基于親疏水模式基片的微液相反應(yīng)方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種基于親疏水模式基片的微液相反應(yīng)方法，它優(yōu)選通過點(diǎn)樣方式將含有親水性物質(zhì)和/或雙親性物質(zhì)的液相體系施加至疏水性平整面形成微小液滴陣列，而后除去各微小液滴中的溶劑等，使各微小液滴中的親水性物質(zhì)和/或雙親性物質(zhì)與疏水性平整面結(jié)合，形成親水結(jié)合點(diǎn)陣列，之后將含一種以上反應(yīng)物的水相體系或親水性液相體系在疏水性平整面上移動(dòng)，從而在各親水結(jié)合點(diǎn)處自動(dòng)形成孤島狀微小反應(yīng)液滴，最后在設(shè)定反應(yīng)條件下，令各微小反應(yīng)液滴中的反應(yīng)物進(jìn)行反應(yīng)。本發(fā)明克服了現(xiàn)有技術(shù)中芯片成本高，反應(yīng)通量低、樣品消耗量大、加樣技術(shù)復(fù)雜、設(shè)備昂貴等問題，使多重反應(yīng)并行處理系統(tǒng)能于普通實(shí)驗(yàn)條件下實(shí)施，大大擴(kuò)展了其應(yīng)用范圍。
【專利說(shuō)明】基于親疏水模式基片的微液相反應(yīng)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明特別涉及一種基于親疏水模式基片的微液相反應(yīng)方法，其可應(yīng)用于生物、化學(xué)、醫(yī)學(xué)、材料科學(xué)等領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]在以生物、化學(xué)反應(yīng)作為一種最基本實(shí)驗(yàn)形式的研究及產(chǎn)業(yè)領(lǐng)域，為了獲得優(yōu)化的結(jié)果或產(chǎn)品，往往需要對(duì)大量反應(yīng)參數(shù)進(jìn)行規(guī)?；Y選；或?qū)悠分械牟煌M分進(jìn)行多指標(biāo)檢測(cè)。由于所需進(jìn)行反應(yīng)的數(shù)量通常遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過手動(dòng)操作的能力范圍，自動(dòng)化的多重反應(yīng)并行處理系統(tǒng)成為了此類應(yīng)用的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)工具。
[0003]在大多數(shù)應(yīng)用中，絕大部分宏觀反應(yīng)參數(shù)如溫度、壓力等對(duì)所有反應(yīng)都是一致的(可以隨時(shí)間變化)；其相互間的區(qū)別主要在于參與反應(yīng)的化學(xué)物質(zhì)。特別是對(duì)于大量的生物醫(yī)學(xué)檢測(cè)應(yīng)用而言，對(duì)樣品中不同指標(biāo)的檢測(cè)主要是通過在反應(yīng)體系中加入不同的反應(yīng)物來(lái)實(shí)現(xiàn)的。因此，在許多情況下，多重反應(yīng)并行處理系統(tǒng)主要解決的是如何加注和隔離不同反應(yīng)的組分問題。
[0004]目前已知的一種檢測(cè)裝置是微孔板(microtiter plate / microwell plate)。其基本構(gòu)型是一塊具有多個(gè)非通孔的固態(tài)平板，板上的每個(gè)孔具有唯一的記號(hào)，被用于存放待檢測(cè)的樣品溶液。用于多重反應(yīng)時(shí)，一般的做法是將不同的反應(yīng)溶液分別加注到不同的孔中。由于各個(gè)孔內(nèi)的溶液相互隔離，各個(gè)反應(yīng)的過程互不干擾；并且可通過專門的檢測(cè)儀器一次性讀取全部反應(yīng)的結(jié)果(或?qū)φ麄€(gè)反應(yīng)過程進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè))，該裝置可以實(shí)現(xiàn)多重反應(yīng)的并行處理。
[0005]但前述微孔板的缺陷至少在于:· 其一，反應(yīng)通量不足。根據(jù)通用的技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)，一個(gè)典型的微孔板可具有6、24、96、384或1536個(gè)孔。也就是說(shuō)，最多可利用單個(gè)微孔板進(jìn)行1536個(gè)并行反應(yīng)。對(duì)于傳統(tǒng)微孔板而言，要提升通量只能通過使用更多的孔板來(lái)實(shí)現(xiàn)，由于微孔板本身的造價(jià)較高，造成檢測(cè)的成本十分高昂。
[0006]其二，樣品消耗量太大。使用現(xiàn)有微孔板進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，每個(gè)孔一般需要微升(UL)量級(jí)的溶液。這給許多樣品量極為有限且非常寶貴的生物學(xué)或醫(yī)學(xué)研究造成了實(shí)質(zhì)性的困難。
[0007]其三，加樣技術(shù)復(fù)雜。對(duì)微孔板而言加樣是指將一定體積的樣品溶液加注到各個(gè)微孔內(nèi)的過程。由于孔板的設(shè)計(jì)并不利于人類操作者在陣列中定位特定的微孔，在實(shí)際操作中對(duì)96孔及以上的微孔板手動(dòng)加樣極易出錯(cuò)，故一般需使用自動(dòng)化的液體傳輸系統(tǒng)。然而此類針對(duì)微孔板特制的加樣機(jī)器人通常較為昂貴，且操作程序十分復(fù)雜，從而增加了整個(gè)檢測(cè)流程的成本。
