專利名稱：黑曲霉麩曲的培養(yǎng)方法以及發(fā)酵制備檸檬酸的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種黑曲霉麩曲的培養(yǎng)方法，以及使用該培養(yǎng)方法得到的黑曲霉麩曲進(jìn)行發(fā)酵制備檸檬酸的方法。
背景技術(shù)：
檸檬酸是有機(jī)酸中第一大酸，由于物理、化學(xué)等方面的優(yōu)異性能，廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、化學(xué)、電子、紡織、石油、皮革、建筑、攝影、塑料、鋳造和陶瓷等エ業(yè)領(lǐng)域。目前檸檬酸黑曲霉種子的制備方法一般包括將小麥麩皮進(jìn)行預(yù)處理、裝三級(jí)燒瓶后進(jìn)行滅菌處理，并接入斜面黑曲霉種子進(jìn)行培養(yǎng)得到合格的麩曲，進(jìn)ー步用于發(fā)酵生產(chǎn)。但是，使用小麥麩皮接種進(jìn)行培養(yǎng)后對(duì)麩曲種子質(zhì)量的影響較大，并且，還可能會(huì)導(dǎo)致麩曲種子的性能差異較大，進(jìn)而導(dǎo)致后續(xù)檸檬酸發(fā)酵生產(chǎn)的不穩(wěn)定。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服通過(guò)上述小麥麩皮培養(yǎng)的麩曲質(zhì)量較低且質(zhì)量不穩(wěn)定的問(wèn)題，提供ー種質(zhì)量較高、穩(wěn)定性較好的黑曲霉麩曲的培養(yǎng)方法。本發(fā)明的目的還在于提供ー種使用上述黑曲霉麩曲的培養(yǎng)方法得到的黑曲霉麩曲進(jìn)行發(fā)酵制備檸檬酸的方法。本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，采用經(jīng)過(guò)預(yù)處理的小麥麩皮培養(yǎng)得到的麩曲的性能差異較大，將其應(yīng)用于檸檬酸發(fā)酵時(shí)，檸檬酸的質(zhì)量并不穩(wěn)定。推測(cè)原因可能為在采用小麥麩皮接種培養(yǎng)麩曲的方法中，所述預(yù)處理的方法通常為用水對(duì)小麥麩皮進(jìn)行多次淘洗，在綜合考慮成本和效果的前提下，普遍認(rèn)為保持其淀粉含量為3-8重量％即可以滿足培養(yǎng)的要求。但是，淘洗步驟難以控制各批次的小麥麩皮的淀粉量的穩(wěn)定，由此不僅浪費(fèi)了水資源，還增加了成本，而且還對(duì)麩曲種子質(zhì)量的影響較大，進(jìn)而導(dǎo)致后續(xù)發(fā)酵生產(chǎn)的不穩(wěn)定。推測(cè)對(duì)麩曲種子質(zhì)量的影響較大的原因可能為1)淘洗步驟造成黑曲霉菌種容易利用的可溶性蛋白質(zhì)(即氮源)的流失，而殘留的蛋白質(zhì)黑曲霉菌種不容易利用，從而增加了黑曲霉菌種利用氮源的難度；2)淘洗過(guò)程中淀粉含量的不固定，造成麩皮接團(tuán)致使氮源不能充分利用。另夕卜，本發(fā)明的發(fā)明人意外發(fā)現(xiàn)，采用含有玉米纖維渣的培養(yǎng)基對(duì)黑曲霉菌種進(jìn)行麩曲培養(yǎng)，能夠得到一種質(zhì)量高、且質(zhì)量穩(wěn)定性好的黑曲霉麩曲，從而完成了本發(fā)明。在本發(fā)明中，采用含有玉米纖維渣的培養(yǎng)基對(duì)黑曲霉菌種進(jìn)行麩曲培養(yǎng)，能夠得到一種質(zhì)量高、且質(zhì)量穩(wěn)定性好的黑曲霉麩曲。推測(cè)原因可能為1)玉米纖維渣中的成分穩(wěn)定，且無(wú)需經(jīng)過(guò)淘洗步驟，玉米纖維渣中可溶性蛋白質(zhì)不流失，黑曲霉菌種容易利用玉米纖維渣中的蛋白質(zhì)；2)相對(duì)于小麥麩皮的纖維，玉米纖維渣中的纖維更容易被黑曲霉菌種所利用。S卩，本發(fā)明提供了一種黑曲霉麩曲的培養(yǎng)方法，該方法包括將培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌，在 滅菌后的培養(yǎng)基中接入黑曲霉菌種進(jìn)行麩曲培養(yǎng)，其中，所述培養(yǎng)基含有玉米纖維渣。本發(fā)明還提供了一種發(fā)酵制備檸檬酸的方法，其中，該方法包括將采用上述的黑曲霉麩曲的培養(yǎng)方法所得到的黑曲霉麩曲接入到檸檬酸種子培養(yǎng)基中進(jìn)行種子培養(yǎng)后，再將得到的種子培養(yǎng)液接入到檸檬酸發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)。根據(jù)本發(fā)明的黑曲霉麩曲的培養(yǎng)方法，該方法能夠降低黑曲霉麩曲的培養(yǎng)成本，并且能夠提高黑曲霉麩曲的質(zhì)量和穩(wěn)定性，進(jìn)而提高后續(xù)檸檬酸發(fā)酵的質(zhì)量和穩(wěn)定性。
具體實(shí)施例方式以下對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施方式
進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。應(yīng)當(dāng)理解的是，此處所描述的具體實(shí)施方式
