專利名稱：耐受除草劑的植物的制作方法
耐受除草劑的植物相關申請的交叉引用本申請要求專利系列號61/314，901 (2010年3月17日提交);61/410，802 (2010年11月5日提交);和61/417，132 (2010年11月24號)的美國臨時申請的優(yōu)選權，這些文獻的公開內(nèi)容通過提及而以其整體合并入本文。
背景技術：
乙酰羥酸合酶(AHAS ；EC 4. I. 3. 18)是催化纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸這些支鏈氨基酸的生物化學合成的第一個酶(Singh B. K. , 1999Biosynthesis of valine, leucine, andisoleucine, Singh B. K.(編輯)Plant amino acids. Marcel Dekker Inc. New York, N.Y.第227-247頁)。AHAS是四個結構上不同的除草劑家族的作用位點，所述四個除草劑家族包括橫酸服類(LaRossa RA 和 Falco S C，1984Trends Biotechnol. 2:158-161 )、咪唑 啉酮類(Shaner 等人，1984Plant Physiol. 76:545-546)、三唑并卩密唳類(Subramanian 和Gerwick, 1989 Inhibition of acetolactate synthase by triazolopyrimidines,(編輯)Whitaker J R, Sonnet P E Biocatalysis in agricultural biotechnology.ACSSymposium Series, American Chemical Society. Washington, D. C.第 277-288 頁)和喃P定基苯甲酸酯類(Subramanian等人，1990Plant Physiol 94:239-244)。由于它們在非常低的施用率時的有效性和在動物中的相對無毒性，咪唑啉酮類(IMI)和磺酰脲類(SU)除草劑被廣泛地用于現(xiàn)代農(nóng)業(yè)。通過抑制AHAS活性，這些除草劑家族阻止易感植物(包括許多雜草物種)的進一步生長和發(fā)育。通過用咪唑啉酮類除草劑進行誘變和選擇，已經(jīng)開發(fā)出了耐受咪唑啉酮類的卡諾拉油菜(S. Tan等人，Pest Management Science 61，200d. Z4b)?；趦蓚€最耐受:的突變體PMi和PM2，開發(fā)出了商業(yè)品種，并且目前以Clearfield 商標進行銷售。已知pmi僅對于咪唑啉酮類耐受，而PM2對于咪唑啉酮類和磺酰脲類兩者是交叉耐受的。盡管PM2突變型基因可以提供一定水平的對于咪唑啉酮類和/或磺酰脲類除草劑的耐受性，但是那些迄今所報道的包含單個PM2突變型基因的油籽油菜(OSR)植物展示出不足的對于SU除草劑的耐受性。例如，向包含PM-突變型基因的春性歐洲油菜(B. napus)栽品種45A77的噻吩磺隆施用顯示出導致減少的卡諾拉油菜生物量、除草劑損傷癥狀或延遲的成熟(R. Degenhardt 等人，Weed Technology 19,2005,608)。另外，存在有四個商購可得的冬油籽油菜(WOSR)品系，它們在本領域中被認為提供了對于作為來自先前的小麥或豌豆作物的遺留物而存在的磺酰脲類除草劑土壤殘留物的耐受性。這四個品系為來自Kansas State University的歐洲油菜品種“Sumner” ；來自 DeKalb 的 Roundup Ready 品系 DKW46-15 和 DKW47-15;和來自 Croplan Genetics 的Roundup Ready 品系 HyClass 115W。但是，已發(fā)現(xiàn)耐受遺留物的WOSR植物展示出有限的對于以超過遺留物水平(即超過從所施用的除草劑劑量剩余的大約O. 5x的殘留濃度)存在的土壤SU除草劑殘留物的耐受性。因此，本領域中仍然存在對于這樣的冬性蕓苔屬植物的需要，所述冬性蕓苔屬植物展示出對于大于遺留物水平的磺酰脲類除草劑的耐受性。
