專利名稱：耐熱乳鐵蛋白活性肽及其制備方法與應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是關(guān)于一種耐熱乳鐵蛋白活性肽及其制備方法與應(yīng)用，具體地說(shuō)是一種以復(fù)合酶水解乳鐵蛋白制備具有耐熱性的活性肽的方法、所得到的活性肽產(chǎn)品及其在食品中的應(yīng)用，所述的食品例如液態(tài)乳制品或奶粉。
背景技術(shù)：
乳鐵蛋白(Lactoferrin簡(jiǎn)稱Lf)又稱乳轉(zhuǎn)鐵蛋白，是一種相對(duì)分子量約為80000道爾頓的鐵結(jié)合型糖蛋白，廣泛分布于哺乳動(dòng)物乳汁和其他多種組織及其分泌液中(包括淚液、精液、膽汁、滑膜液等內(nèi)、外分泌液和嗜中性粒 細(xì)胞)，人乳中乳鐵蛋白濃度約為1.0-3. 2mg/ml,占普通母乳總蛋白的15% -20%。乳鐵蛋白及其蛋白降解產(chǎn)物乳鐵蛋白肽具有廣泛的生物學(xué)活性，包括廣譜抗菌作用、消炎、抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)及調(diào)節(jié)機(jī)體免疫反應(yīng)等，被認(rèn)為是一種新型抗菌、抗癌藥物和極具開(kāi)發(fā)潛力的食品。乳鐵蛋白由于其熱穩(wěn)定性很差，在60°C的熱加工條件下處理15min，有超過(guò)70%的乳鐵蛋白發(fā)生結(jié)構(gòu)改變，改變結(jié)構(gòu)的乳鐵蛋白不具有生物活性，因而乳鐵蛋白在食品領(lǐng)域應(yīng)用時(shí)會(huì)受到很大限制。中國(guó)專利申請(qǐng)200810094034. 6公布了乳鐵蛋白在液態(tài)乳制品中的應(yīng)用，主要是通過(guò)殺菌冷卻后無(wú)菌添加將乳鐵蛋白加入，此工藝需要對(duì)生產(chǎn)設(shè)備進(jìn)行改造，增加了生產(chǎn)成本，同時(shí)，如果無(wú)菌添加過(guò)程中控制不當(dāng)，會(huì)將細(xì)菌帶入到產(chǎn)品中，從而影響產(chǎn)品的質(zhì)量。另外，在奶粉領(lǐng)域，現(xiàn)有配方奶粉產(chǎn)品中由于乳鐵蛋白熱穩(wěn)定較差，一般都是在后期進(jìn)行干混，這就需要配備干混設(shè)備，而且生產(chǎn)的半成品如果不馬上進(jìn)行干混，在存放過(guò)程中，也非常容易產(chǎn)生質(zhì)量問(wèn)題。乳鐵蛋白經(jīng)過(guò)酶解得到的乳鐵蛋白活性肽的熱穩(wěn)定性及一些功能活性比乳鐵蛋白要好，因此，有研究制備這些功能性活性肽并應(yīng)用于食品領(lǐng)域中。中國(guó)專利申請(qǐng)200710190609. X公布了一種制備乳鐵蛋白活性肽的方法，但并沒(méi)有詳細(xì)說(shuō)明制備的活性肽的熱穩(wěn)定性情況；中國(guó)專利申請(qǐng)200810110996. 6公布了一種乳鐵蛋白活性肽的制備及提純辦法，但是該方法所采用的凍干及提純工藝大大增加了制備成本，同時(shí)提純工藝造成了產(chǎn)品的得率降低，不利于規(guī)?；a(chǎn)。因此，需要研發(fā)一種耐熱性的乳鐵蛋白活性肽，以滿足實(shí)際生產(chǎn)要求。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明主要是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)乳鐵蛋白活性肽及其制備中存在的弊端，為滿足實(shí)際生產(chǎn)需要，研發(fā)一種采用復(fù)合酶工藝水解乳鐵蛋白制備乳鐵蛋白活性肽的技術(shù)，工藝簡(jiǎn)便，成本較低，且所得乳鐵蛋白活性肽具有較好的耐熱性，可應(yīng)用于液態(tài)奶及奶粉等食品領(lǐng)域。因此，本發(fā)明的一個(gè)目的在于提供一種乳鐵蛋白活性肽的制備方法，該方法操作簡(jiǎn)便，成本較低，利于規(guī)模化生產(chǎn)。本發(fā)明的另一目的在于提供一種按照所述方法制備得到的乳鐵蛋白活性肽，該乳鐵蛋白活性肽具有良好的耐熱性。