[0008]其四，制作成本很高。一塊合乎行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的微孔板對(duì)材料的機(jī)械、光學(xué)、化學(xué)以及表面等特性都有非常嚴(yán)格的要求；并且在滿足以上要求的前提下孔板的結(jié)構(gòu)尺寸等還必須保證足夠的加工精度。這些都導(dǎo)致了微孔板在長(zhǎng)期的應(yīng)用歷史上始終不能顯著地降低其制作成本。
[0009]如前所述，由于多重反應(yīng)在許多情況下其區(qū)別主要是參與反應(yīng)的物質(zhì)，一種可行的技術(shù)路線是預(yù)先將各個(gè)反應(yīng)所獨(dú)有的組分存放在各個(gè)相互獨(dú)立的反應(yīng)容器中(并加以標(biāo)記或記錄以便區(qū)分)而將相同的成分一次性加入所有反應(yīng)容器?；谠摷夹g(shù)路線，美國(guó)BioTrove公司開發(fā)了一種商品名為OpenArray的多通孔平板技術(shù),在結(jié)構(gòu)上,OpenArray是一塊具有多個(gè)圓柱形通孔的固態(tài)平板，其通孔數(shù)量大約為2000-3000個(gè)左右。通過化學(xué)處理，使所有通孔的內(nèi)表面具有親水性；而通孔所連接的平板的兩個(gè)相對(duì)的表面具有疏水性。使用配套的自動(dòng)化加樣系統(tǒng)，可分別在各個(gè)孔內(nèi)預(yù)先加入每個(gè)反應(yīng)所獨(dú)有的反應(yīng)組分。而所有反應(yīng)共同需要的反應(yīng)組分(如待檢測(cè)的樣品溶液)可通過特制加樣儀器一次性地加入到所有孔內(nèi)。完成加樣后，各個(gè)孔內(nèi)所進(jìn)行的反應(yīng)由預(yù)先加入的反應(yīng)組分決定；因而實(shí)現(xiàn)了對(duì)多重反應(yīng)的并行處理。OpenArray檢測(cè)平板的設(shè)計(jì)相對(duì)于傳統(tǒng)微孔板而言具有若干優(yōu)勢(shì)，如:制造工藝相對(duì)簡(jiǎn)單，對(duì)孔板材料的透光性能限制相對(duì)較寬；可以通過直接將整個(gè)平板浸沒在樣品溶液中再取出的方式進(jìn)行加樣從而不需要使用昂貴的專用加樣設(shè)備等。但OpenArray技術(shù)用于高通量檢測(cè)時(shí)也存在一些不足之處:按每個(gè)通孔的液體容積大約為33納升(nL)計(jì)算，注滿全部3072個(gè)通孔所需的樣品溶液體積大約為100 μ L,其樣品消耗量較大。并且，上述結(jié)果是使用配合OpenArray平板開發(fā)的專用微流體加樣設(shè)備得到的。如果采用浸沒法進(jìn)行加樣，則需要的溶液體積將達(dá)到毫升(mL)級(jí)別。另外，在微通孔中預(yù)先加入各反應(yīng)獨(dú)有的化合物組分亦較為困難，具體的講，要將這些化合物準(zhǔn)確地加入到微孔中需要準(zhǔn)確調(diào)節(jié)點(diǎn)樣針的位置，這導(dǎo)致預(yù)加樣系統(tǒng)造價(jià)昂貴；并且通量的設(shè)計(jì)受到在預(yù)加樣系統(tǒng)精度的限制。同時(shí)，微孔陣列的加工也必須很精確(即使較小的工藝誤差所導(dǎo)致的位置偏移也會(huì)造成點(diǎn)樣的困難)，從而在另一方面也提高了成本。
[0010]美國(guó)Fluidigm公司提供了另一種名為Dynamic Array或Digital Array的集成流體回路，以實(shí)現(xiàn)對(duì)樣品溶液的分配和加注。利用此項(xiàng)技術(shù)可以實(shí)現(xiàn)對(duì)高通量檢測(cè)過程的精確自動(dòng)化控制。目前其產(chǎn)品線涵蓋的通量范圍大致為2000-37000個(gè)并行反應(yīng)/芯片，其所需的樣品體積范圍為10-0.85 nL/反應(yīng)，因此，其最高通量和單個(gè)反應(yīng)最低所需樣品量均優(yōu)于OpenArray平板。然而,該微流體芯片的設(shè)計(jì)復(fù)雜,對(duì)制造工藝要求亦非常之高。并且，該芯片也必須配合昂貴的特制加樣和檢測(cè)設(shè)備使用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0011]本發(fā)明的目的在于提供一種基于親疏水模式基片的微液相反應(yīng)方法，從而克服現(xiàn)有技術(shù)中的不足。
[0012]概括的講，為達(dá)成前述發(fā)明目的，本發(fā)明的一種實(shí)施方案是通過提供一固態(tài)基片，并以固態(tài)基片的一個(gè)平整表面作為反應(yīng)面，且使該反應(yīng)面的表面張力呈差異化分布，藉以實(shí)現(xiàn)不同極性液相反應(yīng)體系在反應(yīng)面上自動(dòng)進(jìn)行分配，形成離散分布(如，陣列分布)的多個(gè)微型液相反應(yīng)體系，進(jìn)而構(gòu)建出多重反應(yīng)并行處理系統(tǒng)。
[0013]作為本發(fā)明的第一個(gè)實(shí)施例，該固態(tài)基片的反應(yīng)面上可具有一個(gè)連續(xù)的大面積疏水區(qū)域(作為優(yōu)選的方案，其疏水程度使水相體系可以在反應(yīng)面上自由移動(dòng)而不殘留)，余下的小面積親水部分在空間上被疏水區(qū)域分隔為大量形狀大小均一的微型孤島狀親水單元，而所有這些親水單元在反應(yīng)面上形成一個(gè)規(guī)則的排布，亦可稱為反應(yīng)陣列，在每個(gè)親水單元表面，存在各個(gè)反應(yīng)條件所獨(dú)有的反應(yīng)物。
[0014]作為該實(shí)施例的一個(gè)較佳實(shí)施方案，其可以包括如下步驟:
(1)提供一種至少局部表面區(qū)域?yàn)槭杷云秸娴幕⒅辽俸幸环N親水性物質(zhì)和/或雙親性物質(zhì)的第一液相體系施加至疏水性平整面，形成微小液滴陣列；
