專利名稱：早期預(yù)測(cè)術(shù)后認(rèn)知功能障礙的MicroRNA 572試劑盒及檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)生物檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，是一種早期預(yù)測(cè)術(shù)后認(rèn)知功能障礙的MicroRNA-572試劑盒及檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
術(shù)后認(rèn)知功能障礙(Post-operativeCognitive Dysfunction, POCD)是老年患者術(shù)后常見的并發(fā)癥之一(參見文獻(xiàn)Baranov, D. , et al. Consensusstatement:First International Workshop on Anesthetics and Alzheimer ' sdisease. Anesth Analg, 2009，108(5):1627-1630. Rohan D, Buggy DJ,Crowley S,LingFK, Gallagher H, Regan C, Moriarty DC. Increased incidence of postoperative cognitive dysfunction 24 hr after minor surgery in the elderly. Can JAnaesth. 2005; 52 (2) : 137-142.)。據(jù)術(shù)后認(rèn)知功能障礙國(guó)際性多中心研究(ISPOCD)報(bào)道，60歲以上行非心臟手術(shù)的全麻患者，術(shù)后I周PO⑶的發(fā)生率為25. 8% (參見文獻(xiàn)Rohan D,Buggy DJ, Crowley S，Ling FK, Gallagher H, Regan C, Moriarty DC. Increasedincidence of postoperative cognitive dysfunction 24 hr after minor surgery inthe elderly. Can J Anaesth. 2005; 52 (2) : 137-142)。據(jù)最近文獻(xiàn)報(bào)道，老年患者行非心臟手術(shù)術(shù)后6周的PO⑶發(fā)生率為54. 3%，術(shù)后一年的發(fā)生率仍高達(dá)46. 1%(參見文獻(xiàn)Monk，T.G.,et al.Predictors of cognitive dysfunction after major noncardiac surgery.Anesthesiology, 2008, 108 (I) : 18-30)。POCD最常表現(xiàn)為精神錯(cuò)亂、焦慮、人格及記憶受損，少數(shù)病人甚至發(fā)生永久性認(rèn)知功能障礙，發(fā)展為癡呆。術(shù)后認(rèn)知功能障礙不僅延長(zhǎng)患者住院時(shí)間、增加治療費(fèi)用，而且增加患者的死亡率(Steinmetz, J.，et al. Long-termconsequences of postoperative cognitive dysfunction. Anesthesiology, 2009, 110 (3):548-555),為家庭和社會(huì)帶來沉重的負(fù)擔(dān)。由于PO⑶多見老年術(shù)后患者，因此推測(cè)與老年認(rèn)知障礙可能有類似的發(fā)生機(jī)制，然而認(rèn)知障礙的研究迄今沒有突破。迄今為止，并沒有能夠直接反應(yīng)POCD的生物學(xué)指標(biāo)。因此目前POCD的研究主要針對(duì)POCD的流行病學(xué)研究和誘發(fā)因素研究，但較少研究探討其發(fā)生機(jī)制。由于目前POCD的診斷主要依靠臨床表現(xiàn)，而缺乏特異性實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)，因此為臨床工作帶來很多不便，增加了誤診與漏診。特別是對(duì)于POCD術(shù)前的預(yù)測(cè)更缺乏相應(yīng)的指標(biāo)，因此，從預(yù)防和治療角度，急需尋找較明確的POCD生物學(xué)標(biāo)記物。microRNA(miRNA)是一類長(zhǎng)度約21 25堿基的非編碼蛋白質(zhì)單鏈小分子RNA，廣泛存在于多細(xì)胞生物和病毒體內(nèi)，主要通過核酸序列互補(bǔ)匹配結(jié)合到特定的靶mRNA上，抑制靶mRNA翻譯過程或降解靶mRNA，是一種起負(fù)調(diào)控作用的分子。