專利名稱：一種用于牛源性無(wú)乳鏈球菌或停乳鏈球菌生長(zhǎng)的培養(yǎng)基的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種細(xì)菌的培養(yǎng)基，確切講是一種用于牛源性無(wú)乳鏈球菌或停乳鏈球菌生長(zhǎng)的培養(yǎng)基。這種培養(yǎng)基主要用于牛源性無(wú)乳鏈球菌或停乳鏈球菌的規(guī)?；囵B(yǎng)，該培養(yǎng)基用于奶牛乳房炎疫苗生產(chǎn)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
奶牛乳房炎長(zhǎng)期一來(lái)一直是影響奶牛業(yè)發(fā)展的三大疾病中最主要的一種常見(jiàn)多發(fā)病，給奶牛業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。據(jù)Jones等(1984)報(bào)道，奶牛乳房炎造成的損失大約70%是由隱性乳房炎導(dǎo)致的奶產(chǎn)量下降而引起的。目前，全世界約有2. 2億頭奶牛，其中約有1/3的奶?；加懈鞣N類型乳房炎，每年因乳房炎造成的損失高達(dá)350億美元，僅美國(guó)的損失就達(dá)20億美元(Charls等，1997)。近年來(lái)，隨著人民生活水平的提高和飲食習(xí)慣的改變，奶類消費(fèi)需求呈較快增長(zhǎng)趨勢(shì)。然而，由于目前在治療奶牛乳房炎方面大量濫用抗生素和化藥，造成乳中藥物殘留日益嚴(yán)重，給乳房炎的預(yù)防與治療提出了新的難題。因此，研制有效的藥物和疫苗顯得越來(lái)越重要。奶牛乳房炎是一種由多種病原微生物感染引起的乳腺疾病，據(jù)報(bào)道有150多種微生物，參見(jiàn)《奶牛疾病學(xué)》[M]. William C. Rebhun.趙德明， 沈建忠，譯.北京中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，1999.，但從國(guó)內(nèi)外學(xué)者大量研究結(jié)果可以看出， 較常見(jiàn)的約有20多種，其中臨床上以葡萄球菌、鏈球菌和大腸桿菌感染引起的乳房炎較為常見(jiàn)，約占總致病菌的90% -95%以上，參見(jiàn)“奶牛乳房炎病原菌區(qū)系分布及發(fā)病規(guī)律研究進(jìn)展” [J].《動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展》李宏勝等.，2005，26(6) :146-149。因此，國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)奶牛乳房炎常見(jiàn)病原菌的研究主要還是針對(duì)鏈球菌、葡萄球菌和大腸桿菌。近年來(lái)國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)奶牛乳房炎疫苗的研究焦點(diǎn)主要集中在滅活苗和亞單位苗等方面。目前國(guó)內(nèi)外已有應(yīng)用滅活的金葡菌和鏈球菌制成的佐劑滅活苗臨床應(yīng)用的報(bào)道，表明有一定的免疫效果，參見(jiàn) Riekerink R. G. M. 0. , Barkema H. W. , Veenstra S. , etal. Prevalence of contagious mastitis pathogen sinbulk tank milk in Prince Edward Island. Can. Vet. J. ,2006, 47(6) :567-572. ；Watson DL, McColl ML, Davies HI. Field trial of a staphylococcal mastitis vaccine in dairy herds :clinical, subclinical and microbiological assessments. Aust Vet J. 1996，74 (6) :447_450 ；李宏勝等，奶牛乳房炎多聯(lián)苗的研制及臨床應(yīng)用效果觀察，中國(guó)獸醫(yī)科學(xué)，2007，37 (4) :277-283。