一種含有甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌與葉枯唑的殺細菌組合物及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種殺細菌組合物，所述組合物含有活性成分甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌和葉枯唑，其中二者的重量比為30:1-1:30。本發(fā)明還涉及一種殺細菌劑，其含有1～90重量％所述的殺細菌組合物，余量為農(nóng)藥上可接受的載體和助劑。進一步地，本發(fā)明還涉及所述殺細菌組合物或殺細菌劑用于防治煙草青枯病、水稻白葉枯病或大白菜軟腐病的應(yīng)用。相比單劑而言，甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌和葉枯唑組合后的增效系數(shù)均在130以上，具有良好的增效作用；本發(fā)明的殺細菌組合物能良好地延緩單劑的抗藥性。
【專利說明】-種含有甲基營養(yǎng)型芽抱桿菌與葉枯睡的殺細菌組合物及 其應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及農(nóng)藥領(lǐng)域，特別是殺細菌劑領(lǐng)域，具體地說是含有甲基營養(yǎng)型芽抱桿 菌和葉枯哇的殺細菌組合物及其應(yīng)用。 技術(shù)背景
[0002] 甲基營養(yǎng)型芽抱桿菌炬acillus methylotrophicus)是芽抱桿菌屬中的一個種。 革蘭氏陽性，葡萄糖、阿拉伯糖、接觸酶、脂肪酶、脈酶及氧化酶均呈陽性、好氧，桿狀，具備 運動能力。
[0003] 研究發(fā)現(xiàn)芽抱桿菌菌株中不存在常見的毒素基因（皿L、BcET、NHE、entFM)、銷磯脂 酶（S地)、磯脂酶（PI-PLC);也不與NHE、皿L抗體反應(yīng)。認為分離自傳統(tǒng)發(fā)酵食品芽抱桿菌 菌株在安全性上是有保證的。
[0004] 在我國農(nóng)業(yè)快速發(fā)展過程中，病蟲危害是制約我國農(nóng)業(yè)持續(xù)穩(wěn)定發(fā)展的重要因 素。近年來，我國農(nóng)作物病害年平均發(fā)生面積超過1億公頃，每年糧食的病蟲危害損失約 為3000多萬噸，致使我國經(jīng)濟損失高達300多億。據(jù)統(tǒng)計，我國被農(nóng)藥污染的農(nóng)田達933 萬hm2 W上，每年死于農(nóng)藥污染食品的為0. 83萬人，每年因農(nóng)藥污染造成的直接經(jīng)濟損失 就高達160多億元人民幣。利用無公害農(nóng)藥防治植物病害，減少化學(xué)農(nóng)藥使用量和減輕農(nóng) 藥污染，保證食品安全和發(fā)展有機農(nóng)業(yè)已成為本世紀我國發(fā)展現(xiàn)代農(nóng)業(yè)和有機農(nóng)業(yè)當務(wù)之 急。
[0005] 另一方面，近年來，隨著作物品種、種植條件的改變，原有的一些并未引起太多重 視的細菌性病害逐漸成為重要病害。例如，煙草青枯病、水稻白葉枯病、大白菜軟腐病等細 困性病吉危吉越來越嚴重。
[0006] 芽抱桿菌因其安全性和能產(chǎn)生多種抗菌物質(zhì)及酶的特性而受到生物防治工作者 的偏愛。而且經(jīng)培養(yǎng)發(fā)酵可加工成生物菌劑，開發(fā)應(yīng)用潛力大。目前已有一些優(yōu)良的芽抱 桿菌菌株應(yīng)用于生產(chǎn)實踐。
[0007] 甲基營養(yǎng)型芽抱桿菌是芽抱桿菌的一種，具有高殺細菌活性、殺菌譜廣及具有促 生作用的環(huán)境友好型生物菌株。
