專利名稱：利用FSHβ基因第2外顯子檢測徐淮山羊繁殖力的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
利用FSHP基因第2外顯子檢測徐淮山羊繁殖力的方法。
背景技術(shù)：
卵泡刺激素又稱促卵泡激素(FSH)，是一種糖蛋白激素，分子量約為30KD，屬于糖蛋白激素家族。它促進(jìn)顆粒細(xì)胞增生，刺激類固醇生成，調(diào)節(jié)配子細(xì)胞的發(fā)育和成熟，是下丘腦-垂體-性腺軸中的主要激素之一。其主要生理作用是促進(jìn)雌性動物子宮內(nèi)膜生長、 排卵、刺激多卵泡發(fā)育及刺激雄性動物精子發(fā)生。FSH是由兩個非共價結(jié)合可解離的亞基所組成，稱為a-亞基和￠-亞基，a-亞基由92 96個氨基酸組成，P -亞基由109 115個氨基酸組成。由垂體分泌的FSH、LH、促甲狀腺激素(TSH)及胎盤產(chǎn)生的絨毛膜促性腺素(hCG)它們共同組成一個糖蛋白激素家族。它們的功能各異，結(jié)構(gòu)卻極為相似，都是由a-亞基和￠-亞基所組成。在同一種內(nèi)a-亞基是確定的，甚至在所有哺乳動物中的 a-亞基的氨基酸序列都是保守的，它們的a-亞基可以互換，而￠-亞基不能互換，￠-亞基具有激素各自的特異性，又具有種間特異性，是激素生物活性和免疫活性的決定因素。徐淮山羊是產(chǎn)于徐州、淮陰地區(qū)沿廢黃河故道及丘陵地帶的兼用型山羊地方品種。經(jīng)過長期選育，逐漸培育形成具有早熟、產(chǎn)羔多、耐粗放、板皮質(zhì)地優(yōu)良等特點的徐淮山羊品種。徐淮山羊主要特征被毛白色，頭部多有角，少數(shù)無角，角粗壯呈三角形，琥珀色，向外上方或向后彎曲，額微突，面微凹，嘴狹長，耳微翅，體型近似方形，前軀較大，腹部緊縮， 四肢稍高，蹄呈白玉色，尾短上翹。公羊4-7月齡性成熟。7月齡開始配種。母羊5-6月齡初配，終年發(fā)情，配種集中在中春、秋兩季，產(chǎn)羔率250%左右，每胎多產(chǎn)雙羔，最多者達(dá)4-5 只。以2-3月齡和7-8月齡的當(dāng)年羊在晚秋初冬時屠宰剝皮，其板皮質(zhì)量最好，皮板足壯， 質(zhì)地堅韌細(xì)致，彈性好。徐淮山羊主要分布徐州市的豐、沛、銅山、睢寧四縣，以睢寧縣數(shù)量最多；淮陰市的泗洪、泗陽、宿遷等縣也有少量分布。Means和Vaitukaitis等(1972)首先證實大鼠睪丸的曲細(xì)精管具有FSH的特異結(jié)合位點 ° (Means AR, Vaitukaitis J. Peptide hormone " receptors " specif ic binding of 3H-FSH to testis[J]Endocrinology, 1972,90 :39-46.) Monniaux 等(1989)發(fā)現(xiàn)，具有二層或二層以上顆粒細(xì)胞的大鼠卵泡，其顆粒細(xì)胞膜上已存在FSH結(jié)合位點.(Monniaux D，De RevierM M. Quantitative autoradiographic study of FSH Binding sites in prepubertal ovaries of three strains of rats[J]. J Reprod Fertil，1989，85 : 151-162.)。趙要風(fēng)等(1999)通過交叉PCR擴(kuò)增對豬FSHP亞基基因結(jié)構(gòu)區(qū)插入片段進(jìn)行了精確定位，該插入片段位于第I個內(nèi)含子靠近第2個外顯子上游區(qū)段。(趙要風(fēng)，李寧，陳永福，等.豬FSHP基因RFLP s研究初報[J],畜牧獸醫(yī)學(xué)報，1998，29 (I) :23-26.)。1997年Abir等首次利用鏡下顯微解剖的方法獲取人腔前卵泡并培養(yǎng)(Abir R， Franks S，Mobberley M A，et al. Mechanical isolation and in vitro growth of preantral and small antral human follicles[J]. Fertil Steril，1997，68 :682-688.)。 Silva的研究結(jié)果表明FSH能夠剌激體外培養(yǎng)的牛顆粒細(xì)胞P450aMmRNA和P450scxmRNA