僅用于說(shuō)明和解釋本發(fā)明，并不用干限制本發(fā)明。按照本發(fā)明的黑曲霉麩曲的培養(yǎng)方法，該方法包括將培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌，在滅菌后 的培養(yǎng)基中接入黑曲霉菌種進(jìn)行麩曲培養(yǎng)，其中，所述培養(yǎng)基含有玉米纖維渣。根據(jù)本發(fā)明，優(yōu)選情況下，所述玉米纖維渣為玉米淀粉生產(chǎn)過(guò)程中得到的副產(chǎn)物玉米纖維渣。在本發(fā)明中，由于能夠利用玉米淀粉生產(chǎn)過(guò)程中的副產(chǎn)品玉米纖維渣，并且，該玉米纖維渣無(wú)需淘洗，因此能夠降低成本。根據(jù)本發(fā)明，由于本發(fā)明提供的黑曲霉麩曲的培養(yǎng)方法主要涉及采用玉米纖維渣制備用于麩曲培養(yǎng)的培養(yǎng)基，因此，對(duì)于玉米纖維渣的制備沒(méi)有特別限定，只要優(yōu)選滿足玉米纖維渣中各組分含量要求即可。例如，可以為玉米淀粉生產(chǎn)過(guò)程中得到的玉米纖維渣副產(chǎn)物。玉米淀粉的生產(chǎn)(即玉米淀粉エ藝)可以參照現(xiàn)有技術(shù)進(jìn)行。該玉米淀粉エ藝通常包括玉米浸泡、脫胚芽、研磨得到粗淀粉乳和玉米纖維渣皮。具體地，在本發(fā)明中，玉米纖維渣可以通過(guò)以下方法獲得首先，將玉米顆粒進(jìn)行浸泡。將玉米顆粒進(jìn)行浸泡的條件可以在很大范圍內(nèi)改變，但優(yōu)選情況下，浸泡的溫度可以為40-60°C，對(duì)于浸泡液與干玉米顆粒的量之間的比例沒(méi)有特別的限制，只要能夠使干玉米顆粒充分浸泡即可，但優(yōu)選情況下，所述浸泡液的液面高于干玉米顆粒至少10厘米。所述浸泡液可以為O. 15-0. 25重量％濃度的亞硫酸溶液，浸泡時(shí)間可以為50小時(shí)以上，優(yōu)選為55-65小吋。根據(jù)本發(fā)明，浸泡所采用的設(shè)備為本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知，例如，可以在浸泡罐中對(duì)玉米進(jìn)行浸泡。其次，除去浸泡后的玉米顆粒的胚芽。除去浸泡后的玉米顆粒的胚芽的方法可以為各種玉米脫胚的方法，例如，該方法可以包括將經(jīng)浸泡后的玉米顆粒進(jìn)行一次研磨，一次研磨的條件使玉米顆粒破碎成平均粒子直徑可以為2-5毫米的顆粒，并除去研磨下的胚芽；之后進(jìn)行二次研磨，二次研磨的條件使得到的顆粒的平均粒子直徑可以為1-1. 5毫米，并除去研磨下的胚芽。然后，分離出玉米纖維渣。分離出玉米纖維渣的方法為本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知，例如，可以將除去胚芽后的玉米顆粒進(jìn)行細(xì)磨，得到漿狀物；將該漿狀物引入到壓カ曲篩中進(jìn)行篩分后洗滌固體，得到玉米纖維渣。上述曲篩的篩面弧度為100-120°，曲篩的篩縫寬度為50-75微米，進(jìn)料壓カ為O. 2-0. 4MPa。所述壓カ曲篩可以通過(guò)商購(gòu)得到，例如宜興淀粉設(shè)備廠生產(chǎn)的DZQ50型壓カ曲篩。另外，分離出玉米纖維渣的漿狀物在除去蛋白后，得到淀粉乳。根據(jù)本發(fā)明，通過(guò)上述方法得到的玉米纖維渣中含有玉米纖維、水、淀粉以及蛋白質(zhì)。優(yōu)選的情況下，所述玉米纖維渣中，玉米纖維的含量為20-35重量％，水的含量為45-65重量％，淀粉含量為I. 5-5重量％，蛋白質(zhì)含量為5-15重量％ ;更優(yōu)選所述玉米纖維渣中，玉米纖維的含量為25-30重量％，水的含量為54-60重量％，淀粉含量為2_4重量％，蛋白質(zhì)含量為7-12重量％。此外，所述玉米纖維渣中可能還含有其他平衡量的雜質(zhì)。根據(jù)本發(fā)明，當(dāng)通過(guò)上述方法得到的玉米纖維渣中，其蛋白質(zhì)含量小于5重量％時(shí)，有可能會(huì)出現(xiàn)氮源不足，影響培養(yǎng)質(zhì)量。在該情況下，可以通過(guò)向培養(yǎng)基中添加補(bǔ)充氮源的方式來(lái)解決氮源不足的問(wèn)題，因此，所述培養(yǎng)基中還可以含有本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的各種氮源。所述補(bǔ)充氮源的添加量可以根據(jù)所述玉米纖維渣的氮源含量(來(lái)自于玉米纖維渣中的蛋白質(zhì))來(lái)適當(dāng)選擇，只要優(yōu)選能夠使培養(yǎng)基的氮源含量在0. 7-1. 2重量％的范圍即可。所述補(bǔ)充氮源可以為玉米浸泡液、尿素、硫酸銨和硝酸銨等中的ー種或多種，優(yōu)選為玉米浸泡液。所述玉米浸泡液 是指上述獲得玉米纖維渣方法中浸泡玉米顆粒后得到的含有可溶性糖的玉米浸泡液體。為了減少所述玉米浸泡液的使用體積，優(yōu)選將該玉米浸泡液進(jìn)行濃縮后再使用，對(duì)濃縮后的體積沒(méi)有特別的要求，一般情況下，通過(guò)將該玉米浸泡液在35-80°C下減壓濃縮至原體積的0. 5-0. I倍即可。此外，所述培養(yǎng)基中還可以含有培養(yǎng)黑曲霉麩曲所需要的本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的其他微量元素，例如，鈉、鉀、氧等，添加量可視具體情況而選擇，在這里不再贅述。根據(jù)本發(fā)明，黑曲霉菌種的接入量可以為本領(lǐng)域在培養(yǎng)黑曲霉麩曲時(shí)的常規(guī)接入量。