專利名稱：林蛙油功能肽及其發(fā)酵乳飲料制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于保健食品領(lǐng)域，特別是涉及林蛙油功能肽及其發(fā)酵乳飲料的制備方法。
背景技術(shù)：
目前，我國林蛙產(chǎn)品的開發(fā)主要是蛤蟆油原干品，此外還有冰糖蛤士蟆油，林蛙油口服液、林蛙油膠囊、飲料等。從目前開發(fā)的有關(guān)林蛙產(chǎn)品看，存在著產(chǎn)品種類不全、產(chǎn)品用途單一等缺點，因此有必要采用現(xiàn)代加工新技術(shù)，如現(xiàn)代分離純化技術(shù)，生物酶工程技術(shù)， 微膠囊包埋技術(shù)等進(jìn)行林蛙產(chǎn)品(包括食品、保健品、藥品等)的開發(fā)研究，以確保原料中有效成分生理活性不損失，高效利用。近年來，小肽類產(chǎn)品開發(fā)受到人們廣泛關(guān)注，因為肽類物質(zhì)是由氨基酸分子聚合成的小分子物質(zhì)，比蛋白質(zhì)更易被人體消化吸收和利用，而且還具有特殊功能，如抗疲勞、 抗衰老、降血壓、排毒養(yǎng)顏等功效。為提高林蛙油利用率和營養(yǎng)價值，本發(fā)明研究采用酶工程技術(shù)對林蛙油進(jìn)行可控水解，既改善了林蛙油的溶解性和風(fēng)味特點，又使其中的蛋白質(zhì)分解成低分子量的肽類物質(zhì)，并且隨著水解程度的提高，使得具有特殊活性成分的游離雌二醇的利用也得以發(fā)揮更大功效。研究林蛙油生物酶解制備功能肽及發(fā)酵乳飲料，采用生姜汁蛋白酶作為生物酶之一，既改善了飲料風(fēng)味，增加了林蛙油保健食品的花色品種，對提高人體免疫力、抗疲勞、抗缺氧和抗氧化等具有重要作用，從而促進(jìn)林蛙產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。

發(fā)明內(nèi)容
1)、技術(shù)問題本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種林蛙油功能肽發(fā)酵乳飲料的制備方法。2)、技術(shù)方案本發(fā)明解決問題的技術(shù)方案是本發(fā)明涉及一種林蛙油功能肽及其發(fā)酵乳飲料的制備方法，其特征在于該方法步驟如下(1)林蛙油功能肽的制備精選林蛙油一浸泡一勻漿一酶解一離心分離一上清液滅酶一脫腥脫色一過濾冷卻一功能肽酶解溶液按一定料液比向精選林蛙油中加入蒸餾水，浸泡溶脹10h-15h，勻漿，按5% -20% 添加生姜汁后加熱煮沸2h，冷卻到60°C，按0. 2% -0. 5%加入生物酶，酶解時間為!3h-6h， 85°C20分鐘滅酶，3000轉(zhuǎn)/分20分鐘離心分離，上清液活性炭吸附(40°C，2 %的活性炭處理Ih)，過濾冷卻，即得功能肽酶解液。姜汁的制備是將生姜去皮后洗凈，加入姜重量1. 5-2倍的蒸餾水，用組織搗碎機(jī)搗碎后四層紗布過濾得粗姜汁，再3000轉(zhuǎn)/分20分鐘離心去除顆粒，得生姜汁放于4°C冰箱內(nèi)儲存?zhèn)溆谩?2)功能肽發(fā)酵乳飲料的制備工藝過程檸檬酸溶液、穩(wěn)定劑、山梨酸鉀溶液一混合調(diào)配原料乳一預(yù)處理一殺菌一冷卻一發(fā)酵一冷卻攪拌一混合調(diào)配一預(yù)熱均質(zhì)一殺菌 —冷卻一灌裝一成品功能肽和白砂糖溶液一混合調(diào)配選用鮮牛奶作為基料，通過保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌兩種活性乳酸菌發(fā)酵制得發(fā)酵乳，再加入1-5倍純凈水和肽液、白砂糖和檸檬酸等配料制備功能性發(fā)酵乳飲料。