專(zhuān)利名稱(chēng)：一種核酸及其應(yīng)用和藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物制藥領(lǐng)域，具體地，涉及一種核酸、該核酸的應(yīng)用和一種藥物組合物。
背景技術(shù)：
乙型病毒性肝炎簡(jiǎn)稱(chēng)乙型肝炎(乙肝)，是一種由乙型肝炎病毒(HBV)引起的傳染病。乙型肝炎主要通過(guò)血液和體液傳播,臨床表現(xiàn)多樣化,包括急性、慢性、淤膽型和重癥型肝炎，并且容易發(fā)展為慢性肝炎和肝硬化，少數(shù)病例亦可轉(zhuǎn)變?yōu)樵l(fā)性肝細(xì)胞癌。目前HBV感染呈世界性流行，主要侵犯兒童及青壯年。據(jù)世界衛(wèi)生組織報(bào)道，全球約有4億人為慢性HBV攜帶者，每年約有100萬(wàn)人死于HBV感染所致的肝衰竭、肝硬化和原發(fā)性肝細(xì)胞癌。中國(guó)是世界范圍內(nèi)感染HBV人數(shù)最多的國(guó)家，全國(guó)現(xiàn)有慢性乙肝病人2000萬(wàn)，每年乙肝新發(fā)病人數(shù)約50萬(wàn)。由此可見(jiàn)，乙肝已成為嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康的世界性疾病，也是我國(guó)當(dāng)前流行最為廣泛、危害性最為嚴(yán)重的一種傳染病。防治乙型肝炎的藥物中，核酸干擾藥物具有良好的應(yīng)用前景，但是，目前的核酸干擾藥物的體內(nèi)干擾HBV的效果較差。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是克服目前的核酸干擾藥物的體內(nèi)干擾HBV的效果較差的缺陷，提供一種體內(nèi)干擾HBV的效果較好的核酸干擾藥物。本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，針對(duì)同一已知基因或基因組，即使根據(jù)已知的siRNA作用機(jī)制和序列規(guī)律設(shè)計(jì)出來(lái)的siRNA，并不一定能在體內(nèi)具有較好的核酸干擾效果，即不經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，無(wú)法確定siRNA的體內(nèi)效果。本發(fā)明的發(fā)明人經(jīng)過(guò)創(chuàng)造性勞動(dòng)，發(fā)現(xiàn)并驗(yàn)證了若干在體內(nèi)具有較好的核酸干擾效果的siRNA，由此得到本發(fā)明。為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了一種核酸，該核酸含有正義鏈序列為SEQ IDNO:1且反義鏈序列為SEQ ID NO:2的siRNA-8、正義鏈序列為SEQ ID NO:3且反義鏈序列為SEQ ID NO:4的siRNA-23、正義鏈序列為SEQ ID NO:5且反義鏈序列為SEQ ID NO:6的siRNA-27、正義鏈序列為SEQ ID NO:7且反義鏈序列為SEQ ID NO:8的siRNA-30、正義鏈序列為SEQ ID NO:9且反義鏈序列為SEQ ID NO:10的siRNA-32、正義鏈序列為SEQ ID NO:11且反義鏈序列為SEQ ID NO:12的siRNA-34、正義鏈序列為SEQ ID NO:34且反義鏈序列為SEQ ID NO:35的siRNA-4、正義鏈序列為SEQ ID NO:36且反義鏈序列為SEQ ID NO:37的siRNA-9、正義鏈序列為SEQ ID NO:38且反義鏈序列為SEQ ID NO:39的siRNA-17、正義鏈序列為SEQ ID NO:40且反義鏈序列為SEQ ID NO:41的siRNA-22、正義鏈序列為SEQ ID NO:42且反義鏈序列為SEQ ID NO:43的siRNA-26、正義鏈序列為SEQ ID