目前越來越多的研究顯示，miRNA廣泛參與了生物體多種生理過程，且相關(guān)研究報(bào)道也表明其表達(dá)及功能失調(diào)可能導(dǎo)致腫瘤發(fā)生、白血病以及病毒感染等多種病理現(xiàn)象。對(duì)于miRNA能否作為一種實(shí)驗(yàn)室無創(chuàng)性檢測(cè)手段，目前更多的研究集中在對(duì)于癌癥早期診斷方面。這一新興研究領(lǐng)域僅僅在測(cè)定血清標(biāo)志物上開始得到應(yīng)用。已有實(shí)驗(yàn)證實(shí)，miRNA在血漿和血清中非常穩(wěn)定，它們被有效保護(hù)以免接觸RNases，在嚴(yán)酷環(huán)境條件下仍能保持穩(wěn)定。因此，它們的穩(wěn)定性使得其實(shí)際值與在病人身上得到的測(cè)試值吻合得很好。目前,對(duì)于miRNA的早期預(yù)測(cè)功能主要集中在腫瘤方面，比如Charles H. Lawrie等人證實(shí)彌漫性B細(xì)胞淋巴瘤病人的血清hsa-mir-21水平很高，后者與不復(fù)發(fā)存活率密切相關(guān)(參見文獻(xiàn) Lawrie CH, Gal S，Dunlop HM, et al. Detection of elevated levelsof tumourassociated microRNAs in serum of patients with diffuse large B—celllymphoma. Br J Haematol 2008;141:672-675)。Chen X 等人在細(xì)胞研究雜志上的報(bào)道對(duì)肺癌、結(jié)腸癌和糖尿病的患者血清miRNAs水平進(jìn)行了分析，確定這些疾病都有其特異性的血清 miRNA 表型(參見文獻(xiàn) Chen X, Ba Y. Ma L, et al. Characterization of miRNAs inserum:a novel class of biomarkers for diagnosis of cancer and other diseases.Cell Res 2008;18:997-1006)。

至今未見miRNA-572作為PO⑶生物學(xué)標(biāo)記物的報(bào)道，也未見一種用于檢測(cè)血漿或血清中的hsa-mir-572含量，來早期預(yù)測(cè)術(shù)后認(rèn)知功能障礙的試劑盒及其檢測(cè)方法的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種早期預(yù)測(cè)術(shù)后認(rèn)知功能障礙的MiCT0RNA 572試劑盒，以及檢測(cè)方法。本發(fā)明人為了尋找參與PO⑶相關(guān)的血漿miRNA，利用miRNA芯片技術(shù)篩選了與PO⑶相關(guān)的miRNA。結(jié)果發(fā)現(xiàn)與患者術(shù)前相比miRNA. 572的表達(dá)具有顯著差異。另有研究提不 miRNA-134 與記憶相關(guān)(參見文獻(xiàn) Gao J, Wang WY, Mao Yff, Graff J, Guan JS, PanL, Mak G, Kim D,Su SC, Tsai LH. A novel pathway regulates memory and plasticityvia SIRTl and miR-134. Nature. 2010，466 (7310) : 1105-1109.)。這些研究提示我們，miRNA與認(rèn)知障礙有一定關(guān)系，提示血漿miRNA可能成為早期特異性潛在標(biāo)記物。臨床上PO⑶有相對(duì)明確的發(fā)病時(shí)間，為了尋找參與PO⑶相關(guān)的血漿miRNA，我們利用miRNA芯片技術(shù)篩選了與PO⑶相關(guān)的miRNA。結(jié)果發(fā)現(xiàn)與患者術(shù)前相比，PO⑶患者血漿中miRNA-572的表達(dá)明顯降低。本發(fā)明人認(rèn)為通過反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PT-PCR)為基礎(chǔ)技術(shù)，通過檢測(cè)PO⑶患者中血漿miRNA-572的表達(dá)來實(shí)現(xiàn)早期診斷PO⑶是完全可行的。本發(fā)明的第一方面，提供了 MiCT0RNA 572在制備早期預(yù)測(cè)術(shù)后認(rèn)知功能障礙的試劑盒中的應(yīng)用。