[000引葉枯哇，又稱喔枯哇，主要用來防治植物細菌性病害，對水稻白葉枯病和細菌性條 斑病、巧枯潰瘍病有較好的防治效果。內(nèi)吸殺細菌劑。具有良好治療和預(yù)防作用。對細菌病 害有較好的防效?？褂晁疀_刷，噴藥后4小時遇雨對藥效無影響。本品屬低毒性殺細菌劑。 無致癌、致崎、致突變作用。對魚類安全。急性口服LD50 ;原藥小鼠為3180-6200mg/kg，原 藥大鼠急性經(jīng)口 LD50為3160-8250mg/kg。大鼠W含0. 25mg/kg飼養(yǎng)一年無不良影響。
[0009] 近年來的大田應(yīng)用中發(fā)現(xiàn)，上述兩種已知殺細菌劑在應(yīng)用過程中出現(xiàn)了殺菌活性 不夠高，同時個別病害也逐漸出現(xiàn)了抗藥性。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0010] 本發(fā)明旨在提供一種有效防治煙草青枯病、水稻白葉枯病、水稻細菌性條斑病、巧 橘潰瘍病、大白菜軟腐病等細菌性病害的殺細菌組合物。該殺細菌組合物相比單劑具有良 好的增效作用，且能延緩單劑的抗藥性，同時安全無毒、環(huán)境友好。
[0011] 本發(fā)明是該樣實現(xiàn)的：
[0012] 本發(fā)明涉及一種殺細菌組合物，其特征在于，所述組合物含有活性成分甲基營養(yǎng) 型芽抱桿菌和葉枯哇，其中二者的重量比為30:1-1:30。
[0013] 優(yōu)選地，該殺細菌組合物中甲基營養(yǎng)型芽抱桿菌和葉枯哇的重量比為10:1? 1:10。
[0014] 更優(yōu)選地，該殺細菌組合物中甲基營養(yǎng)型芽抱桿菌和葉枯哇的重量比為5:1? 1:5。
[0015] 本發(fā)明涉及一種殺細菌劑，其特征在于，該殺細菌劑含有1?90重量％的如上所 述的殺細菌組合物，余量為農(nóng)藥上可接受的載體和助劑。
[0016] 優(yōu)選地，該殺細菌劑含有3?80重量％的如上所述的殺細菌組合物。
[0017] 更優(yōu)選地，該殺細菌劑含有15?70重量％的如上所述的殺細菌組合物。
[001引所述載體和助劑為分散劑1-10%、潤濕劑0. 5-5%、崩解劑1-15%、粘結(jié)劑1-4%、 載體加至100%。
[0019] 所述分散劑可W為工業(yè)副產(chǎn)物分散劑，如木質(zhì)素及其衍生物等；陰離子型表面活 性劑的分散劑焼基硫酸鹽類，焼基酷聚氧己帰基離甲酵縮合物硫酸鹽等；非離子型表面活 性劑的分散劑，如焼基酷聚氧丙帰基離嵌段共聚物，焼基酷聚氧己帰磯酸醋等；水溶性高分 子物質(zhì)分散劑和無機分散劑；或者是上述一種和幾種的混合；
[0020] 所述潤濕劑可W為焼基硫酸鹽類，焼基酷聚氧己帰基離甲酵縮合物硫酸鹽，拉開 粉，S0PA，十二焼基苯賴酸軸，凈洗劑，農(nóng)乳2000系列，潤濕滲透劑T，LS94、LWET/F、聚氧己 帰基離類等；或者是上述一種和幾種的混合；
[0021] 所述崩解劑可W為硫酸饋、硫酸軸，碳酸軸、碳酸氨軸、碳酸饋、氯化饋等；或者是 上述一種和幾種的混合；
[0022] 所述粘結(jié)劑可W為淀粉、聚己二醇、化咯焼麗、聚己帰醇、尿素等；或者是上述一種 和幾種的混合；
[0023] 所述載體可W為高嶺±，活性白±，娃藻±，泥煤，輕質(zhì)碳酸巧，白碳黑，葉臘石，滑 石粉，方解石等；或者是上述一種和幾種的混合。
[0024] 除非另有說明，本發(fā)明所涉及的"％ "均為"重量百分比"。
[0025] 本發(fā)明之制備方法是：將計量好的甲基營養(yǎng)型芽抱桿菌母藥、葉枯哇原藥、分散 齊U、潤濕劑、崩解劑和載體投入混合機中，混合均勻后粉碎，將粉碎后的物料與粘結(jié)劑的水 溶液（2%的水溶液）捏合；捏合后的物料經(jīng)造粒機造粒；去除大于5mm和小于0. 5mm的顆 粒，烘干即可。不合適的顆粒經(jīng)重新捏合后再造粒。