NO:44且反義鏈序列為SEQ ID NO:45的siRNA-35、正義鏈序列為SEQ ID NO:46且反義鏈序列為SEQ ID NO:47的siRNA-3 6、正義鏈序列為SEQ ID NO:48且反義鏈序列為SEQ ID NO:49的siRNA-37、正義鏈序列為SEQ ID NO:50且反義鏈序列為SEQ ID NO:51的siRNA-38、正義鏈序列為SEQ ID NO:52且反義鏈序列為SEQ ID NO:53的siRNA-40和正義鏈序列為SEQID NO:54且反義鏈序列為SEQ ID NO:55的siRNA-45中的至少一種。本發(fā)明還提供了另外一種核酸，該核酸為插入有編碼短發(fā)夾核糖核酸的核酸片段的質(zhì)粒，所述質(zhì)粒表達(dá)所述短發(fā)夾核糖核酸，所述編碼短發(fā)夾核糖核酸的核酸片段由兩個(gè)短反向重復(fù)片段和位于所述兩個(gè)短反向重復(fù)片段之間的環(huán)片段組成；所述兩個(gè)短反向重復(fù)片段的序列分別為SEQ ID N0:13和SEQ ID NO:14，或所述兩個(gè)短反向重復(fù)片段的序列分別為SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:16，或所述兩個(gè)短反向重復(fù)片段的序列分別為SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18，或所述兩個(gè)短反向重復(fù)片段的序列分別為SEQ ID N0:19和SEQ IDNO:20，或所述兩個(gè)短反向重復(fù)片段的序列分別為SEQ ID NO:21和SEQ ID N0:22，或所述兩個(gè)短反向重復(fù)片段的序列分別為SEQ ID N0:23和SEQ ID NO:24，或所述兩個(gè)短反向重復(fù)片段的序列分別為SEQ ID N0:56和SEQ ID NO:57，或所述兩個(gè)短反向重復(fù)片段的序列分別為SEQ ID NO:58和SEQ ID NO:59，或所述兩個(gè)短反向重復(fù)片段的序列分別為SEQ IDN0:60和SEQ ID NO:61，或所述兩個(gè)短反向重復(fù)片段的序列分別為SEQ ID N0:62和SEQ IDNO:63，或所述兩個(gè)短反向重復(fù)片段的序列分別為SEQ ID NO:64和SEQ ID NO:65，或所述兩個(gè)短反向重復(fù)片段的序列分別為SEQ ID N0:66和SEQ ID NO:67，或所述兩個(gè)短反向重復(fù)片段的序列分別為SEQ ID N0:68和SEQ ID NO:69，或所述兩個(gè)短反向重復(fù)片段的序列分別為SEQ ID N0:70和SEQ ID NO:71，或所述兩個(gè)短反向重復(fù)片段的序列分別為SEQ IDN0:72和SEQ ID NO:73，或所述兩個(gè)短反向重復(fù)片段的序列分別為SEQ ID NO:74和SEQID NO:75，或所述兩個(gè)短反向重復(fù)片段的序列分別為SEQ ID NO:76和SEQ ID NO -.1l0本發(fā)明還提供了上述核酸在制備用于預(yù)防和/或治療乙型肝炎的藥物組合物中的應(yīng)用。本發(fā)明還提供了一種藥物組合物，該藥物組合物含有如上所述的核酸和藥學(xué)上可接受的載體。通過(guò)上述技術(shù)方案，本發(fā)明提供的核酸和藥物組合物能夠在體內(nèi)達(dá)到30%以上抑制率的干擾HBV的效果。
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本發(fā)明的其他特征和優(yōu)點(diǎn)將在隨后的具體實(shí)施方式
部分予以詳細(xì)說(shuō)明。
具體實(shí)施例方式以下對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施方式