但由于葡萄球菌和鏈球菌免疫原性較弱，抗原性復(fù)雜等原因，因此，疫苗普遍存在免疫效果不夠理想，免疫持續(xù)期較短等缺陷， 急需進(jìn)行改進(jìn)提高。然而，要提高乳房炎疫苗的免疫效果，必須提高單位體積中的細(xì)菌抗原量，增強(qiáng)細(xì)菌的毒力和免疫原性以達(dá)到有效刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體的目的。而提高細(xì)菌抗原含量的唯一辦法就是提高細(xì)菌培養(yǎng)量，因此，篩選最佳的牛源性無(wú)乳鏈球菌和停乳鏈球菌培養(yǎng)基，大幅度的提高培養(yǎng)基中單位體積的細(xì)菌數(shù)量是解決這一難題的唯一辦法。目前，對(duì)于奶牛乳房炎鏈球菌的培養(yǎng)常用的培養(yǎng)基主要是普通營(yíng)養(yǎng)肉湯和THB培養(yǎng)基。普通營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基的組成為牛肉浸出粉5g、蛋白胨10g、氯化鈉5g，將這些物質(zhì)溶于IL蒸餾水中，調(diào)節(jié)PH值為7. 8 士 0. 1，于121 °C下滅菌20分鐘，備用，《實(shí)用醫(yī)學(xué)培養(yǎng)基手冊(cè)》王欽升等主編，人民軍醫(yī)出版社，1999。試驗(yàn)結(jié)果表明，無(wú)乳鏈球菌和停乳鏈球菌在普通營(yíng)養(yǎng)肉湯中生長(zhǎng)周期長(zhǎng)達(dá) 20-21h,生長(zhǎng)高峰期的細(xì)菌數(shù)量只有6. OX IO8-L OX IO9CFU,因此，不適宜奶牛乳房炎停乳鏈球菌和無(wú)乳鏈球菌的規(guī)?；囵B(yǎng)。THB培養(yǎng)基的組成為牛肉浸出粉10g、胰蛋白胨20g、氯化鈉2g、葡萄糖2g、磷酸氫二鈉0. 4g和碳酸氫鈉2g。將這些物質(zhì)溶于IL蒸餾水中，調(diào)節(jié)PH值為7. 8 士 0. 1，于121°C 下滅菌20分鐘，備用，《實(shí)用醫(yī)學(xué)培養(yǎng)基手冊(cè)》王欽升等主編，人民軍醫(yī)出版社，1999。試驗(yàn)結(jié)果表明，無(wú) 乳鏈球菌在THB培養(yǎng)基中生長(zhǎng)周期為12h，生長(zhǎng)高峰期的細(xì)菌數(shù)量可達(dá)1. 3 X IO9-L 5 X IO9CFU ；停乳鏈球菌在THB培養(yǎng)基中生長(zhǎng)周期為14h，生長(zhǎng)高峰期的細(xì)菌數(shù)量可達(dá)1.4X 109-1.6X 109CFU，細(xì)菌產(chǎn)量明顯高于普通營(yíng)養(yǎng)肉湯。但為了進(jìn)一步提高無(wú)乳鏈球菌和停乳鏈球菌規(guī)模化生產(chǎn)中單位體積中的細(xì)菌抗原量，降低生產(chǎn)成本，還必須對(duì)該培養(yǎng)基進(jìn)行改進(jìn)。中國(guó)發(fā)明專利申請(qǐng)200610038811. 6公開(kāi)了一種致奶牛乳房炎鏈球菌培養(yǎng)液的配制方法及其用途，屬于動(dòng)物疫病診斷和防治領(lǐng)域。將IOg蛋白胨、5g酵母粉、IOg氯化鈉、5g 葡萄糖和0. 5g疊氮鈉溶于IL水中，用氫氧化鈉溶液調(diào)整pH至7. 2，再加入無(wú)菌0. 