(2)除去各微小液滴中揮發(fā)度大于設(shè)定參考值的物質(zhì)，并使各微小液滴中的至少部分親水性物質(zhì)和/或雙親性物質(zhì)或至少部分親水性物質(zhì)和/或雙親性物質(zhì)及其余揮發(fā)度小于設(shè)定參考值的物質(zhì)與疏水性平整面結(jié)合，形成親水結(jié)合點(diǎn)陣列；
(3)將第二液相體系在疏水性平整面上移動(dòng)，使第二液相體系在各親水結(jié)合點(diǎn)處自動(dòng)聚集形成微小反應(yīng)液滴，所述第二液相體系為水相體系或親水性液相體系；
(4)在設(shè)定反應(yīng)條件下，令各微小反應(yīng)液滴中的反應(yīng)物進(jìn)行反應(yīng)，所述反應(yīng)物全部來(lái)源于第二液相體系或者同時(shí)來(lái)源于第一液相體系和第二液相體系。
[0015]但是，對(duì)于某些需要在油相體系中進(jìn)行的反應(yīng)而言，顯然本領(lǐng)域技術(shù)人員可根據(jù)前述實(shí)施例而很容易的想到本發(fā)明的第二個(gè)實(shí)施例，亦即，使前述態(tài)基片的反應(yīng)面上具有一個(gè)連續(xù)的大面積親水區(qū)域(同樣的，其疏水程度應(yīng)足以使油相反應(yīng)體系可以在反應(yīng)面上自由移動(dòng)而不殘留)，余下的小面積疏水區(qū)域在空間上被親水區(qū)域分隔為大量形狀大小均一的微型孤島狀疏水單元(即，形成微液相反應(yīng)陣列)，并且，同樣的在每個(gè)疏水單元表面，存在各個(gè)反應(yīng)條 件所獨(dú)有的反應(yīng)物。相應(yīng)的，本領(lǐng)域技術(shù)人員亦可參照前述第一個(gè)實(shí)施例的優(yōu)選實(shí)施方案，而采用相近的操作達(dá)成該第二個(gè)實(shí)施例。
【具體實(shí)施方式】
[0016]如前所述，現(xiàn)有的多重反應(yīng)并行處理系統(tǒng)普遍存在芯片成本高，反應(yīng)通量有限、樣品消耗量大、加樣技術(shù)復(fù)雜、加樣設(shè)備昂貴等等問題之中的一個(gè)或多個(gè)，有鑒于此，本案發(fā)明人經(jīng)長(zhǎng)期研究和大量實(shí)踐，提出了本發(fā)明的技術(shù)方案，從而很好的解決了本領(lǐng)域技術(shù)人員長(zhǎng)期以來(lái)一直渴望克服的技術(shù)瓶頸，并使多重反應(yīng)并行處理系統(tǒng)能于普通實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行，大大擴(kuò)展了其應(yīng)用范圍。
[0017]作為本發(fā)明的一個(gè)較佳實(shí)施例，其可以包括如下步驟:
(1)提供一種至少局部表面區(qū)域?yàn)槭杷云秸娴幕?，并將至少含有一種親水性物質(zhì)和/或雙親性物質(zhì)的第一液相體系施加至疏水性平整面，形成微小液滴陣列；
(2)除去各微小液滴中揮發(fā)度大于設(shè)定參考值的物質(zhì)，并使各微小液滴中的至少部分親水性物質(zhì)和/或雙親性物質(zhì)或至少部分親水性物質(zhì)和/或雙親性物質(zhì)及其余揮發(fā)度小于設(shè)定參考值的物質(zhì)與疏水性平整面結(jié)合，形成親水結(jié)合點(diǎn)陣列；
(3)將第二液相體系在疏水性平整面上移動(dòng)，使第二液相體系在各親水結(jié)合點(diǎn)處自動(dòng)聚集形成微小反應(yīng)液滴，所述第二液相體系為水相體系或親水性液相體系；
(4)在設(shè)定反應(yīng)條件下，令各微小反應(yīng)液滴中的反應(yīng)物進(jìn)行反應(yīng)，所述反應(yīng)物全部來(lái)源于第二液相體系或者同時(shí)來(lái)源于第一液相體系和第二液相體系。
[0018]作為可實(shí)施的方案之一，前述步驟(1)中可通過噴、點(diǎn)方式中的任意一種將第一液相體系施加至疏水性平整面形成微小液滴陣列。
[0019]進(jìn)一步的，前述噴、點(diǎn)方式可通過針式點(diǎn)樣儀、噴墨點(diǎn)樣儀和噴墨打印機(jī)中的任意一種設(shè)備實(shí)施，但不限于此。[0020]作為優(yōu)選方案之一，前述步驟(1)中所形成的微小液滴陣列中，各微小液滴的尺寸可以為0.1 μ m - 900 μ m,且相鄰微小液滴之間的距離可以為0.1 μ m - 900 μ m。
[0021]作為可實(shí)施的方案之一,前述第一液相體系米用水相體系、油相體系和油水兩相體系中的任意一種。
[0022]作為可實(shí)施的方案之一，前述步驟(2)中可通過自然蒸發(fā)或受控蒸發(fā)方式令各微小液滴中揮發(fā)度大于設(shè)定參考值的物質(zhì)充分揮發(fā)去除。其中，所述的受控蒸發(fā)方式可以包括在輔以加熱、減壓等外加條件的情況下實(shí)施，這可以是本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)實(shí)際需要而適當(dāng)選用及調(diào)整的。
[0023]作為可實(shí)施的方案之一，前述步驟(2)中所述親水性物質(zhì)和/或雙親性物質(zhì)是通過可逆物理吸附和/或可逆化學(xué)鍵合方式與疏水性平整面結(jié)合。
[0024]作為可實(shí)施的方案之一，前述步驟(1)- (2)內(nèi)所述親水性物質(zhì)和/或雙親性物質(zhì)中的至少一種為參與了步驟(4)內(nèi)所述反應(yīng)的反應(yīng)物。
[0025]作為可實(shí)施的方案之一，前述第一液相體系中除含有至少一種親水性物質(zhì)和/或雙親性物質(zhì)之外，還含有用以參與步驟(4)內(nèi)所述反應(yīng)的一種以上反應(yīng)物。
[0026]作為優(yōu)選的實(shí)施方案之一，前述步驟(3)中可以通過拖曳液滴狀的第二液相體系，使其在經(jīng)步驟(2)處理后的疏水性平整面上沿設(shè)定軌跡滑過，進(jìn)而在各親水結(jié)合點(diǎn)處自動(dòng)聚集形成微小反應(yīng)液滴。