進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。應(yīng)當(dāng)理解的是，此處所描述的具體實(shí)施方式
僅用于說(shuō)明和解釋本發(fā)明，并不用于限制本發(fā)明。在本發(fā)明中，使用的術(shù)語(yǔ)siRNA是指小干擾核糖核酸，使用的術(shù)語(yǔ)ShRNA是指短發(fā)夾核糖核酸。本發(fā)明提供了一種核酸，該核酸含有正義鏈序列為SEQ ID NO:1且反義鏈序列為SEQ ID NO:2的siRNA-8、正義鏈序列為SEQ ID NO:3且反義鏈序列為SEQ ID NO:4的siRNA-23、正義鏈序列為SEQ ID NO:5且反義鏈序列為SEQ ID NO:6的siRNA-27、正義鏈序列為SEQ ID NO:7且反義鏈序列為SEQ ID NO:8的siRNA-30、正義鏈序列為SEQ ID NO:9且反義鏈序列為SEQ ID NO:10的siRNA-32、正義鏈序列為SEQ ID NO: 11且反義鏈序列為SEQ ID NO: 12的siRNA-34、正義鏈序列為SEQ ID NO:34且反義鏈序列為SEQ ID N0:35的siRNA-4、正義鏈序列為SEQ ID NO:36且反義鏈序列為SEQ ID NO:37的siRNA-9、正義鏈序列為SEQ ID NO:38且反義鏈序列為SEQ ID NO:39的siRNA-17、正義鏈序列為SEQ ID NO:40且反義鏈序列為SEQ ID NO:41的siRNA-22、正義鏈序列為SEQ ID NO:42且反義鏈序列為SEQ ID NO:43的siRNA-26、正義鏈序列為SEQ ID NO:44且反義鏈序列為SEQ ID NO:45的siRNA-35、正義鏈序列為SEQ ID NO:46且反義鏈序列為SEQ ID NO:47的siRNA-36、正義鏈序列為SEQ ID NO:48且反義鏈序列為SEQ ID NO:49的siRNA-37、正義鏈序列為SEQID NO:50且反義鏈序列為SEQ ID NO:51的siRNA-38、正義鏈序列為SEQ ID NO:52且反義鏈序列為SEQ ID NO:53的siRNA-40和正義鏈序列為SEQ ID NO:54且反義鏈序列為SEQID NO:55的siRNA-45中的至少一種。根據(jù)本發(fā)明所述的核酸，其中，優(yōu)選情況下，該核酸為所述siRNA-8、所述siRNA-23、所述 siRNA-27、所述 siRNA-30、所述 siRNA-32 和所述 siRNA-34 中的一種；進(jìn)一步優(yōu)選為所述siRNA-23、所述siRNA-27或所述siRNA-30。該優(yōu)選情況下，所述核酸能夠在較低的施用量下具有較高的抑制效果。根據(jù)本發(fā)明所述的核酸，其中，所述核酸含有核苷酸基團(tuán)作為基本結(jié)構(gòu)單元，所述核苷酸基團(tuán)含有磷酸基團(tuán)、核糖基團(tuán)和堿基，優(yōu)選情況下，所述核酸含有至少一個(gè)修飾的核苷酸基團(tuán)。所述修飾的核苷酸基團(tuán)不會(huì)導(dǎo)致所述核酸干擾HBV的功能的喪失。根據(jù)本發(fā)明所述的核酸，其中，所述修飾的核苷酸基團(tuán)為磷酸基團(tuán)、核糖基團(tuán)和堿基中的至少一種被修飾的核苷酸基團(tuán)。例如，磷酸基團(tuán)的修飾是指對(duì)磷酸基團(tuán)中的氧進(jìn)行修飾，包括硫代磷酸修飾(Phosphorthioate)和硼燒化磷酸鹽修飾(Boranophosphate)。如下式所示分別用硫和硼烷置換磷酸基團(tuán)中的氧。兩種修飾都能穩(wěn)定核酸的結(jié)構(gòu)，保持堿基配對(duì)的高特異性和高親和力。
權(quán)利要求