此工藝中殺菌方法采用95°C，lOmin，冷卻到43°C，采用3% _5%保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌(1 1)發(fā)酵，攪拌混入配料，均質(zhì)后二次殺菌(85°C，20min)罐裝制得成品。(3)功能肽發(fā)酵乳飲料的配方組成功能肽發(fā)酵乳飲料的口味與穩(wěn)定性受多種因素的影響。選用功能肽酶解液、白砂糖、檸檬酸三個主要影響因素的添加量進(jìn)行口味試驗；選用磷酸二氫鈉、羧甲基纖維素鈉、 黃原膠、單甘脂等作為穩(wěn)定性試驗因素，在單因素實驗基礎(chǔ)上分別進(jìn)行正交設(shè)計。以感官評定作為比較指標(biāo)，確定最佳配方為林蛙油功能肽酶解液10% -20%，白砂糖8% -15%，檸檬酸0. 1% -0.5%，穩(wěn)定劑(磷酸二氫鈉、羧甲基纖維素鈉、黃原膠、單甘脂等)0. 1-0.6%，山梨酸鉀 0. 01-0. 05%。(4)功能肽發(fā)酵乳飲料的質(zhì)量指標(biāo)感官指標(biāo)根據(jù)飲料的組織狀態(tài)、氣味、口感等綜合評分，10位有經(jīng)驗教師和研究生參加評定。理化指標(biāo)和微生物指標(biāo)測定根據(jù)國標(biāo)。經(jīng)分析功能肽發(fā)酵乳飲料色澤呈乳白色， 澄清，無肉眼可見的外來雜質(zhì)；口感酸甜，無異味，具有乳香味。蛋白質(zhì)含量大于1. %;總酸(以檸檬酸計)為0. 23 %，細(xì)菌總數(shù)20個/ml ；大腸菌群數(shù)3個/IOOml ；致病菌未檢出。(5)林蛙油功能肽發(fā)酵乳飲料抗缺氧、抗疲勞動物實驗?zāi)Ｐ偷慕⑴c效果將小鼠隨機(jī)分為4組，每組12只，組間體重經(jīng)t檢驗無顯著差異。對照組、低劑量、中劑量組和高劑量組喂標(biāo)準(zhǔn)小鼠飼料。試驗組每IOg體重每日每鼠灌胃給藥o.ani，其中低劑量、中劑量組和高劑量組分別含林蛙油功能肽發(fā)酵乳飲料為25%，50%和100%， 對照組同途徑給予等量的生理鹽水。飼養(yǎng)7天后進(jìn)行試驗，測定各指標(biāo)。①常壓抗缺氧實驗將試驗組和對照組于末次給予受試物30min后，將小鼠單個放入盛有7. 5克碳酸鈣和7. 5克氫氧化鈉的250ml廣口瓶中，瓶口和瓶塞涂抹凡士林后蓋嚴(yán)，使之不漏氣，立即計時，以呼吸停止為指標(biāo)，觀察并記錄小鼠存活時間。研究證明實驗組與對照組相比， 高劑量組缺氧存活時間提高了 48% (ρ <0.01)，中劑量組缺氧存活時間提高了 33% (ρ < 0. 05)；低劑量組缺氧存活時間提高不明顯。表明林蛙油功能肽發(fā)酵乳飲料具有抗缺氧作用。②游泳試驗?zāi)┐谓o予受試物30min后，給小鼠負(fù)體重5%重量，將小鼠放于水深不少于30cm，水溫25士 1 °C的游泳箱中。記錄自游泳開始至頭部全部沉入水中8s不能浮出水面的時間作為小鼠游泳時間。實驗組與對照組相比，高劑量組游泳時間提高了 64% (p<0.01)，中劑量組游泳時間提高了 38% (ρ < 0. 05)，低劑量組游泳時間提高不明顯。③肝糖原的測定末次給予受試物30min后，將小鼠放于水溫30士 1°C的水中游泳60min后停止， 立即處死小鼠取出肝臟，精確稱取200mg ；加Λ TCA4ml，每管勻漿Imin，3000r/min離心 15min，取上清液轉(zhuǎn)移至另一試管內(nèi)。