[0027]作為優(yōu)選的實(shí)施方案之一，前述第二液相體系的體積可以為1- 30 UL0
[0028]作為可實(shí)施的方案之一，前述步驟(4)可以包括:
1、以至少不與微小反應(yīng)液·滴中的任一種反應(yīng)物反應(yīng)的難揮發(fā)性油相物質(zhì)包裹各微小反應(yīng)液滴；
I1、設(shè)定反應(yīng)條件，令各微小反應(yīng)液滴中的反應(yīng)物相互反應(yīng)。
[0029]作為本發(fā)明的應(yīng)用范例之一，該基于親疏水模式基片的微液相反應(yīng)方法可以是一種PCR方法，它可以包括如下步驟:
(1)提供一種至少局部表面區(qū)域?yàn)槭杷云秸娴幕⒑兄辽僖环N參與組成PCR反應(yīng)體系的親水性物質(zhì)和/或雙親性物質(zhì)的第一液相體系通過噴和/或點(diǎn)的方式施加至疏水性平整面，形成微小液滴陣列；
(2)蒸發(fā)除去各微小液滴中揮發(fā)度大于設(shè)定參考值的物質(zhì)，并使各微小液滴中的至少部分親水性物質(zhì)和/或雙親性物質(zhì)或至少部分親水性物質(zhì)和/或雙親性物質(zhì)及其余揮發(fā)度小于設(shè)定參考值的物質(zhì)與疏水性平整面結(jié)合，形成親水結(jié)合點(diǎn)陣列；
(3)將含有其它參與組成PCR反應(yīng)體系的物質(zhì)的第二液相體系在疏水性平整面上移動(dòng)，使第二液相體系在各親水結(jié)合點(diǎn)處自動(dòng)聚集形成微小反應(yīng)液滴，所述第二液相體系為水相體系；
(4)在設(shè)定PCR反應(yīng)條件下，令各微小反應(yīng)液滴中的各PCR反應(yīng)物進(jìn)行反應(yīng)。
[0030]作為可實(shí)施的方案之一，前述步驟(2)中可通過緩慢蒸發(fā)方式除去由第一液相體系形成的各微小液滴中的水，進(jìn)而使各微小液滴中的固態(tài)溶質(zhì)或固態(tài)溶質(zhì)與固形物和/或揮發(fā)度小于水的液態(tài)物質(zhì)析出并吸附在疏水性平整面上。
[0031]作為可實(shí)施的方案之一，前述第二液相體系內(nèi)可含有引物對(duì)、PCR模板、聚合酶和dNTP中的一種或多種，當(dāng)然，亦可含有PCR反應(yīng)所需的各種鹽類或添加劑等。[0032]作為較佳實(shí)施方案之一，前述步驟(1)中所形成的微小液滴陣列中，各微小液滴的尺寸為0.1 μ m - 900 μ m,且相鄰微小液滴之間的距離為0.1 μ m - 900 μηι。
[0033]作為較佳實(shí)施方案之一，前述步驟(3)中可通過拖曳體積為1- 30 μ L的液滴狀第二液相體系，使其在經(jīng)步驟(2)處理后的疏水性平整面上沿設(shè)定軌跡滑過，進(jìn)而在各親水結(jié)合點(diǎn)處自動(dòng)聚集形成微小反應(yīng)液滴。
[0034]作為可實(shí)施的方案之一，前述步驟(4)可以包括:
I、以至少不與微小反應(yīng)液滴中的任一種反應(yīng)物反應(yīng)的難揮發(fā)性油相物質(zhì)包裹各微小反應(yīng)液滴；
II、設(shè)定PCR反應(yīng)條件，令各微小反應(yīng)液滴中的PCR反應(yīng)物進(jìn)行反應(yīng)。
[0035]作為本發(fā)明的另一應(yīng)用范例，該基于親疏水模式基片的微液相反應(yīng)方法可以是如下所示的PCR方法，它包括如下步驟:
(1)提供一種至少局部表面區(qū)域?yàn)槭杷云秸娴幕?，并將至少含有一種引物對(duì)的引物對(duì)水溶液施加于該疏水性平整面，在該疏水性平整面表面形成微液滴點(diǎn)陣；
(2)緩慢蒸發(fā)除去各微液滴中的水，使前述引物對(duì)或前述引物對(duì)與其它固態(tài)溶質(zhì)和/或揮發(fā)度小于水的組分附著于該疏水性平整面，形成親水性結(jié)合點(diǎn)陣；
(3)將至少包含一種以上樣品模板的樣品模板水溶液從該疏水性平整面上滑過，使該至少包含一種以上樣品模板的水溶液自動(dòng)聚集在各親水性結(jié)合點(diǎn)上，形成微小反應(yīng)液滴點(diǎn)陣；
(4)以至少不與各微小反應(yīng)液滴中的任一種反應(yīng)物反應(yīng)的難揮發(fā)性油相物質(zhì)包裹各微小反應(yīng)液滴，再設(shè)定PCR反應(yīng)條件，令各微小反應(yīng)液滴中的PCR反應(yīng)物進(jìn)行反應(yīng)。
[0036]作為可實(shí)施的方案之一，前述引物對(duì)水溶液為兩種以上，且各種引物對(duì)水溶液中所含引物對(duì)均不相同。
[0037]作為可實(shí)施的方案之一，前述引物對(duì)水溶液中還可含有瓊脂糖、葡聚糖、淀粉、聚乙二醇、血清蛋白、磷脂中的一種或多種，當(dāng)然亦可含有其它PCR反應(yīng)所需的鹽類等輔劑。
[0038]作為可實(shí)施的方案之一，前述樣品模板的水溶液還含有DNA聚合酶、dNTP、PCR反應(yīng)所需的可溶性鹽和用于指示PCR反應(yīng)發(fā)生與否的標(biāo)記性物質(zhì)中的任意一種或兩種以上的組合。
[0039]作為可實(shí)施的方案之一，前述用于指示PCR反應(yīng)發(fā)生與否的標(biāo)記性物質(zhì)可包括熒光探針，但不限于此。
[0040]作為可實(shí)施的方案之一，本較佳實(shí)施例所涉及的PCR方法還可包括如下步驟:
(5)在PCR反應(yīng)完成后，檢測(cè)微小反應(yīng)液滴點(diǎn)陣中各反應(yīng)點(diǎn)的熒光信號(hào)，實(shí)現(xiàn)對(duì)樣品的檢測(cè)。