1.一種核酸，該核酸含有正義鏈序列為SEQ ID NO:1且反義鏈序列為SEQ ID NO:2的siRNA-8、正義鏈序列為SEQ ID NO:3且反義鏈序列為SEQ ID NO:4的siRNA_23、正義鏈序列為SEQ ID NO:5且反義鏈序列為SEQ ID NO:6的siRNA_27、正義鏈序列為SEQ ID NO:7且反義鏈序列為SEQ ID NO:8的siRNA_30、正義鏈序列為SEQ ID NO:9且反義鏈序列為SEQ ID NO:10的siRNA-32、正義鏈序列為SEQ ID NO: 11且反義鏈序列為SEQ ID N0:12的siRNA-34、正義鏈序列為SEQ ID NO:34且反義鏈序列為SEQ ID NO:35的siRNA_4、正義鏈序列為SEQ ID NO:36且反義鏈序列為SEQ ID NO:37的siRNA_9、正義鏈序列為SEQ ID NO:38且反義鏈序列為SEQ ID NO:39的siRNA-17、正義鏈序列為SEQ ID N0:40且反義鏈序列為SEQ ID NO:41的siRNA-22、正義鏈序列為SEQ ID NO:42且反義鏈序列為SEQ ID NO:43的siRNA-26、正義鏈序列為SEQ ID NO:44且反義鏈序列為SEQ ID NO:45的siRNA-35、正義鏈序列為SEQ ID NO:46且反義鏈序列為SEQ ID NO:47的siRNA_36、正義鏈序列為SEQID NO:48且反義鏈序列為SEQ ID NO:49的siRNA_37、正義鏈序列為SEQ ID NO:50且反義鏈序列為SEQ ID NO:51的siRNA_38、正義鏈序列為SEQ ID NO:52且反義鏈序列為SEQID NO:53的siRNA-40和正義鏈序列為SEQ ID NO:54且反義鏈序列為SEQ ID NO:55的siRNA-45中的至少一種。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的核酸，其中，該核酸為所述siRNA-8、所述siRNA-23、所述siRNA-27、所述 siRNA-30、所述 siRNA-32 或所述 siRNA-34 ;優(yōu)選為所述 siRNA-23、所述siRNA-27 或所述 siRNA-30。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的核酸，其中，所述核酸含有至少一個(gè)修飾的核苷酸基團(tuán)。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的核酸，其中，所述修飾的核苷酸基團(tuán)為磷酸基團(tuán)、核糖基團(tuán)和堿基中的至少一種被修飾的核苷酸基團(tuán)。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的核酸，其中，所述核糖基團(tuán)被修飾的核苷酸基團(tuán)為核糖基團(tuán)的2’ -OH被甲氧基或氟取代的核苷酸基團(tuán)。
6.根據(jù)權(quán)利要 求5所述的核酸，其中，該核酸含有正義鏈序列為SEQIDNO:78且反義鏈序列為SEQ ID NO:79的siRNA(m)-8、正義鏈序列為SEQID NO:80且反義鏈序列為SEQID NO:81的siRNA(m)-23、正義鏈序列為SEQ ID NO:82且反義鏈序列為SEQ ID NO:83的siRNA (m)-27、正義鏈序列為 SEQ ID NO:84且反義鏈序列為 SEQ ID NO:85 的 siRNA (m)-30、正義鏈序列為SEQ ID NO:86且反義鏈序列為SEQ ID NO:87的siRNA (m)-32和正義鏈序列為SEQ ID NO:88且反義鏈序列為SEQ ID NO:89的siRNA(m)-34中的至少一種。
