JTLR-1，分類命名為青霉Penicillium sp，保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址是北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，保藏日期為2011年3月21日，保藏編號為CGMCC No. 4701)，但是促進青霉產(chǎn)抗氧化劑的營養(yǎng)配方仍未有報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是提供促抗氧化劑生成的發(fā)酵培養(yǎng)基。促抗氧化劑生成的發(fā)酵培養(yǎng)基每L由5 IOOg的碳源營養(yǎng)成分、0. 1 6g的氮源營養(yǎng)成分、0. 001 0. 04mol的金屬離子和余量的蒸餾水組成；其中碳源營養(yǎng)成分為葡萄糖、蔗糖、淀粉糖漿中的一種或幾種；氮源營養(yǎng)成分為玉米漿、蛋白胨、酵母膏中的一種或幾種；金屬離子為錳離子、鎂離子、鋅離子中的一種或幾種。促抗氧化劑生成的發(fā)酵培養(yǎng)基每L由5 IOOg的碳源營養(yǎng)成分、0. 1 6g的氮源營養(yǎng)成分、1 IOOg的瓊脂、0. 001 0. 04mol的金屬離子和余量的蒸餾水組成；其中碳源營養(yǎng)成分為葡萄糖、蔗糖、淀粉糖漿中的一種或幾種；氮源營養(yǎng)成分為玉米漿、蛋白胨、酵母膏中的一種或幾種；金屬離子為錳離子、鎂離子、鋅離子中的一種或幾種。
本發(fā)明中促抗氧化劑生成的發(fā)酵培養(yǎng)基為液體培養(yǎng)基或固體培養(yǎng)基，培養(yǎng)基組分易得，成本低廉，可以促進抗氧化劑合成，每克發(fā)酵培養(yǎng)物(以去水干重計)含抗氧化劑 100. 7mg 214. 4mg。
具體實施例方式具體實施方式
一本實施方式促抗氧化劑生成的發(fā)酵培養(yǎng)基每L由5 IOOg的碳源營養(yǎng)成分、0. 1 6g的氮源營養(yǎng)成分、0. 001 0. 04mol的金屬離子和余量的蒸餾水組成；其中碳源營養(yǎng)成分為葡萄糖、蔗糖、淀粉糖漿中的一種或幾種；氮源營養(yǎng)成分為玉米漿、蛋白胨、酵母膏中的一種或幾種；金屬離子為錳離子、鎂離子、鋅離子中的一種或幾種。本實施方式中碳源營養(yǎng)成分為兩種或兩種以上物質(zhì)組成時按任意比混合；氮源營養(yǎng)成分為兩種或兩種以上物質(zhì)組成時按任意比混合；金屬離子為兩種或兩種以上物質(zhì)組成時按任意比混合。
具體實施方式
二 本實施方式與具體實施方式
一的不同是促抗氧化劑生成的發(fā)酵培養(yǎng)基每L由5g的碳源營養(yǎng)成分、0. Ig的氮源營養(yǎng)成分、0. OOlmol的金屬離子和余量的蒸餾水組成。其它與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
三本實施方式與具體實施方式
一的不同是促抗氧化劑生成的發(fā)酵培養(yǎng)基每L由IOOg的碳源營養(yǎng)成分、6g的氮源營養(yǎng)成分、0. 04mol的金屬離子和余量的蒸餾水組成。其它與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
四本實施方式與具體實施方式
一的不同是促抗氧化劑生成的發(fā)酵培養(yǎng)基每L由10 90g的碳源營養(yǎng)成分、0. 5 5g的氮源營養(yǎng)成分、0. 002 0. 03mol的金屬離子和余量的蒸餾水組成。其它與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
五本實施方式與具體實施方式
一的不同是促抗氧化劑生成的發(fā)酵培養(yǎng)基每L由30g的碳源營養(yǎng)成分、2g的氮源營養(yǎng)成分、0. 005mol的金屬離子和余量的蒸餾水組成。其它與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