[0026] 進一步地，本發(fā)明還涉及將上述殺細菌組合物或殺細菌劑用于防治煙草青枯病 (Pseudomonas solanacearum 巧.F. Smith) Smith)、水稻白葉枯病(Xanthomonas oryzae Swing et al. pv. oryzlcola (Fang et al) Swing et al)或大白菜軟腐病(Erwinia carotovora subsp. carotovora (Jones) Bergey et al.)的應(yīng)用。
[0027] 所述甲基營養(yǎng)型芽抱桿菌母藥的制備和提取方法是按照中國專利201210579899、 發(fā)明名稱為"一種甲基營養(yǎng)型芽抱桿菌的生物菌劑及其制備方法和應(yīng)用"中所記載的方法 來制得的。
[0028] 關(guān)于本發(fā)明技術(shù)方案的效果，具體如下：
[0029] (1)相比單劑而言，甲基營養(yǎng)型芽抱桿菌和葉枯哇組合后的增效系數(shù)均在130 W 上，具有良好的增效作用；
[0030] (2)本發(fā)明的殺細菌組合物能良好地延緩單劑的抗藥性。

【具體實施方式】
[0031] 下面敘述本發(fā)明的四個實施例
[0032] 本發(fā)明的甲基營養(yǎng)型芽抱桿菌按照中國專利201210579899、發(fā)明名稱為"一種甲 基營養(yǎng)型芽抱桿菌的生物菌劑及其制備方法和應(yīng)用"中所記載的方法來制得的。
[0033] 實施例1.制備水分散粒劑殺菌藥物（1000公斤）
[0034] 主成分甲基營養(yǎng)型芽抱桿菌為1%，即10公斤。葉枯哇為10%，即10公斤。并含 有下述各種助劑，分散劑T36為5%、即50公斤，分散劑27002%，即20公斤；潤濕劑十二焼 基硫酸軸3%，即30公斤；崩解劑硫酸胺3%，即30公斤；粘結(jié)劑聚己二醇3%，即30公 斤；載體白炭黑為140公斤，載體高嶺±余量為590公斤。
[00巧]配制工藝為；將計量好的甲基營養(yǎng)型芽抱桿菌母藥、葉枯哇原藥分散劑T36、分散 劑2700、潤濕劑十二焼基硫酸軸、崩解劑硫酸饋、載體白炭黑和高嶺±投入混合機中，攬拌 均勻，經(jīng)氣流粉碎機粉碎。將粉碎后的物料與粘結(jié)劑聚己二醇的水溶液捏合，捏合成膏狀后 經(jīng)造粒機造粒；用篩子將大于5mm和小于0. 5mm的顆粒去除；合適的顆粒經(jīng)干燥，檢測合格 后包裝。不合適的顆粒經(jīng)捏合機重新捏合后再造粒。
[0036] 實施例2.制備水分散粒劑殺菌藥物（1000公斤）
[0037] 主成分甲基營養(yǎng)型芽抱桿菌為20%，即200公斤。葉枯哇原藥為20%，即200公 斤。并含有下述各種助劑，分散劑MNS9010%、即100公斤；潤濕劑LS940. 5%，即5公斤； 崩解劑氯化饋10%，即100公斤；粘結(jié)劑尿素4%，即40公斤；載體滑石粉余量為355公 斤。
[003引配制工藝同實施例1
[003引實施例3.巧IJ備可濕性粉劑殺菌藥物（1000公斤）
[0040] 主成分甲基營養(yǎng)型芽抱桿菌為12%，即120公斤。葉枯哇為20%，即200公斤。即 并含有下述各種助劑，分散劑NW0 8%、即80公斤；潤濕劑4896為5%，即50公斤；載體白 炭黑為15%，即150公斤公斤。高嶺±余量為400公斤。
[00川 配制工藝