本發(fā)明的再一目的在于提供所述乳鐵蛋白活性肽的應(yīng)用，具體是其在制備食品中的應(yīng)用。本發(fā)明的又一目的在于提供含有所述乳鐵蛋白活性肽的食品，特別是加工工藝中需要進(jìn)行熱處理的食品，例如液態(tài)乳制品、奶粉等。為達(dá)上述目的，一方面，本發(fā)明提供了一種乳鐵蛋白活性肽制備方法，所述制備方法包括如下步驟(I)配制乳鐵蛋白水溶液；(2)向乳鐵蛋白水溶液中加入蛋白酶進(jìn)行水解，其中是先加入中性蛋白酶水解至水解度達(dá)到6 8%,再加入風(fēng)味蛋白酶共同水解至水解度達(dá)到15 20%,終止水解；(3)終止水解后的溶液經(jīng)濃縮、干燥，得到所述乳鐵蛋白活性肽。 在本發(fā)明中，所用乳鐵蛋白可以使用現(xiàn)有技術(shù)中任何可以商購(gòu)得到的乳鐵蛋白，其質(zhì)量應(yīng)符合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)要求。譬如可以選擇DMV公司的乳鐵蛋白商用產(chǎn)品。本發(fā)明優(yōu)選要求所用乳鐵蛋白的純度大于95%。在本發(fā)明的乳鐵蛋白活性肽的制備方法中，采用內(nèi)切酶中性蛋白酶(Neutrase)先行水解，從蛋白質(zhì)分子間進(jìn)行切斷，使蛋白質(zhì)水解為多肽，再加入風(fēng)味蛋白酶(Flavourzyme)從多肽的兩端水解,使蛋白質(zhì)水解為寡肽，經(jīng)過(guò)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，按本發(fā)明的該水解方法生產(chǎn)得到的乳鐵蛋白肽，具有良好的生物活性，且耐熱性好，經(jīng)過(guò)121°C條件下加熱30min處理后，盡管部分肽的結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，但是結(jié)構(gòu)發(fā)生改變后的活性肽依然具有良好的生理活性。根據(jù)本發(fā)明的具體實(shí)施方案，本發(fā)明的方法中，優(yōu)選控制步驟(I)配制的乳鐵蛋白水溶液中乳鐵蛋白重量濃度為20 100mg/ml。根據(jù)本發(fā)明的具體實(shí)施方案，本發(fā)明中，所述中性蛋白酶與風(fēng)味蛋白酶均可商購(gòu)獲得，各酶制劑符合相關(guān)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)要求即可。例如，諾維信(中國(guó))有限公司的中性蛋白酶和風(fēng)味蛋白酶Flavourzyme 。通常在確定所用酶制劑后,適合酶水解的pH值范圍及溫度即可獲知。乳鐵蛋白水解液初始PH值6. 5-7. 7之間，一般為弱堿性。本發(fā)明的方法優(yōu)選根據(jù)需要還包括在向蛋白變性后的乳鐵蛋白水溶液中加入蛋白酶進(jìn)行水解前，將蛋白變性后的乳鐵蛋白水溶液的PH值調(diào)節(jié)至5. O 8. O的過(guò)程。調(diào)節(jié)pH值的調(diào)節(jié)劑可以采用所屬領(lǐng)域中常用的調(diào)節(jié)劑，如NaOH溶液、HCl溶液等。具體的酶制劑的用量及水解溫度、水解時(shí)間可以根據(jù)本發(fā)明中對(duì)水解度的要求進(jìn)行適當(dāng)確定及調(diào)整。在本發(fā)明的優(yōu)選方案中，以乳鐵蛋白水溶液中乳鐵蛋白的量為基準(zhǔn)，控制步驟(2)中中性蛋白酶用量為乳鐵蛋白重量的O. 