3的轉(zhuǎn)錄，雌激素、孕激素的合成能力相應(yīng)的提高，對雌激素起效的最小劑量為O. lng/ml, 而孕麗為 10ng/ml。(J Manuel Silva, et al. [J]. Biol Reprod, 2000,62 :186-191.)。 Campbell發(fā)現(xiàn)生理濃度的FSH刺激羊顆粒細(xì)胞的增生和分化。(Campbell B K，et al. [J], Biol Reprod, 1996,106 :7-16.) Tilly等在培養(yǎng)大鼠的顆粒細(xì)胞時發(fā)現(xiàn)，在體外培養(yǎng)過程中，顆粒細(xì)胞所含F(xiàn)SH受體呈下降趨勢，用FSH處理可防止這種下降(Tilly J L， Lapolt P S, Hsueh A J ff. Hormonal regulation of follicle-stimulating hormone receptor messenger ribonucleic acid levels in cultured rat granulosa cells[J]. Endocrinology, 1992，130 1296-1302.)Tisdall D J等利用反轉(zhuǎn)錄_PCR技術(shù)及原位RNA雜交技術(shù)，發(fā)現(xiàn)成年山羊在有 1-2層顆粒細(xì)胞的早期腔前卵泡中就已存在FSH受體mRNA的表達(dá)并且一直持續(xù)貫穿于卵子發(fā)生至閉鎖后期。(Tisdall D J, Watanabe K, Hudson N L, et al. FSH receptor gene expression during ovarian follicle development in sheep[J]. J Mol Endocrinol, 1995,15(3) =273-281.) 0 Hulshof等發(fā)現(xiàn)，添加FSH可使牛腔前卵泡卵母細(xì)胞生長直徑的增長加快，顆粒細(xì)胞增多，這一結(jié)果與小鼠、倉鼠和人類上的研究結(jié)果一致。(Hulshof S C, Fiquei redo J R, Beckers J F, et al. Effects of fetal bovine serum, FSH and 17 β -E2on the culture of bovine preantral follicles[J]. Theriogenology,1995,44 217-226.)。李鳳娥研究表明在FSHi3基因與仔豬哺乳期生長關(guān)系的研究中發(fā)現(xiàn)雜合型(Nn) 母豬后代生長速度比純合子后代生長快，存在顯著的雜合效應(yīng)(P < O. 05)，攜帶等位基因η 的母豬，其胎兒初生重大于NN型的母豬(P < O. 05)(李鳳娥.豬ESR和FSHii位點對繁殖性狀的調(diào)控及其調(diào)控機(jī)理的研究[學(xué)位論文].華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，2002.)。朱孟玲等研究發(fā)現(xiàn) FSH^基因?qū)Τ醍a(chǎn)小梅山母豬的總產(chǎn)仔數(shù)、產(chǎn)活仔數(shù)和初生窩重有顯著影響(朱孟玲，吳井生，陳超，等.FSHii基因和PRLR基因的多態(tài)性對小梅山豬繁殖性狀的影響[J].豬業(yè)科學(xué)， 2008(4) :76-78. )。CHEN Jie等研究表明二花臉豬中FSHβ基因各基因型間產(chǎn)仔數(shù)差異顯著(CHEN Jie, JIANG Zhi-Hua, LIU Hong-Lin,LI Qi-Xian, FANG Mei-Ying, WU Yan-Ning. Relationship between PCR-SSCP at FSHβ subunit locus and litter size in the Erhualian pigs. Journal of Nanjing Agricultural University,1999, 22(2) :55-58.)。