[0042] 按照配方要求，投入分散劑NN0、MF- 5、高嶺±，開動攬拌機，投入甲基營養(yǎng)型芽 抱桿菌母藥和葉枯哇原藥，白炭黑，最后緩慢加入潤濕劑，料投完后在前混合機混合15-30min，開啟粉碎機，分機轉(zhuǎn)速38- 45,加料速度180- 250Kg/h，粉碎畢后在后混合機混合 15-30min，包裝，即可制成甲基營養(yǎng)型芽抱桿菌和葉枯哇可濕性粉劑。
[0043] 實施例4.制備可濕性粉劑殺菌藥物（1000公斤）
[0044] 主成分甲基營養(yǎng)型芽抱桿菌為20%，即200公斤。葉枯哇20%，即200公斤。即 并含有下述各種助劑，分散劑NW0 8%、即80公斤；潤濕劑4896為5%，即50公斤；載體白 炭黑為15%，即150公斤公斤。高嶺±余量為320公斤。
[0045] 配制工藝同實施例3
[004引生物測定：
[0047]甲基營養(yǎng)型芽抱桿菌與葉枯哇組合對煙草青枯病的毒力測定 [004引 1.試驗條件
[0049] 1. 1供試病原菌：
[0050] 煙草青枯病菌Pseudomonas solanacearum化F. Smith) Smith,由西北農(nóng)林科技大 學(xué)植保學(xué)院植物病理研究室保存和提供。
[0051] 供試菌種在TTC培養(yǎng)基上培養(yǎng)，溫度17-22 °C，相對濕度90%。
[0052] 1. 2供試植物；在滅菌±培育煙苗至4?5葉期。
[005引 2.試驗設(shè)計
[0054] 2. 1供試藥劑：
[0(巧5] 內(nèi)含100億/克甲基營養(yǎng)型芽抱桿菌LW-6母液炬acillus methylotrophilus)， 由西北農(nóng)林科技大學(xué)植保學(xué)院植物病理研究室保存和提供。
[0056] 葉枯哇（Bismerthlazol)97%原藥，由浙江龍灣化工公司提供。
[0057] 2. 2藥劑濃度和配比設(shè)計及溶液配制：
[0058] 甲基營養(yǎng)型芽抱桿菌溶液；稱取0. Olg內(nèi)含100億/克甲基營養(yǎng)型芽抱桿菌LW-6 母液，加入含0. 1 % TweenSO乳化劑的無菌水98. 5ml，攬拌均勻，配制成lOOmg/L母液，再用 含0. 1% TweenSO乳化劑的無菌水稀釋成10、5、2. 5、1.25、0. 625、0. 3125mg/L濃度備用； [005引葉枯哇溶液：稱取0. 01g97 %葉枯哇原藥，用0. 2mlDMF溶解，加入含0. 1 % TweenSO乳化劑的無菌水96. 8ml配制成lOOmg/L母液，再用含0. 1 % TweenSO乳化劑的無 菌水稀釋成10、5、1、0. 5、0. 1、0. 05mg/L濃度備用；
[0060] 各混配溶液；分別取5、9、10、14、9mll0mg/L甲基營養(yǎng)型芽抱桿菌溶液分別加入到 5、6、4、4、29mll0mg/L葉枯哇溶液中制成lOmg/L甲基營養(yǎng)型芽抱桿菌?葉枯哇1:1、3:2、 5:2、7:2和9:2溶液，再用含0. 1% TweenSO乳化劑的無菌水稀釋成100、50、12. 5、6. 25mg/ L5個質(zhì)量試驗濃度，每個質(zhì)量濃度設(shè)4個重復(fù)。
[0061] 對照溶液；0. 2mlDMF加95ml含0. 1 % TweenSO乳化劑的無菌水。
[00的]3.測定方法：
[0063] 選取在滅菌±上培育長勢好的4?5葉期煙苗，噴霧處理后自然瞭干，2化左右將 幼苗取出接種煙草青枯病，接種量為5ml/株。
[0064] 每處理設(shè)3次重復(fù)，每重復(fù)10株煙苗，處理后移栽至裝有滅菌±的苗鉢中，處理放 置于溫室28?36C條件下，每天觀察煙苗生長情況，3天后空白對照重復(fù)發(fā)病時調(diào)查防治 效果，15天后調(diào)查煙草植株發(fā)病情況，統(tǒng)計發(fā)病率和病情指數(shù)，計算防效。