3% 3. 8% (除特別標(biāo)注和說(shuō)明外，本發(fā)明中所述含量與比例均為重量含量與比例)，風(fēng)味蛋白酶用量為乳鐵蛋白重量的O. 12% 2. 1%;更優(yōu)選地，控制中性蛋白酶和風(fēng)味蛋白酶的總用量為乳鐵蛋白重量的O. 5% 5% (優(yōu)選為1% 3%)，且中性蛋白酶與風(fēng)味蛋白酶的重量比為1: O. 3 1: O. 7 (優(yōu)選為1: O. 4 1: 0.5)。更具體地，可控制加入中性蛋白酶的水解條件為40°C 60°C水解I 3小時(shí)；然后加入風(fēng)味蛋白酶后的共同水解條件為40°C 60°C水解O. 5 1. 5小時(shí)。在這些優(yōu)選的方案中，能夠獲得耐熱性能更好的乳鐵蛋白活性肽。根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選具體實(shí)施方案，本發(fā)明的方法中，控制加入中性蛋白酶水解至水解度在6 8%最優(yōu)選7%時(shí)加入風(fēng)味蛋白酶共同水解，共同水解至水解度達(dá)到15% 20%時(shí)滅活終止水解。本發(fā)明中，所述水解度的測(cè)定按照所屬領(lǐng)域的常規(guī)操作進(jìn)行。滅活終止水解的方式也可采用所屬領(lǐng)域的常規(guī)操作，本發(fā)明中優(yōu)選是在水解度達(dá)到要求后將水解溶液在80°C 100°C維持5 15min、優(yōu)選85°C 95°C維持5 IOmin以滅活酶而終止水解。經(jīng)過(guò)本發(fā)明的酶解過(guò)程，所得乳鐵蛋白肽已具有良好的耐熱性，能夠耐受隨后的加熱滅酶處理過(guò)程。滅活酶后的水解液經(jīng)濃縮干燥以制備得到干粉形式的乳鐵蛋白活性肽制品。所述的濃縮、干燥過(guò)程可以參考現(xiàn)有技術(shù)中任何可行的濃縮、干燥操作，例如反滲透膜濃縮、真空濃縮干燥等。本發(fā)明優(yōu)選所述濃縮過(guò)程是將滅活后的溶液濃縮到固形物含量40% 50% ;濃縮后的溶液經(jīng)噴霧干燥得到所述乳鐵蛋白活性肽，所述噴霧干燥進(jìn)風(fēng)溫度為170°C 180°C，出風(fēng)溫度為75°C 90°C。通過(guò)采用本發(fā)明的方法，所得到的乳鐵蛋 白活性肽產(chǎn)品的得率在98%以上，所獲得的活性肽粉具有很好的生理活性，且耐熱性能良好。另一方面，本發(fā)明還提供了一種乳鐵蛋白活性肽制品，該乳鐵蛋白活性肽制品是按照本發(fā)明所述的方法制備得到的。根據(jù)的具體實(shí)施方案，本發(fā)明的乳鐵蛋白活性肽制品中，分子量在1000_3000Da范圍內(nèi)的多肽含量為50% 60%，一般為50%左右(以乳鐵蛋白活性肽制品的總固形物含量為基準(zhǔn))，游離氨基酸含量小于2%。另一方面，本發(fā)明還提供了按照本發(fā)明的方法制備得到的乳鐵蛋白活性肽在制備食品中的應(yīng)用。本發(fā)明的乳鐵蛋白活性肽可以作為功能性配料添加到任何有需要的食品中，特別是由于本發(fā)明的乳鐵蛋白活性肽具有良好的耐熱性，其能夠應(yīng)用于加工工藝中需要熱處理的食品，例如，所述食品可以為液態(tài)乳制品或奶粉。本發(fā)明的活性肽粉可以在液態(tài)乳制品及奶粉生產(chǎn)中的配料工藝過(guò)程中與其他配料直接加入到牛奶中，經(jīng)過(guò)UHT殺菌或其他熱處理工序后，仍能保持良好的生理活性，從而使所得到的含有本發(fā)明乳鐵蛋白活性肽的乳制品也具備一定的抑菌特性、調(diào)節(jié)免疫活性等功效。本發(fā)明的乳鐵蛋白活性肽在食品中的添加量可以參照現(xiàn)有技術(shù)的記載或教導(dǎo)進(jìn)行，本發(fā)明對(duì)此不再贅述。另一方面，本發(fā)明還提供了一種食品，其中含有按照本發(fā)明所述方法制備得到的乳鐵蛋白活性肽。