六本實施方式與具體實施方式
一的不同是促抗氧化劑生成的發(fā)酵培養(yǎng)基每L由50g的碳源營養(yǎng)成分、3g的氮源營養(yǎng)成分、0. Olmol的金屬離子和余量的蒸餾水組成。其它與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
七本實施方式與具體實施方式
一的不同是促抗氧化劑生成的發(fā)酵培養(yǎng)基每L由60g的碳源營養(yǎng)成分、4g的氮源營養(yǎng)成分、0. 02mol的金屬離子和余量的蒸餾水組成。其它與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
八本實施方式與具體實施方式
一至七之一的不同是錳離子來源于 MnSO4 · H2O0其它與具體實施方式
一至七之一相同。
具體實施方式
九本實施方式與具體實施方式
一至八之一的不同是鎂離子來源于 MgSO4 · 7H20。其它與具體實施方式
一至八之一相同。
具體實施方式
十本實施方式與具體實施方式
一至九之一的不同是鋅離子來源于 ZnCl20其它與具體實施方式
一至九之一相同。
具體實施方式
十一本實施方式促抗氧化劑生成的發(fā)酵培養(yǎng)基每L由5 IOOg的碳源營養(yǎng)成分、0. 1 6g的氮源營養(yǎng)成分、1 IOOg的瓊脂、0. 001 0. 04mol的金屬離子和余量的蒸餾水組成；其中碳源營養(yǎng)成分為葡萄糖、蔗糖、淀粉糖漿中的一種或幾種；氮源營養(yǎng)成分為玉米漿、蛋白胨、酵母膏中的一種或幾種；金屬離子為錳離子、鎂離子、鋅離子中的一種或幾種。本實施方式中碳源營養(yǎng)成分為兩種或兩種以上物質(zhì)組成時按任意比混合；氮源營養(yǎng)成分為兩種或兩種以上物質(zhì)組成時按任意比混合；金屬離子為兩種或兩種以上物質(zhì)組成時按任意比混合。
具體實施方式
十二 本實施方式與具體實施方式
十一的不同是促抗氧化劑生成的發(fā)酵培養(yǎng)基每L由15g的碳源營養(yǎng)成分、Ig的氮源營養(yǎng)成分、IOg的瓊脂、0. 03mol的金屬離子和余量的蒸餾水組成。其它與具體實施方式
十一相同。
具體實施方式
十三本實施方式與具體實施方式
十一的不同是促抗氧化劑生成的發(fā)酵培養(yǎng)基每L由20g的碳源營養(yǎng)成分、2g的氮源營養(yǎng)成分、20g的瓊脂、0. Olmol的金屬離子和余量的蒸餾水組成。其它與具體實施方式
十一相同。
具體實施方式
十四本實施方式與具體實施方式
十一的不同是促抗氧化劑生成的發(fā)酵培養(yǎng)基每L由40g的碳源營養(yǎng)成分、5g的氮源營養(yǎng)成分、50g的瓊脂、0. 02mol的金屬離子和余量的蒸餾水組成。其它與具體實施方式
十一相同。
具體實施方式
十五本實施方式與具體實施方式
十一至十四之一的不同是錳離子來源于MnS04*H20。其它與具體實施方式
十一至十四之一相同。
具體實施方式
十六本實施方式與具體實施方式
十一至十五之一的不同是鎂離子來源于MgSO4 · 7H20。其它與具體實施方式
十一至十五之一相同。
具體實施方式
十七本實施方式與具體實施方式
十一至十六之一的不同是鋅離子來源于&iCl2。其它與具體實施方式
十一至十六之一相同。
具體實施方式
十八本實施方式促抗氧化劑生成的發(fā)酵培養(yǎng)基每L由20g的蔗糖、 2g的酵母膏、0. Olmol的錳離子、0. Olmol的鎂離子、0. Olmol的鋅離子和余量的蒸餾水組成。將產(chǎn)抗氧化劑的菌株青霉JTLR-I，接種于種子培養(yǎng)基(PDA固體培養(yǎng)基，由IOOml 質(zhì)量濃度為20%的馬鈴薯汁、2g的蔗糖和2g的瓊脂組成)，在培養(yǎng)2天，然后轉(zhuǎn)接于裝有200mL促抗氧化劑生成的發(fā)酵培養(yǎng)基的500mL三角瓶中，于^°C、180r/min條件下?lián)u瓶培養(yǎng)7天，收集發(fā)酵培養(yǎng)物；將發(fā)酵培養(yǎng)物用液氮冷凍并研碎后，以Ig發(fā)酵培養(yǎng)物加入 IOmL質(zhì)量濃度50%的甲醇水的比例進行提取，用正己烷萃取，直至正己烷萃取液無色后， 除去上層正己烷層，取下層冷凍干燥，即得抗氧化劑，經(jīng)計算，每克發(fā)酵培養(yǎng)物(以去水干重計)含抗氧化劑164. 6mg。