發(fā)明簡述本發(fā)明提供了表達一個或多個耐受除草劑的AHASL基因的耐受除草劑的(HT)冬性蕓苔屬(Brassica)植物以及使用此類植物的方法。包含一個或幾個編碼PM2或類似突變的AHASL基因的本發(fā)明的HT冬性蕓苔屬植物，當與通常引起非耐受性植物展示出顯著損傷的SU除草劑量相接觸時，出人意料地未展示出顯著的損傷。例如，當與Ix率的SU除草劑相接觸時，在I至10的定級標準上(其中I表示沒有可見的損害，而10表示植物死亡)，本文的HT蕓苔屬植物展示出I的得分。本發(fā)明基于出人意料的發(fā)現(xiàn)，即包含提供咪唑啉酮類耐受性的突變型AHAS基因或者包含通常提供不足的SU除草劑耐受性(例如，在春性OSR中)的突變型AHAS基因的 冬性蕓苔屬作物(如通過冬油籽油菜(WOSR)即冬性歐洲油菜卡諾拉所例示的)，令人吃驚地展示出商業(yè)上有用的水平的對于某些磺酰脲類除草劑(即一亞類的磺酰脲類除草劑)的耐受性。然而，當相同基因存在于相同蕓苔屬作物的春性類型中時，即使它們提供了商業(yè)上有用的水平的咪唑啉酮類除草劑耐受性，仍發(fā)現(xiàn)這些作物對于這些商業(yè)水平的磺酰脲類除草劑是易感的。由本發(fā)明的冬性蕓苔屬植物所展示出的令人吃驚地高的水平的SU除草劑耐受性可以在當耐受除草劑的目的AHASL基因存在于蕓苔屬A基因組中時(優(yōu)選地，當這樣的HT-AHASL基因是變體并且位于植物的A基因組天然AHASL基因座中時)發(fā)生。在一些實施方案中，這樣的HT-AHASL是通過誘變(例如，蕓苔屬A基因組AHASL的隨機誘變)而獲得的那種。當耐受除草劑的目的AHASL基因僅存在于除了蕓苔屬A基因組之外的其他基因組中時，發(fā)現(xiàn)冬性蕓苔屬植物對于商業(yè)水平的此類SU除草劑是易感的。還發(fā)現(xiàn)在蕓苔屬A基因組中具有耐受除草劑的目的AHASL基因的相同蕓苔屬作物的春性類型對于此類水平的SU除草劑是易感的。本發(fā)明的HT冬性蕓苔屬植物可以包括具有至少一個耐受除草劑的AHASL(HT-AHASL )基因的蕓苔屬植物，其中所述植物中的HT-AHASL基因之中僅一個編碼選自P197X和W574X的磺酰脲類除草劑耐受性(SU-HT)突變并且為單-SU-HT-AHASL基因，其任選地可以編碼“其他HT突變”，并且其中所述單-SU-HT-AHASL基因位于所述蕓苔屬植物的A基因組中。具有這樣的單-SU-HT-AHASL基因的本發(fā)明的冬性蕓苔屬植物可以在其任何基因組中進一步包含不編碼P197X或W574X置換但編碼不同的HT置換(例如“其他HT突變”)的第二個HT-AHASL基因。例如，在A基因組中具有純合地、半合地或雜合地編碼W574L的HT-AHASL基因的本發(fā)明的冬性蕓苔屬植物也可以在蕓苔屬C基因組中具有第二個HT-AHASL基因，例如編碼S653N突變的AHAS基因。本發(fā)明提供了使用此類HT冬性蕓苔屬植物的方法，包括用于控制雜草的方法，用于選擇HT冬性蕓苔屬植物的方法，和用于向冬性蕓苔屬作物提供產(chǎn)量保護的方法。這些方法可以包括施行本發(fā)明的HT冬性蕓苔屬植物的苗后處理或苗前除草劑處理。附圖