[0041]前述的固態(tài)基片可以選用本領(lǐng)域技術(shù)人員習(xí)知的各類合適材質(zhì)制成，其形態(tài)亦可根據(jù)實(shí)際需要而調(diào)整。比如，作為可實(shí)施的方案之一，前述的固態(tài)基片可選用片狀結(jié)構(gòu)，其材料可選自二氧化硅、聚四氟乙烯、聚偏氟乙烯、聚丙烯塑料、聚乙烯塑料、聚苯乙烯塑料、聚丙烯酰胺膜、有機(jī)硅塑料、金屬、陶瓷和云母等，但不限于此。
[0042]一般來(lái)講，前述的固態(tài)基片在制作反應(yīng)面之前應(yīng)首先進(jìn)行表面處理。比如，對(duì)應(yīng)于前述的本發(fā)明的第一個(gè)實(shí)施例，對(duì)于由疏水性材料制成的基片，通常可以依次采用有機(jī)溶劑和水對(duì)其清洗，而后將其干燥。而對(duì)于由親水性材料或弱疏水性材料制成的基片，則通常可以依次采用有機(jī)溶劑和水清洗，干燥后再在基片表面涂覆或沉積疏水性修飾物，形成表面形成疏水層的反應(yīng)面。前述的疏水性修飾物可選用本領(lǐng)域技術(shù)人員習(xí)用的各類疏水修飾物，特別是具有疏水碳鏈的有機(jī)物，比如，具有含有疏水碳鏈的含硅有機(jī)物、含氟有機(jī)物、含氧有機(jī)物、含氯有機(jī)物、含氮有機(jī)物或碳?xì)浠衔铮绶柰?、氯硅烷、聚丙烯等，但不限于此?br> [0043]相應(yīng)的，對(duì)于前述的本發(fā)明的第二個(gè)實(shí)施例，本領(lǐng)域技術(shù)人員亦可根據(jù)前述內(nèi)容之啟示，而很容易的想到對(duì)固態(tài)基體的材質(zhì)、反應(yīng)面進(jìn)行處理，并使之符合實(shí)際應(yīng)用之需求。
[0044]更為具體的，本發(fā)明的一典型實(shí)施例可以通過下述方案實(shí)施，它是首先通過一個(gè)受控的點(diǎn)樣步驟在高度疏水的表面上生成親水單元陣列，并使各個(gè)單元含有相應(yīng)的反應(yīng)物分子。
[0045]其中，親水單元陣列中所有陣列單元都具有相同的形狀和尺寸，其中，作為一個(gè)較佳方案，單個(gè)陣列單元所形成的平面圖形在反應(yīng)面任意方向上的最大長(zhǎng)度為0.1 μm -900 μ m,且最鄰近陣列單元之間的距離為0.1 μ m - 900 μm。
[0046]點(diǎn)樣所使用的儀器可以選用商用的針式點(diǎn)樣儀、噴墨點(diǎn)樣儀和噴墨打印機(jī)等等，并且，該點(diǎn)樣儀器可以從一個(gè)以上的儲(chǔ)液器(reservoir)中分別取得不同的點(diǎn)樣溶液，并將其施加到點(diǎn)樣程序所設(shè)定的反應(yīng)面上的特定位置。
[0047]而點(diǎn)樣所用的溶液可以由反應(yīng)預(yù)混合物、親水性/雙親性化合物及水組成。其中，反應(yīng)預(yù)混合物應(yīng)包含每一種反應(yīng)所獨(dú)有的參與反應(yīng)的物質(zhì)，例如，有機(jī)反應(yīng)的引發(fā)劑、催化劑，或免疫反應(yīng)的抗體，或PCR反應(yīng)的引物等等，但不局限于此。此外，反應(yīng)預(yù)混合物還可以包含或不包含一些對(duì)所有反應(yīng)來(lái)說(shuō)都相同的輔助物質(zhì)，如助溶劑、穩(wěn)定劑、表面活性劑等，但不局限于此。
[0048]反應(yīng)預(yù)混合物在點(diǎn)樣后的緩慢干燥過程中可以結(jié)合或吸附到點(diǎn)樣液滴覆蓋的平板表面。
[0049]為了改變點(diǎn)樣點(diǎn)的表面張力性質(zhì)，用于點(diǎn)樣的液體還可含有一定量的親水性或雙親性化合物。這些物質(zhì)在點(diǎn)樣后的緩慢干燥過程中同樣可以結(jié)合或吸附到點(diǎn)樣液滴覆蓋的平板表面，使之呈親水性。
[0050]比如，對(duì)于某些生化反應(yīng)體系來(lái)說(shuō)，其中的親水性或雙親性化合物可選用碳水化合物質(zhì)如瓊脂糖、葡聚糖、淀粉、聚乙二醇中的任意一種或其組合，但不局限于此；也可選用雙親性物質(zhì)，如血清蛋白、合成的雙親性物和磷脂等的任意一種或其組合，但不局限于此。
[0051]各個(gè)不同反應(yīng)對(duì)應(yīng)的點(diǎn)樣溶液被預(yù)先儲(chǔ)存在不同的儲(chǔ)液器中。在點(diǎn)樣時(shí)，由點(diǎn)樣儀器根據(jù)預(yù)設(shè)程序?qū)⑺鼈円来问┘拥降近c(diǎn)樣程序所設(shè)定的反應(yīng)面上的特定位置，從而形成一個(gè)由不同點(diǎn)樣溶液干燥后析出的溶質(zhì)所形成的親水陣列單元。根據(jù)具體的實(shí)驗(yàn)要求，所述陣列單元可以兩兩不同，也可以對(duì)各個(gè)不同的反應(yīng)設(shè)置一定的重復(fù)單元。通過控制干燥的條件，可以使各個(gè)陣列單元的形狀和尺寸高度均一，且析出的溶質(zhì)在其表面呈較為均勻的分布。
[0052]在構(gòu)建前述親水單元陣列之后，在加載所有反應(yīng)共有的主成分(樣品)時(shí)，可優(yōu)選采用體積在1- 30 μ L的樣品溶液的單個(gè)液滴在反應(yīng)面上移動(dòng)，其整個(gè)移動(dòng)范圍應(yīng)覆蓋部分或全部親水陣列單元。由于表面張力的差異，拖動(dòng)過后樣品液體將只保留在親水陣列單元表面。這樣，當(dāng)樣品液滴的移動(dòng)完成后(液滴本身也被移除出平板表面)，在反應(yīng)面上將形成一個(gè)由大量微液滴組成的陣列。當(dāng)陣列形成后，原來(lái)吸附在各個(gè)親水陣列單元上的可溶性反應(yīng)物分子逐漸被再水化(rehydration)進(jìn)入液相中，與樣品形成混合溶液。由于在各個(gè)親水陣列單元中已經(jīng)含有不同反應(yīng)所需的相應(yīng)物化合物，且相應(yīng)的反應(yīng)過程被局限在微液滴內(nèi)部互不干擾，在反應(yīng)面上就建立起了一個(gè)微體積的多重反應(yīng)體系。