程美玲等人對云嶺黑山羊產(chǎn)糕性狀的分子基礎(chǔ)進(jìn)行了研究，分析了云嶺黑山羊FSH基因表達(dá)量與其產(chǎn)羔數(shù)性狀的相關(guān)性，采用絕對熒光定量PCR方法對兩品種山羊卵巢組織中FSH基因的表達(dá)量、用放射免疫技術(shù)對血液中FSH的水平進(jìn)行了測定。結(jié)果表明，云嶺黑山羊FSH表達(dá)水平顯著地低于波爾山羊(P < 0. 05)，云嶺黑山羊血清FSH濃度顯著低于波爾山羊(P < 0. 05)，且云嶺黑山羊FSH表達(dá)水平與產(chǎn)羔數(shù)之間的相關(guān)系數(shù)為
0.9540，存在顯著正相關(guān)(P < 0. 05)(程美玲，趙素梅，黃英等.云嶺黑山羊FSH基因表達(dá)量與其產(chǎn)羔數(shù)相關(guān)性研究[J].云南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2010，25 (6) :807-810.)。AN Xiao-peng 等人根據(jù)羊的FSHii基因序列，設(shè)計兩對引物，通過PCR-SSCP檢測FSHii基因第2外顯子在西農(nóng)薩能奶山羊和波爾山羊中的單核苷酸多態(tài)性。研究結(jié)果表明FSHP基因與羊的產(chǎn)糕性能存在著顯著的相關(guān)性(AN Xiao-peng, HAN Dan，HOU Jin-xing，等 Polymorphism of Exon 2 of FSHβ Gene and Its Relationship with Reproduction Performance in Two Goat Breeds [J], Agricultural Sciences in China，2010，9 (6) :880-886.)。王敬軍等人為提高崇明白山羊的繁殖效率，用促卵泡素(Follicle-Stimulating Hormone,FSH)對崇明白山羊進(jìn)行超數(shù)排卵，回收2-4細(xì)胞期胚胎移植至同期發(fā)情受體的輸卵管，跟蹤受體妊娠和產(chǎn)羔結(jié)果，觀察不同F(xiàn)SH劑量時的超排結(jié)果，比較受體品種和移植胚胎數(shù)對妊娠率和產(chǎn)羔率的影響(王敬軍，胡大偉，劉國輝，等.FSH劑量、受體品種及移植胚胎數(shù)對崇明白山羊胚胎移植效率的影響[J]·上海交通大學(xué)學(xué)報，2011，29 (I) :38-42.)。哺乳動物FSH0基因編碼110多個氨基酸，其在分子進(jìn)化過程中具有很強(qiáng)的保守性。例如在111個氨基酸中，人和馬FSHii亞基只有9個氨基酸的變化，同源性達(dá)到92% ； 羊和牛之間有8個氨基酸的變化，同源性為94% ;豬與牛之間有7個氨基酸的變化，同源性為94% (焦淑賢，王瑞祥，蔡正華，等。楓涇和長白青所母豬首次發(fā)情周期內(nèi)血清中5種生殖激素的變化[J]·畜牧獸醫(yī)學(xué)報，1992，23 (3) :202-206.)。張莉，李慶章等(2002)指出 FSH由α和β亞基所組成，F(xiàn)SHa負(fù)責(zé)信號傳導(dǎo)作用，其氨基酸序列保守，山羊與綿羊、水牛的同源性最高(張莉，李慶章，關(guān)洪斌.山羊卵泡刺激素a亞基cDNA的分子克隆與序列分析[J].中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報，2002，18 (6) :693-697.)。FSH^基因作為一個影響繁殖性狀的候選基因，其SNP與產(chǎn)羔性狀相關(guān)性已成為重要研究方向之一。梁琢，儲明星等(2006)在濟(jì)寧青山羊和遼寧絨山羊中檢測到AA、AB和 AC 3種基因型，在波爾山羊中檢測到AA、CC和AC 3種基因型，在安哥拉山羊中檢測到AA、 BB、CC、AB、AC和BC6種基因型，BB型與AA型相比在外顯子2的第94bp處有G — A突變， CC型與AA型相比在外顯子2的第174bp有一處C —T沉默突變。(梁琢，儲明星，張建海， 等.FSHii基因PCR-SSCP多態(tài)性及其與濟(jì)寧青山羊高繁殖力關(guān)系的研究[J].遺傳，2006， 28(9) :1071-1077.)。安小鵬等(2009)則在西農(nóng)薩能奶山羊和波爾山羊2個群體中發(fā)現(xiàn)外顯子2的40bp處發(fā)生了 G — A突變，同時在148bp處堿基發(fā)現(xiàn)了 T — C替代(安小鵬，韓丹，侯金星，等.FSHii基因外顯子2的多態(tài)性及其與兩個山羊品種繁殖性能的相關(guān)性研究 [J].