簡述圖I提供了編碼PM2突變的歐洲油菜AHASL基因(BnAHASLlA_PM2)的部分核苷酸序列(SEQ ID NO: I)。圖2提供了編碼PMl突變的歐洲油菜AHASL基因(BnAHASLlC_PMl)的部分核苷酸序列(SEQ ID NO: 2)。
圖3提供了具有PM2突變的歐洲油菜AHASL (BnAHASLlA_PM2)的部分氨基酸序列(SEQ ID N0:3)。圖4提供了具有PMl突變的歐洲油菜AHASL (BnAHASLlC_PMl)的部分氨基酸序列(SEQ ID N0:4)。圖5提供了編碼PM2突變的蕓苔屬AHASL基因(AHASL1A_PM2)的第二個核苷酸序列(SEQ ID NO:5)。圖6提供了具有PM2突變的蕓苔屬AHASL (AHASL1A_PM2)的第二個氨基酸序列(SEQ ID N0:6)。圖7是顯示了在咪唑啉酮類除草劑存在下AHAS酶活性的圖。圖8是顯示了在磺酰脲類除草劑存在下AHAS酶活性的圖?！?br> 發(fā)明詳述定義如本文中所使用的，將使用氨基酸的標準單字母縮寫，例如A表示丙氨酸，P表示脯氨酸，W表示色氨酸，X表示任意氨基酸，等等。相比于野生型序列而言的突變將通過指明野生型氨基酸和位置并隨后給出在突變體中存在的氨基酸來表示。例如，P197X將用于表示，在位置197處的脯氨酸可以用任意氨基酸進行置換。如本文中所使用的，氨基酸位置涉及質(zhì)體蕓苔屬AHAS酶的大亞基(AHASL)的多肽。在本文中所涉及的蕓苔屬AHASL中的氨基酸位置根據(jù)相應于在擬南芥(Arabidopsisthaliana) (At)AHASL序列中的那些殘基的殘基工業(yè)標準編號來進行編號，并且可以用(At)標示。例如，P197 (Ay)是指在蕓苔屬AHASL中在相應于處于擬南芥AHASL的位置197處的脯氨酸的位置處的脯氨酸殘基。如本文中所使用的，“耐受...的”或“耐受除草劑的”是指在通常在非耐受性(例如，野生型)植物或其部分中引起生長抑制的除草劑量存在下能夠生長的植物或其部分。通常抑制非耐受性植物生長的除草劑水平是已知的，并且可由本領域技術人員容易地確定。實例包括由制造商推薦用于施用的量。最大比率是通常會抑制非耐受性植物生長的除草劑量的實例。如本文中所使用的，“耐受除草劑的(HT) AHASL"是指在植物細胞中從AHASL基因的一個HT AHASL等位基因，和/或從同一 HT AHASL基因的兩個同源等位基因之一或兩者(即在所述植物細胞的同一基因組中)表達出的AHASL多肽，由此該HT-AHASL可以給所述植物細胞的AHAS酶提供除草劑耐受性。HT-AHASL基因可以是重組的，或者可以通過應用誘變方法、育種方法或其他本領域中已知的方法來獲得。這樣的基因可以是半合的、雜合的或純合的。如本文中所使用的，“AHAS”和“AHASL”分別是指功能性的質(zhì)體AHAS酶和其AHASL多肽，即其在本文中所描述的蕓苔屬植物的細胞之中是有功能的。類似地，諸如“基因”和“多核苷酸”的術語，當關于編碼這樣的“AHAS”和“AHASL”的那些進行使用時，是指其功能性基因，即在此類細胞中可表達的基因。如本文中關于在其各種實施方案中有用的除草劑而使用的，諸如AHAS抑制劑、ACCase抑制劑、PPO抑制劑、EPSPS抑制劑、咪唑啉酮類、磺酰脲類等的術語，是指那些在本領域中認可的在農(nóng)藝學上可接受的除草劑活性成分(A. I.)。類似地，諸如殺真菌劑、殺線蟲齊U、殺蟲劑等的術語，是指其他在本領域中認可的在農(nóng)藝學上可接受的活性成分。當關于特定的突變型酶或其突變型多肽進行使用時，諸如“耐受除草劑的(HT)”和“除草劑耐受性”的術語是指此類酶耐受通常會使所述酶的野生型(非突變型)形式的活性失活或抑制所述酶的野生型(非突變型)形式的活性的除草劑A. I.