在沉淀中加入TCA^il，勻漿lmin，再次離心15min，取上清液；與第一次離心的上清液合并，充分混勻。取Iml上清液，每管加入95%的乙醇細(xì)1， 充分混勻至兩種液體間不留有界面。室溫放置過夜。沉淀完全后將試管于3000r/min離心15min。小心倒掉上清液并使試管放置lOmin，用Iml蒸餾水振蕩溶解后測定。高劑量組肝糖原含量為對照組的2. 75倍(ρ < 0. 001)，中劑量組肝糖原含量為對照組的1. 88倍(ρ <0.01)，低劑量提高不明顯。④血乳酸的測定末次給予受試物30min后，將小鼠放于水溫30 士 1°C的水中負(fù)重4%游泳IOmin停止，分別從游泳前、游泳之后的小鼠眼內(nèi)眥靜脈叢取血。于5ml離心管中加入NaF溶液 0. 48ml，準(zhǔn)確吸取全血20μ 1加入試管底部。用試管上清液沖洗微量吸管數(shù)次，再加入蛋白沉淀劑1. 5ml，振蕩混勻，3000r/min離心lOmin，取上清液測定。高中劑量組游泳后與游泳前相比，血乳酸含量與對照組相比分別減少63. 5% (ρ <0.01)和35. 6% (ρ < 0. 05)，并且趨于游泳前的乳酸水平，而低劑量組血乳酸含量與對照組相比變化不明顯。從以上②③④結(jié)果可以看出，高中劑量實驗組與對照組相比游泳時間顯著提高； 肝糖原含量顯著性提高，游泳后與游泳前相比，血乳酸含量變化較小，表明林蛙油功能肽發(fā)酵乳飲料具有延緩疲勞出現(xiàn)的作用。在本發(fā)明中所述的發(fā)酵劑選自保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌混合發(fā)酵劑。本發(fā)明中所述的生物酶選用姜汁蛋白酶和木瓜蛋白酶或姜汁蛋白酶和堿性蛋白酶組合。本發(fā)明涉及的林蛙油功能肽發(fā)酵乳飲料配方中的白砂糖可以用蜂蜜、糖醇和甜蜜素等甜味劑代替。本發(fā)明涉及的林蛙油功能肽發(fā)酵乳飲料配方中的穩(wěn)定劑主要有磷酸二氫鈉、羧甲基纖維素鈉、黃原膠、單甘脂等。本發(fā)明制得的產(chǎn)品證明具有抗疲勞和抗缺氧作用。
具體實施例方式下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明。實施例1一種林蛙油功能肽發(fā)酵乳飲料，是按照下列配方與制備方法制得(1)林蛙油功能肽的制備精選林蛙油一浸泡一勻漿一酶解一離心分離一上清液滅酶一脫腥脫色一過濾冷卻一功能肽酶解溶液按料液比1 20向精選林蛙油中加入蒸餾水，浸泡溶脹12h，勻漿，按10%添加生姜汁后加熱煮沸池，冷卻到60°C，按0. 4%加入木瓜蛋白酶，酶解時間為4h，85°C 20分鐘滅 酶，3000轉(zhuǎn)/分20分鐘離心分離，上清液活性炭吸附(40°C，2%的活性炭處理Ih)，過濾冷 卻，即得功能肽酶解液。姜汁的制備是將生姜去皮后洗凈，加入姜重量2倍的蒸餾水，用組織搗碎機(jī)搗碎 后四層紗布過濾得粗姜汁，再3000轉(zhuǎn)/分20分鐘離心去除顆粒，得生姜汁放于4°C冰箱內(nèi) 儲存?zhèn)溆谩?2)功能肽發(fā)酵乳飲料的制備工藝過程檸檬酸溶液、穩(wěn)定劑、山梨酸鉀溶液一混合調(diào)配原料乳一預(yù)處理一殺菌一冷卻一發(fā)酵一冷卻攪拌一混合調(diào)配一預(yù)熱均質(zhì)一殺菌 —冷卻一灌裝一成品功能肽和白砂糖溶液一混合調(diào)配選用鮮牛奶作為基料，通過保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌兩種活性乳酸菌發(fā)酵制 得發(fā)酵乳，再加入2倍純凈水和15%的林蛙油功能肽酶解液，8%的白砂糖，0. 