[0053]在反應(yīng)過程中，可以將反應(yīng)面置于一定的濕度控制下以確保反應(yīng)的液體不會(huì)顯著地蒸發(fā)從而影響反應(yīng)的正常進(jìn)行；也可以將反應(yīng)面置于某種密閉容器中再加注油相液體將各個(gè)微液滴包裹起來(lái)，使其不能移動(dòng)、蒸發(fā)及相互混合。其中，油相物質(zhì)可選自硅油、碳?xì)浠衔?、含氯碳?xì)湮?、含氧碳?xì)湮?、含氟碳?xì)湮?、礦物油(烯炔)等，但不局限于此。
[0054]反應(yīng)結(jié)束后，可以通過某些能夠被檢測(cè)的信號(hào)，如熒光信號(hào)、化學(xué)發(fā)光信號(hào)、電化學(xué)信號(hào)等對(duì)陣列中各個(gè)反應(yīng)單元的結(jié)果進(jìn)行測(cè)量分析，完成對(duì)樣品的多重反應(yīng)處理。
[0055]前述能夠被檢測(cè)的信號(hào)可以是由反應(yīng)體系中所含的標(biāo)記性物質(zhì)產(chǎn)生，或者由各反應(yīng)物在相互反應(yīng)時(shí)自行產(chǎn)生。比如，對(duì)于PCR反應(yīng)而言，前述標(biāo)記性物質(zhì)可以是反應(yīng)體系中所添加的獨(dú)立熒光探針，或者結(jié)合在其中的某一種反應(yīng)物上的熒光探針，但不限于此。
[0056]總而言之，藉由本說(shuō)明書的前述內(nèi)容，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以顯而易見的獲知，本發(fā)明較之現(xiàn)有技術(shù)至少具有如下優(yōu)勢(shì):
(1)高通量:例如，在75X 25 mm的基片上，藉由本發(fā)明的方案可以非常容易地點(diǎn)制IO4個(gè)以上數(shù)量的位點(diǎn)，遠(yuǎn)遠(yuǎn)超出現(xiàn)有的多重反應(yīng)并行處理系統(tǒng)；
(2)靈活性:通過選擇預(yù)先配制的點(diǎn)樣溶液，可以高效便捷地在基片上訂制不同的反
應(yīng)；
(3)無(wú)需對(duì)基片進(jìn)行微加工，點(diǎn)樣時(shí)也不存在與基片上特定位置對(duì)準(zhǔn)的問題，使用現(xiàn)有的普通設(shè)備(如，商用打印機(jī))即可完`成反應(yīng)陣列的構(gòu)建；
(4)在形成微小尺寸反應(yīng)單元時(shí)所需的微液滴體積小，有效地減少了試劑用量和樣品消耗，并且有利于提高陣列密度；
(5)基片材質(zhì)無(wú)特別要求，選擇范圍比較廣，工作時(shí)也無(wú)需配備特殊的反應(yīng)儀器和/或檢測(cè)儀器，利用常規(guī)設(shè)備即可完成整個(gè)反應(yīng)過程，成本極為低廉。
[0057]下面結(jié)合若干優(yōu)選實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作更為具體的闡述。
[0058]實(shí)施例1該實(shí)施例系涉及一種多重PCR反應(yīng)，其包括如下步驟:
(I)將75 X 25 X I mm玻片依次用丙酮、乙醇、純水各清洗5分鐘后，用異丙醇超聲洗10分鐘。最后再用純水清洗2次，每次5分鐘。清洗好的硅片用氮?dú)獯蹈伞?br> [0059](2)將硅片浸泡在含5% (v/v)的氟硅烷溶液中(溶劑為無(wú)水甲苯)反應(yīng)I分鐘。之后依次在異丙醇和純水中清洗各5分鐘。
[0060](3)將各個(gè)PCR反應(yīng)所需的不同引物(寡聚核苷酸)分別配成多個(gè)點(diǎn)樣溶液。除引物外，該溶液還包含1%瓊脂糖及1% BSA (牛血清白蛋白)。使用程序控制的自動(dòng)化點(diǎn)樣設(shè)備將以上點(diǎn)樣溶液施加到硅片表面，形成所述的反應(yīng)陣列。設(shè)定適當(dāng)?shù)狞c(diǎn)樣參數(shù)，使點(diǎn)制的點(diǎn)在干燥后形成直徑為100 μ m的圓。陣列的構(gòu)型為100 X 350的矩形，各鄰近點(diǎn)樣位點(diǎn)在X和Y方向的間距均為100 μ m.(4)將硅片先置于恒溫恒濕箱(溫度37 ° C，濕度50%)中保持4小時(shí)以便點(diǎn)樣溶液中的各種溶質(zhì)分子吸附或沉積到基片表面上，再在干燥器(室溫)中保持3小時(shí)以除去點(diǎn)樣微液滴中的水分。
[0061](5)使用適當(dāng)?shù)脑O(shè)備(微量移液器、毛細(xì)管、注射針等)拖動(dòng)一個(gè)待擴(kuò)增樣品液滴(含有PCR反應(yīng)的模板核酸分子、核苷酸單體、聚合酶、熒光染料或TaqMan ?熒光探針、緩沖液成分以及防止水分蒸發(fā)的化合物如甜菜堿等)使其在反應(yīng)面上平滑移動(dòng)，并依照一定的路線依次滑過所有反應(yīng)單元。由于表面張力的差異，當(dāng)樣品液滴滑過后，將有一定體積的溶液停留在反應(yīng)單元表面，而反應(yīng)面的疏水部分則沒有溶液殘留。原來(lái)存在于反應(yīng)單元表面的引物分子等反應(yīng)組分由于再水化作用而進(jìn)入溶液液相。這樣就形成了由多個(gè)微液滴組成的多重PCR反應(yīng)陣列。
[0062](6)用硅油包裹微液滴陣列(取適量硅油用適量的速度滑過點(diǎn)陣即可)。
[0063](7)在兼容載玻片的PCR儀器上進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)。循環(huán)反應(yīng)程序的設(shè)定可根據(jù)業(yè)界習(xí)知的技術(shù)知識(shí)來(lái)確定。[0064](8)擴(kuò)增反應(yīng)結(jié)束后，取出多重反應(yīng)平板裝置，將其載入微陣列掃描儀，根據(jù)染料特性選擇適當(dāng)激發(fā)波長(zhǎng)掃描樣品陣列表面獲得其熒光強(qiáng)度分布。根據(jù)每個(gè)反應(yīng)單元的熒光強(qiáng)弱即可確定該P(yáng)CR反應(yīng)擴(kuò)增產(chǎn)物的相對(duì)含量。其中，沒有發(fā)生擴(kuò)增的反應(yīng)單元的熒光強(qiáng)度顯著低于發(fā)生了擴(kuò)增的反應(yīng)單元。