的能力(或者所述多肽賦予其酶以耐受上述除草劑A. I.的能力的能力)。當特別地關于AHAS酶或AHASL多肽進行使用時，它特別地是指耐受AHAS抑制劑的能力。AHAS抑制劑的類別包括，磺酰脲類、咪唑啉酮類、三唑并嘧啶類、磺酰基氨基羰基三唑啉酮類和嘧啶基苯甲酸酯類。如本文中所使用的，“重組體”是指這樣的生物，其由于人工應用致重組(recombinogenic)技術而具有來自不同來源的遺傳物質(zhì)。如本文中所使用的，“經(jīng)誘變的”是指具有相比于相應野生型生物的遺傳物質(zhì)而言經(jīng)改變的遺傳物質(zhì)的生物，其中所述在遺傳物質(zhì)中的改變通過人工作用來進行誘導和/或選擇?？梢杂糜诋a(chǎn)生經(jīng)誘變的生物的人工作用的實例包括但不限于在亞致死濃度的除草劑(例如，磺酰脲類除草劑)中進行的植物細胞(例如，愈傷組織)的組織培養(yǎng)；用化學誘變劑 處理植物細胞，并隨后用除草劑(例如，磺酰脲類除草劑)進行選擇；或者，用X-射線處理植物細胞，并隨后用除草劑(例如，磺酰脲類除草劑)進行選擇?？梢允褂帽绢I域中已知的任何方法來誘導突變。誘導突變的方法可以在遺傳物質(zhì)中的隨機位置處誘導突變，或者可以在遺傳物質(zhì)中的特定位置處誘導突變(即，可以為定向誘變技術)。如本文中所使用的，“基因改造生物”(GMO)是其遺傳特征已經(jīng)通過人工努力(所述人工努力引起插入來自另一來源生物的遺傳物質(zhì))而被改變的生物，或者保留了所插入的遺傳物質(zhì)的其后代。來源生物可以為不同的生物類型(例如，GMO植物可以包含細菌的遺傳物質(zhì))，或者來自相同的生物類型(例如，GMO植物可以包含來自另一植物的遺傳物質(zhì))。如本文中所使用的，“重組體”和“GM0”被認為是同義詞，并且表明來自不同來源的遺傳物質(zhì)的存在；然而，“經(jīng)誘變的”表明經(jīng)改變的來自相應野生型生物的遺傳物質(zhì)，而不是來自另一來源生物的遺傳物質(zhì)。如本文中所使用的，“野生型”或“相應野生型植物”表示生物或其遺傳物質(zhì)的典型形式，正如它通常出現(xiàn)的那樣，其區(qū)別于例如經(jīng)誘變的和/或重組的形式。如本文中所使用的，誘導除草劑耐受性的突變“HT-突變”為賦予對于一種或多種除草劑(即磺酰脲類除草劑、咪唑啉酮類除草劑，等等)的耐受性的在AHASL酶的氨基酸序列中的改變。在一些實施方案中，HT-突變可以為“SU-ΗΤ-突變”，即選自P197X和W574X的突變。在一些實施方案中，SU-HT-突變可以選自 P197S、P197A、P197E、P197L、P197Q、P197R、P197S、P197V、P197W、P197Y、P197I、P197H、P197C 和 P197G。在其他實施方案中，SU-HT-突變可以選自P197S、P197L和P197T。在一些實施方案中，SU-HT-突變可以選自W574L、W574M、W574C、W574S、W574R、W574G、W574A、W574F、W574Q 和 W574Y。在一些實施方案中，SU-HT-突變可以包含W574L。在一些實施方案中，HT-突變可以為“其他HT-突變”。如本文中所使用的，“其他HT-突變”為賦予對于一種或多種除草劑(即磺酰脲類除草劑、咪唑啉酮類除草劑，等等)的耐受性的在AHASL酶的氨基酸序列中的改變，其中所述改變位于除了脯氨酸197或色氨酸574之外的其他位置處。下面的表I提供了用于“其他HT-突變”的可能位點、允許的置換、優(yōu)選的置換和更優(yōu)選的置換的列表。X表示任意氨基酸。表1. “其他” HT突變
權利要求