15%的檸檬 酸，0.3%的穩(wěn)定劑(磷酸二氫鈉、羧甲基纖維素鈉、黃原膠、單甘脂等)和0. 05%的山梨酸 鉀等配料制備功能性發(fā)酵乳飲料。此工藝中殺菌方法采用95°C，10min，冷卻到43°C，采用 3%保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌(1 1)發(fā)酵，攪拌混入配料，均質(zhì)后二次殺菌(85°C， 20min)罐裝制得成品。實施例2一種林蛙油功能肽發(fā)酵乳飲料，是按照下列配方與制備方法制得(1)林蛙油功能肽的制備精選林蛙油一浸泡一勻漿一酶解一離心分離一上清液滅酶一脫腥脫色一過濾冷 卻一功能肽酶解溶液按料液比1 20向精選林蛙油中加入蒸餾水，浸泡溶脹10h，勻漿，按10%添加生 姜汁后加熱煮沸池，冷卻到60°C，按0. 4%加入堿性蛋白酶，酶解時間為證，850C 20分鐘滅 酶，3000轉(zhuǎn)/分20分鐘離心分離，上清液活性炭吸附(40°C，2%的活性炭處理Ih)，過濾冷 卻，即得功能肽酶解液。姜汁的制備是將生姜去皮后洗凈，加入姜重量1. 5倍的蒸餾水，用組織搗碎機(jī)搗 碎后四層紗布過濾得粗姜汁，再3000轉(zhuǎn)/分20分鐘離心去除顆粒，得生姜汁放于4°C冰箱 內(nèi)儲存?zhèn)溆谩?2)功能肽發(fā)酵乳飲料的制備工藝過程檸檬酸溶液、穩(wěn)定劑、山梨酸鉀溶液一混合調(diào)配原料乳一預(yù)處理一殺菌一冷卻一發(fā)酵一冷卻攪拌一混合調(diào)配一預(yù)熱均質(zhì)一殺菌 —冷卻一灌裝一成品功能肽和白砂糖溶液一混合調(diào)配
選用鮮牛奶作為基料，通過保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌兩種活性乳酸菌發(fā)酵制得發(fā)酵乳，再加入3倍純凈水和10%的林蛙油功能肽酶解液，10%的白砂糖，0. 2%的檸檬酸，0.4%的穩(wěn)定劑(磷酸二氫鈉、羧甲基纖維素鈉、黃原膠、單甘脂等)和0.03%的山梨酸鉀等配料制備功能性發(fā)酵乳飲料。此工藝中殺菌方法采用95°C，10min，冷卻到43°C，采用 3%保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌(1 1)發(fā)酵，攪拌混入配料，均質(zhì)后二次殺菌(85°C， 20min)罐裝制得成品。實施例3—種林蛙油功能肽發(fā)酵乳飲料，是按照下列配方與制備方法制得(1)林蛙油功能肽的制備精選林蛙油一浸泡一勻漿一酶解一離心分離一上清液滅酶一脫腥脫色一過濾冷卻一功能肽酶解溶液按料液比1 20向精選林蛙油中加入蒸餾水，浸泡溶脹12h，勻漿，按15%添加生姜汁后加熱煮沸2h，冷卻到60°C，按0. 5%加入木瓜蛋白酶，酶解時間為5h，85°C 20分鐘滅酶，3000轉(zhuǎn)/分20分鐘離心分離，上清液活性炭吸附(40°C，2%的活性炭處理Ih)，過濾冷卻，即得功能肽酶解液。姜汁的制備是將生姜去皮后洗凈，加入姜重量1. 5倍的蒸餾水，用組織搗碎機(jī)搗碎后四層紗布過濾得粗姜汁，再3000轉(zhuǎn)/分20分鐘離心去除顆粒，得生姜汁放于4°C冰箱內(nèi)儲存?zhèn)溆谩?2)功能肽發(fā)酵乳飲料的制備工藝過程檸檬酸溶液、穩(wěn)定劑、山梨酸鉀溶液一混合調(diào)配原料乳一預(yù)處理一殺菌一冷卻一發(fā)酵一冷卻攪拌一混合調(diào)配一預(yù)熱均質(zhì)一殺菌 —冷卻一灌裝一成品功能肽和白砂糖溶液一混合調(diào)配