7.—種核酸，該核酸為插入有編碼短發(fā)夾核糖核酸的核酸片段的質(zhì)粒，所述質(zhì)粒表達(dá)所述短發(fā)夾核糖核酸，所述編碼短發(fā)夾核糖核酸的核酸片段由兩個(gè)短反向重復(fù)片段和位于所述兩個(gè)短反向重復(fù)片段之間的環(huán)片段組成； 所述兩個(gè)短反向重復(fù)片段的序列分別為SEQ ID N0:13和SEQ ID N0:14，或所述兩個(gè)短反向重復(fù)片段的序列分別為SEQ ID N0:15和SEQ ID NO:16，或所述兩個(gè)短反向重復(fù)片段的序列分別為SEQ ID N0:17和SEQ ID NO:18，或所述兩個(gè)短反向重復(fù)片段的序列分別為SEQ ID N0:19和SEQ ID NO:20，或所述兩個(gè)短反向重復(fù)片段的序列分別為SEQ ID NO:21和SEQ ID NO:22，或所述兩個(gè)短反向重復(fù)片段的序列分別為SEQ ID NO: 23和SEQ ID NO:24，或所述兩個(gè)短反向重復(fù)片段的序列分別為SEQ ID N0:56和SEQ ID N0:57，或所述兩個(gè)短反向重復(fù)片段的序列分別為SEQ ID N0:58和SEQ ID NO:59，或所述兩個(gè)短反向重復(fù)片段的序列分別為SEQ ID N0:60和SEQ ID NO:61，或所述兩個(gè)短反向重復(fù)片段的序列分別為SEQ ID N0:62和SEQ ID NO:63，或所述兩個(gè)短反向重復(fù)片段的序列分別為SEQ ID NO:64和SEQ ID NO:65，或所述兩個(gè)短反向重復(fù)片段的序列分別為SEQ ID NO: 66和SEQ ID NO:·67，或所述兩個(gè)短反向重復(fù)片段的序列分別為SEQ ID N0:68和SEQ ID N0:69，或所述兩個(gè)短反向重復(fù)片段的序列分別為SEQ ID N0:70和SEQ ID NO:71，或所述兩個(gè)短反向重復(fù)片段的序列分別為SEQ ID N0:72和SEQ ID NO:73，或所述兩個(gè)短反向重復(fù)片段的序列分別為SEQ ID NO:74和SEQ ID NO:75，或所述兩個(gè)短反向重復(fù)片段的序列分別為SEQ ID NO:·76 和 SEQ ID NO -Jl0
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的核酸，其中，所述兩個(gè)短反向重復(fù)片段的序列分別為SEQIDN0:13和SEQ ID NO:14，或所述兩個(gè)短反向重復(fù)片段的序列分別為SEQ ID N0:15和SEQID NO:16，或所述兩個(gè)短反向重復(fù)片段的序列分別為SEQ ID N0:17和SEQ ID N0:18，或所述兩個(gè)短反向重復(fù)片段的序列分別為SEQ ID N0:19和SEQ ID NO:20，或所述兩個(gè)短反向重復(fù)片段的序列分別為SEQ ID N0:21和SEQ ID NO:22，或所述兩個(gè)短反向重復(fù)片段的序列分別為 SEQ ID NO:23 和 SEQ ID NO:24。
9.權(quán)利要求1-8中任意一項(xiàng)所述的核酸在制備用于預(yù)防和/或治療乙型肝炎的藥物組合物中的應(yīng)用。
10.一種藥物組合物，該藥物組合物含有權(quán)利要求1-8中任意一項(xiàng)所述的核酸和藥學(xué)上可接受的載體。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種核酸，該核酸為siRNA或者插入有編碼短發(fā)夾核糖核酸的核酸片段的質(zhì)粒。本發(fā)明還提供了上述核酸在制備用于預(yù)防和/或治療乙型肝炎的藥物組合物中的應(yīng)用。本發(fā)明還提供了一種藥物組合物，該藥物組合物含有如上所述的核酸和藥學(xué)上可接受的載體。本發(fā)明提供的核酸和藥物組合物能夠在體內(nèi)達(dá)到30％以上抑制率的干擾HBV的效果。
文檔編號(hào)C12N15/63GK103074340SQ201110331328
公開(kāi)日2013年5月1日 申請(qǐng)日期2011年10月26日 優(yōu)先權(quán)日2011年10月26日
發(fā)明者梁子才, 李德毓, 周春雷, 王茜 申請(qǐng)人:昆山市工業(yè)技術(shù)研究院小核酸生物技術(shù)研究所有限責(zé)任公司