中國農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，42 (11) :4051-4057.)。楊玉敏等(2009)對黃淮山羊的該段序列研究中發(fā)現(xiàn)存在AA、AB、和AC 3種基因型，AB型與AA型相比在47bp和147bp發(fā)生了 C —T 突變，AC型除在147bp處發(fā)生了 C —T突變外，在156bp處則發(fā)生了 G — A突變(楊玉敏， 丁建平，張子軍，等.黃淮山羊FSHii基因第2外顯子SSCP多態(tài)性研究[J].安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2009，36 (3) :461-463.)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種利用FSHii基因第2外顯子檢測徐淮山羊繁殖力的方法。本發(fā)明所提供的檢測徐淮山羊繁殖力的方法，是檢測待測徐淮山羊基因組中的 FSH^基因的第二外顯子第174位核苷酸為C還是突變?yōu)門，185位核苷酸為G還是突變?yōu)?A，從而確定徐淮山羊的基因型，然后通過基因型確定徐淮山羊繁殖力；所述FSHii基因第2 外顯子核苷酸序列為自GENBANK ACCESSION NUMBER為S64745. I的第2461至2691的核苷酸。所述確定徐淮山羊的基因型的方法為如果徐淮山羊基因組中的FSH0基因的第二外顯子第174位核苷酸為C時，其純合體的基因型為AA，突變?yōu)門時，其基因型為AB ;如果徐淮山羊基因組中的FSHii基因的第二外顯子第185位核苷酸為G時，其純合體的基因型為AA，突變?yōu)锳時，其基因型為AC。通過基因型確定徐淮山羊繁殖力的方法為所述AA基因型徐淮山羊的繁殖力高于AB基因型徐淮山羊和AC基因型徐淮山羊。所述方法中，所述檢測山羊基因組的FSHP基因的第二外顯子第174位核苷酸為 C還是突變?yōu)門，185位核苷酸為G還是突變?yōu)锳的方法是利用PCR-SSCP方法擴(kuò)增待測山羊基因組中的核苷酸序列為自GENBANK ACCESSION NUMBER為S64745. I的第2387至2738 位核苷酸的片段，并將該擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行SSCP檢測，若得到2條電泳條帶，即為AA基因型；得到與所述AA基因型沿電泳方向第一條電泳條帶和第二條電泳條帶具有相同遷移距離的兩條電泳條帶并且在這兩條電泳條帶之間出現(xiàn)一條新的條帶的，為AB基因型；得到與所述AA 基因型沿電泳方向第一條電泳條帶和第二條電泳條帶具有相同遷移距離的兩條電泳條帶并且在第一條電泳條帶上面出現(xiàn)一條新的電泳條帶的，為AC基因型。所述方法中，所述PCR-SSCP方法的擴(kuò)增引物對為具有序列表中SEQ ID No. I所述的核苷酸和具有序列表中SEQ ID No. 2所述序列的核苷酸。所述方法中，所述繁殖力為每胎產(chǎn)羔數(shù)。本發(fā)明的方法，采用SSCP方法對在FSHP基因第二外顯子進(jìn)行單核苷酸多態(tài)性檢測，并對具有SSCP多態(tài)性的DNA片段進(jìn)行測序比較分析，尋找到與繁殖力相關(guān)的遺傳標(biāo)記， 數(shù)據(jù)統(tǒng)計結(jié)果表明，該遺傳標(biāo)記多態(tài)性可確定山羊的繁殖力。本發(fā)明的方法即利用該遺傳標(biāo)記，建立SSCP檢測山羊品種的基因型，并利用該基因型確定其繁殖力的有效方法，實驗證明，該方法可以迅速、簡便的檢測徐淮山羊的繁殖力。本發(fā)明的方法為山羊的分子育種提供了一個準(zhǔn)確簡便的檢測方法。


圖I為FSHP基因第二外顯子的引物的PCR產(chǎn)物。圖2為徐淮山羊PCR擴(kuò)增片段的SSCP分析。