例如，所述食品可以為液態(tài)乳制品，或奶粉。該食品中由于含有本發(fā)明的乳鐵蛋白活性肽，從而也在一定程度上具有抑菌特性、調(diào)節(jié)免疫活性等功效。本發(fā)明中，各數(shù)據(jù)的測(cè)量均是按照所屬領(lǐng)域的常規(guī)方法，例如，蛋白肽分子量分布采用高效凝膠過(guò)濾色譜法測(cè)定。綜上所述，本發(fā)明采用復(fù)合酶技術(shù)水解乳鐵蛋白技術(shù)制備得到了一種耐熱性的乳鐵蛋白活性肽，本發(fā)明的方法操作簡(jiǎn)便，成本較低，適于規(guī)?；a(chǎn)。按照本發(fā)明的工藝方法，乳鐵蛋白活性肽得率高(通常得率在98%以上，可達(dá)99.1 %甚至更高)，且所得活性肽耐熱性好，乳鐵蛋白活性肽經(jīng)過(guò)121°C條件下加熱30min處理后，部分肽的結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，但是結(jié)構(gòu)發(fā)生改變后的活性肽依然具有良好的生理活性。將該活性肽應(yīng)用于液態(tài)奶及奶粉產(chǎn)品中，可以得到具有抑菌特性及調(diào)節(jié)免疫活性的液態(tài)乳制品及奶粉產(chǎn)品。特別是在奶粉或液態(tài)乳生產(chǎn)中的配料工藝過(guò)程中與其他配料直接加入到牛奶中，經(jīng)過(guò)UHT殺菌工藝，而不用在UHT滅菌后添加，節(jié)約了現(xiàn)有技術(shù)中的后期無(wú)菌添加或干混時(shí)產(chǎn)生的成本，同時(shí)防止在無(wú)菌添加時(shí)造成的微生物污染，可以更好的控制產(chǎn)品質(zhì)量。
具體實(shí)施例方式以下通過(guò)具體實(shí)施例詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)施過(guò)程和產(chǎn)生的有益效果，旨在幫助閱讀者更好地理解本發(fā)明的實(shí)質(zhì)和特點(diǎn)，不作為對(duì)本案可實(shí)施范圍的限定。下面各實(shí)施例中，所用中性蛋白酶和風(fēng)味蛋白酶為購(gòu)自諾維信(中國(guó))有限公司的Neutrase和Flavourzyme ，其中風(fēng)味蛋白酶是由米曲霉發(fā)酵并經(jīng)過(guò)微濾、超濾真空冷凍干燥等工藝制備而成。實(shí)施例1在酶反應(yīng)器中，用純水將乳鐵蛋白配置成濃度為80mg/ml的溶液，用IM HCl將溶液調(diào)節(jié)為7. 0，在溫度為40°C的條件下，先向溶液中加入約占原料乳鐵蛋白用量2. 14%的中性蛋白酶水解2小時(shí)至水解度達(dá)到7%，再向溶液中加入約占原料乳鐵蛋白用量O. 86% 的風(fēng)味蛋白酶共同水解約I小時(shí)直到水解度達(dá)到17%程度時(shí)，在90°C的條件下維持IOmin以滅活酶而終止水解，即得到乳鐵蛋白活性肽溶液。將該溶液通過(guò)真空干燥濃縮至固形物含量約為40%后，進(jìn)行噴霧干燥，進(jìn)風(fēng)溫度控制在175°C，出風(fēng)溫度控制在75°C，經(jīng)噴霧干燥后獲得的產(chǎn)品即為本實(shí)施例的乳鐵蛋白活性肽粉。本發(fā)明所獲得的乳鐵蛋白活性肽粉的得率為99. 4%，在121°C條件下加熱30min依然具有良好的生理活性。本發(fā)明中得到的乳鐵蛋白活性肽粉可以在液態(tài)乳制品生產(chǎn)中的配料工藝過(guò)程中與其他配料直接加入到牛奶中，經(jīng)過(guò)UHT殺菌工藝生產(chǎn)得到液態(tài)乳制品，此液態(tài)乳制品中乳鐵蛋白活性肽依然具有良好的生理活性。