本發(fā)明的第二方面，提供了一種早期預(yù)測(cè)術(shù)后認(rèn)知功能障礙的hsa-mir-572檢測(cè)試劑盒，是通過檢測(cè)血漿或血清中的hsa-mir-572分子含量的變化，監(jiān)測(cè)或早期預(yù)測(cè)術(shù)后認(rèn)知功能障礙的可能或進(jìn)程，以便盡早采取措施或藥物治療，防止術(shù)后認(rèn)知功能障礙發(fā)生或發(fā)展，進(jìn)而防止轉(zhuǎn)變成癡呆。本發(fā)明通過對(duì)術(shù)前認(rèn)知功能正?；颊哐獫{中hsa-mir-572的含量比較；術(shù)后未發(fā)生認(rèn)知功能障礙者與術(shù)后認(rèn)知功能障礙患者血漿中hsa-mir-572的含量比較；發(fā)現(xiàn)術(shù)后認(rèn)知功能障礙患者血衆(zhòng)中hsa-mir-572含量明顯低于術(shù)前認(rèn)知功能正常的患者,約低于術(shù)前認(rèn)知功能正常的患者群的5倍左右，這個(gè)結(jié)果顯示了 hsa-mir-52的含量變化情況，可以作為術(shù)后認(rèn)知功能的早期預(yù)測(cè)手段。本發(fā)明提供了一種早期預(yù)測(cè)術(shù)后認(rèn)知功能障礙的hsa-mir-572檢測(cè)試劑盒，該試劑盒由反轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)、引物系統(tǒng)和擴(kuò)增系統(tǒng)組成，其中的引物系統(tǒng)由特異性的hsa-mir-572反轉(zhuǎn)錄引物及Real-time PCR的上、下游引物組成，hsanir-572反轉(zhuǎn)錄引物為GTCGTATCCAGTGCGAACTGTGGCGATCGGTACGGGCTACACTCGGCAATTGCACTGGATACGACTGGGCC (SEQ ID N0:1)；Real-time PCR 上游引物為GTCCGCTCGGC GGTGGCCCA (SEQ ID N0:2)；Real-time PCR 下游引物為AGTGCGAACTGTGGCGAT (SEQ ID N0:3)。本發(fā)明試劑盒的引物是根據(jù)已知的生物信息學(xué)查得hsa-mir-572的成熟體序列而設(shè)計(jì)的(詳見http://microrna. sanger. ac. uk/sequences/),包括其特異性的反轉(zhuǎn)錄引物、Real-time PCR的上下游引物均通過Primer 5引物設(shè)計(jì)軟件設(shè)計(jì)。hsa-mir-572的成熟體序列⑶CCGCUCGGCGGUGGCCCA (SEQ ID NO:4)上述試劑盒的反轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)由反轉(zhuǎn)錄酶、反轉(zhuǎn)錄體系緩沖液和R N A酶抑制劑組成，擴(kuò)增系統(tǒng)由SYBR Premix Ex Taq 試劑組成。本發(fā)明的試劑盒，具體組成如下A) hsa-mir-572 反轉(zhuǎn)錄引物(SEQ ID N0:1)，1 管，濃度10 μ M，100 μ I/管;B) Real-time PCR 上游引物(SEQ ID N0:2)，l 管，濃度10 μ M，100 μ I/管;Real-time PCR 下游引物(SEQ ID N0:3)，l 管，濃度10 μ M，100 μ I/管；C) Trizol reagent (總 RNA 提取試劑)，I 管，2000 μ I/ 管;D)氯仿，I 管，500 μ I/管；Ε)無水乙醇，I管，7ml/管；F) DEPC H20 (經(jīng)焦炭酸乙二酯處理的純水)，I管，1000 μ I/管G) dd H20 (雙蒸水)，I 管，2000 μ I/ 管。使用本發(fā)明試劑盒監(jiān)測(cè)或早期預(yù)測(cè)術(shù)后認(rèn)知功能障礙，首先，將若干已知的術(shù)前認(rèn)知功能正常病人編組，用本發(fā)明試劑盒分別檢測(cè)術(shù)前認(rèn)知功能正常病人、術(shù)后認(rèn)知功能正常、術(shù)后認(rèn)知功能障礙血漿中hsa-mir-572含量，以此作為對(duì)照的標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)。再用相同的方法檢測(cè)未知患者血清中hsa-mir-572含量,對(duì)照上述標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)，即可初步確定該患者是否為術(shù)前認(rèn)知功能正常病人、術(shù)后認(rèn)知功能正?