1 %結(jié)晶紫水溶液1. 3ml和溴甲酚紫水溶液1. 5ml，在121°C下滅菌，最后于4°C保存?zhèn)溆?。該培養(yǎng)液屬于選擇性培養(yǎng)基，奶牛乳房炎鏈球菌可在該培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，而葡萄球菌和腸道菌不能在該培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。因此，該培養(yǎng)液主要用于快速鑒別致奶牛乳房炎的鏈球菌，同時(shí)還可用于抗生素敏感性試驗(yàn)。中國(guó)發(fā)明專利申請(qǐng)200610038812. 0公開(kāi)了一種致奶牛乳房炎葡萄球菌培養(yǎng)液的配制方法及其用途，屬于動(dòng)物疫病診斷和防治技術(shù)領(lǐng)域。先將IOg蛋白胨、5g酵母粉、IOg 丙酮酸鈉、12g甘氨酸、5g氯化鋰完全溶解于980ml水中，再用氫氧化鈉溶液調(diào)pH至7. 3，然后，于121°C下滅菌冷卻至50°C 士 10°C時(shí)加入無(wú)菌亞碲酸鉀溶液IOml和7ml吐溫80， 4°C保存。該培養(yǎng)液屬于選擇性培養(yǎng)基，奶牛乳房炎葡萄球菌可在該培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，而鏈球菌和腸道菌不能在該培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。因此，該培養(yǎng)液主要用于快速鑒別致奶牛乳房炎的葡萄球菌，同時(shí)還可用于乳房炎葡萄球菌的藥敏試驗(yàn)。中國(guó)發(fā)明專利申請(qǐng)200610038813. 5公開(kāi)了一種致奶牛乳房炎大腸桿菌培養(yǎng)液的配制方法及其用途，屬于動(dòng)物疫病診斷和防治領(lǐng)域。先將IOg蛋白胨、1.5g三號(hào)膽鹽、IOg 乳糖、5g氯化鈉和5g檸檬酸鈉溶于IOOOml水中，再用氫氧化鈉溶液調(diào)整pH值至7. 2，再向溶液中加入無(wú)菌結(jié)晶紫水溶液0. 5ml和0. 4%酚紅水溶液4ml，在121°C下滅菌，最后置于4°C保存。該培養(yǎng)液屬于選擇性培養(yǎng)基，奶牛乳房炎大腸桿菌可在該培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，而鏈球菌和葡萄球菌不能在該培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。因此，該培養(yǎng)液主要用于快速鑒別致奶牛乳房炎的大腸桿菌，同時(shí)還可用于藥敏試驗(yàn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種可明顯縮短細(xì)菌培養(yǎng)時(shí)間，大大提高細(xì)菌生產(chǎn)量，提高細(xì)菌毒力和免疫原性，節(jié)約生產(chǎn)成本的牛源性無(wú)乳鏈球菌和停乳鏈球菌生長(zhǎng)的培養(yǎng)基。本發(fā)明的牛源性無(wú)乳鏈球菌培養(yǎng)基組份為1000ml牛肉浸出液、胰蛋白胨17-23g、酵母浸出粉2-5g、氯化鈉2-5g、磷酸氫二鈉0. 3-0. 5g、碳酸氫鈉2_3g、乳清50_60ml 和500g/L的葡萄糖溶液20-25ml。其最佳組分為1000ml牛肉浸出液、胰蛋白胨20g、酵母浸出粉3g、氯化鈉3g、磷酸氫二鈉0. 4g、碳酸氫鈉2. 5g、乳清50ml和500g/L的葡萄糖溶液 22ml。本發(fā)明的牛源性停乳鏈球菌培養(yǎng)基組份為1000ml牛肉浸出液、胰蛋白胨 17-23g、酵母浸出粉2-5g、氯化鈉2-5g、磷酸氫二鈉0. 3-0. 