例如，以每克培養(yǎng)基為基準(zhǔn)，所述黑曲霉菌種的接入量為1.5X10”5.5X IO5個(gè)黑曲霉孢子；優(yōu)選情況下，以每克培養(yǎng)基為基準(zhǔn)，所述黑曲霉菌種的接入量為2X IO5IX IO5個(gè)黑曲霉孢子。根據(jù)本發(fā)明，進(jìn)行麩曲培養(yǎng)的條件可以為本領(lǐng)域在培養(yǎng)黑曲霉麩曲時(shí)常用的條件。例如，該培養(yǎng)的條件包括 .溫度為30-37°C，濕度為45-55%，通氣量為0. 1-0. 3體積(體積 分鐘)，培養(yǎng)時(shí)間為7-15天；更優(yōu)選溫度為32-35°C，濕度為47-53%，通氣量為0. 1-0. 2體積(體積 分鐘)，培養(yǎng)時(shí)間為9-11天在本發(fā)明中，術(shù)語(yǔ)“通氣量” 一般以通氣比來(lái)表示，通常以每分鐘內(nèi)通過(guò)單位體積培養(yǎng)液的空氣體積比來(lái)表示(V / V min)，例如通氣比為I :0. 1-1，簡(jiǎn)稱通氣量為0.01-1體積(體積 分鐘)。根據(jù)本發(fā)明，所述將培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌的方法可以采用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的各種方法。例如，可以將培養(yǎng)基在溫度為121-125°C、壓カ為0. 1-0. 15MPa下滅菌45-90min。本發(fā)明還提供了一種發(fā)酵制備檸檬酸的方法，其中，該方法包括將采用上述的黑曲霉麩曲的培養(yǎng)方法所得到的黑曲霉麩曲接入到檸檬酸種子培養(yǎng)基中進(jìn)行種子培養(yǎng)后，再將得到的種子培養(yǎng)液接入到檸檬酸發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)。根據(jù)本發(fā)明，對(duì)所述檸檬酸種子培養(yǎng)基沒(méi)有特別的要求，只要可以用于檸檬酸種子培養(yǎng)的培養(yǎng)基即可。優(yōu)選情況下，所述檸檬酸種子培養(yǎng)基為淀粉質(zhì)原料酶解液化清液。以該淀粉質(zhì)原料酶解液化清液的總量為基準(zhǔn)，淀粉質(zhì)原料酶解液化清液中的總糖為7-13重量％、氮源(以氮元素計(jì))為0. 1-0. 5重量％ ;優(yōu)選地,該淀粉質(zhì)原料酶解液中的總糖為9-11重量％、氮源為0. 1-0. 3重量％。另外，根據(jù)需要，也可以向種子培養(yǎng)基中添加補(bǔ)充氮源。所述補(bǔ)充氮源的添加量可以為培養(yǎng)基總重量的0. 01-0. 05重量％。所述補(bǔ)充氮源的種類為本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知，例如，所述補(bǔ)充氮源可以為尿素、硫酸銨和硝酸銨等中的ー種或多種。根據(jù)本發(fā)明，對(duì)檸檬酸發(fā)酵培養(yǎng)基的也沒(méi)有特別的要求，只要可以用于檸檬酸發(fā)酵的發(fā)酵培養(yǎng)基即可。優(yōu)選情況下，所述發(fā)酵培養(yǎng)基含有淀粉質(zhì)原料酶解產(chǎn)物。以該淀粉質(zhì)原料酶解產(chǎn)物的總量為基準(zhǔn)，淀粉質(zhì)原料酶解產(chǎn)物中的總糖為14. 5-18重量％、氮源(以氮元素計(jì))為O. 05-0. 2重量％ ;優(yōu)選地，該淀粉質(zhì)原料酶解液中的總糖為15. 5-17重量％、氮源為O. 08-0. 15重量％。一般地，淀粉質(zhì)原料酶解得到淀粉質(zhì)原料酶解殘?jiān)偷矸圪|(zhì)原料酶解液化清液，通?？梢詫⒌矸圪|(zhì)原料酶解液化清液用于制備檸檬酸種子培養(yǎng)基或檸檬酸發(fā)酵培養(yǎng)基，也可以將淀粉質(zhì)原料酶解液化清液與淀粉質(zhì)原料酶解殘?jiān)旌虾笥糜谥苽錂幟仕岚l(fā)酵培養(yǎng)基。本發(fā)明所述檸檬酸發(fā)酵培養(yǎng)基(即淀粉質(zhì)原料酶解產(chǎn)物)優(yōu)選由淀粉質(zhì)原料酶解殘?jiān)偷矸圪|(zhì)原料酶解液化清液與水混合或不與水混合得到，且進(jìn)一歩優(yōu)選以所述發(fā)酵培養(yǎng)基的總重量為100重量份為基準(zhǔn)，所述淀粉質(zhì)原料酶解液化清液的用量為70-90重量份，所述淀粉質(zhì)原料酶解殘?jiān)挠昧繛?0-20重量份，水的用量為0-10量份。 根據(jù)本發(fā)明，所述淀粉質(zhì)原料酶解液化清液可以通過(guò)多種方法制備得到，例如，可以通過(guò)如下方法制備得到將淀粉質(zhì)原料粉碎，將粉碎后的產(chǎn)物進(jìn)行酶解，得到酶解產(chǎn)物，將酶解產(chǎn)物固液分離，得到淀粉質(zhì)原料酶解液化清液和淀粉質(zhì)原料酶解殘?jiān)?，所述固液分離的條件使淀粉質(zhì)原料酶解殘?jiān)墓毯繛?-60重量％，更優(yōu)選為30-50重量％。根據(jù)本發(fā)明，所述淀粉質(zhì)原料可以為本領(lǐng)公知的各種可以用于酶解、發(fā)酵制備檸檬酸的含有淀粉的原料，例如，可以選自玉米、薯類(如木薯)和小麥中的ー種或幾種，優(yōu)選情況下，所述淀粉質(zhì)原料為玉米。