；颊?、術(shù)后認(rèn)知功能障礙患者，以便作進(jìn)一步檢查確診。本發(fā)明的第三方面，提供了上述早期預(yù)測(cè)術(shù)后認(rèn)知功能障礙的hsa-mir-572檢測(cè)試劑盒的檢測(cè)方法，具體步驟如下按常規(guī)抽血取血清或血漿，用總RNA提取試劑處理血清或血漿，加氯仿離心后取上層水相，并富集血清或血衆(zhòng)中的小RNA ;由反轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)反轉(zhuǎn)錄hsa-mir-572成cDNA ;用擴(kuò)增系統(tǒng)進(jìn)行Real-time PCR擴(kuò)增，測(cè)定hsa-mir-572含量。


圖I :認(rèn)知功能正?；颊呤中g(shù)前后血漿中hsa-mir-572的含量檢測(cè)；圖2 :術(shù)后認(rèn)知功能障礙患者手術(shù)如后血衆(zhòng)中hsa-mir-572的差異表達(dá)檢測(cè)；
具體實(shí)施例方式現(xiàn)結(jié)合實(shí)施例和附圖，對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步描述，但本發(fā)明的實(shí)施并不僅限于此。實(shí)施例I :制備本發(fā)明的試劑盒(供一人用)本發(fā)明的試劑盒組成如下I.反轉(zhuǎn)錄引物I管，100 μ I/管濃度10 μ M反轉(zhuǎn)錄引物為GTCGTATCCAGTGCGAACTGTGGCGATCGGTACGGGCTACACTCGGCAATTGCACTGGATACGACTGGGCC2. Real-time PCR 的上、下游引物各 I 管，100 μ I/管濃度10 μ M ;
上游引物為GTCCGCTCGGCGGTGGCCCA下游引物為AGTGCGAACTGTGGCGAT3.Trizol reagent I 管 2000 μ I/ 管4.氯仿I 管 500 μ I/ 管5.無水乙醇I管 7ml/管6. DEPC H20I 管 1000 μ I/ 管7. dd H2OI 管 2000 μ I/ 管。本發(fā)明根據(jù)已知的生物信息學(xué)查得hsa-mir-572的成熟體序列⑶CCG⑶CGGCGGUGGCCCA，其特異性的反轉(zhuǎn)錄引物、Real-time PCR的上下游引物均通過Primer 5引物設(shè)計(jì)軟件設(shè)計(jì)，由美國(guó)invitrogen公司負(fù)責(zé)引物合成。設(shè)計(jì)的引物序列如下(I)反轉(zhuǎn)錄引物

GTCGTATCCAGTGCGAACTGTGGCGATCGGTACGGGCTACACTCGGCAATTGCACTGGATACGACTGGGCC (SEQ ID NO:I)(2) Real-time PCR 的上下游引物上游引物GTCCGCTCGGCGGTGGCCCA(SEQ ID NO:2)下游引物AGTGCGAACTGTGGCGAT(SEQ ID NO:3)制備包括下列組成成分的試劑盒總RNA提取試劑、氯仿、無水乙醇、特異性hsa-mir-572反轉(zhuǎn)錄引物(100 μ I/管濃度10 μ Μ)、特異性的hsa-mir-572上游引物(100 μ I/管濃度10 μ Μ)、下游引物(100 μ I/管濃度:10 μ M)、DEPCH2O (1000 μ I/管)、ddH2O (2000 μ I/ 管)DEPC H2O的配置用購買的DEPC(焦碳酸二乙酯)，純度>99%，密度為I. 12g/ml，配置DEPC H2O0 IOOmlMiliQ純水中加O. lmlDEPC，放在IOOml干烤過的容量瓶中靜置4小時(shí)后高壓滅菌，制成千分之一濃度的DEPC H2O,經(jīng)檢測(cè)不含RNase、DNase和proteinase。用來溶解合成的反轉(zhuǎn)錄引物，并作為反轉(zhuǎn)錄時(shí)的稀釋用水。dd H2O的配置MiliQ純水經(jīng)高壓滅菌后，配置成Real-time PCR用的dd H2O0特異性hsa-mir-572反轉(zhuǎn)錄引物通過Primer 5引物設(shè)計(jì)軟件設(shè)計(jì)，由美國(guó)invitrogen公司負(fù)責(zé)引物合成，純度為PAGE級(jí)，合成后的引物用DEPC H2O溶解，終濃度為10 μ Μ。特異性的hsa-mir-572上游引物通過Primer 5引物設(shè)計(jì)軟件設(shè)計(jì)，由美國(guó)invitrogen公司負(fù)責(zé)引物合成，純度為PAGE級(jí)，合成后的引物用dd H2O溶解，終濃度為10 μ Μ。實(shí)施例2 :本發(fā)明的試劑盒的檢測(cè)一、采集血漿樣本及樣本準(zhǔn)備由于血漿具有取材方便、無創(chuàng)傷性、連續(xù)檢測(cè)的優(yōu)點(diǎn)，因此從血漿中檢測(cè)術(shù)后認(rèn)知功能障礙生物標(biāo)志物可以將預(yù)測(cè)術(shù)后認(rèn)知功能障礙的轉(zhuǎn)歸提高到一個(gè)新的水平，從而達(dá)到早預(yù)防、早治療的目的。
