專利名稱：一種枯草芽孢桿菌及其在防治植物葉斑病中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及ー種枯草芽孢桿菌及其在防治鐵皮石斛葉斑病中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
生物農(nóng)藥(biopesticides)包括植物源農(nóng)藥，微生物農(nóng)藥，微生物次生代謝物(抗生素)等，用于防治各種昆蟲和病害，因其具有危害小、使用安全等優(yōu)點(diǎn)，已成為農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展中最關(guān)心的問題之一，已成為研究熱點(diǎn)。隨著公眾對(duì)食品和環(huán)境中化學(xué)農(nóng)藥安全性的普遍關(guān)注，充分利用有益微生物防治植物病害已日趨受到重視。尤其是進(jìn)入21世紀(jì)以來， 各國政府和民眾更加重視生物農(nóng)藥的開發(fā)和應(yīng)用。我國也把微生物農(nóng)藥的研制和開發(fā)列為國家重點(diǎn)科技攻關(guān)和高新技術(shù)發(fā)展計(jì)劃。生物農(nóng)藥的特性賦予了農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展戰(zhàn)略，為保護(hù)農(nóng)業(yè)生態(tài)環(huán)境，保障食品安全提供物質(zhì)基礎(chǔ)和技術(shù)支撐；同時(shí)生物農(nóng)藥產(chǎn)業(yè)也是未來經(jīng)濟(jì)中具有發(fā)展?jié)摿Φ男略鲩L點(diǎn)之一。鐵皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)又名黑節(jié)草，蘭科石斛屬植物，為多年生附生草本，是ー種集栽培和觀賞于一體的植物，為珍稀名貴的中藥材，一直與靈芝、人參、冬蟲夏草等被列為上品中藥，被譽(yù)為“中華九大仙草”之首。鐵皮石斛因表皮呈鐵綠色而得名，具有滋陰清熱、養(yǎng)胃生津、潤肺止咳等功效，其所含的多糖成分具有增強(qiáng)人體免疫功能、防癌抗癌、恢復(fù)嗓音等功效，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)證明，鐵皮石斛還具有抗腫瘤、抗衰老、增強(qiáng)機(jī)體免疫力和有效減輕肝損傷等作用。由于鐵皮石斛喜濕度大的環(huán)境，葉斑病的發(fā)生較為嚴(yán)重，但因藥用的特性，決定了對(duì)其病蟲害的防治不可使用高毒的化學(xué)農(nóng)藥。因此，尋找ー種經(jīng)濟(jì)、安全、有效的防治措施是當(dāng)務(wù)之急，生物防治不失為重要的輔助手段，其中生防細(xì)菌在植物病害生物防治中起到非常重要的作用，其主要優(yōu)勢(shì)在于(I)種類和數(shù)量眾多，在植物體內(nèi)外大量存在；(2)對(duì)病原菌的作用方式多樣化，包括競爭、拮抗、寄生、誘導(dǎo)植物抗性產(chǎn)生等；(3)繁殖速度快；(4)大多細(xì)菌在植物體內(nèi)外定殖カ強(qiáng)；(5)能夠人工培養(yǎng)，易于操作，便于生產(chǎn)應(yīng)用；(6)有些細(xì)菌菌株不僅能夠防治病害而且可以促進(jìn)植物的生長，増加作物的產(chǎn)量。目前對(duì)鐵皮石斛葉斑病的防治尚無理想的生防藥劑，如果能使用生物農(nóng)藥或盡量少的使用農(nóng)藥對(duì)鐵皮石斛葉斑病進(jìn)行有效防治，將在一定程度上降低農(nóng)藥殘留，大大提高其食用安全性。從保護(hù)生態(tài)環(huán)境和食品安全的角度出發(fā)，鐵皮石斛生產(chǎn)需要有低毒、污染少，對(duì)人體安全的生物制劑來控制病害，達(dá)到安全食用的目的，這也符合農(nóng)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展戰(zhàn)略。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種對(duì)鐵皮石斛葉斑病病原菌具有拮抗作用的枯草芽孢桿菌。本發(fā)明還要解決的技術(shù)問題是提供上述枯草芽孢桿菌在防治鐵皮石斛葉斑病中的應(yīng)用。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下高效防治鐵皮石斛葉斑病的枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis) JSNL1205是2010年10月在江蘇農(nóng)博園鐵皮石斛栽植區(qū)內(nèi)感病植株上分離獲得的，該菌株對(duì)鐵皮石斛葉斑病具有顯著的拮抗作用，目前該菌株已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏編號(hào)為CGMCC No. 6303，保藏日期為2012年6月28日。保藏地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)中國科學(xué)院微生物研究所，郵編100101?？莶菅挎邨U菌(Bacillus subtilis) JSNL1205的生理活性特征如下枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis) JSNL1205在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基平板上菌 落較小，黃色，直徑一般3 5mm，圓形，邊緣整齊，光滑濕潤，產(chǎn)淡紫色色素，菌體桿狀，大小為0.8X (廣2) μ m，頂生ー根或三根鞭毛。革蘭氏染色表現(xiàn)為陰性；葡萄糖氧化發(fā)酵反應(yīng)(0/F反應(yīng))結(jié)果為氧化產(chǎn)酸、好氧；氧化酶反應(yīng)為弱陽性。上述枯草芽孢桿菌在防治植物葉斑病中的應(yīng)用，所述的植物為鐵皮石斛、紅葉石楠或草莓。將枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis) JSNL1205接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，在280C _35°C下發(fā)酵培養(yǎng)48-72小時(shí)，得到的發(fā)酵液作為防治鐵皮石斛葉斑病的菌劑。本發(fā)明中所述發(fā)酵培養(yǎng)基的配方為1000mL蒸餾水，牛肉膏2_5g，蛋白胨5-10g，氯化鈉 4-5g，pH6. 5-7.5。有益效果與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是(I)枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis) JSNL1205對(duì)多種植物病原菌具有抑制作用，在拮抗細(xì)菌對(duì)植物病害生物防治中起到非常重要的作用，便于生產(chǎn)應(yīng)用，尤其是對(duì)真菌引起的鐵皮石斛葉斑病的防治具有重要意義，也是保證食用安全的重要手段。(2)枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis) JSNL1205培養(yǎng)條件簡單、容易保存，易于エ業(yè)化生產(chǎn)，具有良好的開發(fā)應(yīng)用前景。


圖I為枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)JSNL1205對(duì)鐵皮石斛葉斑病病原菌蕓苔鏈格孢(Alternaria brassicae)的室內(nèi)平板對(duì)峙效果。其中A是枯草芽孢桿菌對(duì)病原菌的室內(nèi)平板對(duì)峙圖病原菌單接種圖片(CK)，以下同。圖2為枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)JSNL1205對(duì)紅葉石楠葉斑病病原菌葡萄孢盤菌(Botryotiniafuckeliana)的室內(nèi)平板對(duì)峙效果。圖3枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)JSNL1205對(duì)草莓葉斑病病原菌小孢擬盤多毛孢(Pestalotiopsis microspora)的室內(nèi)平板對(duì)峙效果。
具體實(shí)施例方式根據(jù)下述實(shí)施例，可以更好地理解本發(fā)明。然而，本領(lǐng)域的技術(shù)人員容易理解，實(shí)施例所描述的內(nèi)容僅用于說明本發(fā)明，而不應(yīng)當(dāng)也不會(huì)限制權(quán)利要求書中所詳細(xì)描述的本發(fā)明。實(shí)施例I :枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis) JSNL1205對(duì)鐵皮石斛葉斑病病原菌蕓苔鏈格孢(Alternaria brassicae)、紅葉石楠葉斑病病原菌葡萄孢盤菌(Botryotiniafuckeliana)、草莓葉斑病病原菌小孢擬盤多毛孢(Pestalotiopsis microspora)的平板抑菌作用。將用LB斜面活化的枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis) JSNL1205菌株對(duì)稱接種于PDA平板的兩側(cè)，再將鐵皮石斛、紅葉石楠和草莓葉斑病的病原菌的PDA平板培養(yǎng)物用直徑5mm的打孔器打取同質(zhì)同量的菌餅，接種于平板中央。27±1°C培養(yǎng)10天觀察抑菌效果，并拍照記錄，實(shí)驗(yàn)效果如圖I-圖3、表I所示。結(jié)果表明，枯草芽孢桿菌BacillussubtilisJSNL1205對(duì)3種病原菌均有明顯的拮抗作用。用單接病原菌的PDA平板作為對(duì)、照。表I JSNL1205對(duì)3種病原菌的抑制效果
權(quán)利要求
1.一種枯草芽孢桿菌，其分類命名為枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)JSNL1205，現(xiàn)已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏編號(hào)為CGMCCNo. 6303，保藏日期為2012年6月28日。
2.權(quán)利要求I所述的枯草芽孢桿菌在防治植物葉斑病中的應(yīng)用。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的植物為鐵皮石斛、紅葉石楠或草毒。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種枯草芽孢桿菌，其分類命名為枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)JSNL1205，在中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏，保藏編號(hào)為CGMCC No.6303，保藏日期為2012年6月28日。本發(fā)明還公開了上述枯草芽孢桿菌在防治鐵皮石斛等植物葉斑病中的應(yīng)用。本發(fā)明枯草芽孢桿菌JSNL1205對(duì)鐵皮石斛上的多種病原真菌具有抑制作用；且能夠人工培養(yǎng)，繁殖速度快，便于進(jìn)行規(guī)?；a(chǎn)，具有良好的開發(fā)應(yīng)用前景。
文檔編號(hào)C12N1/20GK102732471SQ20121025395
公開日2012年10月17日 申請(qǐng)日期2012年7月23日 優(yōu)先權(quán)日2012年7月23日
發(fā)明者席剛俊, 張紅巖, 徐超, 管斌, 趙桂華 申請(qǐng)人:江蘇農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院