所述酶解步驟可以通過(guò)本領(lǐng)域常用的方法完成，比如向粉碎產(chǎn)物中添加產(chǎn)酶微生物和/或酶，在產(chǎn)酶微生物的生長(zhǎng)溫度和/或酶有活力的溫度下保溫完成。所述產(chǎn)酶微生物為能夠分泌淀粉酶的產(chǎn)酶微生物。所述酶包括淀粉酶。由于微生物生長(zhǎng)會(huì)產(chǎn)生副產(chǎn)物，因此優(yōu)選直接加入酶。所述酶的用量越多越好，出于成本考慮，優(yōu)選以每克粉碎后的粉碎產(chǎn)物的干重計(jì)，所述淀粉酶的用量為15-50個(gè)酶活カ單位。本發(fā)明所述酶的酶活力単位的定義為在pH值為6. O、溫度為70°C的條件下，I分鐘將I毫克淀粉轉(zhuǎn)化為還原糖所需的酶量為ー個(gè)酶活力単位。所述酶解的溫度可以在很大范圍內(nèi)改變，優(yōu)選為70_105°C，更優(yōu)選為80_95°C。所述酶解的時(shí)間理論上越長(zhǎng)越好，考慮到設(shè)備利用率，優(yōu)選所述酶解的時(shí)間為90-150分鐘，更優(yōu)選為100-120分鐘。所述酶解的pH值可以在很大范圍內(nèi)改變，優(yōu)選為5. 0-7.0，更優(yōu)選pH 值為 5. 4-5.7。淀粉酶是指能夠分解淀粉糖苷鍵的ー類酶的總稱，所述淀粉酶一般包括α -淀粉酶、β -淀粉酶、糖化酶和異淀粉酶。根據(jù)本發(fā)明，優(yōu)選使用α -淀粉酶和/或異淀粉酶。根據(jù)本發(fā)明，所述固液分離的方法與裝置為本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知，例如，壓濾機(jī)或離心機(jī)。根據(jù)本發(fā)明，在進(jìn)行檸檬酸種子培養(yǎng)時(shí)，黑曲霉菌種的接入量可以為本領(lǐng)域的常規(guī)接入量。例如，以每毫升檬酸種子培養(yǎng)基為基準(zhǔn)，黑曲霉麩曲的接入量使得黑曲霉孢子的接入量為I. 5 X10”4. 5 X IO5個(gè)；優(yōu)選地，以每毫升檸檬酸種子培養(yǎng)基為基準(zhǔn)，黑曲霉麩曲的接入量使得黑曲霉孢子的接入量為2 X IO5IX IO5個(gè)。在本發(fā)明中，黑曲霉孢子是以黑曲霉麩曲的形式接入到培養(yǎng)基中的，黑曲霉麩曲中的黑曲霉孢子數(shù)可以按照血球平板計(jì)數(shù)法測(cè)得。具體地，該方法為稱取Ig黑曲霉麩曲5組，每組中加入含吐蒽4%的無(wú)菌生理鹽水，經(jīng)過(guò)磁力攪拌器和超聲波使孢子成為游離狀態(tài)，分別在顯微鏡下進(jìn)行孢子計(jì)數(shù)，取5組得到的數(shù)據(jù)的平均值。在本發(fā)明中，檸檬酸種子培養(yǎng)的程度可以通過(guò)取樣顯微鏡鏡檢、酸度測(cè)定和pH測(cè)定對(duì)黑曲霉的生長(zhǎng)進(jìn)行觀察，當(dāng)pH在2. 0-2. 5、酸度0. 5-2. 0%、菌球大小均勻、菌絲粗壯伸出時(shí)停止培養(yǎng)。上述種子培養(yǎng)的條件可以在很大范圍內(nèi)改變，例如所述培養(yǎng)的條件可以包括培養(yǎng)的溫度可以為33-42°C，pH值可以為2-6，通氣量可以為0. 1-0. 5體積(體積 分鐘)，培養(yǎng)的時(shí)間可以為18-40小時(shí)；更優(yōu)選的情況下，所述培養(yǎng)的條件可以包括培養(yǎng)的溫度可以為34-38°C，pH值可以為2. 5-4. 5，通氣量可以為0. 15-0. 4體積(體積 分鐘)，所述培養(yǎng)的時(shí)間可以為22-30小時(shí)。根據(jù)本發(fā)明，在進(jìn)行朽1檬酸發(fā)酵培養(yǎng)時(shí)，朽1檬酸種子培養(yǎng)液的接入量可以為本領(lǐng)域的常規(guī)接入量。例如，以每毫升檸檬酸發(fā)酵培養(yǎng)基為基準(zhǔn)，種子培養(yǎng)液的接入量使得黑曲 霉孢子的接入量為1X1(T5X104個(gè)；優(yōu)選地，以每毫升檸檬酸發(fā)酵培養(yǎng)基為基準(zhǔn)，種子培養(yǎng)液的接入量使得黑曲霉孢子的接入量為I. 5X10，3. 5 X IO4個(gè)。根據(jù)本發(fā)明，檸檬酸發(fā)酵的條件可以為本領(lǐng)域的常規(guī)條件。例如檸檬酸發(fā)酵的條件可以包括培養(yǎng)的溫度可以為33-40°C，pH值可以為I. 5-6，通氣量可以為0. 1-0. 5體積(體積 分鐘)，培養(yǎng)的時(shí)間可以為45-65小時(shí)；更優(yōu)選所述培養(yǎng)的條件可以包括培養(yǎng)的溫度可以為34-39°C，pH值可以為I. 5-3. 0，通氣量可以為0. 12-0. 3體積(體積 分鐘)，所述培養(yǎng)的時(shí)間可以為50-60小時(shí)。按照本發(fā)明的方法制備得到的發(fā)酵產(chǎn)物檸檬酸可以用常規(guī)的方法，根據(jù)不同エ業(yè)產(chǎn)品的要求分離并精制，比如中和、酸解、脫色、濃縮、結(jié)晶、包裝。以下將通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)描述。以下實(shí)施例中，玉米纖維渣各成分含量的測(cè)定方法為玉米纖維渣中玉米纖維含量的測(cè)定根據(jù)GB-T 6434-1994測(cè)定玉米纖維渣中玉米纖維含量。