[0065] 4.數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
[0066] 參照生測標準方法NY/T1156. 6-2006,根據(jù)Sun&Johnson(1996)的共毒系數(shù)法 (CTC)來評價藥劑混配的增效作用，即CTC《80為枯抗作用，80 < CTC < 120為相加作用， CTC> 120為增效作用。
[0067] W病情指數(shù)計算出各個處理防效，所有數(shù)據(jù)均采用SAS6. 12系統(tǒng)軟件進行分析， 求出毒力回歸方程式、相關(guān)系數(shù)（r)和ECs。(95%置信度）。
[006引 5.結(jié)果與分析：
[0069] 采取5點法取5個代表性的配比，并將該5個配比和標準藥劑進行毒力測定。甲 基營養(yǎng)型芽抱桿菌和葉枯哇復(fù)配對煙草青枯病的毒力測定結(jié)果見表1。由表1可見，甲基營 養(yǎng)型芽抱桿菌與葉枯哇W 1: 1、3: 2、5: 2、7:2和9:2的比例混配對煙草青枯病菌均表現(xiàn)出 增效作用，其ECs。值分別為0. 40、0. 47、0. 51、0. 62和0. 72mg/L，共毒系數(shù)分別為138. 18、 135. 95、152. 48、142. 62和134. 55,其中W 5:2的比例混配增效作用最好。
[0070] 表1甲基營養(yǎng)型芽抱桿菌和葉枯哇復(fù)配對煙草青枯病的毒力測定結(jié)果
[0071]

【權(quán)利要求】
1. 一種殺細菌組合物，其特征在于，所述組合物含有活性成分甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌和 葉枯唑，其中二者的重量比為30:1-1:30。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的殺細菌組合物，其特征在于，二者的重量比為10:1?1:10。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的殺細菌組合物，其特征在于，二者的重量比為5:1?1:5。
4. 一種殺細菌劑，其特征在于，該殺細菌劑含有1?90重量％權(quán)利要求1至3任一所 述的殺細菌組合物，余量為農(nóng)藥上可接受的載體和助劑。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4的殺細菌劑，其特征在于，該殺細菌劑含有3?80重量％的殺細菌 組合物。
6. 根據(jù)權(quán)利要求4的殺細菌劑，其特征在于，該殺細菌劑含有15?70重量％的殺細菌 組合物。
7. 根據(jù)權(quán)利要求4至6任一所述的殺細菌劑，其特征在于，所述載體和助劑為分散劑 1-10%、潤濕劑0. 5-5%、崩解劑1-15%、粘結(jié)劑1-4%、載體加至100%。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1至3任一所述的殺細菌組合物或權(quán)利要求4-7任一所述的殺細菌劑 用于防治煙草青枯病、水稻白葉枯病或大白菜軟腐病的應(yīng)用。
【文檔編號】A01N63/00GK104397035SQ201410654499
【公開日】2015年3月11日 申請日期:2014年11月17日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月17日
【發(fā)明者】唐滿倉, 馬玉明, 葉龍江, 李林強 申請人:陜西恒田化工有限公司