[0065]此種應(yīng)用模式適用于區(qū)分特定序列的場(chǎng)合，如突變位點(diǎn)檢測(cè)，因?yàn)榇祟悜?yīng)用不需要精確定量熒光信號(hào)。由于對(duì)照中設(shè)有陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照，反應(yīng)單元熒光信號(hào)接近陽(yáng)性對(duì)照的，即可認(rèn)為該樣品溶液中含有和引物互補(bǔ)的帶有突變位點(diǎn)的模板序列，而在閾值以下者則被認(rèn)為是野生型序列。
[0066]以上說(shuō)明及具體實(shí)施例不可解析為限定本發(fā)明的設(shè)計(jì)思想。在本發(fā)明的【技術(shù)領(lǐng)域】里持有相同知識(shí)者可以將本發(fā)明的技術(shù)性思想以多樣的形態(tài)改良變更，這樣的改良及變更應(yīng)理解為屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種基于親疏水模式基片的微液相反應(yīng)方法，其特征在于，包括如下步驟: (1)提供一種至少局部表面區(qū)域?yàn)槭杷云秸娴幕⒅辽俸幸环N親水性物質(zhì)和/或雙親性物質(zhì)的第一液相體系施加至疏水性平整面，形成微小液滴陣列； (2)除去各微小液滴中揮發(fā)度大于設(shè)定參考值的物質(zhì)，并使各微小液滴中的至少部分親水性物質(zhì)和/或雙親性物質(zhì)或至少部分親水性物質(zhì)和/或雙親性物質(zhì)及其余揮發(fā)度小于設(shè)定參考值的物質(zhì)與疏水性平整面結(jié)合，形成親水結(jié)合點(diǎn)陣列； (3)將第二液相體系在疏水性平整面上移動(dòng)，使第二液相體系在各親水結(jié)合點(diǎn)處自動(dòng)聚集形成微小反應(yīng)液滴，所述第二液相體系為水相體系或親水性液相體系； (4)在設(shè)定反應(yīng)條件下，令各微小反應(yīng)液滴中的反應(yīng)物進(jìn)行反應(yīng)，所述反應(yīng)物全部來(lái)源于第二液相體系或者同時(shí)來(lái)源于第一液相體系和第二液相體系。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于親疏水模式基片的微液相反應(yīng)方法，其特征在于，步驟(O中是通過噴、點(diǎn)方式中的任意一種將第一液相體系施加至疏水性平整面形成微小液滴陣列的。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的基于親疏水模式基片的微液相反應(yīng)方法，其特征在于，所述噴、點(diǎn)方式是通過針式點(diǎn)樣儀、噴墨點(diǎn)樣儀和噴墨打印機(jī)中的任意一種而實(shí)施的。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的基于親疏水模式基片的微液相反應(yīng)方法，其特征在于，步驟(1)中所形成的微小液滴陣列中，各微小液滴的尺寸為0.1 μ m - 900 μπι，且相鄰微小液滴之間的距離為0.1 μ m - 900 μπι。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的基于親疏水模式基片的微液相反應(yīng)方法，其特征在于，所述第一液相體系米用水相體系、油相體系和油水兩相體系中的任意一種。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于親疏水模式基片的微液相反應(yīng)方法，其特征在于，步驟(2)中是通過自然蒸發(fā)或受控蒸發(fā)方式令各微小液滴中揮發(fā)度大于設(shè)定參考值的物質(zhì)充分揮發(fā)去除。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于親疏水模式基片的微液相反應(yīng)方法，其特征在于，步驟(2)中所述親水性物質(zhì)和/或雙親性物質(zhì)是通過可逆物理吸附和/或可逆化學(xué)鍵合方式與疏水性平整面結(jié)合。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于親疏水模式基片的微液相反應(yīng)方法，其特征在于，步驟(O- (2)內(nèi)所述親水性物質(zhì)和/或雙親性物質(zhì)中的至少一種為參與了步驟(4)內(nèi)所述反應(yīng)的反應(yīng)物。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于親疏水模式基片的微液相反應(yīng)方法，其特征在于，所述第一液相體系中除含有至少一種親水性物質(zhì)和/或雙親性物質(zhì)之外，還含有用以參與步驟(4)內(nèi)所述反應(yīng)的一種以上反應(yīng)物。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于親疏水模式基片的微液相反應(yīng)方法，其特征在于，步驟(3)中是通過拖曳液滴狀的第二液相體系，使其在經(jīng)步驟(2)處理后的疏水性平整面上沿設(shè)定軌跡滑過，進(jìn)而在各親水結(jié)合點(diǎn)處自動(dòng)聚集形成微小反應(yīng)液滴。
11.根據(jù)權(quán)利要求1或10所述的基于親疏水模式基片的微液相反應(yīng)方法，其特征在于，所述第二液相體系的體積優(yōu)選為1- 30 UL0