玉米纖維渣中水含量的測(cè)定稱取IOg玉米纖維渣，在90°C下烘干，烘干后的重量與稱取的玉米纖維渣的重量的比值即為玉米纖維渣中的水的含量。玉米纖維渣中淀粉含量的測(cè)定根據(jù)GB/T 5009. 9-2008測(cè)定玉米纖維渣中淀粉含量。玉米纖維渣中蛋白質(zhì)含量的測(cè)定采用凱氏定氮法測(cè)定玉米纖維渣中蛋白質(zhì)含量。對(duì)比例中，小麥麩皮各成分測(cè)定方法的測(cè)定方法為小麥麩皮中纖維含量的測(cè)定根據(jù)GB-T 6434-1994測(cè)定小麥麩皮中纖維含量。小麥麩皮中水含量的測(cè)定稱取IOg小麥麩皮,在90°C下烘干,烘干后的重量與稱取的小麥麩皮的重量的百分比即為小麥麩皮中的水的含量。小麥麩皮中淀粉含量的測(cè)定根據(jù)GB/T 5009. 9-2008測(cè)定小麥麩皮中淀粉含量。小麥麩皮中蛋白質(zhì)含量的測(cè)定采用凱氏定氮法測(cè)定小麥麩皮中蛋白質(zhì)含量。以下實(shí)施例中，黑曲霉麩曲中的黑曲霉孢子數(shù)可以按照血球平板計(jì)數(shù)法測(cè)得。具體地,該方法為稱取Ig黑曲霉麩曲5組，每組中加入含吐蒽4%的無(wú)菌生理鹽水，經(jīng)過(guò)磁力攪拌器和超聲波使孢子成為游離狀態(tài)，分別在顯微鏡下進(jìn)行孢子計(jì)數(shù)，取5組得到的數(shù)據(jù)的平均值。以下實(shí)施例中的玉米酶解清液和玉米酶解殘?jiān)梢詤⒄找韵路椒ǐ@得(I)將收獲的56千克玉米在熱水槽潤(rùn)燜，直至玉米的含水量為15重量％，然后進(jìn)行粉碎，得到平均粒子直徑為400微米的粉碎后產(chǎn)物。(2)將粉碎后的產(chǎn)物按25重量％的濃度調(diào)漿，相對(duì)于每克粉碎后的產(chǎn)物，加入20個(gè)酶活力単位的淀粉酶(諾維信公司，α-淀粉酶，本發(fā)明實(shí)施例中均為此淀粉酶)，進(jìn)入噴射器，在85°C、pH為5. 5的條件下酶解100分鐘，得到酶解產(chǎn)物。(3)將酶解產(chǎn)物通過(guò)用液壓式板框壓濾機(jī)進(jìn)行壓濾，分離出酶解液化清液和酶解濾渣，其中，酶解殘?jiān)暮繛?0%。 根據(jù)GB 1987-2007標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)以下實(shí)施例中所得檸檬酸發(fā)酵液的濃度(簡(jiǎn)稱酸度)，計(jì)算檸檬酸的轉(zhuǎn)化率，轉(zhuǎn)化率(％) =檸檬酸發(fā)酵液的濃度(簡(jiǎn)稱酸度)X檸檬酸發(fā)酵液的體積/總糖的重量X 100%。以下實(shí)施例中，發(fā)酵糧耗是指生產(chǎn)I噸檸檬酸所消耗玉米的量。發(fā)酵強(qiáng)度是指生產(chǎn)中每小時(shí)每立方米發(fā)酵液所產(chǎn)酸的量。實(shí)施例II)玉米纖維渣的制備將玉米顆粒(含水量為15重量％)置于浸泡罐中，并引入O. 25重量％的亞硫酸溶液對(duì)玉米進(jìn)行浸泡，浸泡的溫度為50°C，浸泡的時(shí)間為55小吋，O. 25重量％的亞硫酸溶液的引入量使液面高于玉米顆粒10厘米。將浸泡后的玉米連水一起輸送到DTMT-80型的脫胚磨機(jī)中進(jìn)行脫胚，經(jīng)過(guò)脫胚機(jī)中的脫水篩的玉米顆粒被研磨至平均粒子直徑為3毫米的顆粒；之后將該顆粒與脫水篩下的水一起，被輸送至旋流器中，以除去研磨下的胚芽；之后，將在旋流器中除去了研磨下的胚芽的玉米顆粒和水一起引入到DTMT-80型脫胚磨機(jī)中繼續(xù)進(jìn)行研磨，研磨后得到平均粒子直徑為I. 5毫米的顆粒，之后將該顆粒與脫水篩下的水一起，輸送至旋流器中，以除去研磨下的胚芽。將脫除了胚芽的玉米顆粒引入到LZM685-NA型沖擊磨中進(jìn)行研磨，得到漿狀物，并將所述漿狀物引入到壓カ曲篩(宜興淀粉設(shè)備廠，DZQ50)中進(jìn)行篩分，得到玉米纖維渣和除去了玉米纖維渣后的組分，其中，壓カ曲篩的篩面弧度為120°，壓カ曲篩的篩縫寬度為75微米，進(jìn)料壓カ為O. 2MPa。除去了玉米纖維渣后的組分用于制備淀粉乳。將得到的玉米纖維渣加入到擠干機(jī)中進(jìn)行除水，得到玉米纖維的含量為25重量％，水的含量為55重量％，淀粉含量為4重量％，蛋白質(zhì)含量為10重量％的玉米纖維渣，余量為平衡量雜質(zhì)。2)黑曲霉麩曲的培養(yǎng)將步驟(I)得到的玉米纖維渣在溫度為121°C、壓カ為O. 12MPa下高溫滅菌50min后得到培養(yǎng)基，在培養(yǎng)基中接入黑曲霉菌種(斜面菌種)，以每克培養(yǎng)基為基準(zhǔn)，所述黑曲霉菌種的接入量為2 X IO5個(gè)孢子。培養(yǎng)的條件包括 .溫度為32°C，濕度為47%，通氣量為O. I體積(體積 分鐘)，培養(yǎng)時(shí)間為9天，且每隔12小時(shí)進(jìn)行翻麩一次，得到黑曲霉麩曲，每克得到的黑曲霉麩曲中含有的孢子數(shù)如表I所示。