實(shí)施例2在酶反應(yīng)器中，用純水將乳鐵蛋白配置成濃度為20mg/ml的溶液，用IM HCl將溶液調(diào)節(jié)為7. 5，在溫度為50 V的條件下，先向溶液中加入約占原料乳鐵蛋白用量O. 38 %的中性蛋白酶水解3h至水解度達(dá)到7%，再向溶液中加入約占原料乳鐵蛋白用量0.12%的風(fēng)味蛋白酶共同水解約O. 5h直到水解度達(dá)到15%程度后，在95°C的條件下滅酶5min，即得到乳鐵蛋白活性肽溶液。將該溶液真空干燥濃縮至濃度約為45%后，進(jìn)行噴霧干燥，進(jìn)風(fēng)溫度控制在175°C，出風(fēng)溫度控制在75°C，經(jīng)噴霧干燥后獲得的產(chǎn)品即為本實(shí)施例的乳鐵蛋白活性肽粉。本發(fā)明所獲得的乳鐵蛋白活性肽粉的得率為98. 5%，在121°C條件下加熱30min依然具有良好的生理活性。本發(fā)明中得到的乳鐵蛋白活性肽粉可以在液態(tài)乳制品生產(chǎn)中的配料工藝過(guò)程中與其他配料直接加入到牛奶中，經(jīng)過(guò)UHT殺菌工藝生產(chǎn)得到液態(tài)乳制品，此液態(tài)乳制品中乳鐵蛋白活性肽依然具有良好的生理活性。實(shí)施例3在酶反應(yīng)器中，用純水將乳鐵蛋白配置成濃度為50mg/ml的溶液，用IM HCl將溶液調(diào)節(jié)為6. 5，在溫度為55°C的條件下，先向溶液中加入約占原料乳鐵蛋白用量2. 9%的中性蛋白酶水解Ih至水解度達(dá)到7%，再向溶液中加入約占原料乳鐵蛋白用量2.0%的風(fēng)味蛋白酶共同水解1. 5h至水解度達(dá)到20%，在85°C的條件下滅酶15min，即得到乳鐵蛋白活性肽溶液。將該溶液濃縮至濃度為50%后，進(jìn)行噴霧干燥，進(jìn)風(fēng)溫度控制在175°C，出風(fēng)溫度控制在75°C，經(jīng)噴霧干燥后獲得的產(chǎn)品即為本實(shí)施例的乳鐵蛋白活性肽粉。本發(fā)明所獲得的乳鐵蛋白活性肽粉的得率為98. 9%，在121°C條件下加熱30min依然具有良好的生理活性。本發(fā)明中得到的乳鐵蛋白活性肽粉可以在液態(tài)乳制品生產(chǎn)中的配料工藝過(guò)程中與其他配料直接加入到牛奶中，經(jīng)過(guò)UHT殺菌工藝生產(chǎn)得到液態(tài)乳制品，此液態(tài)乳制品中乳鐵蛋白活性肽依然具有良好的生理活性。實(shí)施例4在酶反應(yīng)器中，用純水將乳鐵蛋白配置成濃度為40mg/ml的溶液，用IM HCl將溶液調(diào)節(jié)為7. 0，在溫度為60°C的條件下，先向溶液中加入約占原料乳鐵蛋白用量O. 6%的中性蛋白酶水解2h至水解度達(dá)到6%，再向溶液中加入約占原料乳鐵蛋白用量O. 4%的風(fēng)味蛋白酶共同水解1. 5h直到水解度達(dá)到16%，反應(yīng)結(jié)束后，在90°C的條件下滅酶lOmin，即得到乳鐵蛋白活性肽溶液。將該溶液濃縮至濃度為40%后，進(jìn)行噴霧干燥，進(jìn)風(fēng)溫度控制在175°C，出風(fēng)溫度控制在75°C，經(jīng)噴霧干燥后獲得的產(chǎn)品即為本實(shí)施例的乳鐵蛋白活性肽粉。
本發(fā)明所獲得的乳鐵蛋白活性肽粉的得率為99. 2%，在121°C條件下加熱30min依然具有良好的生理活性。本發(fā)明中得到的乳鐵蛋白活性肽粉可以在液態(tài)乳制品生產(chǎn)中的配料工藝過(guò)程中與其他配料直接加入到牛奶中，經(jīng)過(guò)UHT殺菌工藝生產(chǎn)得到液態(tài)乳制品，此液態(tài)乳制品中乳鐵蛋白活性肽依然具有良好的生理活性。各實(shí)施例乳鐵蛋白活性肽抑菌性測(cè)定實(shí)驗(yàn)抑菌性的測(cè)定采用平板計(jì)數(shù)法。將保存的菌種接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)基上(若干支)，與37°C培養(yǎng)24小時(shí)，連續(xù)活化2次。