具體實施方式
十九本實施方式促抗氧化劑生成的發(fā)酵培養(yǎng)基每L由15g的蔗糖、 Ig的蛋白胨、IOg的瓊脂、0. Olmol的錳離子、0. Olmol的鎂離子、0. Olmol的鋅離子和余量的蒸餾水組成。將產(chǎn)抗氧化劑的菌株青霉JTLR-I，接種于種子培養(yǎng)基(PDA固體培養(yǎng)基)，在培養(yǎng)3天，然后轉(zhuǎn)接于裝有50mL促抗氧化劑生成的發(fā)酵培養(yǎng)基的大平皿中，于25°C下培養(yǎng) 7天得培養(yǎng)物；將培養(yǎng)物用液氮冷凍并研碎后，以Ig培養(yǎng)物加入IOmL質(zhì)量濃度50%的甲醇水的比例進行提取，用正己烷萃取，直至正己烷萃取液無色后，除去上層正己烷層，取下層冷凍干燥，即得抗氧化劑，經(jīng)計算，每克發(fā)酵培養(yǎng)物(以去水干重計)含抗氧化劑106. 2mgo具體實施方式
二十本實施方式促抗氧化劑生成的發(fā)酵培養(yǎng)基每L由20g的葡萄糖、2g的酵母膏、IOg的瓊脂、0. 02mol的錳離子、0. Olmol的鎂離子、0. Olmol的鋅離子和余
量的蒸餾水組成。 將產(chǎn)抗氧化劑的菌株青霉JTLR-I，接種于種子培養(yǎng)基(PDA固體培養(yǎng)基)，在培養(yǎng)3天，然后轉(zhuǎn)接于裝有50mL促抗氧化劑生成的發(fā)酵培養(yǎng)基的大平皿中，于25°C下培養(yǎng)7天得培養(yǎng)物；將培養(yǎng)物用液氮冷凍并研碎后，以Ig培養(yǎng)物加入IOmL質(zhì)量濃度50% 的甲醇水的比例進行提取，用正己烷萃取，直至正己烷萃取液無色后，除去上層正己烷層， 取下層冷凍干燥，即得抗氧化劑，經(jīng)計算，每克發(fā)酵培養(yǎng)物(以去水干重計)含抗氧化劑 214. 4mg。
權(quán)利要求
1.促抗氧化劑生成的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于促抗氧化劑生成的發(fā)酵培養(yǎng)基每L由 5 IOOg的碳源營養(yǎng)成分、0. 1 6g的氮源營養(yǎng)成分、0. 001 0. 04mol的金屬離子和余量的蒸餾水組成；其中碳源營養(yǎng)成分為葡萄糖、蔗糖、淀粉糖漿中的一種或幾種；氮源營養(yǎng)成分為玉米漿、蛋白胨、酵母膏中的一種或幾種；金屬離子為錳離子、鎂離子、鋅離子中的一種或幾種。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的促抗氧化劑生成的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于促抗氧化劑生成的發(fā)酵培養(yǎng)基每L由10 90g的碳源營養(yǎng)成分、0. 5 5g的氮源營養(yǎng)成分、0. 002 0. 03mol的金屬離子和余量的蒸餾水組成。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的促抗氧化劑生成的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于促抗氧化劑生成的發(fā)酵培養(yǎng)基每L由30g的碳源營養(yǎng)成分、2g的氮源營養(yǎng)成分、0. 005mol的金屬離子和余量的蒸餾水組成。