選用鮮牛奶作為基料，通過保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌兩種活性乳酸菌發(fā)酵制得發(fā)酵乳，再加入4倍純凈水和15%的林蛙油功能肽酶解液，15%的白砂糖，0.3%的檸檬酸，0.5%的穩(wěn)定劑(磷酸二氫鈉、羧甲基纖維素鈉、黃原膠、單甘脂等)和0. 04%的山梨酸鉀等配料制備功能性發(fā)酵乳飲料。此工藝中殺菌方法采用95°C，10min，冷卻到43°C，采用 4%保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌(1 1)發(fā)酵，攪拌混入配料，均質(zhì)后二次殺菌(85°C， 20min)罐裝制得成品。實施例4一種林蛙油功能肽發(fā)酵乳飲料，是按照下列配方與制備方法制得(1)林蛙油功能肽的制備精選林蛙油一浸泡一勻漿一酶解一離心分離一上清液滅酶一脫腥脫色一過濾冷卻一功能肽酶解溶液按料液比1 20向精選林蛙油中加入蒸餾水，浸泡溶脹13h ，勻漿，按15%添加生姜汁后加熱煮沸2h，冷卻到60°C，按0. 5%加入堿性蛋白酶，酶解時間為3h，85°C 20分鐘滅酶，3000轉(zhuǎn)/分20分鐘離心分離，上清液活性炭吸附(40°C，2%的活性炭處理Ih)，過濾冷卻，即得功能肽酶解液。姜汁的制備是將生姜去皮后洗凈，加入姜重量2倍的蒸餾水，用組織搗碎機(jī)搗碎后四層紗布過濾得粗姜汁，再3000轉(zhuǎn)/分20分鐘離心去除顆粒，得生姜汁放于4°C冰箱內(nèi)儲存?zhèn)溆谩?2)功能肽發(fā)酵乳飲料的制備工藝過程檸檬酸溶液、穩(wěn)定劑、山梨酸鉀溶液一混合調(diào)配原料乳一預(yù)處理一殺菌一冷卻一發(fā)酵一冷卻攪拌一混合調(diào)配一預(yù)熱均質(zhì)一殺菌 —冷卻一灌裝一成品功能肽和白砂糖溶液一混合調(diào)配 選用鮮牛奶作為基料，通過保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌兩種活性乳酸菌發(fā)酵制得發(fā)酵乳，再加入2倍純凈水和10%的林蛙油功能肽酶解液，12%的白砂糖，0.3%的檸檬酸，0.5%的穩(wěn)定劑(磷酸二氫鈉、羧甲基纖維素鈉、黃原膠、單甘脂等)和0. 03%的山梨酸鉀等配料制備功能性發(fā)酵乳飲料。此工藝中殺菌方法采用95°C，10min，冷卻到43°C，采用 5%保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌(1 1)發(fā)酵，攪拌混入配料，均質(zhì)后二次殺菌(85°C， 20min)罐裝制得成品。
權(quán)利要求
1.一種林蛙油功能肽發(fā)酵乳飲料，其特征在于其制備方法如下檸檬酸溶液、穩(wěn)定劑、山梨酸鉀溶液一混合調(diào)配原料乳一預(yù)處理一殺菌一冷卻一發(fā)酵一冷卻攪拌一混合調(diào)配一預(yù)熱均質(zhì)一殺菌一冷卻一灌裝一成品功能肽和白砂糖溶液一混合調(diào)配選用鮮牛奶作為基料，通過保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌兩種活性乳酸菌發(fā)酵制得發(fā)酵乳，再加入1-5倍純凈水和肽液、白砂糖和檸檬酸等配料制備功能性發(fā)酵乳飲料；此工藝中殺菌方法采用95°C，10min，冷卻到43°C，采用3% 保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌 (1 1)發(fā)酵，攪拌混入配料，均質(zhì)后二次殺菌(85°C，20min)罐裝制得成品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的林蛙油功能肽發(fā)酵乳飲料的制備，其特征在于所涉及的林蛙油功能肽的制備方法如下精選林蛙油一浸泡一勻漿一酶解一離心分離一上清液滅酶一脫腥脫色一過濾冷卻一功能肽酶解溶液按一定料液比向精選林蛙油中加入蒸餾水，浸泡溶脹10h-15h，勻漿，按5% -20%添加生姜汁后加熱煮沸2h，冷卻到60°C，按0. 