專利名稱：一種快速的基因表達(dá)載體構(gòu)建連接方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物基因克隆表達(dá)技術(shù)，具體是一種快速的基因表達(dá)載體構(gòu)建連接方法。
背景技術(shù)：
目前，較常 用的基因表達(dá)載體構(gòu)建方法的步驟為(1)酶切基因酶切體系I:含有目的基因的T克隆載體經(jīng)限制性內(nèi)切酶消化，酶切體系II :轉(zhuǎn)基因載體經(jīng)限制性內(nèi)切酶消化；以含有雙酶切EcoR I與xho I位點(diǎn)的T克隆載體及植物轉(zhuǎn)基因載體為例，
酶切體系I如下
權(quán)利要求
1.一種快速的基因表達(dá)載體構(gòu)建連接方法，其步驟為(I)酶切基因酶切體系I :含有目的基因的T克隆載體經(jīng)限制性內(nèi)切酶消化，酶切體系II :轉(zhuǎn)基因載體經(jīng)限制性內(nèi)切酶消化；(2)回收獲得目的基因片段及酶切載體；(3)酶切產(chǎn)物的連接；(4)連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化；(5)轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的鑒定；其特征在于，所述的步驟(2)回收獲得目的基因片段及酶切載體的步驟為步驟(I)的酶切體系I、II中分別加入體積為酶切體系I、II 3 5倍的無水乙醇，均在-20 _80°C環(huán)境下放置0. 5 lh，隨后12000 13000rpm離心沉淀5 lOmin，棄上清，真空干燥，加入20W-30W的pH8. 0的TE緩沖液重新溶解，分別電泳檢測目的基因片段及酶切載體濃度。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的快速的基因表達(dá)載體構(gòu)建連接方法，其特征在于，所述的步驟(I)中有含目的基因的T克隆載體具有氨芐霉素抗性，所述的轉(zhuǎn)基因載體具有卡納霉素抗性。
全文摘要
本發(fā)明涉及生物基因克隆表達(dá)技術(shù)，具體是一種快速的基因表達(dá)載體構(gòu)建連接方法，彌補(bǔ)了現(xiàn)有的基因表達(dá)載體構(gòu)建方法存在的缺陷，其步驟為(1)酶切基因酶切體系Ⅰ含有目的基因的T克隆載體經(jīng)限制性內(nèi)切酶消化，酶切體系Ⅱ轉(zhuǎn)基因載體經(jīng)限制性內(nèi)切酶消化；(2)回收獲得目的基因片段及酶切載體；(3)酶切產(chǎn)物的連接；(4)連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化；(5)轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的鑒定。本發(fā)明所述的快速的基因表達(dá)載體構(gòu)建連接方法簡單方便、實(shí)用性強(qiáng)，替換了凝膠電泳、EB染色等步驟，提高了科研人員的安全性，提高了工作效率，減少了試驗(yàn)環(huán)節(jié)所需費(fèi)用，并能夠有效地減少試驗(yàn)用EB對(duì)水資源等環(huán)境的污染。
文檔編號(hào)C12N15/66GK102776219SQ201210257058
公開日2012年11月14日 申請日期2012年7月24日 優(yōu)先權(quán)日2012年7月24日
發(fā)明者吳霞, 李燕娥, 王霞, 馬燕斌 申請人:山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院棉花研究所