1.用于在冬性蕓苔屬作物中控制雜草的方法，所述方法包括 施行所述作物的耐受除草劑的(HT)蕓苔屬植物的苗后處理，這通過以在從O. 25x至大約4x SU的范圍內(nèi)的劑量率向所述植物和其緊鄰的附近施用包含磺酰脲類(SU)的除草劑組合物來進行，其中， (A)所述除草劑組合物 (1)包含選自下列的SU:酰嘧磺隆、氟啶嘧磺隆、甲酰胺磺隆、唑吡嘧磺隆、碘磺隆、甲磺胺磺隆、煙嘧磺隆、噻吩磺隆和苯磺隆，其農(nóng)藝學上可接受的鹽和酯，以及其組合，和 (2)包含不超過顯著量的任何其他SU;和 (B)所述蕓苔屬植物包含至少一個耐受除草劑的AHASL(HT-AHASL)基因，其中所述植物中的HT-AHASL基因之中僅一個編碼選自P197X和W574X的磺酰脲類除草劑耐受性(SU-HT)突變并且為單-SU-HT-AHASL基因，其任選地可以編碼“其他HT突變”，并且其中所述單-SU-HT-AHASL基因位于所述蕓苔屬植物的A基因組中；并且 其中，所述蕓苔屬植物能夠耐受以Ix SU的劑量率來進行的所述苗后SU處理，其中沒有顯著的來自所述處理的由SU除草劑誘導的損傷。
2.用于在冬性蕓苔屬作物中控制雜草的方法，所述方法包括 施行所述作物的耐受除草劑的(HT)蕓苔屬植物的苗前處理或植前0-30天時的處理，這通過以在從大于O. 5x至大約4x SU的范圍內(nèi)的劑量率向其種子種植地點和其緊鄰的附近施用包含磺酰脲類(SU )的除草劑組合物來進行，其中， (A)所述除草劑組合物 Cl)包含選自下列的SU :酰嘧磺隆、氟啶嘧磺隆、甲酰胺磺隆、唑吡嘧磺隆、碘磺隆、甲磺胺磺隆、煙嘧磺隆、噻吩磺隆和苯磺隆，其農(nóng)藝學上可接受的鹽和酯，以及其組合，和 (2)不包含顯著量的其他SU ;和 (B)所述蕓苔屬植物包含至少一個耐受除草劑的AHASL(HT-AHASL)基因，其中所述植物中的HT-AHASL基因之中僅一個編碼選自P197X和W574X的磺酰脲類除草劑耐受性(SU-HT)突變并且為單-SU-HT-AHASL基因，其任選地可以編碼“其他HT突變”，并且其中所述單-SU-HT-AHASL基因位于所述蕓苔屬植物的A基因組中；并且 其中，所述蕓苔屬植物能夠耐受以Ix SU的劑量率來進行的所述苗后SU處理，其中沒有顯著的來自所述處理的由SU除草劑誘導的損傷。
3.權利要求I或2的方法，所述方法進一步包括在用除草劑組合物進行處理之前，選擇所述耐受除草劑的蕓苔屬植物。
4.權利要求I或2的方法，所述方法進一步包括選擇能夠產(chǎn)生所述耐受除草劑的蕓苔屬植物的種子，種植所述種子，和從所述種子生長出所述耐受除草劑的蕓苔屬植物。
5.權利要求I或2的方法，其中所述單-SU—HT-AHASL基因 Ca)編碼P197X或W574X中的僅一個，并且純合地或半合地編碼它； (b)編碼P197X或W574X中的僅一個，并且在一個等位基因中編碼它，并且在同源等位基因中分別編碼野生型P197P或W574W殘基； (c)雜合地編碼兩個不同的P197X突變，并且對于野生型W574W殘基而言是純合的； (d)雜合地編碼兩個不同的W574X突變，并且對于野生型P197P殘基而言是純合的；或者(e)編碼下述兩者(i)在一個等位基因中，一個P197X突變和野生型W574W殘基，和(ii)在同源等位基因中，一個W574X突變和野生型P197P殘基。
6.用于選擇HT冬性蕓苔屬植物的方法，所述方法包括 (I)根據(jù)權利要求I的第(A)和(B)項，施行蕓苔屬植物的苗后處理，這通過以在從O. 25x至大約4x SU的范圍內(nèi)的劑量率向所述植物和其緊鄰的附近施用包含磺酰脲類(SU)的除草劑組合物來進行；和 (II)選擇這樣的蕓苔屬植物，該蕓苔屬植物能夠耐受以至少IxSU的劑量率來進行的所述苗后SU處理，其中沒有顯著的來自所述處理的由SU除草劑誘導的損傷。