血漿樣本在上海長(zhǎng)海醫(yī)院住院部部采集16例術(shù)前認(rèn)知功能正?；颊咝泄强葡ァⅢy關(guān)節(jié)置換，10例術(shù)后認(rèn)知功能正常，6例術(shù)后認(rèn)知功能障礙患者。根據(jù)美國(guó)精神病學(xué)協(xié)會(huì)診斷與統(tǒng)計(jì)指南(Diagnostic and Statistical Manual, DSM-IV)的定義，即無其他方面敘述的認(rèn)知障礙(ICD :International Classification ofDiseases296. 5)。有神經(jīng)精神系統(tǒng)疾病史；未經(jīng)控制的高血壓、糖尿病、腫瘤、血液病史；有長(zhǎng)期應(yīng)用精神活性藥物或酒精史；心、肺、肝、腎功能不全；有認(rèn)知障礙病史或術(shù)前MMSE評(píng)分異常的患者被排除。所有患者均無血液、腎臟、腫瘤等可能影響血清水平的疾病。入院后均經(jīng)B超或CT檢查排除癌癥。樣品收集收集約4ml病人的外周血放入含360 μ I EDTA的抗凝管中，靜置約I小時(shí)。二、采集血漿樣本的處理及提取其中的小RNA (I)血漿樣本處理采集的外周血樣品4°C離心兩次，首先1600g離心lOmin，取上清，加入新的離心管中，再12000g離心lOmin，取上清，加入新離心管中。加Trizolreagent (Invitrogen 公司購買)，使 Trizol reagent :血衆(zhòng)=I :0.8 左右。(2)小RNA提取添加過Trizol reagent的樣本搖晃混勻，放置冰上15min, IOOOg,4°C離心lOmin，取上清，分別放入經(jīng)DEPC處理過的2ml EP管中。每管加入200 μ I氯仿，搖晃混勻，放置冰上IOmin左右，12000g、4°C離心15min，取上層水相。下面的步驟按照Applied Biosystems 公司購買的 mirVana miRNA Isolation Kit 中提取小 RNA 的步驟進(jìn)行。使用Eppendorf紫外分光光度儀測(cè)定RNA的A260值和A260/A280的比值(I. 8-2. 2)，以評(píng)估其濃度和質(zhì)量。符合定量檢測(cè)要求的樣本進(jìn)行下一步反應(yīng)。三、miRNA的實(shí)時(shí)定量I.反轉(zhuǎn)錄成 hsa-mir-572 的 cDNA取富集液50ng為模板，以設(shè)計(jì)的特異性hsa-mir-572反轉(zhuǎn)錄引物進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄。按照 5 XPrime Scrip Buffer (for Real Time) 4 μ I、Prime S cript RT Enzyme Mix0. 5 μ KPrimeScript RT reagent Kit) (TaKaRa 公司)、hsa-mir-122 反轉(zhuǎn)錄引物 0. 5 μ I、富集的小RNA50ng、DEPC H20 (補(bǔ)充H20使總體積達(dá)到20 μ I)進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄。以上步驟所用的tip頭、EP管均經(jīng)過DEPC水處理后高壓滅菌。2. Real-time PCR 定量 miRNA米用TaKaRa 公司的 SYBR Premix Ex Taq 試劑和美國(guó) Applied Biosystems 公司的Step Plus One實(shí)時(shí)定量PCR儀，按照下述體系進(jìn)行PCR反應(yīng)Premix Ex Taqui ( 2 χ )10 μ
上游引物(10 μΜ)0.4 μ (終濃度0.2 μΜ)
下游引物(10 μΜ)0.4 μ1(終濃度0.2 μΜ)
ROX Reference Dye (50χ)0.4 μ!