5g、碳酸氫鈉2_3g、犢牛血清 20-25ml、乳清50-60ml和500g/L的葡萄糖溶液20_25ml。其最佳組分為1000ml牛肉浸出液、胰蛋白胨20g、酵母浸出粉3g、氯化鈉3g、磷酸氫二鈉0. 4g、碳酸氫鈉2. 5g、犢牛血清 20ml、乳清50ml和500g/L的葡萄糖溶液22ml。本發(fā)明的牛源性無(wú)乳鏈球菌培養(yǎng)基制備方法是按量稱取各組份，將胰蛋白胨、酵母浸出粉、氯化鈉、磷酸氫二鈉，碳酸氫鈉溶于牛肉浸出液中，調(diào)整PH值至7.7士0. 1，滅菌后再在前述溶液中加 入乳清和的滅菌葡萄糖溶液。本發(fā)明的牛源性停乳鏈球菌培養(yǎng)基制備方法是按量稱取各組份，將胰蛋白胨、酵母浸出粉、氯化鈉、磷酸氫二鈉，碳酸氫鈉溶于牛肉浸出液中，調(diào)整PH值至7.7士0. 1，滅菌后再在前述溶液中加入犢牛血清、乳清和的滅菌葡萄糖溶液。相關(guān)的試驗(yàn)結(jié)果表明，用本發(fā)明的兩種培養(yǎng)基分別培養(yǎng)無(wú)乳鏈球菌和停乳鏈球菌時(shí)細(xì)菌生長(zhǎng)均良好，兩種鏈球菌4h就進(jìn)入生長(zhǎng)對(duì)數(shù)期，無(wú)乳鏈球菌IOh左右達(dá)到生長(zhǎng)高峰期，停乳鏈球菌12h左右達(dá)到生長(zhǎng)高峰期。兩種鏈球菌生長(zhǎng)周期比常用的普通營(yíng)養(yǎng)肉湯均縮短一半左右，比THB縮短2h左右。用本發(fā)明的兩種培養(yǎng)基培養(yǎng)的無(wú)乳鏈球菌和停乳鏈球菌生長(zhǎng)高峰期細(xì)菌數(shù)量比THB培養(yǎng)基細(xì)菌數(shù)量均提高1/3左右、比普通營(yíng)養(yǎng)肉湯提高3倍左右。采用本發(fā)明的兩種培養(yǎng)基進(jìn)行無(wú)乳鏈球菌和停乳鏈球菌規(guī)?；囵B(yǎng)可以大大節(jié)約時(shí)間，提高細(xì)菌抗原濃度和免疫原性，增強(qiáng)疫苗免疫效果，同時(shí)還可降低生產(chǎn)成本。


圖1為不同培養(yǎng)基對(duì)無(wú)乳鏈球菌生長(zhǎng)的影響曲線。圖2為不同培養(yǎng)基對(duì)停乳鏈球菌生長(zhǎng)的影響曲線。
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合實(shí)施例解說(shuō)本發(fā)明。無(wú)乳鏈球菌培養(yǎng)基的制備稱取胰蛋白胨17_23g、酵母浸出粉2_5g、氯化鈉2_5g、 磷酸氫二鈉0. 3-0. 5g，碳酸氫鈉2-3g，將前述各組份溶于IOOOml牛肉浸出液中，用2M氫氧化鈉溶液調(diào)整PH值至7. 7士0. 1，分裝三角瓶，121°C 20分鐘滅菌，溶液放涼后，向溶液中以無(wú)菌方式加入乳清50-60ml和500g/L的滅菌葡萄糖溶液20_25ml，搖勻后備用。停乳鏈球菌培養(yǎng)基的制備稱取胰蛋白胨17_23g、酵母浸出粉2_5g、氯化鈉2_5g、 磷酸氫二鈉0. 3-0. 5g，碳酸氫鈉2-3g，將前述各組份溶于IOOOml牛肉浸出液中，用2M氫氧化鈉溶液調(diào)整PH值至7. 7士0. 1，分裝三角瓶，121°C 20分鐘滅菌，溶液放涼后，向溶液中以無(wú)菌方式加入犢牛血清18-25ml、乳清50-60ml和500g/L的滅菌葡萄糖溶液20_25ml，搖勻后備用。菌種無(wú)乳鏈球菌W04152和停乳鏈球菌T2009，系從蘭州、天津、西安等地奶牛場(chǎng)采集的臨床型乳房炎病乳，經(jīng)分離鑒定，篩選出的毒力強(qiáng)的優(yōu)勢(shì)血清型地方菌株。