7.用于選擇HT冬性蕓苔屬植物的方法，所述方法包括 (I)根據(jù)權利要求2的第(A)和(B)項，施行蕓苔屬植物的苗前處理或植前0-30天時的處理，這通過以在從大于O. 5x至大約4x SU的范圍內(nèi)的劑量率向其種子種植地點和其緊鄰的附近施用包含磺酰脲類(SU)的除草劑組合物來進行；和 (II)選擇這樣的蕓苔屬植物，該蕓苔屬植物能夠耐受以IxSU的劑量率來進行的所述苗后SU處理，其中沒有顯著的來自所述處理的由SU除草劑誘導的損傷。
8.向在磺酰脲類(SU)除草劑組合物存在下生長的冬性蕓苔屬作物提供產(chǎn)量保護的方法，所述方法包括 在SU除草劑組合物存在下種植冬性蕓苔屬植物的種子；和 在能夠產(chǎn)生該冬性蕓苔屬植物的條件下使所述種子生長； 其中所述蕓苔屬植物包含至少一個耐受除草劑的AHASL (HT-AHASL)基因，其中所述植物中的HT-AHASL基因之中僅一個編碼選自P197X和W574X的磺酰脲類除草劑耐受性(SU-HT)突變并且為單-SU-HT-AHASL基因，其任選地可以編碼“其他HT突變”，并且其中所述單-SU-HT-AHASL基因位于所述蕓苔屬植物的A基因組中；并且 其中所述產(chǎn)量等于或大于由相同類型的冬性蕓苔屬植物的野生型形式所提供的產(chǎn)量。
9.向冬性蕓苔屬作物提供產(chǎn)量保護的方法，所述方法包括 種植冬性蕓苔屬植物的種子； 在能夠產(chǎn)生該冬性蕓苔屬植物的條件下使所述種子生長；和 施行所述植物的除草劑處理，這通過向所述植物和其緊鄰的附近施用包含磺酰脲類(SU)的除草劑組合物來進行； 其中所述蕓苔屬植物包含至少一個耐受除草劑的AHASL (HT-AHASL)基因，其中所述植物中的HT-AHASL基因之中僅一個編碼選自P197X和W574X的磺酰脲類除草劑耐受性(SU-HT)突變并且為單-SU-HT-AHASL基因，其任選地可以編碼“其他HT突變”，并且其中所述單-SU-HT-AHASL基因位于所述蕓苔屬植物的A基因組中；并且 其中所述產(chǎn)量等于或大于由相同類型的冬性蕓苔屬植物的野生型形式所提供的產(chǎn)量。
10.權利要求8或9的方法，所述方法進一步包括在所述除草劑處理之前，選擇所述冬性蕓苔屬植物的所述種子。
11.權利要求I至10中任一項的方法，其中所述除草劑組合物進一步包含一種或多種咪唑啉酮類除草劑。
12.權利要求11的方法，其中所述咪唑啉酮類為咪草啶酸或者其農(nóng)藝學上可接受的鹽或酯。
13.權利要求I至10中任一項的方法，其中所述除草劑組合物包含碘磺隆和甲磺胺磺隆的組合。
14.權利要求I至10中任一項的方法，其中所述SU-HT突變選自P197S、P197A、P197E、P197L、P197Q、P197R、P197S、P197V、P197W、P197Y、P197I、P197H、P197C、P197G。
15.權利要求14的方法，其中所述SU-HT突變選自P197S、P197L和P197T。
16.權利要求I至10中任一項的方法，其中所述SU-HT突變選自W574L、W574M、W574C、W574S、W574R、W574G、W574A、W574F、W574Q 和 W574Y。
17.權利要求16的方法，其中所述SU-HT突變?yōu)閃574L。
18.權利要求I至10中任一項的方法，其中所述蕓苔屬植物包含選自A122X、R199X、A205X、S653X、G654X以及其組合的“其他HT-突變”。
19.權利要求I至10中任一項的方法，其中所述蕓苔屬植物包含選自A122T、A122V、A122D、A122P、A122Y、R199A、R199E、A205V、A205C、A205D、A205E、A205R、A205T、A205W、A205Y、A205N、S653N、S653I、S653F、S653T、G654Q、G654C、G654E、G654D 以及其組合的“其他HT-突變”。