反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物I μ
雙蒸水7.8 μ
總體系20μ1經(jīng)過預(yù)實(shí)驗(yàn)確立了 hsa-mir-572引物的合適退火溫度,最終確定以下條件
權(quán)利要求
1.MicroRNA 572在制備早期預(yù)測(cè)術(shù)后認(rèn)知功能障礙的試劑盒中的應(yīng)用。
2.一種早期預(yù)測(cè)術(shù)后認(rèn)知功能障礙的hsa-mir-572檢測(cè)試劑盒，其特征在于該試劑盒是由反轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)、引物系統(tǒng)和擴(kuò)增系統(tǒng)組成，其中的引物系統(tǒng)由特異性的hsa-mir-572反轉(zhuǎn)錄引物及Real-time PCR的上、下游引物組成， hsa-mir-572反轉(zhuǎn)錄引物序列如SEQ ID NO: I所示， Real-time PCR上游引物序列如SEQ ID N0:2所示， Real-time PCR下游引物序列如SEQ ID N0:3所示; 其中的反轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)由反轉(zhuǎn)錄酶、反轉(zhuǎn)錄體系緩沖液和R N A酶抑制劑組成； 其中的擴(kuò)增系統(tǒng)由SYBR Premix Ex Taq 試劑組成。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種早期預(yù)測(cè)術(shù)后認(rèn)知功能障礙的hsa-mir-572檢測(cè)試劑盒，其特征在于該試劑盒具體組成如下 A)hsa-mir-572 反轉(zhuǎn)錄引物，I 管，濃度10 μ M，100 μ I/ 管； B)Real-time PCR 上游引物，I 管，濃度:10 μ M, 100 μ I/管； Real-time PCR 下游引物，I 管，濃度10 μ M，100 μ I/管；C)Trizol reagent, I 管，2000 μ I/ 管； D)氯仿，I管，500μ1/管； Ε)無水乙醇，I管，7ml/管;F)DEPC H20,1 管，1000 μ I/ 管;G)dd H20,1 管，2000 μ I/ 管。
4.一種根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的早期預(yù)測(cè)術(shù)后認(rèn)知功能障礙的hsa-mir-572檢測(cè)試劑盒的檢測(cè)方法，具體步驟如下 按常規(guī)抽血取血清或血漿，用總RNA提取試劑處理血清或血漿，加氯仿離心后取上層水相，并富集血清或血衆(zhòng)中的小RNA ;由反轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)反轉(zhuǎn)錄hsa-mir-572成cDNA ;用擴(kuò)增系統(tǒng)進(jìn)行Real-time PCR擴(kuò)增，測(cè)定hsa-mir-572含量。
全文摘要
本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)生物檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，是一種早期預(yù)測(cè)術(shù)后認(rèn)知功能障礙的MicroRNA 572試劑盒及檢測(cè)方法。目前還沒有一種有效的方法來預(yù)測(cè)術(shù)后認(rèn)知功能障礙，給臨床上早期預(yù)測(cè)及治療帶來不便。本發(fā)明通過對(duì)術(shù)前認(rèn)知功能正常患者、術(shù)后認(rèn)知功能障礙患者血漿中hsa-mir-572的含量比較發(fā)現(xiàn)hsa-mir-572的含量變化情況可以作為術(shù)后認(rèn)知功能障礙的早期預(yù)測(cè)手段。本發(fā)明提供一種早期預(yù)測(cè)術(shù)后認(rèn)知功能障礙的hsa-mir-572檢測(cè)試劑盒，該試劑盒包括反轉(zhuǎn)錄引物、Real-time PCR的上下游引物和擴(kuò)增系統(tǒng)等，經(jīng)臨床試用，檢測(cè)的準(zhǔn)確率達(dá)85%左右，因此本發(fā)明試劑盒可用于早期預(yù)測(cè)術(shù)后認(rèn)知功能障礙。
文檔編號(hào)C12Q1/68GK102766696SQ201210289608
公開日2012年11月7日 申請(qǐng)日期2012年8月15日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月15日
發(fā)明者余喜亞, 劉善榮, 劉淑鵬, 畢曉瑩, 鄧小明 申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)