菌種的活化取凍干保存的無(wú)乳鏈球菌(W04152)和停乳鏈球菌(T2009)，開(kāi)啟后接入含2%血清和5%乳清的普通營(yíng)養(yǎng)肉湯中，37°C培養(yǎng)16-18h后，涂片鏡檢純粹后，接入70ml/L羊血瓊脂斜面，37°C培養(yǎng)16_18h，將菌苔刮入含20%甘油、2%血清和5%乳清的的營(yíng)養(yǎng)肉湯中，混合均勻后，分裝凍存管Iml/支，作為母種，加蓋，貼簽，注明菌種名稱， 置-70°C冰箱保藏。 種子液的制備將-70°C冰箱保藏的無(wú)乳鏈球菌和停乳鏈球菌母種取出后，分別接種于本發(fā)明的無(wú)乳鏈球菌和停乳鏈球菌培養(yǎng)液中，置37°C溫箱，無(wú)乳鏈球菌培養(yǎng)10h，停乳鏈球菌培養(yǎng)12h，鏡檢純粹后，即為兩種鏈球菌的種子液。將前述配制好的無(wú)乳鏈球菌和停乳鏈球菌培養(yǎng)基分別置入500ml三角瓶中，裝量為300ml/瓶，再將牛源性無(wú)乳鏈球菌和停乳鏈球菌種子液分別以0. 08億/ml的接種量接種于裝有兩種發(fā)明培養(yǎng)基的三角瓶中，在37°C下靜止培養(yǎng)2h，然后在轉(zhuǎn)速為120r/min的搖床上振蕩培養(yǎng)，在培養(yǎng)的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期內(nèi)(4-llh)，檢測(cè)培養(yǎng)基PH，在細(xì)菌培養(yǎng)過(guò)程中不斷補(bǔ)加2M NaOH調(diào)節(jié)PH值，使其保持在7.2士0. 1，無(wú)乳鏈球菌培養(yǎng)至IOh停止培養(yǎng)，停乳鏈球菌培養(yǎng)至12h停止培養(yǎng)，收獲菌液。本發(fā)明的兩種培養(yǎng)基與其它培養(yǎng)基使用效果對(duì)比將與前述相同的牛源性無(wú)乳鏈球菌和停乳鏈球菌種子液分別以0. 08億/ml的接種量接種于裝量為300ml的營(yíng)養(yǎng)肉湯、本發(fā)明的兩種培養(yǎng)基和THB的三種培養(yǎng)基搖瓶中，在 37°C下靜止培養(yǎng)2h，然后在轉(zhuǎn)速為120r/min的搖床上振蕩培養(yǎng)至24h，其間每隔2h取樣， 用平板計(jì)數(shù)法測(cè)菌濃度。從圖1可以看出，牛源性無(wú)乳鏈球菌在本發(fā)明無(wú)乳鏈球菌培養(yǎng)基中生長(zhǎng)良好，4h 就進(jìn)入生長(zhǎng)對(duì)數(shù)期，IOh左右達(dá)到生長(zhǎng)高峰期；在THB培養(yǎng)基中無(wú)乳鏈球菌生長(zhǎng)高峰期在 12h左右，細(xì)菌量少于本發(fā)明培養(yǎng)基。而在普通營(yíng)養(yǎng)肉湯中，無(wú)乳鏈球菌生長(zhǎng)緩慢，10h-12h 才進(jìn)入生長(zhǎng)對(duì)數(shù)期，20h才達(dá)到生長(zhǎng)高峰期且細(xì)菌量明顯少于其它兩種培養(yǎng)基。從圖2可以看出，牛源性停乳鏈球菌在本發(fā)明停乳鏈球菌培養(yǎng)基中生長(zhǎng)良好，4h 就進(jìn)入生長(zhǎng)對(duì)數(shù)期，12h左右達(dá)到生長(zhǎng)高峰期，而在THB培養(yǎng)基中生長(zhǎng)高峰期在14h左右，細(xì)菌數(shù)量少于本發(fā)明培養(yǎng)基。在普通營(yíng)養(yǎng)肉湯中，停乳鏈球菌生長(zhǎng)緩慢，10h-12h才進(jìn)入生長(zhǎng)對(duì)數(shù)期，20h左右才達(dá)到生長(zhǎng)高峰期且細(xì)菌數(shù)量明顯少于其它兩種培養(yǎng)基。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，適宜的培養(yǎng)基對(duì)細(xì)菌的生長(zhǎng)有明顯的促進(jìn)作用。營(yíng)養(yǎng)肉湯不適宜牛源性無(wú)乳鏈球菌和停乳鏈球菌生長(zhǎng)，最佳的培養(yǎng)基為本發(fā)明的培養(yǎng)基。