2% -0. 5%加入生物酶，酶解時間為!3h-6h， 85°C 20分鐘滅酶，3000轉(zhuǎn)/分20分鐘離心分離，上清液活性炭吸附(40°C，2%的活性炭處理Ih)，過濾冷卻，即得功能肽酶解液。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的林蛙油功能肽的制備，其特征在于所述的生物酶選用姜汁蛋白酶和木瓜蛋白酶或姜汁蛋白酶和堿性蛋白酶組合。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的林蛙油功能肽發(fā)酵乳飲料，其特征在于工藝配方為添加林蛙油功能肽酶解液10 % -20 %，白砂糖8 % -15 %，檸檬酸0.1^-0.5%,穩(wěn)定劑(磷酸二氫鈉、 羧甲基纖維素鈉、黃原膠、單甘脂等)0. 1-0. 6%，山梨酸鉀0. 01-0. 05%。
5.根據(jù)權(quán)利要求1和權(quán)利要求4所述的林蛙油功能肽發(fā)酵乳飲料，其特征在于配方中的白砂糖可以用蜂蜜、糖醇和甜蜜素等甜味劑代替。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5所述制備的林蛙油功能肽發(fā)酵乳飲料，其特征在于經(jīng)質(zhì)量指標(biāo)檢測完全符合產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)，且每天食用一定劑量具有抗疲勞和耐缺氧作用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種林蛙油功能肽發(fā)酵乳飲料及其制備方法，屬于保健食品技術(shù)領(lǐng)域。該發(fā)酵乳飲料的制備包括林蛙油功能肽的制備和功能肽發(fā)酵乳飲料的制備。它的工藝配方為林蛙油功能肽酶解液，白砂糖，檸檬酸，穩(wěn)定劑(磷酸二氫鈉、羧甲基纖維素鈉、黃原膠、單甘脂等)，山梨酸鉀。本發(fā)明涉及的發(fā)酵乳飲料原料簡單易得，產(chǎn)品酸甜可口，色香味協(xié)調(diào)愉悅，可接受性強(qiáng)。本發(fā)明采用酶工程技術(shù)對林蛙油進(jìn)行可控水解，既改善了林蛙油的溶解性和風(fēng)味特點，又使其中的蛋白質(zhì)分解成低分子量的肽類物質(zhì)，使其更易吸收并提高其營養(yǎng)功能特性。本發(fā)明涉及的林蛙油功能肽發(fā)酵乳飲料質(zhì)量指標(biāo)經(jīng)檢測完全符合產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)功能試驗證明其具有抗疲勞和抗缺氧作用。
文檔編號A23J3/04GK102440347SQ201110404740
公開日2012年5月9日 申請日期2011年12月8日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月8日
發(fā)明者葉海青, 張鐵華, 梁海艷, 鄭健, 陳玉江 申請人:吉林大學(xué)