專利名稱：一種甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌(Bacillus methylotrophicus)三炬-04及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一株甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌與具體應(yīng)用，特別是涉及一株甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌(Bacillus methylotrophicus)三炬-04菌及其菌劑與該菌劑在防治植物病害中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
青枯病是一種廣泛分布于熱帶、亞熱帶和某些溫帶地區(qū)的世界性病害，是多種農(nóng)作物減產(chǎn)的主要原因，在我國福建、廣東、廣西、四川、云南、湖南、江西、浙江、上海、江蘇、安徽等省、市(區(qū))都有分布。辣椒的青枯病是辣椒種植過程中最為嚴(yán)重的土傳病害之一，由于近幾年塑料大棚辣椒春早熟和秋延遲栽培的迅速發(fā)展，辣椒青枯病呈逐步上升趨勢。春早熟栽培從剛進(jìn)入盛花結(jié)果期(一般在5月上旬)開始發(fā)生，秋延遲栽培從10 11月份開始發(fā)生。一旦發(fā)生，損失嚴(yán)重，常常造成20% 30%的死亡，嚴(yán)重的高達(dá)50%以上。秋延遲栽培比春早熟栽培為害更為突出，也是近年來影響辣椒種植的突出問題。柑桔炭疽病是一種世界性的、為害較重的病害?？梢鹇淙~、枝梢枯死，嚴(yán)重時會造成連片的果園感染，樹捎全部枯死，損失慘重，2007年廣東的德慶柑橘產(chǎn)區(qū)就出現(xiàn)了大面積感染炭疽病，造成嚴(yán)重減產(chǎn)，是一種毀滅性的病害。對于輕微的果實感染會造成果實腐爛及落果，帶病果實常在貯運(yùn)期間發(fā)生腐爛，所以又是一種重要的采后病害。柑桔炭疽病對我國的柑橘主產(chǎn)區(qū)福建、廣東、江西、四川都造成過嚴(yán)重的危害和較大經(jīng)濟(jì)損失，對柑橘產(chǎn)業(yè)的發(fā)展造成嚴(yán)重影響。對于以上病害傳統(tǒng)防治`方法大都采用化學(xué)農(nóng)藥，然而化學(xué)農(nóng)藥效果大都不顯著，卻同時帶來了環(huán)境污染、化學(xué)殘留等副作用，對農(nóng)產(chǎn)品的質(zhì)量造成不良影響。對此，具有污染小、而且對人畜毒性小、環(huán)境兼容性好、病蟲害不易產(chǎn)生抗性等優(yōu)點(diǎn)的生物修復(fù)技術(shù)應(yīng)運(yùn)而生。生物修復(fù)劑是利用微生物本身或其代謝物防治和修復(fù)病、蟲、雜草等影響的生物制齊 ，其更符合現(xiàn)代社會對農(nóng)業(yè)生產(chǎn)要求。目前我國在生物修復(fù)劑生產(chǎn)始終未能形成規(guī)模產(chǎn)業(yè)。生物修復(fù)劑和生物農(nóng)藥在農(nóng)藥總量中的占有量只為4%左右，與發(fā)達(dá)國家相比還有較大差距。近年來，我國開發(fā)的生物修復(fù)劑、生物農(nóng)藥及其它高新技術(shù)越來越受到國際生物、農(nóng)藥界的關(guān)注。但在品種、劑型、質(zhì)量和數(shù)量方面與發(fā)達(dá)國家相差甚遠(yuǎn)，仍遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足國內(nèi)外市場的需求。發(fā)展生物修復(fù)劑、生物農(nóng)藥產(chǎn)業(yè)對保證農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展、保障人們的生命與健康、保護(hù)生態(tài)環(huán)境都十分重要，將為我國農(nóng)產(chǎn)品出口創(chuàng)造十分有利的條件，極大地增強(qiáng)我國農(nóng)產(chǎn)品的國際競爭力。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一株對植物青枯病、炭疽病具有防治作用的甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌。該甲基營養(yǎng)型芽抱桿菌(Bacillus methylotrophicus)三炬-04CCTCC N0.M2012169,該菌株已于2012年5月16日保藏于武漢大學(xué)中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號CCTCCN0.M2012169。所述的一種甲基營養(yǎng)型芽抱桿菌(Bacillus methylotrophicus)三炬-04CCTCCN0.M2012169，其菌株的16S rRNA基因序列如序列表中SEQ ID NOl所示。本發(fā)明的另一目的在于提供所述的一種甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌三炬-04的用途，其用于防治植物的青枯病或炭疽病。尤其是用于防治辣椒的青枯病或柑橘的炭疽病。本發(fā)明的再一目的在于提供前述的甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌三炬-04的使用方法，即將其發(fā)酵，制成發(fā)酵液使用。在本發(fā)明的較佳實施例中，所述的發(fā)酵為液體發(fā)酵，以1-10%接種量接種發(fā)酵罐，進(jìn)行好氧深層發(fā)酵，發(fā)酵溫度20-30°C，發(fā)酵周期36-45h。在本發(fā)明的較佳實施例中，液體發(fā)酵培養(yǎng)基包括:蔗糖0.5-2%、酵母膏0.5-2%、磷酸二氫鉀 0.05-0.02%、硫酸鎂 0.01-0.10%、氯化鈉 0.01-0.10%、碳酸鈣 0.01-0.10%、pH5-9。在本發(fā)明的較佳實施例中，發(fā)酵液再制成液體產(chǎn)品或固體產(chǎn)品使用。在本發(fā)明的較佳實施例中，發(fā)酵液中加入穩(wěn)定劑后，經(jīng)無菌灌裝即為液體產(chǎn)品。在本發(fā)明的較佳實施例中，固態(tài)產(chǎn)品為:把發(fā)酵液按10-20%的比例噴灑在滅菌后的有機(jī)培養(yǎng)基上，混合攪拌均勻，在放置至少IOh后包裝成袋。本發(fā)明的有益效果是:本發(fā)明提供了一株對辣 椒的青枯病、柑橘的炭疽病具有較高防治效果的甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌(Bacillus methylotrophicus)三炬-04CCTCC N0.M2012169 及其菌劑。該菌劑具有很好的防治和修復(fù)辣椒的青枯病、柑橘的炭疽病功效，且較為穩(wěn)定，無有毒的化學(xué)物殘留，不污染農(nóng)產(chǎn)品和環(huán)境， 性價比高和施用方便的優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明將在辣椒的青枯病、柑橘的炭疽病的防治中發(fā)揮重要的作用，應(yīng)用前景廣闊。