本發(fā)明培養(yǎng)基主要特點(diǎn)是在培養(yǎng)基中添加胰蛋白胨，用來(lái)補(bǔ)充碳源和氮源，添加乳清用來(lái)提高細(xì)菌的毒力和免疫原性，配置簡(jiǎn)單即縮短了培養(yǎng)時(shí)間，也提高了單位體積中細(xì)菌數(shù)量和細(xì)菌的免疫原性，增強(qiáng)了疫苗免疫效果，同時(shí)還降低了生產(chǎn)成本，適宜無(wú)乳鏈球菌和停乳鏈球菌大規(guī)模發(fā)酵生產(chǎn)使用。
權(quán)利要求
1.一種牛源性無(wú)乳鏈球菌培養(yǎng)基，其特征在于培養(yǎng)基的組份為1000ml牛肉浸出液、 胰蛋白胨17_23g、酵母浸出粉2-5g、氯化鈉2-5g、磷酸氫二鈉0. 3-0. 5g、碳酸氫鈉2_3g、乳清50-60ml和500g/L的葡萄糖溶液20_25ml。
2.權(quán)利要求所述的牛源性無(wú)乳鏈球菌培養(yǎng)基，其特征在于培養(yǎng)基的組份為1000ml牛肉浸出液、胰蛋白胨20g、酵母浸出粉3g、氯化鈉3g、磷酸氫二鈉0. 4g、碳酸氫鈉2. 5g、乳清 50ml和500g/L的葡萄糖溶液22ml。
3.一種牛源性停乳鏈球菌培養(yǎng)基，其特征在于培養(yǎng)基的組份為1000ml牛肉浸出液、 胰蛋白胨17_23g、酵母浸出粉2-5g、氯化鈉2-5g、磷酸氫二鈉0. 3-0. 5g，碳酸氫鈉2_3g、犢牛血清20-25ml、乳清50-60ml和500g/L的葡萄糖溶液20_25ml。
4.權(quán)利要求3所述的牛源性停乳鏈球菌培養(yǎng)基，其特征在于培養(yǎng)基的組份為1000ml 牛肉浸出液、胰蛋白胨20g、酵母浸出粉3g、氯化鈉3g、磷酸氫二鈉0. 4g、碳酸氫鈉2. 5g、犢牛血清20ml、乳清50ml和500g/L的葡萄糖溶液22ml。
5.權(quán)利要求1至4所述的任一牛源性無(wú)乳鏈球菌培養(yǎng)基制備方法，其特征在于按量稱取各組份，將胰蛋白胨、酵母浸出粉、氯化鈉、磷酸氫二鈉，碳酸氫鈉溶于牛肉浸出液中，調(diào)整pH值至7.7士0. 1，滅菌后再在前述溶液中加入乳清和的滅菌葡萄糖溶液。
6.權(quán)利要求5所述的牛源性停乳鏈球菌培養(yǎng)基制備方法，其特征在于按量稱取各組份，將胰蛋白胨、酵母浸出粉、氯化鈉、磷酸氫二鈉，碳酸氫鈉溶于牛肉浸出液中，調(diào)整PH值至7. 7士0. 1，滅菌后再在前述溶液中加入犢牛血清、乳清和的滅菌葡萄糖溶液。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)一種用于牛源性無(wú)乳鏈球菌或停乳鏈球菌生長(zhǎng)的培養(yǎng)基。本發(fā)明的牛源性無(wú)乳鏈球菌培養(yǎng)基組份為1000ml牛肉浸出液、胰蛋白胨17-23g、酵母浸出粉2-5g、氯化鈉2-5g、磷酸氫二鈉0.3-0.5g、碳酸氫鈉2-3g、乳清50-60ml和500g/L的葡萄糖溶液20-25ml。本發(fā)明的牛源性停乳鏈球菌培養(yǎng)基組份為1000ml牛肉浸出液、胰蛋白胨17-23g、酵母浸出粉2-5g、氯化鈉2-5g、磷酸氫二鈉0.3-0.5g、碳酸氫鈉2-3g、犢牛血清20-25ml、乳清50-60ml和500g/L的葡萄糖溶液20-25ml。
文檔編號(hào)C12R1/46GK102352335SQ20111032440
公開(kāi)日2012年2月15日 申請(qǐng)日期2011年10月21日 優(yōu)先權(quán)日2011年10月21日
發(fā)明者嚴(yán)作廷, 李宏勝, 李新圃, 楊峰, 王玲, 羅金印, 苗小樓, 陳炅然 申請(qǐng)人:中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所