3)檸檬酸發(fā)酵在種子罐中加入玉米酶解清液、水和尿素得到種子培養(yǎng)基(使得總糖含量為9重量％，氮源(以氮元素計(jì))為0. I重量％)，在溫度為121°C、壓カ為0. 12MPa下高溫滅菌50分鐘后快速降溫至36°C，接入黑曲霉麩曲(黑曲霉麩曲的接種量使得每毫升種子培養(yǎng)基中黒曲霉孢子的接入量為2X105個(gè))。然后在36°C、pH值為3、通氣量為0. 2體積(體積 分鐘)的條件下進(jìn)行菌種培養(yǎng)30小時(shí)，得到種子培養(yǎng)液。通過(guò)取樣顯微鏡鏡檢、酸度測(cè)定和PH測(cè)定可知，種子培養(yǎng)液的pH為2. O、酸度為1%、菌球大小均勻、菌絲粗壯伸出。在發(fā)酵罐中加入玉米酶解清液、玉米酶解殘?jiān)?、水和尿素得到發(fā)酵培養(yǎng)基(使得總糖含量為15. 5重量％，氮源(以氮 元素計(jì))為0. 08重量％)，在溫度為121°C、壓カ為0. 12MPa下高溫滅菌50分鐘后快速降溫至39°C，接入步驟2)得到的種子培養(yǎng)液，種子培養(yǎng)液的接種量使得每毫升發(fā)酵培養(yǎng)基中黒曲霉孢子的接入量為1.5X104個(gè)。并在35°C、pH值為1.8、通氣量為0. 12體積(體積 分鐘)的條件下進(jìn)行發(fā)酵60小吋，得到發(fā)酵液。發(fā)酵酸度和檸檬酸的轉(zhuǎn)化率的結(jié)果如表2所示。實(shí)施例2I)玉米纖維渣的制備將玉米顆粒(含水量為15重量％)置于浸泡罐中，并引入0. 2重量％的亞硫酸溶液對(duì)玉米進(jìn)行浸泡,浸泡的溫度為45°C,浸泡的時(shí)間為50小時(shí),0. 2重量％的亞硫酸溶液的引入量使液面高于玉米顆粒10厘米。將浸泡后的玉米連水一起輸送到DTMT-80型的脫胚磨機(jī)中進(jìn)行脫胚，經(jīng)過(guò)脫胚機(jī)中的脫水篩的玉米顆粒被研磨至平均粒子直徑為4毫米的顆粒；之后將該顆粒與脫水篩下的水一起，被輸送至旋流器中，以除去研磨下的胚芽；之后，將在旋流器中除去了研磨下的胚芽的玉米顆粒和水一起引入到DTMT-80型脫胚磨機(jī)中繼續(xù)進(jìn)行研磨，研磨后得到平均粒子直徑為I. 5毫米的顆粒，之后將該顆粒與脫水篩下的水一起，輸送至旋流器中，以除去研磨下的胚芽。將脫除了胚芽的玉米顆粒引入到LZM685-NA型沖擊磨中進(jìn)行研磨，得到漿狀物，并將所述漿狀物引入到壓カ曲篩(宜興淀粉設(shè)備廠，DZQ50)中進(jìn)行篩分，得到玉米纖維渣和除去了玉米纖維渣后的組分，其中，壓カ曲篩的篩面弧度為120°，壓カ曲篩的篩縫寬度為75微米，進(jìn)料壓カ為0. 3MPa。除去了玉米纖維渣后的組分用于制備淀粉乳。將得到的玉米纖維渣加入到擠干機(jī)中進(jìn)行除水，得到玉米纖維的含量為30重量％，水的含量為55重量％，淀粉含量為2重量％，蛋白質(zhì)含量為7重量％的玉米纖維渣，余量為平衡量雜質(zhì)。2)黑曲霉麩曲的培養(yǎng)將步驟(I)得到的玉米纖維渣在在溫度為121で、壓カ為0.1210^下高溫滅菌50min后得到培養(yǎng)基，在培養(yǎng)基中接入黑曲霉菌種(斜面菌種)，以每克培養(yǎng)基為基準(zhǔn)，所述黑曲霉菌種的接入量為4X IO5個(gè)孢子。培養(yǎng)的條件包括溫度為35°C，濕度為53%，通氣量為0. 2體積(體積 分鐘)，培養(yǎng)時(shí)間為11天，且每隔12小時(shí)進(jìn)行翻麩一次，得到黑曲霉麩曲，每克得到的黑曲霉麩曲中含有的孢子數(shù)如表I所示。3)檸檬酸發(fā)酵在種子罐中加入玉米酶解清液、水和尿素得到種子培養(yǎng)基(使得總糖含量為11重量％，氮源(以氮元素計(jì))為O. 3重量％)，在溫度為121°C、壓カ為O. 12MPa下高溫滅菌50分鐘后快速降溫至36°C，接入黑曲霉麩曲(黑曲霉麩曲的接種量使得每毫升種子培養(yǎng)基中黒曲霉孢子的接入量為3 X IO5個(gè))。然后在38°C、pH值為2. 5、通氣量為O. 4體積(體積 分鐘)的條件下進(jìn)行菌種培養(yǎng)22小時(shí)，得到種子培養(yǎng)液。通過(guò)取樣顯微鏡鏡檢、酸度測(cè)定和PH測(cè)定可知，種子培養(yǎng)液的pH為2. I、酸度為I. 2%、菌球大小均勻、菌絲粗壯伸出。在發(fā)酵罐中加入玉米酶解清液、玉米酶解殘?jiān)?、水和尿素得到發(fā)酵培養(yǎng)基(使得總糖含量為17重量％，氮源(以氮元素計(jì))為O. 15重量％)，在溫度為121°C、壓カ為O. 12MPa下高溫滅菌50分鐘后快速降溫至38°C，接入步驟2)得到的種子培養(yǎng)液，種子培養(yǎng)液的接種量使得每毫升發(fā)酵培養(yǎng)基中黒曲霉孢子的接入量為3. 5X IO4個(gè)。并在34°C、pH值2. 5、通氣量為O. 3體積(體積·分鐘)的條件下進(jìn)行發(fā)酵60小時(shí)，得到發(fā)酵液。發(fā)酵酸度和檸檬酸的轉(zhuǎn)化率的結(jié)果如表2所示。
