pAVEC的制作方法
【專利摘要】本申請(qǐng)部分提供用于產(chǎn)生多肽諸如免疫球蛋白以及生成所述含有編碼所述多肽的多核苷酸的質(zhì)粒的重組版本的pAVEC質(zhì)粒和所述質(zhì)粒的使用方法。
【專利說(shuō)明】pAVEC
[0001]本申請(qǐng)要求2011年4月8日提交的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)?zhí)?1/473，431的權(quán)益，該申請(qǐng)通過(guò)全文引用并入本文。
發(fā)明領(lǐng)域
[0002]本發(fā)明的領(lǐng)域涉及質(zhì)粒，其可用于，例如，表達(dá)目標(biāo)多肽。
[0003]發(fā)明背景
培養(yǎng)用于治療性蛋白商業(yè)生產(chǎn)的細(xì)胞是一個(gè)昂貴的過(guò)程。所需設(shè)備費(fèi)用昂貴并且研發(fā)及生產(chǎn)成本高昂。開(kāi)發(fā)使每升細(xì)胞培養(yǎng)物生產(chǎn)的治療性蛋白的量最大化的細(xì)胞培養(yǎng)方法將會(huì)使生產(chǎn)給定量蛋白所需的資源最少化。因此，期望使用商業(yè)上可行的生產(chǎn)大量蛋白的試劑。
[0004]在標(biāo)準(zhǔn)的培養(yǎng)條件下，許多天然存在的細(xì)胞并不產(chǎn)生大量的期望蛋白。相反地，必須進(jìn)行廣泛的會(huì)誘使培養(yǎng)中的細(xì)胞產(chǎn)生大量治療性蛋白的細(xì)胞培養(yǎng)方法的研發(fā)。通常，在高水平鑒定可用于表達(dá)蛋白的質(zhì)粒載體需要大量的創(chuàng)造性投入。
[0005]發(fā)明概沭
本發(fā)明部分提供分離的PAVEC質(zhì)粒載體，所述分離的pAVEC質(zhì)粒載體是包含多克隆位點(diǎn)的線性或環(huán)狀質(zhì)粒載體，所述多克隆位點(diǎn)包含限制性位點(diǎn):
【權(quán)利要求】
1.分離的質(zhì)粒，其是線性或環(huán)狀的，包含含有以下限制性位點(diǎn)的多克隆位點(diǎn):

2.權(quán)利要求1的載體，其特征在于圖1的質(zhì)粒圖譜。
3.權(quán)利要求1的載體,其中所述多克隆位點(diǎn)包含SEQID NO:1中所述的核苷酸序列。
4.權(quán)利要求1的載體，其包含SEQID NO:2中所述的多核苷酸序列。
5.用于制備重組質(zhì)粒載體的方法，其包括切割權(quán)利要求1的質(zhì)粒，且將經(jīng)切割質(zhì)粒的末端連接至引入的多核苷酸的相容末端，從而使得產(chǎn)生閉環(huán)質(zhì)粒。
6.權(quán)利要求5的方法，其中所述引入的多核苷酸編碼免疫球蛋白鏈。
7.權(quán)利要求6的方法，其中所述免疫球蛋白鏈?zhǔn)沁x自以下的成員的重鏈或輕鏈:阿昔單抗、阿達(dá)木單抗、阿侖單抗、巴利昔單抗、貝伐單抗、西妥昔單抗、賽妥珠單抗、達(dá)妥珠單抗、賽尼哌、狄諾塞麥、依庫(kù)麗單抗、依法珠單抗、吉妥珠單抗、替伊莫單抗、英夫利昔單抗、莫羅單抗-CD3、那他珠單抗、奧馬珠單抗、帕利珠單抗、帕尼單抗、蘭尼單抗、利妥昔單抗、羅妥木單抗、托西旲單抗、ALD518和曲妥珠單抗； 或者，其中所述免疫球蛋白鏈?zhǔn)桥c選自以下的抗原特異性結(jié)合的抗體的重鏈或輕鏈或其抗原結(jié)合片段:VEGF、VEGFR、EGF、EGFR、PD-U TNFa、TGFP、TRAIL-Rl、TSLP、Navl.7、Navl.8、ERK、MEK、TRAIL-R2、IL-10、IL-6、IL-6R、IGF1R、IL_23pl9、IL23R、PCSK9、CD20、RANKL、RANK、CD33、CDlla、E rbB2、IgE、G 蛋白偶聯(lián)受體(GPCR)、HIV 抗原、HCV 抗原、和呼吸道合胞病毒(RSV)抗原。
8.重組質(zhì)粒載體，其是權(quán)利要求5的方法的產(chǎn)物。
9.包含權(quán)利要求1的載體的分離的宿主細(xì)胞。
10.權(quán)利要求9的宿主細(xì)胞，其是細(xì)菌或哺乳動(dòng)物細(xì)胞。
11.用于在分離的宿主細(xì)胞中產(chǎn)生重組多肽的方法，其包括在允許所述多肽表達(dá)的條件下將權(quán)利要求5的重組載體引入所述宿主細(xì)胞中。
12.權(quán)利要求11的方法，進(jìn)一步包括純化所述多肽。
13.試劑盒，其包含權(quán)利要求1的質(zhì)粒載體和一種或多種額外組分。
【文檔編號(hào)】C12N15/64GK103717743SQ201280017429
【公開(kāi)日】2014年4月9日 申請(qǐng)日期:2012年4月2日 優(yōu)先權(quán)日:2011年4月8日
【發(fā)明者】D.P.薩哈 申請(qǐng)人:默沙東公司