12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于親疏水模式基片的微液相反應(yīng)方法，其特征在于，步驟(4)具體包括:·1、以至少不與微小反應(yīng)液滴中的任一種反應(yīng)物反應(yīng)的難揮發(fā)性油相物質(zhì)包裹各微小反應(yīng)液滴； I1、設(shè)定反應(yīng)條件，令各微小反應(yīng)液滴中的反應(yīng)物相互反應(yīng)。
13.一種PCR方法，其特征在于，它包括如下步驟: (1)提供一種至少局部表面區(qū)域?yàn)槭杷云秸娴幕?，并將含有至少一種參與組成PCR反應(yīng)體系的親水性物質(zhì)和/或雙親性物質(zhì)的第一液相體系通過噴和/或點(diǎn)的方式施加至疏水性平整面，形成微小液滴陣列； (2)蒸發(fā)除去各微小液滴中揮發(fā)度大于設(shè)定參考值的物質(zhì)，并使各微小液滴中的至少部分親水性物質(zhì)和/或雙親性物質(zhì)或至少部分親水性物質(zhì)和/或雙親性物質(zhì)及其余揮發(fā)度小于設(shè)定參考值的物質(zhì)與疏水性平整面結(jié)合，形成親水結(jié)合點(diǎn)陣列； (3)將含有其它參與組成PCR反應(yīng)體系的物質(zhì)的第二液相體系在疏水性平整面上移動(dòng)，使第二液相體系在各親水結(jié)合點(diǎn)處自動(dòng)聚集形成微小反應(yīng)液滴，所述第二液相體系為水相體系； (4)在設(shè)定PCR反應(yīng)條件下，令各微小反應(yīng)液滴中的各PCR反應(yīng)物進(jìn)行反應(yīng)。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的PCR方法，其特征在于，步驟(2)中是通過緩慢蒸發(fā)方式除去由第一液相體系形成的各微小液滴中的水，進(jìn)而使各微小液滴中的固態(tài)溶質(zhì)或固態(tài)溶質(zhì)與固形物和/或揮發(fā)度小于水的液態(tài)物質(zhì)析出并吸附在疏水性平整面上。
15.根據(jù)權(quán)利要求13-14中任一項(xiàng)所述的PCR方法，其特征在于，所述第二液相體系內(nèi)至少含有引物對(duì)、PCR模板、聚合酶和dNTP中的任意一種。
16.根據(jù)權(quán)利要求13··所述的PCR方法，其特征在于，步驟(1)中所形成的微小液滴陣列中，各微小液滴的尺寸為0.1 μ-- - 900 μ m，且相鄰微小液滴之間的距離為0.1 μπι -900 μ mD
17.根據(jù)權(quán)利要求13所述的PCR方法，其特征在于，步驟(3)中是通過拖曳體積為1-30 μ L的液滴狀第二液相體系，使其在經(jīng)步驟(2)處理后的疏水性平整面上沿設(shè)定軌跡滑過，進(jìn)而在各親水結(jié)合點(diǎn)處自動(dòng)聚集形成微小反應(yīng)液滴。
18.根據(jù)權(quán)利要求13所述的PCR方法，其特征在于，步驟(4)具體包括: 1、以至少不與微小反應(yīng)液滴中的任一種反應(yīng)物反應(yīng)的難揮發(fā)性油相物質(zhì)包裹各微小反應(yīng)液滴； I1、設(shè)定PCR反應(yīng)條件，令各微小反應(yīng)液滴中的PCR反應(yīng)物進(jìn)行反應(yīng)。
19.一種PCR方法，其特征在于，它包括如下步驟: (1)提供一種至少局部表面區(qū)域?yàn)槭杷云秸娴幕?，并將至少含有一種引物對(duì)的引物對(duì)水溶液施加于該疏水性平整面，在該疏水性平整面表面形成微液滴點(diǎn)陣； (2)緩慢蒸發(fā)除去各微液滴中的水，使前述引物對(duì)或前述引物對(duì)與其它固態(tài)溶質(zhì)和/或揮發(fā)度小于水的組分附著于該疏水性平整面，形成親水性結(jié)合點(diǎn)陣； (3)將至少包含一種以上樣品模板的樣品模板水溶液從該疏水性平整面上滑過，使該至少包含一種以上樣品模板的水溶液自動(dòng)聚集在各親水性結(jié)合點(diǎn)上，形成微小反應(yīng)液滴點(diǎn)陣； (4)以至少不與各微小反應(yīng)液滴中的任一種反應(yīng)物反應(yīng)的難揮發(fā)性油相物質(zhì)包裹各微小反應(yīng)液滴，再設(shè)定PCR反應(yīng)條件，令各微小反應(yīng)液滴中的PCR反應(yīng)物進(jìn)行反應(yīng)。
20.根據(jù)權(quán)利要求19所述的PCR方法，其特征在于，所述引物對(duì)水溶液為兩種以上，且各種引物對(duì)水溶液中所含引物對(duì)均不相同。
21.根據(jù)權(quán)利要求19或20所述的PCR方法，其特征在于，所述引物對(duì)水溶液中還含有瓊脂糖、葡聚糖、淀粉、聚乙二醇、血清蛋白、磷脂中的任意一種或兩種以上的組合。
22.根據(jù)權(quán)利要求19所述的PCR方法，其特征在于，所述樣品模板的水溶液還含有DNA聚合酶、dNTP、PCR反應(yīng)所需的可溶性鹽和用于指示PCR反應(yīng)發(fā)生與否的標(biāo)記性物質(zhì)中的任意一種或兩種以上的組合。
23.根據(jù)權(quán)利要求22所述的PCR方法，其特征在于，所述用于指示PCR反應(yīng)發(fā)生與否的標(biāo)記性物質(zhì)包括突光探針。
24.根據(jù)權(quán)利要求13或19所述的PCR方法，其特征在于，該方法還包括如下步驟: (5)在PCR反應(yīng)完成后，檢測(cè)微小反應(yīng)液滴點(diǎn)陣中各反應(yīng)點(diǎn)的熒光信號(hào)，實(shí)現(xiàn)對(duì)樣品的檢測(cè) 。
【文檔編號(hào)】C12Q1/68GK103849674SQ201210499954
【公開日】2014年6月11日 申請(qǐng)日期:2012年11月30日 優(yōu)先權(quán)日:2012年11月30日
【發(fā)明者】李炯, 鄭克孝 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院蘇州納米技術(shù)與納米仿生研究所