實(shí)施例3I)玉米纖維渣的制備將玉米顆粒(含水量為15重量％)置于浸泡罐中，并引入O. 25重量％的亞硫酸溶液對(duì)玉米進(jìn)行浸泡，浸泡的溫度為50°C，浸泡的時(shí)間為55小吋，O. 25重量％的亞硫酸溶液的引入量使液面高于玉米顆粒10厘米。將浸泡后的玉米連水一起輸送到DTMT-80型的脫胚磨機(jī)中進(jìn)行脫胚，經(jīng)過(guò)脫胚機(jī)中的脫水篩的玉米顆粒被研磨至平均粒子直徑為3毫米的顆粒；之后將該顆粒與脫水篩下的水一起，被輸送至旋流器中，以除去研磨下的胚芽；之后，將在旋流器中除去了研磨下的胚芽的玉米顆粒和水一起引入到DTMT-80型脫胚磨機(jī)中繼續(xù)進(jìn)行研磨，研磨后得到平均粒子直徑為I. 5毫米的顆粒，之后將該顆粒與脫水篩下的水一起，輸送至旋流器中，以除去研磨下的胚芽。將脫除了胚芽的玉米顆粒引入到LZM685-NA型沖擊磨中進(jìn)行研磨，得到漿狀物，并將所述漿狀物引入到壓カ曲篩(宜興淀粉設(shè)備廠，DZQ50)中進(jìn)行篩分，得到玉米纖維渣和除去了玉米纖維渣后的組分，其中，壓カ曲篩的篩面弧度為120°，壓カ曲篩的篩縫寬度為75微米，進(jìn)料壓カ為O. 3MPa。除去了玉米纖維渣后的組分用于制備淀粉乳。將得到的玉米纖維渣加入到擠干機(jī)中進(jìn)行除水，得到玉米纖維的含量為29重量％，水的含量為53重量％，淀粉含量為3重量％，蛋白質(zhì)含量為9重量％的玉米纖維渣，余量為平衡量雜質(zhì)。2)黑曲霉麩曲的培養(yǎng)將步驟(I)得到的玉米纖維渣在在溫度為121で、壓カ為0.1210^下高溫滅菌50min后得到培養(yǎng)基，在培養(yǎng)基中接入黑曲霉菌種(斜面菌種)，以每克培養(yǎng)基為基準(zhǔn)，所述黑曲霉菌種的接入量為3X105個(gè)孢子。培養(yǎng)的條件包括溫度為34°C，濕度為50%，通氣量為O. 15體積(體積 分鐘)，培養(yǎng)時(shí)間為10天，且每隔12小時(shí)進(jìn)行翻麩一次。得到黑曲霉麩曲，每克得到的黑曲霉麩曲中含有的孢子數(shù)如表I所示。3)檸檬酸發(fā)酵在種子罐中加入玉米酶解清液、水和尿素得到種子培養(yǎng)基(使得總糖含量為10重量％，氮源(以氮元素計(jì))為O. 2重量％)，在溫度為121°C、壓カ為O. 12MPa下高溫滅菌50分鐘后快速降溫至36°C，接入黑曲霉麩曲(黑曲霉麩曲的接種量使得每毫升種子培養(yǎng)基中黒曲霉孢子的接入量為2. 5 X IO5個(gè))。然后在36°C、pH值為4. 5、通氣量為0. 3體積(體積 分鐘)的條件下進(jìn)行菌種培養(yǎng)25小時(shí)，得到種子培養(yǎng)液。通過(guò)取樣顯微鏡鏡檢、酸度測(cè)定和PH測(cè)定可知，種子培養(yǎng)液的pH為2. 3、酸度為I. 3%、菌球大小均勻、菌絲粗壯伸出。在發(fā)酵罐中加入玉米酶解清液、玉米酶解殘?jiān)⑺湍蛩氐玫桨l(fā)酵培養(yǎng)基(使得總糖含量為16. 5重量％，氮源(以氮元素計(jì))為0. 13重量％)，在溫度為121°C、壓カ為0. 12MPa下高溫滅菌50分鐘后快速降溫至38°C，接入步驟2)得到的種子培養(yǎng)液，種子培養(yǎng)液的接種量使得每毫升發(fā)酵培養(yǎng)基中黒曲霉孢子的接入量為2. 5X IO4個(gè)。并在36. 5°C、pH值為
2.2、通氣量為0. 2體積(體積 分鐘)的條件下進(jìn)行發(fā)50小時(shí)，得到發(fā)酵液。發(fā)酵酸度和檸檬酸的轉(zhuǎn)化率的結(jié)果如表2所示。實(shí)施例4I)玉米纖維渣的制備將玉米顆粒(含水量為15重量％)置于浸泡罐中，并引入0. 15重量％的亞硫酸溶液對(duì)玉米進(jìn)行浸泡，浸泡的溫度為60°C，浸泡的時(shí)間為55小吋，0. 15重量％的亞硫酸溶液的引入量使液面高于玉米顆粒10厘米。將浸泡后的玉米連水一起輸送到DTMT-80型的脫胚磨機(jī)中進(jìn)行脫胚，經(jīng)過(guò)脫胚機(jī)中的脫水篩的玉米顆粒被研磨至平均粒子直徑為5毫米的顆粒；之后將該顆粒與脫水篩下的水一起，被輸送至旋流器中，以除去研磨下的胚芽；之后，將在旋流器中除去了研磨下的胚芽的玉米顆粒和水一起引入到DTMT-80型脫胚磨機(jī)中繼續(xù)進(jìn)行研磨，研磨后得到平均粒子直徑為I. 5毫米的顆粒，之后將該顆粒與脫水篩下的水一起，輸送至旋流器中，以除去研磨下的胚芽。將脫除了胚芽的玉米顆粒引入到LZM685-NA型沖擊磨中進(jìn)行研磨，得到漿狀物，并將所述漿狀物引入到壓カ曲篩(宜興淀粉設(shè)備廠，DZQ50)中進(jìn)行篩分，得到玉米纖維渣和除去了玉米纖維渣后的組分，其中，壓カ曲篩的篩面弧度為120°，壓カ曲篩的篩縫寬度為75微米，進(jìn)料壓カ為0. 25MPa。除去了玉米纖維渣后的組分用于制備淀粉乳。將得到的玉米纖維渣加入到擠干機(jī)中進(jìn)行除水，得到玉米纖維的含量為33重量％，水的含量為45重量％，淀粉含量為5重量％，蛋白質(zhì)含量為11重量％的玉米纖維渣，余量為平衡量雜質(zhì)。2)黑曲霉麩曲的培養(yǎng)按照實(shí)施例I中的步驟2)的方法進(jìn)行黑曲霉麩曲的培養(yǎng)，不同的是培養(yǎng)基為上述步驟I)中得到的玉米纖維渣，得到黑曲霉麩曲，每克得到的黑曲霉麩曲中含有的孢子數(shù)如表I所示。3)檸檬酸發(fā)酵按照實(shí)施例I中的步驟3)的方法進(jìn)行檸檬酸發(fā)酵，不同的是接入種子罐的是上述步驟2)中得到的黑曲霉麩曲，得到的發(fā)酵液的發(fā)酵酸度和檸檬酸的轉(zhuǎn)化率的結(jié)果如表2所
/Jn o對(duì)比例II)小麥麩皮的制備 將小麥經(jīng)過(guò)除雜后，用水潤(rùn)麥，使水份均勻，達(dá)到14-15重量％，然后經(jīng)過(guò)機(jī)械研磨過(guò)篩，然后再把麩皮通過(guò)打麩機(jī)強(qiáng)力打擊與摩擦，把麩片上粘附的粉粒與麩皮分離，再經(jīng)過(guò)刷粉機(jī)把麩片上的粉粒刷下，最后經(jīng)過(guò)圓篩處理、多次淘洗得到小麥麩皮。得到的小麥麩皮中纖維的含量為25重量％,水的含量為55重量％,淀粉含量為4重量％,蛋白質(zhì)含量為9重量％，余量為平衡量雜質(zhì)。