20.權利要求I至10中任一項的方法，其中所述蕓苔屬植物包含一個HT-AHASL/197/574 基因，其 SU-HT 突變?yōu)?W574X。
21.權利要求20的方法，其中所述蕓苔屬植物進一步包含至少一個“其他HT-突變”。
22.權利要求21的方法，其中所述“其他HT-突變”選自A122X、R199X、A205X、S653X、G654X以及其組合。
23.權利要求22的方法，其中所述“其他HT-突變”選自A122T、A122V、R199A、R199E、A205V、S653N、G654E 以及其組合。
24.權利要求22的方法，其中所述“其他HT-突變”為S653X。
25.權利要求24的方法，其中所述“其他HT-突變”為S653N。
26.權利要求21的方法，其中所述“其他HT-突變”由位于所述植物的蕓苔屬A-基因組中的HT-AHASL基因編碼。
27.權利要求21的方法，其中所述“其他HT-突變”由所述單-SU-AHASL基因編碼。
28.權利要求8至10中任一項的方法，所述方法進一步包括收獲由所述冬性蕓苔屬植物所產(chǎn)生的種子。
29.權利要求8至10中任一項的方法，其中所述SU除草劑組合物包含 (A)選自下列的SU:酰嘧磺隆、氟啶嘧磺隆、甲酰胺磺隆、唑吡嘧磺隆、碘磺隆、甲磺胺磺隆、煙嘧磺隆、噻吩磺隆和苯磺隆，其農(nóng)藝學上可接受的鹽和酯，以及其組合，和 (B)不超過顯著量的任何其他SU。
30.權利要求8至10中任一項的方法，其中通過所述SU除草劑組合物來控制存在于所述冬性蕓苔屬植物的緊鄰的附近處的雜草。
31.權利要求8或10的方法，其中所述SU除草劑組合物作為施用給先前作物的SU除草劑組合物的土壤殘留物而存在。
32.權利要求8至10中任一項的方法，其中所述冬性蕓苔屬作物的產(chǎn)量高于相應的野生型同品系的且在包含相同除草劑的條件下生長的冬性蕓苔屬植物的作物的產(chǎn)量。
33.權利要求8至10中任一項的方法，其中所述冬性蕓苔屬作物的產(chǎn)量實質(zhì)上等價于當所述冬性蕓苔屬作物在所述SU除草劑組合物不存在下生長時的產(chǎn)量。
34.權利要求10的方法，其中所選擇出的蕓苔屬植物能夠耐受以至少IxSU的劑量率來進行的所述除草劑處理，其中沒有顯著的來自所述處理的由SU除草劑誘導的損傷。
35.權利要求1-34中任一項的方法，其中所述除草劑組合物包含至少一種選自下列的進一步的A. I. =EPSPS-抑制劑，草甘膦；谷氨酰胺合成酶抑制劑，草銨膦；ACCase抑制劑，dim類、fop類或den類；PP0_抑制劑，苯嘧磺草胺；殺真菌劑，吡唑醚菌酯；或者其農(nóng)藝學上可接受的鹽或酯；并且所述蕓苔屬植物表達對于所述進一步的A. I.的耐受性性狀。
36.用于在冬性蕓苔屬作物中控制雜草的方法，所述方法包括 施行所述作物的耐受除草劑的(HT)蕓苔屬植物的苗后處理，這通過以在從O. 25x至大約4x SU的范圍內(nèi)的劑量率向所述植物和其緊鄰的附近施用包含磺酰脲類(SU)的除草劑組合物來進行，其中， (A)所述除草劑組合物 Cl)包含選自下列的SU :酰嘧磺隆、氟啶嘧磺隆、甲酰胺磺隆、唑吡嘧磺隆、碘磺隆、甲磺胺磺隆、煙嘧磺隆、噻吩磺隆和苯磺隆，其農(nóng)藝學上可接受的鹽和酯，以及其組合，和 (2)任選地，包含至多豐實量的總“其他SU”含量；和 (B)所述蕓苔屬植物包含至少一個耐受除草劑的AHASL(HT-AHASL)基因，其中所述植物中的HT-AHASL基因之中僅一個編碼選自P197X和W574X的磺酰脲類除草劑耐受性(SU-HT)突變并且為單-SU-HT-AHASL基因，其任選地可以編碼“其他HT突變”，并且其中所述單-SU-HT-AHASL基因位于所述蕓苔屬植物的A基因組中；并且 其中，所述蕓苔屬植物能夠耐受以Ix SU的劑量率來進行的所述苗后SU處理，其中沒有顯著的來自所述處理的由SU除草劑誘導的損傷。