經(jīng)兩次活化的實(shí)驗(yàn)菌種，加無(wú)菌生理鹽水洗滌后，轉(zhuǎn)移至無(wú)菌試管，并振蕩使菌體分布均勻。根據(jù)吸光度值(A56tol)與菌液濃度關(guān)系曲線，將菌液調(diào)至106cfu/ml。取裝有4ml肉湯蛋白胨培養(yǎng)基(蛋白胨1%、牛肉粉O. 8%、酵母粉O. 4%m NaCl O. 5% )的試管，分別編號(hào)，各試管加入菌濃為106cfu/ml的菌液O. 5ml，再加入O. 5ml濃度為8mg/ml的乳鐵蛋白肽溶液,然后置于37± 1°C的搖床培養(yǎng)6小時(shí)后,平板計(jì)
數(shù)。抑菌性大小用Y表示，計(jì)算公式為
v0/對(duì)照組菌濃度-實(shí)驗(yàn)組菌濃度1Λη()/
I % =-~———-X100%
對(duì)照組菌濃度本發(fā)明獲得的乳鐵蛋白活性肽具有抑菌的生理活性，將實(shí)施例3得到的乳鐵蛋白活性肽其中一部分置于室溫下，另一部分置于高壓殺菌鍋經(jīng)121°C熱處理30min，調(diào)節(jié)不同的PH值，進(jìn)行抑菌性的分析，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表I。表I乳鐵蛋白肽經(jīng)不同pH及高壓高溫殺菌處理后的抑菌性
抑菌本％
處理方法 -
pH 5.0pH6.0pH 7.0ρΗ8·0-
室溫94.8595.3496.5085.12
高壓高溫92.2195.0195.8962.67從表I中可以看出，在ρΗ5. 0-8. O范圍內(nèi)，該活性肽在室溫下放置對(duì)大腸桿菌、沙門(mén)氏菌、金黃色葡萄球菌、志賀氏菌、李斯特菌、枯草芽孢桿菌有較好的抑菌性，在經(jīng)過(guò)高壓高溫處理后，抑菌性幾乎沒(méi)有變化，這為其在牛奶體系中加入提供了依據(jù)。對(duì)比例I在酶反應(yīng)器中，用純水將乳鐵蛋白配置成濃度為40mg/ml的溶液，用IM HCl將溶液調(diào)節(jié)為7. 0，在溫度為60°C的條件下，向溶液中同時(shí)加入約占原料乳鐵蛋白用量O. 6%的中性蛋白酶和約占原料乳鐵蛋白用量O. 4%的風(fēng)味蛋白酶共同水解3. 5h，水解度為9%，反應(yīng)結(jié)束后，在90°C的條件下滅酶lOmin，即得到乳鐵蛋白活性肽溶液。將該溶液濃縮至濃度為40%后，進(jìn)行噴霧干燥，進(jìn)風(fēng)溫度控制在175° C,出風(fēng)溫度控制在75°C,經(jīng)噴霧干燥后獲得的產(chǎn)品即為本對(duì)比例的乳鐵蛋白活性肽粉。本發(fā)明所獲得的乳鐵蛋白活性肽粉的得率為97.2%，但在121°C條件下加熱30min后，生理活性大幅度降低。將實(shí)施例3的樣品和對(duì)比例I的樣品進(jìn)行抑菌性比對(duì)，結(jié)果如下，抑菌性試驗(yàn)方法如上。表2乳鐵蛋白肽經(jīng)不同pH及高壓高溫殺菌處理后的抑菌性
權(quán)利要求
1.一種乳鐵蛋白活性肽的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括如下步驟(1)配制乳鐵蛋白水溶液；(2)向乳鐵蛋白水溶液中加入蛋白酶進(jìn)行水解，其中是先加入中性蛋白酶水解至水解度達(dá)到6 8%，再加入風(fēng)味蛋白酶共同水解至水解度達(dá)到15 20%，終止水解；(3)終止水解后的溶液經(jīng)濃縮、干燥，得到所述乳鐵蛋白活性肽。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，控制步驟(I)配制的乳鐵蛋白水溶液中乳鐵蛋白濃度為20 100mg/ml。