2)黑曲霉麩曲的培養(yǎng)按照實(shí)施例I中的步驟2)的方法進(jìn)行黑曲霉麩曲的培養(yǎng)，不同的是培養(yǎng)基為上述小麥麩皮。得到黑曲霉麩曲，每克得到黑曲霉麩曲中含有的孢子數(shù)如表I所示。3)檸檬酸發(fā)酵按照實(shí)施例I中的步驟3)的方法進(jìn)行檸檬酸發(fā)酵，不同的是接入種子罐的是上述步驟2)中得到的黑曲霉麩曲。發(fā)酵酸度和檸檬酸的轉(zhuǎn)化率的結(jié)果如表2所示。表I
權(quán)利要求
1.一種黑曲霉麩曲的培養(yǎng)方法，該方法包括將培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌，在滅菌后的培養(yǎng)基中接入黑曲霉菌種進(jìn)行麩曲培養(yǎng)，其特征在于，所述培養(yǎng)基含有玉米纖維渣。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的培養(yǎng)方法，其中，所述玉米纖維渣中，玉米纖維的含量為20-35重量％，水的含量為45-65重量％，淀粉的含量為I. 5-5重量％，蛋白質(zhì)的含量為5_15重量％。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的培養(yǎng)方法，其中，所述玉米纖維渣中，玉米纖維的含量為25-30重量％，水的含量為54-60重量％，淀粉的含量為2_4重量％，蛋白質(zhì)的含量為7_12重量％。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的培養(yǎng)方法，其中，以每克培養(yǎng)基為基準(zhǔn)，所述黑曲霉菌種的接入量為I. 5X IO5 5. 5X IO5個(gè)黑曲霉孢子。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的培養(yǎng)方法，其中，進(jìn)行麩曲培養(yǎng)的條件包括溫度為30-37°C，濕度為45-55%，通氣量為0. 1-0. 3體積(體積 分鐘)，培養(yǎng)時(shí)間為7-15天。
6.一種發(fā)酵制備朽1檬酸的方法，其特征在于，該方法包括將米用權(quán)利要求1-5中任意一項(xiàng)所述的黑曲霉麩曲的培養(yǎng)方法所得到的黑曲霉麩曲接入到檸檬酸種子培養(yǎng)基中進(jìn)行種子培養(yǎng)后，再將得到的種子培養(yǎng)液接入到檸檬酸發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中，以每毫升檸檬酸種子培養(yǎng)基為基準(zhǔn)，黑曲霉麩曲的接入量使得黑曲霉孢子的接入量為I. 5 X 10ぃ4. 5 X IO5個(gè)。
8.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的方法，其中，所述種子培養(yǎng)的條件包括培養(yǎng)的溫度為30-42°C，pH值為2-6，通氣量為0. 1-0. 5體積(體積 分鐘)，培養(yǎng)的時(shí)間為18-40小時(shí)。
9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法,其中，以姆毫升朽1檬酸發(fā)酵培養(yǎng)基為基準(zhǔn)，種子培養(yǎng)液的接入量使得黑曲霉孢子的接入量為I X 1(T5 X IO4個(gè)。
10.根據(jù)權(quán)利要求6或8所述的方法,其中，朽1檬酸發(fā)酵的條件包括培養(yǎng)的溫度為33-40°C，pH值為I. 5-6，通氣量為0. 1-0. 5體積(體積 分鐘)，培養(yǎng)的時(shí)間為45-65小時(shí)。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種黑曲霉麩曲的培養(yǎng)方法，該黑曲霉麩曲的培養(yǎng)方法包括將培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌，在滅菌后的培養(yǎng)基中接入黑曲霉菌種進(jìn)行麩曲培養(yǎng)，其中，所述培養(yǎng)基含有玉米纖維渣。本發(fā)明還公開了一種發(fā)酵制備檸檬酸的方法，該方法包括將采用上述的黑曲霉麩曲的培養(yǎng)方法所得到的黑曲霉麩曲接入到檸檬酸種子培養(yǎng)基中進(jìn)行種子培養(yǎng)后，再將得到的種子培養(yǎng)液接入到檸檬酸發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)。根據(jù)本發(fā)明的黑曲霉麩曲的培養(yǎng)方法，該方法能夠降低黑曲霉麩曲的培養(yǎng)成本，并且能夠提高黑曲霉麩曲的質(zhì)量和穩(wěn)定性，進(jìn)而提高后續(xù)檸檬酸發(fā)酵的質(zhì)量和穩(wěn)定性。
文檔編號(hào)C12P7/48GK102649971SQ20121015011
公開日2012年8月29日 申請(qǐng)日期2012年5月15日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月15日
發(fā)明者滿云, 羅虎, 邵引剛, 鐘華, 馬靜 申請(qǐng)人:中糧生物化學(xué)(安徽)股份有限公司