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的促抗氧化劑生成的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于促抗氧化劑生成的發(fā)酵培養(yǎng)基每L由50g的碳源營養(yǎng)成分、3g的氮源營養(yǎng)成分、0. Olmol的金屬離子和余量的蒸餾水組成。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的促抗氧化劑生成的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于促抗氧化劑生成的發(fā)酵培養(yǎng)基每L由60g的碳源營養(yǎng)成分、4g的氮源營養(yǎng)成分、0. 02mol的金屬離子和余量的蒸餾水組成。
6.根據(jù)權(quán)利要求1、2、3、4或5所述的促抗氧化劑生成的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于錳離子來源于MnSO4 · H2O。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的促抗氧化劑生成的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于鎂離子來源于 MgSO4 · 7H20。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的促抗氧化劑生成的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于鋅離子來源于 ZnCl20
9.促抗氧化劑生成的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于促抗氧化劑生成的發(fā)酵培養(yǎng)基每L由 5 IOOg的碳源營養(yǎng)成分、0. 1 6g的氮源營養(yǎng)成分、1 IOOg的瓊脂、0. 001 0. 04mol 的金屬離子和余量的蒸餾水組成；其中碳源營養(yǎng)成分為葡萄糖、蔗糖、淀粉糖漿中的一種或幾種；氮源營養(yǎng)成分為玉米漿、蛋白胨、酵母膏中的一種或幾種；金屬離子為錳離子、鎂離子、鋅離子中的一種或幾種。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的促抗氧化劑生成的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于促抗氧化劑生成的發(fā)酵培養(yǎng)基每L由15g的碳源營養(yǎng)成分、Ig的氮源營養(yǎng)成分、IOg的瓊脂、0. 03mol的金屬離子和余量的蒸餾水組成。
全文摘要
促抗氧化劑生成的發(fā)酵培養(yǎng)基，它涉及培養(yǎng)基。促抗氧化劑生成的發(fā)酵培養(yǎng)基由碳源營養(yǎng)成分、氮源營養(yǎng)成分、金屬離子和余量的蒸餾水組成；其中碳源營養(yǎng)成分葡萄糖、蔗糖、淀粉糖漿中的一種或幾種；氮源營養(yǎng)成分是玉米漿、蛋白胨、酵母膏中的一種或幾種；金屬離子是錳離子、鎂離子、鋅離子中的一種或幾種。促抗氧化劑生成的發(fā)酵培養(yǎng)基由碳源營養(yǎng)成分、氮源營養(yǎng)成分、瓊脂、金屬離子和余量的蒸餾水組成。本發(fā)明中促抗氧化劑生成的發(fā)酵培養(yǎng)基為液體培養(yǎng)基或固體培養(yǎng)基，培養(yǎng)基組分易得，成本低廉，可以促進抗氧化劑合成，每克發(fā)酵培養(yǎng)物(以去水干重計)含抗氧化劑100.7mg～214.4mg。
文檔編號C12R1/80GK102250955SQ201110127680
公開日2011年11月23日 申請日期2011年5月17日 優(yōu)先權(quán)日2011年5月17日
發(fā)明者葛菁萍, 金濤 申請人:黑龍江大學(xué)