圖1為本發(fā)明菌種的顯微照片圖(放大1000倍)
具體實施例方式以下通過具體實施方式
進(jìn)一步描述本發(fā)明:實施例1菌種分離和鑒定甲基營養(yǎng)型芽抱桿菌(Bacillusmethylotrophicus)三炬-04CCTCC N0.M2012169菌的分離:采集福建省南靖縣和溪鎮(zhèn)樂土村六斗山(東經(jīng)117° I ' 30"，北緯24° 56 ' 20"，海拔360米)的土壤，從該土壤中通過營養(yǎng)瓊脂平板分離獲得一株甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌，命名為三炬-04，已于2012年5月16日保藏于武漢大學(xué)中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號CCTCC N0.M2012169。經(jīng)鑒定，該菌為甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌，具有以下特征:單個細(xì)胞
0.7 0.8X2 3微米，著色均勻。無莢膜，周生鞭毛，能運(yùn)動。革蘭氏陽性菌，芽孢0.6
0.9X1.0 1.5微米，橢圓到柱狀，位于菌體中央或稍偏，芽孢形成后菌體不膨大。菌落表面粗糙不透明，污白色或微黃色，在液體培養(yǎng)基中生長時，常形成皺醭，需氧菌，適宜生長溫度28 30°C，適宜pH值為5-9。菌種的顯微照片見圖1。菌株三炬-04生理生化特性表型及生理生化特性-酶活、碳源同化
權(quán)利要求
1.一種甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌(Bacillus methylo trophicus)三炬-04,保藏于保藏于武漢大學(xué)中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏日期為2012年5月16日，保藏號為CCTCCN0.M2012169。
2.如權(quán)利要求1所述的一種甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌三炬-04，其特征在于:其菌株的16SrRNA基因序列如SEQ ID NOl所示。
3.如權(quán)利要求1所述的一種甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌三炬-04的用途，其特征在于:其用于防治植物的青枯病或炭疽病。
4.如權(quán)利要求1所述的一種甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌三炬-04的用途，其特征在于:其用于防治辣椒的青枯病或柑橘的炭疽病。
5.如權(quán)利要求1所述的一種甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌三炬-04的使用方法，其特征在于:將其發(fā)酵，制成發(fā)酵液使用。
6.如權(quán)利要求5所述的一種甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌三炬-04的使用方法，其特征在于:所述的發(fā)酵為液體發(fā)酵，以1-10%接種量接種發(fā)酵罐，進(jìn)行好氧深層發(fā)酵，發(fā)酵溫度20-30 0C，發(fā)酵周期 36-45h。
7.如權(quán)利要求6所述的一種甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌三炬-04的使用方法，其特征在于:液體發(fā)酵培養(yǎng)基包括:蔗糖0.5-2%、酵母膏0.5-2%、磷酸二氫鉀0.05-0.02%、硫酸鎂0.01-0.10%、氯化鈉 0.01-0.10%、碳酸鈣 0.01-0.10%、pH5-9。
8.如權(quán)利要求5所述的一種甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌三炬-04的使用方法，其特征在于:發(fā)酵液再制成液體產(chǎn)品或固體產(chǎn)品使用。
9.如權(quán)利要求8所述的一種甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌三炬-04的使用方法，其特征在于:發(fā)酵液中加入穩(wěn)定劑后，經(jīng)無菌灌裝即為液體產(chǎn)品。
10.如權(quán)利要求8所述的一種甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌三炬-04的使用方法，其特征在于:固態(tài)產(chǎn)品為:把發(fā)酵液按10-20%的比例噴灑在滅菌后的有機(jī)培養(yǎng)基上，混合攪拌均勻，在放置至少IOh后包裝成袋。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌(Bacillus methylotrophicus)三炬-04及其應(yīng)用，該菌株保藏于保藏于武漢大學(xué)中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏日期為2012年5月16日，保藏號為CCTCC No:M2012169。本發(fā)明具有很好的防治辣椒的青枯病、柑橘的炭疽病功效，且較為穩(wěn)定，無有毒的化學(xué)物殘留，不污染農(nóng)產(chǎn)品和環(huán)境，性價比高和施用方便的優(yōu)點(diǎn)。其將在植物的青枯病、炭疽病的防治中發(fā)揮重要的作用，應(yīng)用前景廣闊。
文檔編號C12N1/20GK103074272SQ201210550128
公開日2013年5月1日 申請日期2012年12月17日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月17日
發(fā)明者林克明, 尤越 申請人:漳州三炬生物科技有限公司