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，以乳鐵蛋白水溶液中乳鐵蛋白的量為基準(zhǔn)，控制步驟(2)中中性蛋白酶用量為乳鐵蛋白重量的O. 3% 3. 8%，風(fēng)味蛋白酶用量為乳鐵蛋白重量的O. 12% 2.1 優(yōu)選地，控制中性蛋白酶和風(fēng)味蛋白酶的總用量為乳鐵蛋白重量的O.5% 5%，且中性蛋白酶與風(fēng)味蛋白酶的重量比為1: O. 3 1: 0.7。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的方法，其中，步驟(2)中加入中性蛋白酶水解條件為 40°C 60°C水解I 3小時(shí)，加入風(fēng)味蛋白酶共同水解條件為40°C 60°C水解O. 5 1. 5 小時(shí)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，步驟(2)中水解度達(dá)到要求后將水解溶液在 80°C 100°C維持5 15min以滅活酶而終止水解。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，步驟(3)中所述濃縮過(guò)程是將滅活后的溶液濃縮到固形物含量40% 50% ;濃縮后的溶液經(jīng)噴霧干燥得到所述乳鐵蛋白活性肽，所述噴霧干燥進(jìn)風(fēng)溫度為170°C 180°C，出風(fēng)溫度為75°C 90°C。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，該方法還包括在向乳鐵蛋白水溶液中加入蛋白酶進(jìn)行水解前，將乳鐵蛋白水溶液的PH值調(diào)節(jié)至5. O 8. O的過(guò)程。
8.一種乳鐵蛋白活性肽制品，其是按照權(quán)利要求1 7任意一項(xiàng)所述方法制備得到的；優(yōu)選地，該乳鐵蛋白活性肽制品中，分子量在1000-3000Da范圍內(nèi)的多肽含量為50% 60 %，游離氨基酸含量小于2 %。
9.按照權(quán)利要求1 7任意一項(xiàng)所述方法制備得到的乳鐵蛋白活性肽在制備食品中的應(yīng)用；優(yōu)選地，所述食品例如為液態(tài)乳制品或奶粉。
10.一種食品，其中含有按照權(quán)利要求1 7任意一項(xiàng)所述方法制備得到的乳鐵蛋白活性肽；優(yōu)選地，所述食品例如為液態(tài)乳制品或奶粉。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種耐熱乳鐵蛋白活性肽及其制備方法與應(yīng)用，所述耐熱乳鐵蛋白活性肽的制備方法包括如下步驟配制乳鐵蛋白水溶液；向乳鐵蛋白水溶液中加入蛋白酶進(jìn)行水解，其中是先加入中性蛋白酶水解至水解度達(dá)到6～8％，再加入風(fēng)味蛋白酶共同水解至水解度達(dá)到15～20％，終止水解；終止水解后的溶液經(jīng)濃縮、干燥，得到所述乳鐵蛋白活性肽。本發(fā)明的方法操作簡(jiǎn)便，成本較低，適于規(guī)?；a(chǎn)，乳鐵蛋白活性肽得率高且所得活性肽耐熱性好，乳鐵蛋白活性肽經(jīng)過(guò)121℃條件下加熱30min處理后依然具有良好的生理活性。將該活性肽應(yīng)用于食品例如液態(tài)奶及奶粉產(chǎn)品中，可以得到具有抑菌特性及調(diào)節(jié)免疫活性的液態(tài)乳制品及奶粉產(chǎn)品。
文檔編號(hào)A23C9/152GK103014110SQ20121053858
公開(kāi)日2013年4月3日 申請(qǐng)日期2012年12月13日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月13日
發(fā)明者石丹 申請(qǐng)人:內(nèi)蒙古伊利實(shí)業(yè)集團(tuán)股份有限公司