37.權利要求36的方法，其中所述除草劑組合物(A)任選地包含至多中等量的“其他SU ”。
38.權利要求36的方法，其中所述除草劑組合物(A)任選地包含至多少量的“其他SU”。
39.權利要求36的方法，其中所述除草劑組合物(A)任選地包含至多微小量的“其他 SU ”。
40.權利要求36的方法，其中所述除草劑組合物(A)任選地包含至多最小量的“其他SU ”。
41.權利要求I的方法，其中所述除草劑組合物(A)任選地包含至多痕量的“其他SU”。
42.權利要求I的方法，其中所述除草劑組合物(A)任選地包含大約0wt%的“其他SU”。
43.用于產(chǎn)生種子的方法，所述方法包括施行權利要求I至42中任一項的方法，并且從所述蕓苔屬植物收獲種子。
44.從根據(jù)權利要求I至42中任一項的方法進行處理的蕓苔屬植物收獲的種子。
45.用于在冬性蕓苔屬作物中控制雜草的方法，所述方法包括 施行所述作物的耐受除草劑的(HT)蕓苔屬植物的苗后處理，這通過以在從O. 25x至大約4x SU的范圍內(nèi)的劑量率向所述植物和其緊鄰的附近施用包含磺酰脲類(SU)的除草劑組合物來進行，其中， (A)所述除草劑組合物 (I)包含選自下列的SU :酰嘧磺隆、氟啶嘧磺隆、甲酰胺磺隆、唑吡嘧磺隆、碘磺隆、甲磺胺磺隆、煙嘧磺隆、噻吩磺隆和苯磺隆，其農(nóng)藝學上可接受的鹽和酯，以及其組合，和 (2)不包含顯著量的其他SU ;和 (B)所述蕓苔屬植物 Cl)包含至少一個耐受除草劑的AHASL (HT-AHASL)基因，其中所述HT-AHASL基因之一編碼選自P197X和W574X的磺酰脲類耐受性HT (SU-HT)突變，以及至少一個選自G121X、A122X、M124X、V196X、R199X、T203X、A205X、F206X、K256X、M351X、H352X、R373X、D375X、D376X、R377X、M570X、V571X、F578X、S653X 和 G654X 的另外的突變；或 (2)包含至少兩個耐受除草劑的AHASL (HT-AHASL)基因，其中第一個HT-AHASL基因編碼選自P197X和W574X的磺酰脲類耐受性(SU-HT)突變，并且第二個HT-AHASL基因編碼選自 G121X、A122X、M124X、V196X、R199X、T203X、A205X、F206X、K256X、M351X、H352X、R373X、D375X、D376X、R377X、M570X、V571X、F578X、S653X 和 G654X 的突變； 其中，所述蕓苔屬植物能夠耐受以Ix SU的劑量率來進行的所述苗后SU處理，其中沒有顯著的來自所述處理的由SU除草劑誘導的損傷。
全文摘要
本發(fā)明提供了耐受除草劑的冬性蕓苔屬植物。本發(fā)明還提供了用于通過施用本發(fā)明的耐受除草劑的植物所耐受的除草劑來控制雜草生長的方法。本發(fā)明的植物表達對于一種或多種AHAS酶抑制劑的作用耐受的AHAS酶。
文檔編號C12N9/88GK102947443SQ201180019608
公開日2013年2月27日 申請日期2011年3月17日 優(yōu)先權日2010年3月17日
發(fā)明者H·梵鐵吉姆, M·普芬寧, H·布雷默, R·克勒, A·舍恩哈默 申請人:巴斯夫農(nóng)業(yè)化學產(chǎn)品公司