具體實施例方式下述實施中所用主要試劑10XPCR Buffer, d NTP, Taq DNA聚合酶，DNA Maker PCR弓丨物等均購自上海生物工程公司。檢測山羊繁殖力的方法的建立及其效果驗證I、檢測山羊繁殖力的方法的建立I)模板材料準(zhǔn)備2011年具有產(chǎn)羔數(shù)記錄的75只徐淮山羊母羊的耳組織，采自江蘇鎮(zhèn)江種羊場。采用酚-氯仿法抽提山羊的基因組DNA，滅菌TE溶解稀釋后_20°C保存?zhèn)溆谩?)弓丨物設(shè)計和PCR擴(kuò)增根據(jù)Guzman K等發(fā)表的綿羊FSH ^基因外顯子2的序列(GenBank登錄號 S64745)設(shè)計引物，引物擴(kuò)增片段大小為352bp。上游引物5'-CAGACTACTGTAACTCATCTC-3' (SEQ ID No. I)下游引物5'-ATGTTTTGGTCCTTTAAGGGT-3' (SEQ ID No. 2)PCR擴(kuò)增反應(yīng)總體積為 20 ii L 10 XBuffer 2. 5 y L (含Mg2+)，lOmmol/LdNTP 2 u L,10 μ mol/L上下游引物各I. O μ L, IOOng/ μ LDNA模版I μ L, rTaq酶O. 3 μ L,去離子水 12. 2 μ L0PCR擴(kuò)增條件如下94°C預(yù)變性5min，94°C變性30s, 58. 8°C退火30s，72°C延伸 30s, 32個循環(huán)，72°C延伸10min，4°C保存。擴(kuò)增產(chǎn)物在聚丙烯酰胺凝膠中檢測，結(jié)果表明擴(kuò)增片段長度與預(yù)期大小一致(圖 I)，并且沒有非特異性擴(kuò)增條帶，可以直接進(jìn)行SSCP分析。3) SSCP 分析將擴(kuò)增的PCR產(chǎn)物進(jìn)行SSCP分析，具體方法如下所述取5μ L PCR產(chǎn)物置于 PCR管中，加5μ L上樣緩沖液(98%甲酰胺、O. 025%溴酚藍(lán)、O. 025%二甲苯氰、ρΗ8. O的 IOmmoI/L EDTA, 10%甘油)，離心混勻，98°C變性lOmin，迅速插入冰盒放置_25°C冰箱7min 完成變性。變性后PCR產(chǎn)物在12%非變性聚丙烯酰胺凝膠中常溫電泳過夜，電泳結(jié)束后，銀染顯色并進(jìn)行拍照和分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)PCR擴(kuò)增片段有3種基因型，命名為AA、AC和AB (圖2)。擴(kuò)增產(chǎn)物非變性聚丙烯酰胺電泳得到兩條帶的，即為AA基因型；得到與所述AA基因型沿電泳方向第一條電泳條帶和第二條電泳條帶具有相同遷移距離的兩條電泳條帶并且在這兩條電泳條帶之間出現(xiàn)一條新的條帶的，為AB基因型；得到與所述AA基因型沿電泳方向第一條電泳條帶和第二條電泳條帶具有相同遷移距離的兩條電泳條帶并且在第一條電泳條帶上面出現(xiàn)一條新的電泳條帶的，為AC基因型。圖2中，泳道3，5，6，7為AA基因型；泳道1，2，8為AB基因型；泳道4為AC基因型。根據(jù)PCR-SSCP的分析結(jié)果，選取不同的基因型的樣品進(jìn)行序列測定。PCR產(chǎn)物經(jīng)電泳鑒定后，交由上海生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司AB I PRISM 377DNA自動測序儀完成序列測定。結(jié)果發(fā)現(xiàn)AA型與GenBank S64745序列一致，AB型與AA型相比在外顯子2的第 174bp有一處C — T沉默突變，AC型與AA型相比在外顯子2的第185bp發(fā)生G — A突變， 并引起氨基酸的改變(精氨酸一谷氨酰胺)。上述結(jié)果表明，引物擴(kuò)增得到的352bp的片段具有多態(tài)性，共有AA、AB和AC三種基因型。其中AA基因型的擴(kuò)增得到的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No. 3所示，AB基因型的擴(kuò)增得到的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No. 4所示，AC基因型的擴(kuò)增得到的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No. 5所示。2、FSHi3基因與繁殖力關(guān)系的統(tǒng)計分析配合下列模型進(jìn)行最小二乘方差分析，比較山羊產(chǎn)羔數(shù)在基因型之間的差異。 _] Yijk = μ +Gj+Ik+eiJk(Yijk為性狀觀察值；μ為群體均值而為基因型效應(yīng)；Ik為家系效應(yīng)；eiA為隨機(jī)殘差效應(yīng))，采用SPSS生物分析軟件分析基因型與山羊產(chǎn)羔數(shù)的相關(guān)。3、FSHii基因不同基因型的徐淮山羊的產(chǎn)羔數(shù)的最小二乘均值不同F(xiàn)SH0基因型的75只徐淮山羊母羊產(chǎn)羔數(shù)的最小二乘均值及標(biāo)準(zhǔn)誤見表I。由表I可見AA基因型徐淮山羊產(chǎn)羔數(shù)的最小二乘均值比AC基因型的多O. 75 只(P < O. 05)，而AA與AB及AB與AC基因型產(chǎn)羔數(shù)最小二乘均值的差異都不顯著(P >0. 05)。該結(jié)果表明，可利用該引物基因型多態(tài)性檢測徐淮山羊繁殖力。
表I不同F(xiàn)SHP基因型的徐淮山羊產(chǎn)羔數(shù)的最小二乘均值及標(biāo)準(zhǔn)誤
權(quán)利要求
1.利用FSHii基因第2外顯子檢測徐淮山羊繁殖力的方法，是檢測待測徐淮山羊基因組中的FSH β基因的第二外顯子第174位核苷酸為C還是突變?yōu)棣常?85位核苷酸為G還是突變?yōu)棣?，從而確定徐淮山羊的基因型，然后通過基因型確定徐淮山羊繁殖力；所述FSH3 基因第2外顯子核苷酸序列為自GENBANK ACCESSION NUMBER為S64745. I的第2461至 2691的核苷酸；所述確定徐淮山羊的基因型的方法為如果徐淮山羊基因組中的FSHii基因的第二外顯子第174位核苷酸為C時，其純合體的基因型為AA，突變?yōu)門時，其基因型為AB ;如果徐淮山羊基因組中的FSHii基因的第二外顯子第185位核苷酸為G時，其純合體的基因型為 AA,突變?yōu)锳時，其基因型為AC ；通過基因型確定徐淮山羊繁殖力的方法為所述AA基因型徐淮山羊的繁殖力高于AB基因型徐淮山羊和AC基因型徐淮山羊。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于所述檢測徐淮山羊基因組的FSHii基因的第二外顯子第174位核苷酸為C還是突變?yōu)門，185位核苷酸為G還是突變?yōu)锳的方法是利用PCR-SSCP方法擴(kuò)增待測徐淮山羊基因組中的核苷酸序列為自GENBANK ACCESSION NUMBER為S64745. I的第2387至2738位核苷酸的片段，并將該擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行SSCP檢測， 若得到2條電泳條帶，即為AA基因型；得到與所述AA基因型沿電泳方向第一條電泳條帶和第二條電泳條帶具有相同遷移距離的兩條電泳條帶并且在這兩條電泳條帶之間出現(xiàn)一條新的條帶的，為AB基因型；得到與所述AA基因型沿電泳方向第一條電泳條帶和第二條電泳條帶具有相同遷移距離的兩條電泳條帶并且在第一條電泳條帶上面出現(xiàn)一條新的電泳條帶的，為AC基因型。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于所述PCR-SSCP方法的擴(kuò)增引物對為具有序列表中SEQ ID No. I所述的核苷酸和具有序列表中SEQ ID No. 2所述序列的核苷酸。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任意一項所述的方法，其特征在于所述繁殖力為每胎產(chǎn)羔數(shù)。
全文摘要
本發(fā)明公開了利用FSHβ基因第2外顯子檢測徐淮山羊繁殖力的方法，是檢測待測山羊基因組中的FSHβ基因的第二外顯子第174位核苷酸為C還是突變?yōu)門，185位核苷酸為G還是突變?yōu)锳，從而確定徐淮山羊的基因型，然后通過基因型確定徐淮山羊繁殖力。本發(fā)明的方法利用SSCP遺傳標(biāo)記多態(tài)性確定徐淮山羊的繁殖力，可以迅速、簡便的檢測徐淮山羊的繁殖力，為徐淮山羊的育種提供了一個準(zhǔn)確簡便的檢測其繁殖力的方法，從而有利于擴(kuò)大有利群里，進(jìn)行規(guī)?；B(yǎng)殖，提高經(jīng)濟(jì)效益。
文檔編號C12Q1/68GK102586471SQ201210112319
公開日2012年7月18日 申請日期2012年4月17日 優(yōu)先權(quán)日2012年4月17日
發(fā)明者周洪, 孫偉, 張玉龍, 陳家振 申請人:揚州大學(xué)